專利名稱：蟲草銀杏白果黃酒、制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特指利用三種酶水解銀杏白果，經(jīng)過(guò)兩次菌種發(fā)酵獲得的發(fā)酵液經(jīng)過(guò)過(guò)濾和勾兌生產(chǎn)蟲草銀杏白果黃酒的方法和用途。
背景技術(shù)：
銀杏白果的主要成分是蛋白質(zhì)、淀粉和脂肪，另外含有黃酮、萜類化合物、銀杏酸、 氫化白果酸、氫化白果亞酸、銀杏醇、白果酚和多糖。我國(guó)中醫(yī)古書，一直將白果列為重要藥材，白果酸抑制多種桿菌及皮膚真菌，并對(duì)葡萄球菌、鏈球菌、白喉、炭瘟桿菌，枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、傷寒菌等都有不同程度的抑制作用。從鮮白果中提取出來(lái)的白果酚酸，有降壓作用，并且使血管的滲透性增加。近年來(lái)各地臨床試驗(yàn)證明，經(jīng)常食用白果，可治高血壓、止白帶、咳鍬發(fā)熱；心腦血管、呼吸系統(tǒng)、皮膚病、牙痛等疾病，還有清熱擾菌、溫肺益氣、 擴(kuò)張血管、增加血流量、定痰喘、去皺紋、防衰老、潤(rùn)音喉、健身美容、延年益壽等功效。但是白果中由于含有微量的白果酚、白果酸，易導(dǎo)致人體食欲不振、脫皮、觸痛，不等程度的肝損害、腎小球腎炎，白果酸有溶血作用引起驚厥和死亡。由于這些副作用阻礙了白果的大量的食用。因此采用一方面可以強(qiáng)化白果的藥用價(jià)值，同時(shí)具有降低白果毒性的技術(shù)開發(fā)利用白果資源具有重要社會(huì)學(xué)意義，同時(shí)也會(huì)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。國(guó)內(nèi)關(guān)于銀杏白果發(fā)酵酒有部分研究和報(bào)道，已經(jīng)申請(qǐng)發(fā)明專利共十多項(xiàng)，這些專利基本上采用浸泡、勾兌或者發(fā)酵，如中國(guó)專利(CN 01113680. 4)介紹了一種以銀杏為主要原料加入48度至52度白酒中浸漬提取有效成份后得酒液，然后再加入銀杏提取物即銀杏酮、蜂蜜勾兌而成；專利(CN 03131562. 3)主要介紹以草莓和浸泡、蒸煮后的銀杏、紅棗、 葡萄為原料，經(jīng)糖、米曲、活性酵母發(fā)酵24 36小時(shí)，攪拌勾兌50° 60°麥酒，封存5 15天后壓汁，經(jīng)粗、細(xì)過(guò)濾，取汁與糖按50 1的比例調(diào)配，該酒具有軟化血管、降低血脂、 補(bǔ)血、活血、潤(rùn)肺、健脾之功效和營(yíng)養(yǎng)、醫(yī)用價(jià)值；專利(CN 96115885. 9)主要涉及采用銀杏葉80 110克、小米70 85克、糯米50 80克、高梁45 60克、糖化酶30 40克、 紅曲75 95克、白酒30 45克、水15 35克等原料經(jīng)過(guò)發(fā)酵獲得銀杏酒，該酒可預(yù)防防治由動(dòng)脈硬化引起的疾病、腦血管障礙后遺癥、腦受傷后遺癥等；專利(CN1376776)涉及銀杏葉低溫粉碎機(jī)內(nèi)粉碎，白酒浸泡，脫苦以及白酒勾兌，該酒降低血清膽固醇、預(yù)防腦供血不足、腦功能性障礙提高人體耐缺氧能力、促進(jìn)紅細(xì)胞的生成功能。目前，對(duì)白果發(fā)酵的方法主要銀杏葉或其提取物或者白果加入大米、酒曲或其他輔料直接發(fā)酵。用這些方法得到的酒由于含有銀杏葉或白果中果的活性成分，如黃酮和萜類因而具有一定的功效。例如胡廣東，宋瑞濱曾經(jīng)報(bào)道米與銀杏葉或白果一同蒸煮，蒸煮冷卻后加入米曲糖化發(fā)酵，經(jīng)過(guò)后續(xù)壓榨獲得銀杏果酒，發(fā)明專利(申請(qǐng)?zhí)朇N 201010145712. 4)涉及藥用真菌金耳轉(zhuǎn)化銀杏白果獲得的白果酒，該酒同時(shí)含有金耳和銀杏的活性成分具有預(yù)防糖尿病、高血脂、抗氧化和增加肌體免疫力具有特效。由上述研究可知，銀杏白果可以與米混合通過(guò)與酒曲發(fā)酵獲得含有銀杏活性成分的功能性白酒，但是無(wú)論銀杏葉還是其提取物或者白果都含有一定量的銀杏毒素，如氫氰酸、銀杏酚酸，使得銀杏白酒或果酒的使用量受到了一定的限制，限制了銀杏酒的銷售量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供的是一種蟲草銀杏白果黃酒的釀制技術(shù)，采用三種酶水解銀杏白果， 獲得銀杏白果水解液，該水解液中含有銀杏黃酮、萜類化合物、氨基酸和肽類、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽類含量> 1%，淀粉含量> 2%，該水解液添加銀杏葉提取物后通過(guò)蟲草菌種轉(zhuǎn)化，加入米飯酒曲發(fā)酵獲得發(fā)酵液，該發(fā)酵液經(jīng)過(guò)過(guò)濾、勾兌獲得蟲草銀杏白果黃酒。