專利名稱：雷公藤及其提取物在抗sars冠狀病毒感染中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥學(xué)領(lǐng)域，具體而言涉及雷公藤及其提取物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
嚴(yán)重急性呼吸綜合征(severeacute respiratory syndrome, SARS)又稱傳染性非典型肺炎，是一種嚴(yán)重的急性呼吸系統(tǒng)傳染病。SARS病原體是冠狀病毒屬的一種病毒(Peiris J et al.Lancet, 2003, 361:1319-1325)。冠狀病毒屬隸屬于冠狀病毒科，冠狀病毒是正鏈RNA病毒，在目前已知的正鏈RNA病毒中，它們的基因組是最大的(SiddelI，
S.G et al.Coronaviruses, toroviruses and arteriviruses.1n Topley & Wilson' sMicrobiology and Microbia Infections,IOth edition, Vol.Virology(eds.Mahy,B.ff.J.& ter Meulen, V.) 823-856 (Hodder Arnold.London，2005))。這個(gè)屬含有約 26 個(gè)種;按照它們的自然宿主、基因序列以及血清型關(guān)系，這個(gè)屬又可以被分為三個(gè)組群:其中第一組群有豬傳染性胃腸炎病毒(Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus, TGEV)等；第二組群有SARS冠狀病毒等；第三組群有禽傳染性支氣管炎病毒(Avian InfectiousBronchitis Virus, AIBV)等(Spaan, ff.J.M.and Cavanagh, D.Coronaviridae.1n Virustaxonomy, VIIIth Report of the ICTV.945-62(Elsevier-Academic Press., London,2004)。SARS冠狀病毒2/3到3/4的基因組編碼了兩個(gè)復(fù)制酶多蛋白(replicasepolyproteins)ppla和 pplab(Ziebuhr, Snijder et al.2000 ；Thiel, Herold et al.2001 ；Anand，Yang et al.2005 ；Ziebuhr 2005)，它們只有在病毒編碼的蛋白酶切割成獨(dú)立亞基之后才能使病毒完成正常轉(zhuǎn)錄、復(fù)制功能(Ziebuhr, Snijder et al.2000 ；Anand, Yang etal.2005 ；Bartlam, Yang et al.2005)，SARS冠狀病毒主要蛋白酶(簡(jiǎn)稱主蛋白酶，mainprotease)在這個(gè)過(guò)程中起主要作用。如果能夠抑制SARS冠狀病毒主蛋白酶的水解作用，那么將會(huì)有效地抵御SARS冠狀病毒對(duì)人體的侵染。因此，SARS冠狀病毒的主蛋白酶是抗SARS藥物篩選的一個(gè)主要靶標(biāo)。天然產(chǎn)物又稱次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有結(jié)構(gòu)多樣性和生物活性多樣性。天然產(chǎn)物及其衍生物在以往的疾病治療中發(fā)揮了無(wú)可限量的作用，也是當(dāng)今藥物研發(fā)過(guò)程中最具潛力的資源之一(Newman DJ, Gragg GM, Snader KM.Nat Prod Rep, 2000,17 (3):215-234 ;LeeK-H.J Nat Prod.2004,67(2):273-283)?，F(xiàn)在對(duì)中藥等傳統(tǒng)藥物、海洋生物以及微生物代謝過(guò)程中的天然產(chǎn)物研究方興未艾，每年都會(huì)有大量結(jié)構(gòu)新穎的化合物被發(fā)現(xiàn)，這些新穎化合物是合成方法所無(wú)法實(shí)現(xiàn)的藥物和藥物先導(dǎo)化合物的重要源泉，在新藥和先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)中起著重要作用。對(duì)于天然產(chǎn)物尤其是來(lái)源于中藥等的天然產(chǎn)物的研究是很有必要的，因?yàn)橹兴幵谖覈?guó)已有數(shù)千年應(yīng)用的歷史，是藥物小分子化合物的一個(gè)巨大的寶庫(kù)，因此從中藥等天然產(chǎn)物中進(jìn)行重要病毒或重要疾病相關(guān)靶蛋白抑制劑的篩選是很有必要的。陳建操等在C N1539426A中公開(kāi)了利用植物多酚用于制備藥物和保健品抗SARS病毒以及治療和/或預(yù)防SARS病毒所致的疾??；在CN1568945A中公開(kāi)了姜黃素在制備治療SARS的藥物中的應(yīng)用；在CN1568968A中公開(kāi)了黃烷醇多酚在制備治療SARS的藥物中的應(yīng)用。邵寧生等在CN1443770A中公開(kāi)了抑制SARS病毒感染的小RNA分子及其作用靶點(diǎn)。趙原在CN1453030A中公開(kāi)了一種治療和預(yù)防SARS病的中藥，它由下述重量配比的原料制成，徐長(zhǎng)卿3-10份、僵蠶3-10份、蟬蛻3-10份、鬼白3-10份、女青3_10份、貫眾10-15份、檳榔
