專利名稱：一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體及其制備方法，特別涉及一種經(jīng)透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體及其制備方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇是從紫杉的樹皮中提取的一種四環(huán)二萜類化合物，其可以在細胞分裂時與細胞微管結(jié)合，在細胞內(nèi)形成穩(wěn)定的維管束，抑制細胞分裂和增殖，使癌細胞停止在G2期和M期，從而抑制腫瘤細胞的生長。紫杉醇抗腫瘤譜廣、治療指數(shù)高，近年來被廣泛用于乳腺癌、卵巢癌、子宮癌、非小細胞肺癌、胃癌等的治療，在臨床上取得了良好的療效。但是紫杉醇幾乎不溶于水，口服生物利用度差。臨床上的紫杉醇制劑有兩種紫杉醇注射液(TaXolK)和紫杉醇白蛋白納米粒注射劑。Taxd 是采用聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇以1 1體積比例混合后溶解紫杉醇制得的注射液，大大提高了紫杉醇的溶解度，但是其溶劑會引發(fā)不良反應(yīng)，如過敏，中性粒細胞減少，骨髓抑制等。白蛋白納米粒注射劑避免了使用有機溶劑，但是依然缺乏靶向性。因此開發(fā)新的制劑，提高紫杉醇的溶解性，避免使用有機溶劑，增強腫瘤靶向性，是研究的熱點。紫杉醇的研究制劑很多，如脂質(zhì)體，微球，微乳，納米粒，膠束等。所用的載體材料有脂質(zhì)類和聚合物類。其中脂質(zhì)類載體因其生物相容性，生物可降解性等眾多優(yōu)勢一直受到研究者的青睞。近年來，納米脂質(zhì)載體(NLC)作為一種新型的載體受到了廣泛的研究。NLC是在固態(tài)脂質(zhì)中加入不相容的液態(tài)脂質(zhì)，液態(tài)脂質(zhì)可以形成特殊的內(nèi)核如不完整的結(jié)晶態(tài)，無定形態(tài)等，破壞了固態(tài)脂質(zhì)形成的完整的晶格結(jié)構(gòu)，增加藥物與脂質(zhì)的親和性，更大的增加了載藥量。且NLC是采用脂質(zhì)作為載體，制備簡單，材料易得，具有很好的應(yīng)用前景和市場價值。同時，NLC具有納米載體的優(yōu)勢增加藥物的溶解度，保護藥物免受外界環(huán)境的破壞，延長藥物的血液循環(huán)時間，改善藥物分布，提高藥物的生物利用度等。透明質(zhì)酸作為腫瘤的主動靶向因子，使藥物靶向腫瘤已在試驗中得到了證實。透明質(zhì)酸(HA)是人體細胞外基質(zhì)的主要成分，其由N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸經(jīng) β-1，4糖苷鍵組成，結(jié)構(gòu)非常規(guī)則，相對分子質(zhì)量(Mr)范圍為100000-5000000，屬于生物大分子。其主要受體為CD44，二者結(jié)合后激活細胞內(nèi)的信號傳導途徑，參與細胞的生理功能。CD44是位于細胞表面的一種單鏈跨膜糖蛋白，其在人體內(nèi)分布廣泛，如白細胞、紅細胞、上皮細胞、成纖維細胞、角質(zhì)細胞和癌細胞，其中CD44在腫瘤細胞的表達大大高于正常細胞。CD44分為胞外區(qū)，跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，胞外區(qū)是其與透明質(zhì)酸結(jié)合的位點。利用CD44 在腫瘤部位高表達這一特點，采用外源的HA作為靶向因子對載紫杉醇NLC進行修飾，靜注進入體內(nèi)后依靠腫瘤的EI3R效應(yīng)和HA的CD44高度結(jié)合性，使藥物在腫瘤部位蓄積。HA與 CD44結(jié)合后介導NLC入胞，在溶酶體內(nèi)HA被降解，從而釋放藥物，達到殺死腫瘤細胞的目的。而且，HA為人體的細胞外基質(zhì)成分，無毒，生物可降解，生物相容性好，近年來用HA作為腫瘤的靶向因子治療癌癥受到了廣泛的研究。如HA與紫杉醇形成接枝聚合物，或先使用其他載體如脂質(zhì)體包載紫杉醇，再在表面經(jīng)化學鍵連接靶向因子HA等。但這些方法均需要材料合成，或化學鍵修飾，過程復雜，不易控制。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體及其制備方法，以及透明質(zhì)酸修飾的的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體及其制備方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，是由以下組分組成的紫杉醇，固態(tài)脂質(zhì)材料，液態(tài)脂質(zhì)材料，乳化劑，水，其中，各組分的濃度為紫杉醇0. 