專利名稱：一種卵黃抗體的制備方法、用該方法制得的卵黃抗體及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種卵黃抗體的制備方法、用該方法制得的卵黃抗體及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
中華蜜蜂已被列入國(guó)家畜禽遺傳資源保護(hù)名錄，也是遼寧省十大畜禽遺傳資源保護(hù)品種之一，是我國(guó)寶貴的地方蜂種資源，飼養(yǎng)中蜂也已成為山區(qū)農(nóng)民發(fā)家致富的有效途徑。中蜂對(duì)保持我國(guó)植物生態(tài)系統(tǒng)具有不可替代的作用，研究表明一旦中蜂滅絕，我國(guó)將有 30%的植物滅絕，目前因中蜂的減產(chǎn)，導(dǎo)致一些國(guó)家級(jí)二級(jí)保護(hù)植物瀕臨滅絕。近年來(lái)各地為加強(qiáng)中蜂業(yè)的發(fā)展，已經(jīng)建立了中蜂保護(hù)區(qū)，然而，目前因中蜂囊狀幼蟲病的發(fā)生，已經(jīng)給中蜂業(yè)造成了毀滅性的打擊。1972年中蜂囊狀幼蟲病在廣東大流行，不到半年蔓延至大半個(gè)中國(guó)，中蜂損失約百萬(wàn)群，嚴(yán)重制約了中蜂產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。目前雖然有中藥用于中蜂囊狀幼蟲病的治療，但中藥治療主要是通過免疫調(diào)節(jié)作用，間接抗病毒，并不能直接殺死病毒， 相對(duì)起效慢，尤其是對(duì)重病蜂群治愈效果較差，同時(shí)由于中藥的藥味會(huì)使蜜蜂不能很好的采食，甚至發(fā)生逃逸。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種卵黃抗體的制備方法、用該方法制得的卵黃抗體及其應(yīng)用，可用于治療中蜂囊狀幼蟲病，且療效顯著。本發(fā)明涉及的一種卵黃抗體的制備方法，其具體步驟如下
1、中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗的制備
將中蜂囊狀幼蟲病毒用BCA法檢測(cè)濃度，用ΡΗ=7. Γ7. 8的磷酸鹽緩沖液將病毒濃度稀釋至0. 2^0. 3毫克/毫升，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒溶液體積的0. 3^0. 4%加入甲醛滅活M 48小時(shí)后，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒溶液體積的4 8%的加入吐溫-80，做水相；司本-80與10號(hào)白油按體積比1: 9^1: 19混合，滅菌，做油相；水相與油相體積比為 1 3 2 3，先將油相在800(Tl0000rpm攪拌，再緩慢加入水相，1000(Tl2000rpm攪拌4 6分鐘，進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)后，制得中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗，所制疫苗為油包水型；
2、卵黃抗體的制備
用制備的中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，首次免疫肌肉注射0. 5 1毫升，之后第1^15天，第觀 30天免疫加強(qiáng)1次，劑量加大至首次注射劑量的2、倍，經(jīng)三次免疫后，用間接ELESA法測(cè)定抗體效價(jià)，當(dāng)效價(jià)達(dá)到28以上時(shí)，收集雞蛋，儲(chǔ)于4、°C，以后每隔3(Γ35天免疫一次所述產(chǎn)蛋雞，以保證有效抗體效價(jià)在28以上；對(duì)收集到的雞蛋用水合法提取卵黃抗體IgY。上述的卵黃抗體的制備方法，所述的中蜂囊狀幼蟲病毒通過以下步驟得到