6-15份、厚樸3-10份、草果3-6份、女貞子6-15份、大黃3_12份。所述中藥可制成水劑、沖齊U、丹丸、膠囊的口服藥物或針劑，救治已患SARS病的病人。王一飛等在CN1452967A中公開(kāi)了千金藤素在制備抗SARS病毒藥物中的應(yīng)用。高平在CN1552387A中公開(kāi)了一種治療SARS的清熱、潤(rùn)肺藥物，是由藿香、茅術(shù)、滑石、明雄、前胡、寸香、厚樸、半夏、甘草、青皮、瓜萎、貝母組成的；在0附552388八中公開(kāi)了一種治療SARS的清熱、解毒藥物，是由榔片、厚樸、草果、甘草、元芩、雙花、明白礬、牛子、知母、柴胡、青皮組成；在CN1552390A中公開(kāi)了一種治療SARS的清肺藥物，是由知母、甘草、當(dāng)歸、元芩、陳皮、麥冬、地骨皮、百合、石膏、柴胡、半夏組成的；在CN1552391A中公開(kāi)了一種治療SARS的消炎、退熱藥物，是由陳皮、雙花、元芩、元柏、連翹、甘草、附子、柴胡、川貝、花粉、龍膽組成的；在0附552395八中公開(kāi)了一種預(yù)防SARS病毒的中藥制劑，由連翹、黃芩、赤芍、歸尾、雙花、麻黃、防風(fēng)、大黃、牛子、青葉、花粉、皂角刺、佩蘭磨成細(xì)粉，制成中藥散劑，該發(fā)明是在古秘方治療古代瘟疫病的基礎(chǔ)上，在辨證施治的過(guò)程中不斷修改完善的經(jīng)驗(yàn)之方。蕭偉等在CN1488380A中公開(kāi)了一種中藥組合物在制備抗SARS病毒的藥物中的應(yīng)用，該種中藥組合物由羚羊角、平貝母、大黃、黃芩、青礞石、生石膏、人工牛黃和甘草等原料制成。于靈恩在CN1449817A中公開(kāi)了抗SARS病毒、治療心腦血管栓塞的中藥，其組成為禹白附、黑附子、元胡。丁潤(rùn)泉在CN1454665A中公開(kāi)了一種治療SARS病毒的中藥，主要包括黃芩、銀花、連翹、石葦、黃芪、靈芝、丹參、赤芍、佩蘭。李建青等在CN1552321A中公開(kāi)了阿比朵爾在制備預(yù)防和治療SARS病毒藥物中的用途，通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明阿比朵爾對(duì)SARS病毒有顯著的抑制作用。樓士榮在CN1451434A中公開(kāi)了治療和預(yù)防SARS病毒的中藥，包含一枝黃花的原料制成的藥物對(duì)SARS病毒和冠狀病毒有十分明顯的針對(duì)性殺滅和抑制效果。羅偉生等在CN1721387A中公開(kāi)了一種從中藥大黃中分離提取的大黃蒽醌類化合物具有強(qiáng)大的抑制SARS病毒的作用，體外實(shí)驗(yàn)表明，對(duì)SARS冠狀病毒3C-like proteinase (3C-蛋白酶)藥物劑量在100 μ g/mL時(shí)抑制率達(dá)85%以上。
雷公藤為植物衛(wèi)矛科(Celastraceae)植物雷公藤(Tripterygium wilfordiiHook, f.)的根。味苦、 辛，性涼，有大毒。具有祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)、消腫止痛、殺蟲(chóng)解毒的功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明它具有免疫調(diào)節(jié)作用、抗腫瘤作用、改善微循環(huán)作用、抗炎殺菌等。王曉民等在CN1276209A中公開(kāi)了雷公藤屬植物提取物能預(yù)防和治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病。魯君華在CN1321482A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療生殖器潰瘍和皮膚病。羅都強(qiáng)等在CN1289540A中公開(kāi)了雷公藤具有殺蟲(chóng)活性。王漢東在CN1398603A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療頸、肩、腰、腿疼疾病。林開(kāi)春在CN1337157A中公開(kāi)了雷公藤非水提取物具有迅速殺蟲(chóng)作用。