專利名稱：一種山慈菇提取物的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種山慈菇提取物的提取方法。
背景技術(shù)：
山慈燕為蘭科植物杜胃$蘭Cremastra appendiculata (D. Don) Makino、獨蒜蘭Pleione bulbocodioides (Franch. ) Rolfe 和云南獨蒜蘭P. yunnanensis Rolfe 的干燥假鱗莖，具清熱解毒、化痰散結(jié)等功效，常用于癰腫疔毒，瘰疬結(jié)核，淋巴結(jié)結(jié)核，蛇蟲叮咬等癥狀的治療，廣泛分布于長江流域以南地區(qū)及山西、陜西、甘肅等地。山慈菇作為中醫(yī)抗癌中藥已得到廣泛應(yīng)用，特別是近年來在臨床上對乳腺癌、食道癌、胃癌、白血病等惡性腫·瘤表現(xiàn)出的良好療效而備受關(guān)注。但就當(dāng)前山慈菇的開發(fā)利用來看，臨床上主要以中藥復(fù)方的形式應(yīng)用，其有效成分及藥理作用尚不十分明確，嚴(yán)重限制了山慈菇的深度開發(fā)及市場潛能的發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服目前山慈菇在應(yīng)用于藥物時有效成分及藥理作用不十分明確的缺陷，提供一種山慈菇提取物的提取方法，明確了各提取部位的藥理作用，可將提取物應(yīng)用于制藥以提高藥效、減小服用劑量。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案
本發(fā)明山慈菇提取物的提取方法，包括如下步驟
(1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，濾液濃縮得粗提物浸膏；
(2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋，稀釋液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分別濃縮得氯仿層浸膏和乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。優(yōu)選的，上述提取方法為
(1)粗提取山慈菇，粉碎，用5 15重量倍75 100%乙醇在室溫下浸提I 4次，然后再用5 15重量倍40 75%乙醇在室溫下浸提I 4次，殘渣用5 10重量倍50 95%乙醇于50 90°C水浴回流提取I 4次，合并所有提取液，過濾，濃縮，得粗提物浸膏；
(2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水混懸均勻，用氯仿萃取I 7次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯萃取I 7次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。最佳的，前述山慈菇提取物的提取方法為
(1)粗提取山慈菇，粉碎，用12重量倍95%乙醇在室溫下浸提2次，然后再用12重量倍75%乙醇在室溫下浸提2次，每次48小時，殘渣用8重量倍75%乙醇于70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并所有提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，得粗提物浸膏；
(2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋至室溫下相對密度I.I I. 2，混懸均勻，用氯仿等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。
申請人對山慈菇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)預(yù)試和體外抗腫瘤活性驗證，具體如下
一、提取物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試
I、提取
山慈菇干燥假鱗莖30kg，粉碎，用體積分?jǐn)?shù)為95%及75%的乙醇分別冷浸兩次，每次48h，最后再以75%乙醇，70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并各次提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，得到粗提物總浸膏約2. Okgo取粗提物總浸膏，加入適量蒸餾水均勻混懸，測試其相對密度在I. I I. 2之間為宜，再分別以氯仿、乙酸乙酯反復(fù)等體積萃取5次，合并各次萃取液，減壓濃縮，得到氯仿層 部位浸膏約150g，乙酸乙酯層部位浸膏約IOOg ;剩余部分再結(jié)合高濃度醇沉法(95%乙醇)得到醇層和水層部位浸膏。2、山慈菇提取物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試
同一天然藥物中至少含有上百種化學(xué)成分，在著手研究山慈菇的化學(xué)成分時，有必要大致知曉其主要化學(xué)成分在不同極性段中的分布情況，這樣才便于在以后的研究中根據(jù)各類化學(xué)成分的性質(zhì)選擇合理的研究方法。2. I供試樣品
A 50%乙醇-山慈菇粗提物浸膏溶液，B 50%乙醇-山慈菇水層浸膏溶液，C 90%乙醇-山慈菇醇層浸膏溶液，D :甲醇-山慈菇乙酸乙酯層浸膏溶液，E :氯仿-甲醇(1:1)-山慈燕氯仿層浸膏溶液。2. 2系統(tǒng)預(yù)試方法
山慈菇提取物化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試，主要采用試管法對山慈菇粗提物以及萃取后得到水層、醇層、乙酸乙酯層及氯仿層部位進(jìn)行定性鑒定，具體方法見表I。表I山慈燕化學(xué)成分定性檢測
權(quán)利要求
1.一種山慈菇提取物的提取方法，包括如下步驟 (1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，濾液濃縮得粗提物浸膏； (2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋，稀釋液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分別濃縮得氯仿層浸膏和乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。
2.按照權(quán)利要求I所述山慈菇提取物的提取方法，其特征在于 (1)粗提取山慈菇，粉碎，用5 15重量倍75 100%乙醇在室溫下浸提I 4次，然后再用5 15重量倍40 75%乙醇在室溫下浸提I 4次，殘渣用5 10重量倍50 95%乙醇于50 90°C水浴回流提取I 4次，合并所有提取液，過濾，濃縮，得粗提物浸膏； (2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水混懸均勻，用氯仿萃取I 7次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯萃取I 7次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。
3.按照權(quán)利要求2所述山慈菇提取物的提取方法，其特征在于 (1)粗提取山慈菇，粉碎，用12重量倍95%乙醇在室溫下浸提2次，然后再用12重量倍75%乙醇在室溫下浸提2次，每次48小時，殘渣用8重量倍75%乙醇于70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并所有提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，得粗提物浸膏； (2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋至室溫下相對密度I.I I. 2，混懸均勻，用氯仿等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得氯仿層浸膏，萃余物再用乙酸乙酯等體積萃取5次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種山慈菇提取物的提取方法，(1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，濾液濃縮得粗提物浸膏；(2)萃取將粗提物浸膏用蒸餾水稀釋，稀釋液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分別濃縮得氯仿層浸膏和乙酸乙酯層浸膏，該浸膏即為山慈菇提取物，實驗證明，山慈菇的氯仿層萃取物和乙酸乙酯層萃取物對腫瘤細(xì)胞具有較好的抑制活性，可取代山慈菇原藥材而用于制備抗腫瘤藥物，以提高療效、減小服用量。
文檔編號A61P35/00GK102895523SQ20111021006
公開日2013年1月30日 申請日期2011年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月26日
發(fā)明者周英, 黃波, 郭東貴, 王慧娟, 錢利安 申請人:貴州大學(xué)