5 10mg/mL，固態(tài)脂質(zhì)材料10 150mg/mL，液態(tài)脂質(zhì)材料5 100mg/mL，乳化劑0. 1 50mg/mL，余量為水；或者，是由以下組分組成的紫杉醇，固態(tài)脂質(zhì)材料，液態(tài)脂質(zhì)材料，乳化劑，水，透明質(zhì)酸，其中，各組分的濃度為紫杉醇0. 5 10mg/mL，固態(tài)脂質(zhì)材料10 150mg/mL，液態(tài)脂質(zhì)材料5 100mg/mL，乳化劑0. 1 50mg/mL，透明質(zhì)酸0. 1 5mg/mL，余量為水(即為透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體)。所述載紫杉醇納米脂質(zhì)載體的粒徑為50 300nm ；所述經(jīng)透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體的粒徑為100 400nm。所述固態(tài)脂質(zhì)材料為硬脂酸，單硬脂酸，單硬脂酸甘油酯，三硬脂酸甘油酯，三月桂酸甘油酯，三肉豆蔻酸甘油酯，癸酸甘油酯，PEG-2硬脂酸，蜂蠟，鯨蠟醇十六醇酯，二月桂酸甘油酯，十六醇，山崳酸甘油酯，膽留醇油酸酯，卵磷脂中的任意一種或任意兩種的混合物。所述液態(tài)脂質(zhì)材料為大豆油，辛/癸酸甘油酯，油酸，花生油，三油酸甘油酯，杏仁油聚乙二醇-6-酯，，Miglyol 812中的一種或任意兩種的混合物。所述乳化劑為十六燒基三甲基溴化銨(tetradecyltrimethylammonium bromide, CTAB)，雙十八烷基溴化銨(dimethyldioctadecylammonium bromide, DDAB)，N_[l_(2， 3- 二油酰氧基)]_N，N，N-三甲基氯化銨(N-[l-(2，3-dioleyloxy)propyl]-N，N， N-tri-methylammonium chlorideDOTMA)，類脂十二烷酸 6-(2，5-二氨基-戊酰氧基)己酉旨(6-lauroxyhexyl ornithinate, LH0N),十六燒基氣化口比唆(hexadecylpryridinium chloride, CPC)，[1-(2,3- 二油?；?]_N，N，N-三甲胺丙烷甲基硫酸鹽(1， 2-diacyl-3-trimethylammonium propane, D0TAP)禾口類月旨十二燒酸 6-(2，6-二氛基一己酷氧基)己酯(6-lauroxyhexyl lysinate, LHLN)中任一種或者任意兩種的混合物。所述透明質(zhì)酸為分子量為50 200萬的透明質(zhì)酸。所述載紫杉醇納米脂質(zhì)載體的制備方法為首先采用具有生物相容性和生物可降解性的脂質(zhì)載體制備陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，然后用HA(含羧基，荷負電)經(jīng)電荷吸附在NLC表面，制備得到腫瘤主動靶向的HA修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。具體步驟如下(1)將紫杉醇、固態(tài)脂質(zhì)材料、液態(tài)脂質(zhì)材料混合，用有機溶劑溶解，按每15 260mg溶質(zhì)用Iml溶劑，形成油相，備用；(2)將乳化劑溶于水中，形成濃度為0. 5 5. 0% (w/v,單位g/ml)的溶液，為水相，備用；(3)將水相加熱至50 80°C，在200 800r/min的攪拌速度下，把油相滴加至水相中，滴加完畢后，乳化10 60min，得混懸液；(4)將混懸液轉(zhuǎn)移至冰浴條件下低溫固化，并繼續(xù)攪拌2 3h，即得粒徑在50 300nm的納米脂質(zhì)載體；(5)把上述制備好的納米脂質(zhì)載體在攪拌下滴加至濃度為0. 1 5. Omg/mL的透明質(zhì)酸水溶液中，并在200 800r/min的攪拌速度下繼續(xù)攪拌lh，即得透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。所述步驟(1)中，有機溶劑為無水乙醇，甲醇，二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，丙酮中的任意一種或任意兩種及兩種以上的混合物。所述步驟(3)中的滴加速度為10 50mL/h。所述步驟(5)中的滴加速度為10 100mL/h。