1、用RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性的患病幼蟲與ρΗ=7. Ο. 8的磷酸鹽緩沖液先混勻，每Ig患病幼蟲加磷酸鹽緩沖液廣anl，磨碎后的混合液加入氯仿，氯仿與所述混合液的體積比1 0. 8 1 1. 5，在37 40°C下勻漿8 10 min,然后800 1200 rpm離心8 lOmin，分別收集上清液和沉淀物；
2、取上清液，在上清液中加入與其體積比為1:0.8^1:1. 5的氯仿，在37、0°C水浴中振搖8 10 min，然后80(Tl200 rpm離心8 10 min，分別收集上清液和沉淀物;
3、上清液繼續(xù)用步驟2處理2、次，分別收集上清液和沉淀物；
4、將所得沉淀物收集在一起，用ρΗ=7.Ο. 8的磷酸鹽緩沖液溶解，每Ig沉淀物加廣2ml磷酸鹽緩沖液，然后80(T1200 rpm離心8 10 min，取上清液，與之前經(jīng)過多次處理的上清液混合，然后5000 8000 rpm離心25 30min，取上清液，10000^15000rpm離心25 30 min,再取上清液，35000^45000 rpm離心50 60 min,棄去上清液，將最后離心得到的沉淀物用磷酸鹽緩沖液溶解，得到中蜂囊狀幼蟲病毒。上述的卵黃抗體的制備方法，采用水合法提取卵黃抗體IgY時(shí)具體步驟為 用蒸餾水將卵黃液稀釋，其中卵黃抗體與蒸餾水的體積比為1:9 1:10，攪拌
15 30min，用0. Imol / L的HCL調(diào)節(jié)PH= 5. 0 5. 2后，放置4 8°C冰箱6 12小時(shí)；然后以4 8°C，800(Tl0000 r / min離心25 30min，用醫(yī)用紗布過濾，取上清液，濃縮。用上述方法制備得到的卵黃抗體。上述的卵黃抗體在防治中蜂囊狀幼蟲病的藥物中應(yīng)用。上述的卵黃抗體在防治中蜂囊狀幼蟲病的藥物中應(yīng)用，其具體步驟如下 將效價(jià)調(diào)整到25的卵黃抗體溶液，通過直接溶解糖或噴霧的方式給予蜜蜂，飼喂量為
15^25毫升/天/框，隔天飼喂1次，連續(xù)飼喂三周。用該方法制得的卵黃抗體在治療中蜂囊狀幼蟲病的藥物中，具有作用迅速、療效確切、治愈率高、特異性強(qiáng)、起效快、不復(fù)發(fā)等優(yōu)點(diǎn)，其直接針對(duì)相應(yīng)抗原發(fā)生迅速的結(jié)合反應(yīng)，因而使用后可產(chǎn)生立竿見影的效果，尤其用于周邊已有疾病發(fā)生時(shí)的緊急預(yù)防，使用方便，見效快、安全。卵黃抗體除具有抗體共同優(yōu)點(diǎn)外，更有許多獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)，表現(xiàn)在原料易得，生產(chǎn)成本低，使用方便，無(wú)藥物殘留，不易失效，便于貯存等特點(diǎn)。通過該方法制得的卵黃抗體，用于中蜂囊狀幼蟲病治療，臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)已經(jīng)通過RT-PCR檢測(cè)和臨床確診的80箱感染中蜂囊狀幼蟲病毒的蜂群進(jìn)行治療，發(fā)病較輕的蜂群6、天，不再有幼蟲拖出，2周左右開始出現(xiàn)新的封蓋幼蟲，而其他蜂群在13天左右陸續(xù)不再有幼蟲拖出，并在21天左右出現(xiàn)新的封蓋幼蟲，一個(gè)月左右77箱蜜蜂全部治愈， 治愈率96. 25%以上。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
一、中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗的制備
用RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性的患病幼蟲與pH7. 6的磷酸鹽緩沖溶液先混勻，每Ig患病幼蟲加磷酸鹽緩沖液lml，磨碎后的混合液加入氯仿，與上述混合液的體積比1:0.8，在371下勻漿10 min，然后1000 rpm離心lOmin，分別收集上清液和沉淀物；取上清液，在上清液中加入與其體積比為1:0. 8的氯仿，在37°C水浴中振搖10 min，然后1000 rpm離心10 min, 分別收集上清液和沉淀物，上清液繼續(xù)用此法處理兩次，分別收集上清液和沉淀物；將所得沉淀物收集在一起，用PH7. 