蟲草銀杏白果黃酒，其特征在于酒精度(質(zhì)量/體積m/V) 8 16 %，總黃酮含量 1 5mg/L，銀杏內(nèi)酯1 6 mg/L,總萜類化合物含量30 800mg/L，蛋白質(zhì)60 200mg/ L，可溶性糖彡2. 0%，蟲草酸10 30mg/L，蟲草素0. 5 2mg/L，銀杏酚酸0 5ppm，氫氰酸
0 0. 1 μ g/L。本發(fā)明的目的在于提供一種蟲草銀杏白果黃酒的制備方法，按下述步驟進(jìn)行
(1)精確稱取已經(jīng)脫殼的銀杏白果，打漿加入1 5倍的水，煮沸糊化，加入0.2 5. 0% (質(zhì)量/體積)市售液化酶(16萬(wàn)單位/毫升)，80°C水浴10 50分鐘，冷卻到50 70°C 后，加入0. 1 4. 0% (質(zhì)量/體積)糖化酶，50 70°C水浴10 50分鐘，待冷卻至40 600C以下后加入0. 2 3. 0% (質(zhì)量/體積)蛋白酶40 60°C水解0. 5 9小時(shí)，制得銀杏白果水解液；
(2)銀杏白果水解液在100 120°C滅菌10 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉(zhuǎn)速60 180轉(zhuǎn)/分鐘，溫度22 33°C培養(yǎng)5 10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過(guò)100 120°C滅菌，以3 10% (體積比)接種量接入蟲草液體搖瓶菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉(zhuǎn)速60 250轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :0. 3 1 :1. 2v/v/m培養(yǎng)3 8天，制得蟲草銀杏一級(jí)液體菌種；銀杏水解液經(jīng)過(guò)100 120°C滅菌10 60分鐘，以3 10% (體積比)接種量接入蟲草銀杏一級(jí)液體菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉(zhuǎn)速60 250 轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :0. 3 1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 10天，制得蟲草銀杏白果發(fā)酵液；向蟲草銀杏白果發(fā)酵液加入白果重量的0. 2 5. 0倍大米和水煮成的米飯，其中以質(zhì)量計(jì)大米水=
1:1 2，以及大米重的1 10%酒曲和大米重的0. 5 2%釀酒酵母，10 40°C發(fā)酵7 30天后，經(jīng)過(guò)過(guò)濾，濾液加入食用酒精、蜂蜜和檸檬酸勾兌，滅菌得到蟲草銀杏白果酒。其中銀杏白果水解液制備過(guò)程中所使用的蛋白酶為風(fēng)味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、高效水解蛋白酶或小麥蛋白水解專用酶等。用該工藝生產(chǎn)的蟲草銀杏白果黃酒，其特征在于色質(zhì)米黃色至褐色，具有淡淡白果香味和蟲草發(fā)酵的特有香味，該酒濃縮后香味濃郁持久不退。本發(fā)明提供的蟲草銀杏白果黃酒，該酒含有銀杏活性成分(黃酮和萜類)和蟲草活性成分(如蟲草多糖、甘露醇和蟲草酸)，具有預(yù)防高血壓或抗氧化等功效。


圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明所述的蟲草銀杏白果酒中活性成分分別按下列方法檢測(cè)總黃酮含量的測(cè)定采用亞硝酸鈉一硝酸鋁法(鄧斌，蔣剛彪，陳六平分光光度法測(cè)定食品包裝紙用紫甘薯總黃酮的含量.包裝工程，2008，29(1) :27 29.)；萜類含量的測(cè)定采用王翔飛介紹的測(cè)定方法(王翔飛，潘旭東，劉雯霞，等黃花瓦松中總?cè)瞥煞值暮康臏y(cè)定.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2009，18(10): 11.)；銀杏內(nèi)酯含量測(cè)定采用分光光度法(張渝陽(yáng)，王鑫，趙麗娟，荀紹馨，田明，張新，王曉寧，鄧桂春分光光度法測(cè)定銀杏萜內(nèi)酯的含量.