康小海在CN1397323A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療子宮內(nèi)膜異位癥。鄭家潤(rùn)等在CN1060845A中公開(kāi)了雷公藤中的雷公藤酮具有抗生育作用。張林豪在CN1066592A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療腎炎蛋白尿病。朱欽文在CN1098933A中公開(kāi)了雷公藤作為組方之一制備成治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和腎炎等疾病的雷公藤搽劑。黃世寬在CN1117853A中公開(kāi)了雷公藤可代替啤酒花作為組方藥之一用于治療血管瘤。黃德軒在CN1141794A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療骨質(zhì)增生。胡碩泉在CN1615922A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療再生障礙性貧血。楊華山在CN1846732A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療畜禽類流行性疾病。徐冬生在CN1872174A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療燒傷與燙傷。陳衛(wèi)軍在CN1850165A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療牛皮癬。于震鵬在CN101040927A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療強(qiáng)直性脊柱炎。邱日輝在CN101194923A中公開(kāi)了雷公藤作為組方藥之一用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡。雖然雷公藤已被用于治療多種疾病,但尚未見(jiàn)到雷公藤在抑制SARS冠狀病毒主蛋白酶活性中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
在對(duì)雷公藤進(jìn)行研究的過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)雷公藤及其提取物具有抑制SARS冠狀病毒主蛋白酶活性的作用。可以將其制備成SARS冠狀病毒主蛋白酶抑制劑，從而預(yù)防或治療SARS冠狀病毒感染。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了雷公藤在制備預(yù)防或者治療SARS冠狀病毒感染的藥物中的應(yīng)用，尤其是在制備SA·RS冠狀病毒主蛋白酶抑制劑中的應(yīng)用。在上述應(yīng)用中，所述雷公藤為衛(wèi)矛科(Celastraceae)植物雷公藤(Tripterygiumwilfordii Hook.f.)的根。在上述應(yīng)用中，所述雷公藤經(jīng)溶劑提取。其中，所述溶劑選自水、醇或其混合物。所述醇包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇、乙二醇等，優(yōu)選甲醇或乙醇。在一個(gè)具體實(shí)施例中，雷公藤經(jīng)95%乙醇提取得到雷公藤的95%乙醇提取物。在上述應(yīng)用中，對(duì)經(jīng)提取后的雷公藤進(jìn)一步進(jìn)行有機(jī)溶劑萃取。其中所述有機(jī)溶劑選自石油醚、氯仿、乙酸乙酯、或正丁醇中的一種或多種。在一個(gè)具體實(shí)施例中，對(duì)經(jīng)95%乙醇提取后的雷公藤依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。在本發(fā)明中還提供了雷公藤提取物及其石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物中的任意一種在制備抑制SARS冠狀病毒感染的藥物中的應(yīng)用，尤其是在制備SARS冠狀病毒主蛋白酶抑制劑中的應(yīng)用。本發(fā)明采用離體活性測(cè)量的方法，對(duì)雷公藤進(jìn)行活性測(cè)定，結(jié)果表明，雷公藤及其提取物具有很好的抑制SARS冠狀病毒主蛋白酶活性的作用，說(shuō)明雷公藤及其提取物可以成為預(yù)防或者治療SARS冠狀病毒感染的潛在藥物，或者與本領(lǐng)域公知的藥物上可接受的適當(dāng)載體或者賦形劑組成藥物組合物，用于預(yù)防或者治療SARS冠狀病毒感染。