6磷酸鹽緩沖液溶解，每Ig沉淀物加Iml磷酸鹽緩沖液，然后1000 rpm離心10 min，取上清液，與之前經(jīng)過多次處理的上清液混合，然后5000 rpm離心 30 min，取上清液，15000 rpm離心25 min，再取上清液，35000 rpm離心60 min，棄去上清液，將沉淀物用磷酸鹽緩沖液溶解，用RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)陽(yáng)性，證明得到中蜂囊狀幼蟲病毒。將得到的病毒用BCA法檢測(cè)濃度，用pH7. 6磷酸鹽緩沖液將病毒濃度稀釋至0. 25 毫克/毫升，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒體積的0. 3%加入甲醛滅活M小時(shí)后，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒體積的4%的加入吐溫-80，做水相；司本-80與10號(hào)白油按體積比1 14混合， 在121. 3°C溫度下滅菌，做油相；水相與油相體積比為2:3，先將油相在SOOOrpm攪拌，再緩慢加入水相，12000rpm攪拌4分鐘，進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)后，制得中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗，所制疫苗為油包水型。二、卵黃抗體的制備
用制備的中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，首次免疫肌肉注射0. 5毫升，之后第14天，第觀天免疫加強(qiáng)1次，劑量加大1倍，經(jīng)三免后，用間接ELESA法測(cè)定抗體效價(jià)，效價(jià)達(dá)到28以上，就可以收集雞蛋，儲(chǔ)于4°C，以后每隔35天免疫一次上述產(chǎn)蛋雞， 以保證有效抗體效價(jià)在28以上；對(duì)收集到的雞蛋用水合法提取卵黃抗體IgY，具體方法為 用蒸餾水將卵黃液稀釋，其中卵黃抗體與蒸餾水的體積比為1 :9，攪拌15min，用0. Imol / L的HCL調(diào)節(jié)PH至5.0后放置4°C冰箱6小時(shí)；然后以4°C，10000 r / min離心25min， 用醫(yī)用紗布過濾，取上清液，用濃縮儀(millipoe 30kd)濃縮，即制得卵黃抗體。三、上述的卵黃抗體在防治中蜂囊狀幼蟲病的藥物中應(yīng)用
對(duì)已經(jīng)通過RT-PCR檢測(cè)和臨床確診的30箱感染中蜂囊狀幼蟲病毒的蜂群進(jìn)行治療， 將效價(jià)調(diào)整到25的卵黃抗體溶液作為藥物通過直接溶解糖的方式給予蜜蜂，飼喂量為15 毫升/天/框，隔天飼喂1次，連續(xù)飼喂21天。除了 2箱因管理不善、失王、工蜂產(chǎn)卵外，未進(jìn)行持續(xù)治療外，其他剩下的觀箱蜜蜂，在治療后第13天不再有幼蟲拖出，21天開始出現(xiàn)新的封蓋幼蟲，截止31天28箱蜜蜂全部治愈，治愈率96. 25%。實(shí)施例2
一、中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗的制備
用RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性的患病幼蟲與pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液先混勻，每Ig患病幼蟲加磷酸鹽緩沖液1. 5ml，磨碎后的混合液加入氯仿，與上述混合液的體積比1:1. 2，在39°C下勻漿8 min，然后1200 rpm離心8min，分別收集上清液和沉淀物；取上清液，在上清液中加入與其體積比為1:1.2的氯仿，在39°C水浴中振搖8 min，然后1200 rpm離心8 min，分別收集上清液和沉淀物，上清液繼續(xù)用此法處理三次，分別收集上清液和沉淀物；將所得沉淀物收集在一起，用PH7. 4磷酸鹽緩沖液溶解，每Ig沉淀物加1. 