遼寧化工，2006，35(10):618 620)；氫氰酸含量測(cè)定依據(jù)中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/ T15665-1995 豆類、配糖氫氰酸含量的測(cè)定；銀杏酚酸采用熒光分析法測(cè)定(田亞平，尤文元，李或娜熒光分析法測(cè)定銀杏酚酸.分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào).2006年特刊，sl55-sl57)，蟲草酸測(cè)定采用比色法(董巍巍，呂效平，李祥，陳建偉，孫東東，左堅(jiān)人工蟲草及野生蟲草的成分比較研究?，F(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐2007，22 (2) :39 41);蟲草素含量測(cè)定采用高效液相色譜法(夏敏反相高效液相色譜法測(cè)定蛹蟲草中蟲草素的含量.淮陰工學(xué)院學(xué)報(bào)， 2004，13(3)22 24)。下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步闡述
本發(fā)明中實(shí)施例1 3中所使用的蟲草菌種為可以購(gòu)買到的任意一種蟲草菌種。蟲草斜面菌種采用PDA培養(yǎng)基制備。IOOOmLPDA培養(yǎng)基含200g馬鈴薯提取液(去皮馬鈴薯切成碎片、IOOOmL蒸餾水煮沸30分鐘，八層紗布過(guò)濾，濾液定容至IOOOmL,濾液即為馬鈴薯提取液)加入蔗糖20g、瓊脂20g，煮沸待瓊脂完全溶化后分裝試管，塞上棉塞，121°C滅菌，制成斜面。無(wú)菌接種蟲草菌種，28°C培養(yǎng)7天，4°C冷藏待用。實(shí)施例1
精確稱取已經(jīng)脫殼的白果200g，打漿加入200mL的水，煮沸糊化，溫度降至60°C，加入
0.4mL液化酶(無(wú)錫賽德生物工程有限公司，16萬(wàn)單位/mL)60°C水解50分鐘，降溫到50°C， 加入0. 2mL糖化酶(無(wú)錫賽德生物工程有限公司，2萬(wàn)單位/mL) 50°C水解50分鐘，降溫到 30°C，加入0. 4g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬(wàn)單位/g)，水解9 小時(shí)，制得銀杏白果水解液；銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶100mL，100°C滅菌 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分鐘，溫度22°C培養(yǎng)10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經(jīng)過(guò)100°C滅菌60分鐘，以10%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度22°C，攪拌轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :0. 3v/v/m培養(yǎng)8天，制得蟲草銀杏一級(jí)液體菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過(guò)100°C滅菌60分鐘，以3%接種量接入蟲草的一級(jí)液體菌種， 在溫度22°C，攪拌轉(zhuǎn)速60轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :0. 3v/v/m培養(yǎng)10天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液加入加入200g大米和200mL水煮成的米飯，以及大米重的1% (Ig)白酒酒曲 (購(gòu)自洋河酒廠)和大米重的0. 5% (Ig)釀酒酵母(feccAarofflj^M cererisiae，安琪酵母股份有限公司)，10°C發(fā)酵30天后，離心，上清液加入食用酒精25mL，檸檬酸0. lg，蜂蜜10g， 調(diào)勻后獲得蟲草銀杏白果黃酒。該酒為米黃色。
實(shí)施例2
精確稱取已經(jīng)脫殼的白果200g，打漿加入IOOOmL水，煮沸糊化，降溫至70°C加入加入
