專利名稱：金雞菊提取物保肝和抗氧化作用的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及金雞菊提取物在制備保肝和抗氧化作用的藥物和保健食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
金雞菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)又名雪菊,系菊科(Compositae)金雞菊屬 (Coreopsis)的干燥頭狀花序，單瓣、重瓣或半重瓣，舌狀花黃色或金黃色，花期6 9月。 大花金雞菊屬于北溫帶植物，原產(chǎn)于北美，弗羅里達(dá)州及墨西哥州，我國1936年作為觀賞植物引種子至廬山、南岳等地栽培，目前各地除供觀賞外，還用全草入藥，而且從花中提取的食用色素，具有清熱解毒和降壓之功效。目前在新疆和田地區(qū)種植較為廣泛，其維語名稱為古里恰依(Gulqai)，商品名“雪菊”。當(dāng)?shù)鼐用穸噙x用雪菊當(dāng)茶引用，有著非常好的民間使用基礎(chǔ)，。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供金雞菊提取物的新用途，即在制備保肝、抗氧化作用的藥物和保健食品中的應(yīng)用。金雞菊頭狀花絮500g，粉碎過50目篩，分別用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇回流提取2 次和用50%的乙醇回流提取1次，料液比1 10，每次池，合并3次的提取液，蒸干，得金雞菊總提物，上D-101大孔吸附樹脂進(jìn)行梯度洗脫，分別用水、10 %乙醇、30 %乙醇、50%乙醇、70 %乙醇、95 %乙醇洗脫，收集各洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，得到棕色粉末，其收率分別為總提物，16. 8%、水洗脫物，3. 57%,10%醇洗脫物，0. 95%、30%醇洗脫物，1.30%、50%醇洗脫物，0. 09 %、70%醇洗脫物，0. 06%、95%醇洗脫物，0. 07%。金雞菊提取物可用于制備保肝、抗氧化作用的藥物和保健食品，在劑型方面可采用各種劑型，如片劑、顆粒劑、散劑、或丸劑等劑型。金雞菊提取物可用于制備保肝、抗氧化作用的藥物和保健食品，其形狀為普通形狀或特殊形狀，也可以是片劑、膠囊或丸劑等劑型。金雞菊提取物實驗研究1、金雞菊提取物抗氧化作用實驗研究1. 2金雞菊提取物對羥自由基(-0H)的清除作用試驗方法采用！^enton反應(yīng)原理法，取ImL 0. 5mmol/L鄰二氮菲溶液于試管中，加入2mL 0. 2mol/L的磷酸鹽緩沖液(pH = 7. 4)，充分混勻，再加入ImL新配制的0. 5mmol/L硫酸亞鐵溶液，混勻后加入ImL新配制的0. 1 %雙氧水，于37°C水浴反應(yīng)60min后，在510nm處測吸光度值，所測吸光值為損傷管的吸光值；未損傷管以ImL蒸餾水代替損傷管中雙氧水， 操作方法同損傷管；樣品管以ImL樣品代替損傷管中的蒸餾水，操作方法同損傷管。清除率=[(A2-A1V(Atl-A1)]X 100%式中人為未損傷管的吸光值^為損傷管的吸光值-A為樣品管的吸光值。1. 3金雞菊提取物對超氧陰離子自由基(0_2)的清除作用試驗方法
采用鄰苯三酚自氧化法，取50mmol/L Tris-HCl緩沖溶液(pH = 8. 2)4. 5mL，置于25°C水浴中預(yù)熱20min，分別加入ImL樣品和0. 4mL 25mmol/L鄰苯三酚溶液，混勻后于 25°C水浴中反應(yīng)5min后，加入8mol/LHCl 0. 8mL終止反應(yīng)。自氧化管以ImL蒸餾水代替樣品管中樣品，操作方法同樣品管，在325nm處測定吸光值，以等體積pH值8. 2的Tris-HCl 緩沖液作為空白。超氧陰離子的清除率=(A0-A1)A0X 100%式中，Atl為自氧化管的吸光值^為樣品管的吸光值。1.4金雞菊提取物對DPPH自由基的清除作用試驗方法將金雞菊各提取物和VC配成0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Og/L濃度的溶液備用。分別取各濃度的試樣ImL于試管中，編號后，每支試管各加入6. 5X 10_5mol/LDPPH ·無水乙醇溶液 4. Oml均勻混合，在室溫下避光靜置30min。以無水乙醇調(diào)零，于517nm處測定其吸光度A。 空白對照組采用無水乙醇替代DPPH溶液，其他試劑與樣品組相同。各個實驗組均做5次平行，取均值。DPPH ·自由基清除率按下式計算。清除率(％) = [l-(Ai-Aj)/A0]X100%AO 4. 0mL6. 5X 10_5mol/LDPPH ·無水乙醇溶液 +ImL 樣品溶劑Ai 4. 0mL6. 5X l(T5mol/LDPPH ·無水乙醇溶液 +ImL 樣品Aj 4. OmL無水乙醇+ImL樣品2、實驗結(jié)果2. 1金雞菊提取物對-OH自由基的清除作用羥自由基是最活潑的自由基，其反應(yīng)速率極快，它是機體危害最大的自由基。實驗利用!^enton反應(yīng)原理法，F(xiàn)enton反應(yīng)是最常見的產(chǎn)生羥自由基的化學(xué)反應(yīng)，H2O2的量和 i^enton反應(yīng)產(chǎn)生的·0Η的量成正比，當(dāng)給予電子受體后，用gress試劑顯色，形成紅色物質(zhì)， 其呈色與·0Η的量成正比關(guān)系。由