5ml磷酸鹽緩沖液，然后1200 rpm離心8 min，取上清液，與之前經(jīng)過多次處理的上清液混合，然后6000 rpm離心27 min, 取上清液，12000 rpm離心27 min，再取上清液，40000 rpm離心55 min，棄去上清液，將沉淀物用磷酸鹽緩沖液溶解，用RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)陽(yáng)性，證明得到中蜂囊狀幼蟲病毒。將得到的病毒用BCA法檢測(cè)濃度，用pH7. 4磷酸鹽緩沖液將病毒濃度稀釋至0. 2 毫克/毫升，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒體積的0. 35%加入甲醛滅活36小時(shí)后，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒體積的6%的加入吐溫-80，做水相；司本-80與10號(hào)白油按體積比1: 19混合，在121. 3°C溫度下滅菌，做油相；水相與油相體積比為1 2，先將油相在9000rpm攪拌，再緩慢加入水相，IOOOOrpm攪拌6分鐘，進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)后，制得中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗，所制疫苗為油包水型。二、卵黃抗體的制備
用制備的中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，首次免疫肌肉注射0. 75毫升，之后第14天，第四天免疫加強(qiáng)1次，劑量加大1. 5倍，經(jīng)三免后，用間接ELESA法測(cè)定抗體效價(jià)，效價(jià)達(dá)到28以上，就可以收集雞蛋，儲(chǔ)于6°C，以后每隔32天免疫一次上述產(chǎn)蛋雞，以保證有效抗體效價(jià)在28以上；對(duì)收集到的雞蛋用水合法提取卵黃抗體IgY，具體方法為用蒸餾水將卵黃液稀釋，其中卵黃抗體與蒸餾水的體積比為1:10，攪拌20!^11，用 0. Imol / L的HCL調(diào)節(jié)PH至5.1后放置6°C冰箱9小時(shí)；然后以6°C，9000r / min離心 27min,用醫(yī)用紗布過濾，取上清液，用濃縮儀(millipoe 30kd)濃縮，即制得卵黃抗體。三、上述的卵黃抗體在防治中蜂囊狀幼蟲病的藥物中應(yīng)用
對(duì)已經(jīng)通過RT-PCR檢測(cè)和臨床確診的25箱感染中蜂囊狀幼蟲病毒的蜂群進(jìn)行治療， 將效價(jià)調(diào)整到25的卵黃抗體溶液作為藥物通過直接溶解糖的方式給予蜜蜂，飼喂量為20 毫升/天/框，隔天飼喂1次，連續(xù)飼喂21天。在治療后第8天不在有幼蟲拖出，18天開始出現(xiàn)新的封蓋幼蟲，截止35天，25箱蜜蜂全部治愈，治愈率100%。實(shí)施例3
一、中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗的制備
用RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性的患病幼蟲與pH7. 8的磷酸鹽緩沖溶液先混勻，每Ig患病幼蟲加磷酸鹽緩沖液anl，磨碎后的混合液加入氯仿，與上述混合液的體積比1 1. 5，在40°C下勻漿9 min，然后800 rpm離心9min，分別收集上清液和沉淀物；取上清液，在上清液中加入與其體積比為1:1.5的氯仿，在40°C水浴中振搖9min，然后800 rpm離心9 min，分別收集上清液和沉淀物，上清液繼續(xù)用此法處理四次，分別收集上清液和沉淀物；將所得沉淀物收集在一起，用PH7. 8磷酸鹽緩沖液溶解，每Ig沉淀物加2ml磷酸鹽緩沖液，然后800 rpm離心 9 min，取上清液，與之前經(jīng)過多次處理的上清液混和，然后8000 rpm離心25 min，取上清液，10000 rpm離心30 min，再取上清液，45000 rpm離心50 min，棄去上清液，將沉淀物用磷酸鹽緩沖液溶解，用RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)陽(yáng)性，證明得到中蜂囊狀幼蟲病毒。