1.6mL液化酶(無(wú)錫賽德生物工程有限公司，16萬(wàn)單位/mL)70°C水解30分鐘，降溫到60°C， 加入1. 6mL糖化酶(無(wú)錫賽德生物工程有限公司，2萬(wàn)單位/mL) 60°C水解30分鐘，降溫到40°C，加入0. 4g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬(wàn)單位/g)，水解6 小時(shí)，制得銀杏白果水解液；銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶100mL，ll(TC滅菌 30分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉(zhuǎn)速120轉(zhuǎn)/分鐘，溫度28°C培養(yǎng)7天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經(jīng)過(guò)110°c滅菌30分鐘，以7%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度28°C，攪拌轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :0. 8v/v/m培養(yǎng)5天，制得蟲草銀杏一級(jí)液體菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過(guò)110°C滅菌30分鐘，以7%接種量接入蟲草的一級(jí)液體菌種， 在溫度28°C，攪拌轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :0. 8v/v/m培養(yǎng)5天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液加入加入500g大米和500mL水煮成的米飯，以及大米重的7. 5g (2. 5%)黃酒酒曲(購(gòu)自中南食品科學(xué)研究院)和2g (0. 4%)酵母，25°C發(fā)酵20天后，離心取清液加入食用酒精70mL.檸檬酸0.3g，蜂蜜20g，即為蟲草銀杏白果黃酒。該酒為淺褐色。
實(shí)施例3
精確稱取已經(jīng)脫殼的白果200g，打漿，加入2000mL水，煮沸糊化，降溫至80°C，加入 IOOmL液化酶(無(wú)錫賽德生物工程有限公司，16萬(wàn)單位/mL)80°C水解10分鐘，降溫到70°C， 加入IOOmL糖化酶(無(wú)錫賽德生物工程有限公司，2萬(wàn)單位/mL) 70°C水解10分鐘，降溫到 500C，加入30g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬(wàn)單位/g)，水解0. 5 小時(shí)，制得銀杏白果水解液；其中所述的搖瓶培養(yǎng)工藝是銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶lOOmL，120°C滅菌10分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘， 溫度33°C培養(yǎng)5天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經(jīng)過(guò)120°C滅菌，以10%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度33°C，攪拌轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :1. 2v/v/m培養(yǎng)3天， 制得蟲草銀杏一級(jí)液體菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過(guò)120°C滅菌10分鐘，以10%接種量接入蟲草的一級(jí)液體菌種，在溫度33°C，攪拌轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 1.2v/v/m培養(yǎng)3天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液加入IOOOg大米和IOOOmL水煮成的米飯，以及大米重的5%(50g)黃酒酒曲(購(gòu)自浙江力克生物科技有限公司)和2% (20g)酵母，40°C發(fā)酵10天后，離心取清液加入食用酒精lOOmL，檸檬酸0. 05g，蜂蜜20g勾兌即為蟲草銀杏白果黃酒。 該酒為褐色。
實(shí)施例4
實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3的測(cè)定結(jié)果顯示在表1
表1 實(shí)施例1 3成分分析表
權(quán)利要求