圖1可以看出金雞菊提取物對-OH自由基有明顯的清除作用，并且隨著提取物濃度的增加，清除能力增強，表明金雞菊提取物對-OH自由基的清除能力與提取物濃度有明顯的量效關(guān)系。30%乙醇提取物(清除率為91. 19%) 50%乙醇提取物(清除率為86. 19% )在濃度為1. Og/L時清除自由基的能力與Vc(清除率為96. 73% ) 相當(dāng)。2. 2金雞菊提取物對0_2自由基的清除作用以空白對照組作參比，測各濃度樣品的吸光值，得出金雞菊提取物對超氧陰離子自由基的清除效果(圖幻。由圖2可知，金雞菊提取物濃度為0. 2 1. Og/L時，隨溶液濃度的增加對超氧陰離子自由基的清除率也隨之增加；當(dāng)濃度達(dá)1. 0g/L時，其中30%乙醇提取物與50 %乙醇提取物對超氧陰離子自由基的清除率分別為55. 65 %和97. 90 %，50 %乙醇提取物對超氧陰離子自由基的清除率尤為顯著，明顯強于陽性對照藥Vc(在濃度1. 0g/L 時，清除率為68. 89% )0說明金雞菊提取物在一定的濃度條件下對超氧陰離子自由基有較好的清除效果。2. 3金雞菊提取物對DPPH ·自由基的清除作用DPPH ·是一種很穩(wěn)定的以N為中心的自由基，在517nm處有強吸收峰，DPPH ·通常被用來檢測抗氧化劑的抗氧化活性。當(dāng)有自由基清除劑存在時，DPPH ·會和清除劑提供的質(zhì)子結(jié)合形成DPPH-H，從而使溶液顏色由紫色變?yōu)辄S色。從圖3可以看出，30%乙醇提取物、50%乙醇提取物和70%乙醇提取物在濃度為1. 0g/L時，對自由基的清除率均超過了70%這表明金雞菊提取物具有很強的清除DPPH ·的能力且有明顯的劑量依賴性，實驗結(jié)果說明金雞菊提取物是良好的質(zhì)子供體，具有顯著的抗氧化作用。實驗結(jié)果表明，金雞菊提取物具有清除羥自由基的作用，并且隨著提取物濃度的增加，對羥自由基的清除作用增強，呈明顯的量效關(guān)系；通過鄰苯三酚自氧化體系表明，金雞菊提取物能夠明顯清除體系中的氧自由基，表現(xiàn)出極強的抗氧化活性。此外，金雞菊提取物對DPPH ·自由基也表現(xiàn)出較強的抗氧化作用。通過對自由基的清除作用證實金雞菊提取物是一種有效的自由基清除劑，在試驗質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，其中30%乙醇提取物和50%乙醇提取物對DPPH 和· OH自由基的清除率與Vc相當(dāng)，50%乙醇提取物對0_2 ·自由基的清除率明顯強于Vc。表明金雞菊提取物是有效的外源性天然有機抗氧劑。3、金雞菊提取物對四氯化碳肝損傷的的影響空白對照組和模型組分別灌胃給予0. 2ml/10g的蒸餾水；陽性對照組灌胃給予 400mg/kg聯(lián)苯雙酯；給藥組，每天灌胃給予金雞菊提取物，連續(xù)5天。末次給藥1小時后， 除空白對照組外其余各組腹腔注射0. 的CC14(植物油配制)0.2ml/10g。禁食不禁水， 24小時后摘眼球取血，用全自動生化儀測定ALT和AST活性。
權(quán)利要求
1.按照說明書所述得到的金雞菊提取物，其特征在于金雞菊總提物上D-101大孔吸附樹脂進(jìn)行梯度洗脫，用25% -75%乙醇洗脫，收集各洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，得到棕色粉末，本提取物可用于制備保肝的藥物和保肝的保健食品，特征在于金雞菊提取物可與藥學(xué)上適用載體混合，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、或緩釋劑等。
2.按照說明書所述得到的金雞菊提取物，其特征在于金雞菊總提物上D-101大孔吸附樹脂進(jìn)行梯度洗脫，用25% -75%乙醇洗脫，收集各洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，得到棕色粉末，本提取物可用于制備抗氧化保健食品，特征在于金雞菊提取物可與藥學(xué)上適用載體混合，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、或緩釋劑等。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)和保健食品領(lǐng)域，是金雞菊提取物用于制備保肝和抗氧化藥物和保健食品的新用途。其制備方法如下金雞菊頭狀花絮經(jīng)粉碎過50目篩，分別用體積分?jǐn)?shù)為95％的乙醇回流提取2次和用50％的乙醇回流提取1次，合并提取液，蒸干，得金雞菊總提物，上D-101大孔吸附樹脂進(jìn)行梯度洗脫，用30％-95％乙醇洗脫，收集各洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，得到棕色粉末，其收率在0.07-1.3％之間，經(jīng)過動物實驗，發(fā)現(xiàn)30％-95％乙醇洗脫物有保肝作用和抗氧化作用，可以用于制備保肝和抗氧化藥物和保健食品。
文檔編號A61K133/00GK102266369SQ20111013961
公開日2011年12月7日 申請日期2011年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月27日
發(fā)明者劉曉燕, 哈木拉提, 孫玉華, 龐市賓, 張?zhí)m蘭, 徐磊, 胡夢穎 申請人:新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所