圖1是雷公藤95%乙醇提取物對(duì)SARS冠狀病毒主蛋白酶的活性抑制曲線圖；圖2是雷公藤95%乙醇提取物各萃取物對(duì)SARS冠狀病毒主蛋白酶的活性抑制曲線圖。
具體實(shí)施例方式為了更好地說(shuō)明本發(fā)明，在下面將詳述本發(fā)明的具體實(shí)施方式
。
雷公藤的提取和萃取將一定量的雷公藤藥材用5-10倍量水、醇、或其混合物提取2-4次，每次1-3小時(shí)，合并提取液，經(jīng)過(guò)濾后減壓濃縮得到雷公藤的粗提物。將該粗提物用1-5倍量的雙蒸水超聲1-3小時(shí)使其分散后，倒入分液漏斗中，依次用極性由小到大的有機(jī)溶劑如依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取，充分振搖，靜置，每種溶劑萃取3次，分離有機(jī)相和水相，并將有機(jī)溶劑相萃取液蒸發(fā)濃縮至干，得到雷公藤的有機(jī)溶劑萃取物。藥理活性測(cè)試部分1.SARS冠狀病毒主蛋白酶的表達(dá)、純化根據(jù)文獻(xiàn)(YangH et al.Proc Natl Acad Sc1.2003 Nov ； 100 (23):13190-5)進(jìn)行SARS冠狀病毒主蛋白酶的表達(dá)和純化。具體方法如下:1.1SARS冠狀病毒主蛋白酶的表達(dá)載體的構(gòu)建，具體步驟包括:a.利用北京華大基因中心提供的編號(hào)為BJOl的SARS病毒毒株的cDNA文庫(kù)，用PCR技術(shù)進(jìn)行體外擴(kuò)增；正向引物:5'-CGGGATCCAGTGGTTTTAGGAAAATG-3'反向引物:5'-CCGCTCGAGTCATTGGAAGGTAACACCAGA-3'b.經(jīng)PCR擴(kuò)增的基因片段經(jīng)BamHI和XhoI雙酶酶切后，用瓊脂糖凝膠電泳回收大小為Ikb左右的片段；c.將回收片段與T載體進(jìn)行連接,然后用連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸肝菌Escherichiacoli DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，并涂在LB平板(含100mg/L氨芐青霉素)上，培養(yǎng)過(guò)夜；d.從平板上挑取多個(gè)單克隆，分別接種于裝有約5mL的LB的試管(該LB溶液中加入氨芐青霉素，使其終濃度為100mg/L)中，培養(yǎng)過(guò)夜。然后用質(zhì)粒提取試劑盒(博大泰克公司B型質(zhì)粒小量快速提取試劑盒)提取質(zhì)粒，并用BamHI和XhoI酶切，然后用瓊脂糖凝膠回收大小約為Ikb左右的目標(biāo)基因片段；e.將目標(biāo)載體pGEX-4T-l (購(gòu)自Pharmacia公司)用BamHI和XhoI酶切，然后用瓊脂糖凝膠回收酶切的片段；f.將d和e獲得的片段連接(將酶切回收后的目標(biāo)基因片斷和目標(biāo)載體片段按照摩爾數(shù)3:1 6:1的比率混合，按照Takara DNA Ligation的要求在16°C反應(yīng)30分鐘 18小時(shí))，轉(zhuǎn)化大腸肝菌(Escherichia coli)DH5a感受態(tài)細(xì)胞，涂在LB平板(含100mg/L氨芐青霉素)上培養(yǎng)過(guò)夜。將篩選到的陽(yáng)性克隆，用于鑒定和測(cè)序。測(cè)序結(jié)果表明，SARS冠狀病毒的主蛋白酶的編碼基因已被正確地克隆到pGEX-4T-l載體中。1.2SARS冠狀病毒主蛋白酶的表達(dá)與純化，具體步驟包括:a.將上述步驟1.1中得到的含有編碼SARS冠狀病毒主蛋白酶基因的pGEX_4T_l載體轉(zhuǎn)化Escherichia coli BL21 (DE3)的菌株,并用LB平板(含100mg/L氨節(jié)青霉素)篩選陽(yáng)性克隆；b.在a中所述的LB平板上挑取陽(yáng)性克隆(在含有氨芐青霉素的LB平板上生長(zhǎng)出來(lái)的單克隆)，培養(yǎng)過(guò)夜，然后轉(zhuǎn)入IL的LB培養(yǎng)基(含100mg/L氨芐青霉素)，當(dāng)0D_達(dá)到0.6-0.8時(shí)，加入ImM左右的IPTG，在16°C培養(yǎng)12小時(shí)左右；c.5000 8000rpm離心10 15min收集細(xì)胞，然后冰浴超聲破菌20 30min ;破菌液13000rpm 15000rpm離心20 40min后收集上清液；d.將上清液加入PBS預(yù)平衡的GST親和層析柱(GE公司)中，用PBS淋洗20 30個(gè)柱床體積去除雜蛋白。最后加入2mL 0.lmg/mL左右的人類鼻病毒3C蛋白酶,在4°C酶切12 20小時(shí)，之后收集SARS冠狀病毒主蛋白酶；e.