將得到的病毒用BCA法檢測(cè)濃度，用pH7. 8磷酸鹽緩沖液將病毒濃度稀釋至0. 3 毫克/毫升，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒體積的0. 4%加入甲醛滅活48小時(shí)后，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒體積的8%的加入吐溫-80，做水相；司本-80與10號(hào)白油按體積比1 9混合， 在121. 3°C溫度下滅菌，做油相；水相與油相體積比為1 3，先將油相在IOOOOrpm攪拌，再緩慢加入水相，IlOOOrpm攪拌5分鐘，進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)后，制得中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗，所制疫苗為油包水型。二、卵黃抗體的制備
用制備的中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，首次免疫肌肉注射1毫升， 之后第15天，第30天免疫加強(qiáng)1次，劑量加大2倍，經(jīng)三免后，用間接ELESA法測(cè)定抗體效價(jià)，效價(jià)達(dá)到28以上，就可以收集雞蛋，儲(chǔ)于8°C，以后每隔30天免疫一次上述產(chǎn)蛋雞，以保證有效抗體效價(jià)在28以上；對(duì)收集到的雞蛋用水合法提取卵黃抗體IgY，具體方法為用蒸餾水將卵黃液稀釋，其中卵黃抗體與蒸餾水的體積比為1 :9. 5，攪拌30min，用0. Imol / L 的HCL調(diào)節(jié)PH至5.2后放置8°C冰箱12小時(shí)；然后以8°C，8000r / min離心30min，用醫(yī)用紗布過濾，取上清液，用濃縮儀(millipoe 30kd)濃縮，即制得卵黃抗體。
三、上述的卵黃抗體在防治中蜂囊狀幼蟲病的藥物中應(yīng)用
對(duì)已經(jīng)通過RT-PCR檢測(cè)和臨床確診的25箱感染中蜂囊狀幼蟲病毒的蜂群進(jìn)行治療， 將效價(jià)調(diào)整到25的卵黃抗體溶液作為藥物通過噴霧的方式給予蜜蜂，飼喂量為25毫升/ 天/框，隔天飼喂1次，連續(xù)飼喂21天。在治療后第6天不再有幼蟲拖出，17天開始出現(xiàn)新的封蓋幼蟲，在第23天因1箱蜜蜂失王與鄰近箱合并，剩下的M箱蜜蜂全部治愈，治愈率 98. 76%ο
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及的一種卵黃抗體的制備方法，其特征在于1.1中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗的制備將中蜂囊狀幼蟲病毒用BCA法檢測(cè)濃度，用ΡΗ=7. Γ7. 8的磷酸鹽緩沖液將病毒濃度稀釋至0. 2^0. 3毫克/毫升，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒溶液體積的0. 3^0. 4%加入甲醛滅活M 48小時(shí)后，按稀釋后的囊狀幼蟲病毒溶液體積的4 8%的加入吐溫-80，做水相；司本-80與10號(hào)白油按體積比1: 9^1: 19混合，滅菌，做油相；水相與油相體積比為 1 3 2 3，先將油相在800(Tl0000rpm攪拌，再緩慢加入水相，1000(Tl2000rpm攪拌4 6分鐘，進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)后，制得中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗，所制疫苗為油包水型；1.2卵黃抗體的制備用制備的中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗免疫產(chǎn)蛋雞，首次免疫肌肉注射0. 