1.蟲草銀杏白果黃酒，其特征在于其中酒精度8 16%，總黃酮含量1 5mg/L，銀杏內(nèi)酯1 6 mg/L,總萜類化合物含量30 800mg/L，蛋白質(zhì)60 200mg/L，可溶性糖 (2. 0%，蟲草酸10 30mg/L，蟲草素0. 5 2mg/L，銀杏酚酸0 5ppm，氫氰酸0 0. 1 μ g/ L0
2.權(quán)利要求1所述的蟲草銀杏白果黃酒的制備方法，其特征在于按下述步驟進(jìn)行(1)精確稱取已經(jīng)脫殼的銀杏白果，打漿加入1 5倍的水，煮沸糊化，加入以質(zhì)量與體積比為0. 2 5. 0%液化酶，80°C水浴10 50分鐘，冷卻到50 70°C后，加入以質(zhì)量與體積比為0. 1 4. 0%糖化酶，50 70°C水浴10 50分鐘，待冷卻至40 60°C以下后加入以質(zhì)量與體積比為0. 2 3. 0%蛋白酶40 60°C水解0. 5 9小時(shí)，制得銀杏白果水解液；(2)銀杏白果水解液在100 120°C滅菌10 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種， 在轉(zhuǎn)速60 180轉(zhuǎn)/分鐘，溫度22 33°C培養(yǎng)5 10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；銀杏白果水解液經(jīng)過(guò)100 120°C滅菌，以體積比3 10%接種量接入蟲草液體搖瓶菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉(zhuǎn)速60 250轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :0. 3 1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 8天，制得蟲草銀杏一級(jí)液體菌種；銀杏水解液經(jīng)過(guò)100 120°C滅菌10 60分鐘，以體積比3 10%接種量接入蟲草銀杏一級(jí)液體菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉(zhuǎn)速60 250轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)量1 :0. 3 1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 10天，制得蟲草銀杏白果發(fā)酵液；向蟲草銀杏白果發(fā)酵液加入白果重量的0. 2 5. 0倍大米和水煮成的米飯，其中以質(zhì)量計(jì)大米水=1 :1 2， 以及大米重的1 10%酒曲和大米重的0. 5 2%釀酒酵母，10 40°C發(fā)酵7 30天后， 經(jīng)過(guò)過(guò)濾，濾液加入食用酒精、蜂蜜和檸檬酸勾兌，滅菌得到蟲草銀杏白果酒。
3.權(quán)利要求2所述的蟲草銀杏白果黃酒的制備方法，其特征在于其中銀杏白果水解液制備過(guò)程中所使用的蛋白酶為風(fēng)味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、高效水解蛋白酶或小麥蛋白水解專用酶。
4.權(quán)利要求1所述的蟲草銀杏白果黃酒的用途，可用于預(yù)防高血壓或抗氧化。
全文摘要
本發(fā)明公開了蟲草銀杏白果黃酒，生物工程技術(shù)領(lǐng)域。其中酒精度酒精度8～16％，總黃酮含量1～5mg/L，銀杏內(nèi)酯1～6mg/L，總萜類化合物含量30～800mg/L,蛋白質(zhì)60～200mg/L，可溶性糖≤2.0%，蟲草酸10～30mg/L,蟲草素0.5～2mg/L，銀杏酚酸0～5ppm，氫氰酸0~0.1μg/L。采用雙酶法水解銀杏白果，獲得銀杏白果水解液，該水解液中含有銀杏黃酮、萜類化合物、氨基酸和肽類、淀粉等活性化合物，該水解液通過(guò)蟲草菌種轉(zhuǎn)化，加入米飯酒曲發(fā)酵獲得發(fā)酵液，該發(fā)酵液經(jīng)過(guò)過(guò)濾、勾兌獲得蟲草銀杏白果酒。該酒含有銀杏和蟲草活性成分，具有預(yù)防高血壓和抗氧化等功效。
文檔編號(hào)A61K36/16GK102250724SQ20111019768
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月15日
發(fā)明者任曉鋒, 侯莎莎, 唐懿駿, 張志才, 張若花, 楊芳 申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)