將上一步驟d中獲得的SARS冠狀病毒主蛋白酶再用Mono Q(GE公司)陰離子交換層析進(jìn)行純化，便可得到純度較高的SARS冠狀病毒主蛋白酶。2.SARS冠狀病毒主蛋白酶抑制劑的篩選方法本發(fā)明所采用的篩選SARS冠狀病毒主蛋白酶抑制劑的方法是饒子和等在CN101418334A中公開(kāi)的篩選方法，具體方法如下:SARS冠狀病毒主蛋白酶的活性測(cè)定是使用熒光底物MCA-AVLQSGFR-Lys (Dnp) -Lys_NH2 (純度大于95%，上海吉爾生化有限公司)來(lái)完成的。該熒光底物的氨基酸序列來(lái)源于SARS冠狀病毒主蛋白酶的N端自剪切序列。用于突光強(qiáng)度測(cè)定的儀器為Fluoraskan Ascent突光儀(ThermoLabsystems,Helsinki, Finland)，激發(fā)光和發(fā)射光的波長(zhǎng)分別為320nm和405nm。在緩沖溶液(50mMTris-HCl (pH 7.3)，ImM EDTA (含或不含 DTT))中加入 SARS 冠狀病毒主蛋白酶(終濃度0.5 μ M)，加入備選樣品的DMSO溶解物(使其終濃度為:500 μ g/mL,底物濃度為20 μ Μ，298Κ放置10分鐘后，迅速加入熒光標(biāo)記底物(MCA-AVLQSGFRL (DNP)L-NH2，終濃度20μΜ)。設(shè)定陰性對(duì)照:不加入備選樣品，其余條件相同。激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為320nm和405nm，溫度保持298K，每3秒鐘記錄一次熒光讀數(shù)，共測(cè)定10個(gè)點(diǎn)。以時(shí)間為X軸，熒光值為Y軸作圖便可得到酶活動(dòng)力學(xué)曲線。通過(guò)圖上前兩個(gè)點(diǎn)的數(shù)值計(jì)算斜率便可得到反應(yīng)的初 速度V，將陰性對(duì)照的反應(yīng)初速度定義為Vtl，加入備選樣品的反應(yīng)初速度定義為Vi,從而計(jì)算出加入相應(yīng)備選樣品后主蛋白酶的剩余活性(ViZiVci)，相應(yīng)備選樣品的抑制率則為(HiZV0)?？梢詫?duì)剩余活性小于20% (或抑制率大于80%)的備選樣品進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化以找到更集中的活性部位。下面的實(shí)施例可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1雷公藤95%乙醇提取物的制備取2公斤的雷公藤藥材(購(gòu)買于安徽省亳州市新興藥材有限公司)用8倍量95%乙醇回流提取3次，每次提取2小時(shí)，將提取液經(jīng)過(guò)濾后合并，用EYELA N1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本理化公司)減壓濃縮，蒸干后得到254g浸膏。實(shí)施例2雷公藤95%乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取物的制備將實(shí)施例1中所得的雷公藤95%乙醇提取物取出200g，用280毫升雙蒸水懸浮超聲2小時(shí)使其分散，然后將其倒入I升分液漏斗中，按照有機(jī)溶劑極性由小到大依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，每種溶劑萃取3次，每次用有機(jī)溶劑280毫升，充分振搖，靜置6小時(shí)，分離出有機(jī)溶劑相并按有機(jī)溶劑種類合并，將各種有機(jī)溶劑萃取液用EYELAN1001型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，得到干膏狀的雷公藤石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物，其中得到石油醚萃取物7.4克、乙酸乙酯萃取物73.5克、正丁醇萃取物34.8克。實(shí)施例3雷公藤提取物對(duì)SARS冠狀病毒主蛋白酶抑制活性的測(cè)定將實(shí)施例1中得到的雷公藤95%乙醇提取物和實(shí)施例2中得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物各取5mg，溶于二甲基亞砜(DMSO)溶液中使其濃度為50mg/mLo在緩沖溶液(50mMTris-HCl (pH 7.3), ImM EDTA (含或不含 DTT))中加入 SARS冠狀病毒主蛋白酶(終濃度0.5 μ M)，加入上面4種提取物樣品的DMSO溶液(使其終濃度為AOOyg/mL，底物濃度為20μΜ，298Κ放置10分鐘后，迅速加入熒光標(biāo)記底物(MCA-AVLQSGFRL (DNP) L-NH2,終濃度20 μ Μ)。