5^1毫升，之后第1^15天，第觀 30天免疫加強(qiáng)1次，劑量加大至首次注射劑量的2、倍，經(jīng)三次免疫后，用間接ELESA法測(cè)定抗體效價(jià)，當(dāng)效價(jià)達(dá)到28以上時(shí)，收集雞蛋，儲(chǔ)于4、°C，以后每隔3(Γ35天免疫一次所述產(chǎn)蛋雞，以保證有效抗體效價(jià)在28以上；對(duì)收集到的雞蛋用水合法提取卵黃抗體IgY。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卵黃抗體的制備方法，其特征在于所述的中蜂囊狀幼蟲病毒通過以下步驟得到2. 1用RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性的患病幼蟲與ρΗ=7. Ο. 8的磷酸鹽緩沖液先混勻，每Ig患病幼蟲加磷酸鹽緩沖液廣anl，磨碎后的混合液加入氯仿，氯仿與所述混合液的體積比 1 0. 8 1 1. 5，在37 40°C下勻漿8 10 min,然后800 1200 rpm離心8 lOmin，分別收集上清液和沉淀物；2. 2取上清液，在上清液中加入與其體積比為1:0. 8^1:1. 5的氯仿，在37、0°C水浴中振搖8 10 min，然后800 1200 rpm離心8 10 min，分別收集上清液和沉淀物；2. 3上清液繼續(xù)用步驟2處理2、次，分別收集上清液和沉淀物；2.4將所得沉淀物收集在一起，用ρΗ=7. Ο. 8的磷酸鹽緩沖液溶解，每Ig沉淀物加廣2ml磷酸鹽緩沖液，然后80(T1200 rpm離心8 10 min，取上清液，與之前經(jīng)過多次處理的上清液混合，然后5000 8000 rpm離心25 30min，取上清液，10000^15000rpm離心25 30 min,再取上清液，35000^45000 rpm離心50 60 min,棄去上清液，將最后離心得到的沉淀物用磷酸鹽緩沖液溶解，得到中蜂囊狀幼蟲病毒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的卵黃抗體的制備方法，采用水合法提取卵黃抗體IgY時(shí)其特征在于 用蒸餾水將卵黃液稀釋，其中卵黃抗體與蒸餾水的體積比為1:9 1:10，攪拌 15 30min，用0. Imol / L的HCL調(diào)節(jié)PH= 5. 0 5. 2后，放置4 8°C冰箱6 12小時(shí)；然后以4 8°C，800(Tl0000 r / min離心25 30min，用醫(yī)用紗布過濾，取上清液，濃縮。
4.如權(quán)利要求1或2或3所述方法制備得到的卵黃抗體。
5.按照權(quán)利要求4所述的卵黃抗體在防治中蜂囊狀幼蟲病的藥物中應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的卵黃抗體在防治中蜂囊狀幼蟲病的藥物中應(yīng)用，其特征在于將效價(jià)調(diào)整到25的卵黃抗體溶液，通過直接溶解糖或噴霧的方式給予蜜蜂，飼喂量為 15^25毫升/天/框，隔天飼喂1次，連續(xù)飼喂三周。
全文摘要
一種卵黃抗體的制備方法、用該方法制得的卵黃抗體及其應(yīng)用，其技術(shù)方案是以中蜂囊狀幼蟲為病毒增殖模型增值病毒，并用增值的病毒制備中蜂囊狀幼蟲病毒油佐劑滅活疫苗，用制備的滅活疫苗連續(xù)三次免疫產(chǎn)蛋雞，用間接ELESA法測(cè)定抗體效價(jià)，效價(jià)達(dá)到28以上收集雞蛋，用水合法提純卵黃抗體。用這種卵黃抗體對(duì)感染中蜂囊狀幼蟲病毒的蜂群進(jìn)行治療，治愈率96.25%達(dá)以上，并且使用方便、特異性強(qiáng)、起效快、不復(fù)發(fā)、無(wú)藥物殘留。
文檔編號(hào)A61K39/42GK102504023SQ201110343389
公開日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2011年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月3日
發(fā)明者和紹禹, 宋英今, 張大利, 徐曉麗, 王立辛, 袁小波, 費(fèi)東亮, 韓喜彬, 馬鳴瀟 申請(qǐng)人:遼寧醫(yī)學(xué)院