設(shè)定陰性對(duì)照:不加入提取物樣品，其余條件相同。激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為320nm和405nm，溫度保持298K，每3秒鐘記錄一次熒光讀數(shù)，共測(cè)定10個(gè)點(diǎn)。以時(shí)間為X軸，熒光值為Y軸作圖得到這4種提取物對(duì)SARS冠狀病毒主蛋白酶的活性抑制曲線，如圖1和圖2所示。根據(jù)曲線計(jì)算得到如下結(jié)果:在500 μ g/mL終濃度下，雷公藤95%乙醇提取物對(duì)SARS主蛋白酶的抑制率達(dá)98.8 % ;其相應(yīng)的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取物對(duì)SARS主蛋白酶的抑制率分別為99.3%,97.2%和83.8%。根據(jù)上述實(shí)施例可以看出，雷公藤95%乙醇提取物及其各萃取物對(duì)SARS冠狀病毒主蛋白酶均具有良好的抑制活性。表明雷公藤及其提取物和萃取物可以分別用于制備SARS冠狀病毒主蛋白酶抑制劑，從而可以預(yù)防或者治療SARS冠狀病毒感染。盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，應(yīng)當(dāng)理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，因此，上面的說(shuō)明書(shū)旨在用于說(shuō)明而不是用于限制。所以，本發(fā)明的范圍不應(yīng)參考上述說(shuō)明書(shū)來(lái)確定，而應(yīng)當(dāng)參照下面所附權(quán)利要求以及這些權(quán)利要求所享有的等同原則所確定的 全部范圍確定。
權(quán)利要求
1.雷公藤在制備預(yù)防或者治療SARS冠狀病毒感染的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中所述雷公藤為衛(wèi)矛科(Celastraceae)植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)的根。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，所述雷公藤經(jīng)溶劑提取。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中，所述溶劑選自水、醇或其混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其中所述醇是甲醇或乙醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中所述溶劑是95%乙醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中對(duì)經(jīng)溶劑提取后的雷公藤進(jìn)一步進(jìn)行有機(jī)溶劑萃 取。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中所述有機(jī)溶劑選自石油醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，所述雷公藤用于制備SARS冠狀病毒主蛋白酶抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了雷公藤及其提取物在預(yù)防或者治療SARS冠狀病毒感染中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)表明在500μg/mL終濃度下，雷公藤的95％乙醇提取物對(duì)SARS主蛋白酶的抑制率達(dá)98.8％；而其95％乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇萃取物對(duì)SARS主蛋白酶的抑制率分別為99.3％、97.2％和83.8％。
文檔編號(hào)A61P31/14GK103156902SQ20111041574
公開(kāi)日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2011年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月13日
發(fā)明者饒子和, 楊誠(chéng), 婁智勇, 孫希彩, 李金楠, 牛國(guó)君, 周天元, 王波, 馮金磊, 陳衛(wèi)強(qiáng) 申請(qǐng)人:天津市國(guó)際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院