本發(fā)明的透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，粒徑在100 400nm，適合靜脈注射給藥。所用的載體材料為生物相容和生物可降解的脂質(zhì)材料和人體的細胞基質(zhì)成分 HA,本身無毒，生物相容性好，且生物可降解。本發(fā)明利用電荷吸附即HA鏈上的羧基與陽離子型NLC表面的氨基作用使HA吸附在NLC的表面，達到靶向修飾的目的。制備簡單，材料易得，具有很好的產(chǎn)業(yè)化前景。透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體經(jīng)腫瘤部位的Era 效應(yīng)與HA的腫瘤靶向性聚集在腫瘤部位，然后與腫瘤高表達的CD44受體結(jié)合入胞，在溶酶體內(nèi)釋放藥物，達到選擇性殺死腫瘤細胞的目的。本發(fā)明采用靶向因子修飾NLC，使藥物靶向腫瘤部位，更大程度的殺死腫瘤細胞， 以達到提高療效的目的。本發(fā)明利用HA的羧基與陽離子型NLC表面的氨基經(jīng)電荷吸附達到靶向修飾的目的，過程簡單，質(zhì)量可控，無需化學修飾，適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。且載體為脂質(zhì)類，均具有良好的生物相容性和生物可降解性，透明質(zhì)酸修飾作為靶向因子靶向腫瘤部位， 體外體內(nèi)均具有很好的腫瘤靶向性，發(fā)揮更大的抑瘤效力。本發(fā)明具有很好的市場前景。


圖1為載紫杉醇NLC的透射電鏡照片(X 70K)。圖2為HA修飾的載紫杉醇NLC的透射電鏡照片(X 58K)。圖3為載紫杉醇NLC的粒徑分布圖。 圖4為HA修飾的載紫杉醇NLC的粒徑分布圖。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何形式限制本發(fā)明。載紫杉醇納米脂質(zhì)載體的制備實施例1 精密稱取紫杉醇lmg，單硬脂酸甘油酯20mg，大豆油15mg和卵磷脂 25mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的CTAB用水溶解，形成濃度為0. 1% (w/ ν)的CTAB溶液，構(gòu)成水相。取40mL CTAB溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min速度進行攪拌。把油相以30mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。 然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌池，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，其透射電鏡圖如圖1所示，從圖中看出，納米脂質(zhì)載體的粒徑在50 300nm，粒徑分布如圖3所示。
實施例2 精密稱取紫杉醇5mg，單硬脂酸甘油酯40mg，大豆油30mg和卵磷脂 50mg，用2mL丙酮溶解，形成油相。精密稱取一定量的CTAB用水溶解，形成濃度為0. 5% (w/ ν)的CTAB溶液，構(gòu)成水相。取40mL CTAB溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min速度進行攪拌。把油相以20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。 然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實施例3 精密稱取紫杉醇8mg，單硬脂酸甘油酯60mg，大豆油45mg和卵磷脂 75mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的CTAB用水溶解，形成濃度為1. 0% (w/ ν)的CTAB溶液，構(gòu)成水相。取40mL CTAB溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min速度進行攪拌。把油相以10mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。 然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實施例4 精密稱取紫杉醇10mg，單硬脂酸甘油酯lOOmg，大豆油70mg，油酸20mg， 辛/癸酸甘油酯20mg和卵磷脂lOOmg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的CTAB 用水溶解，形成濃度為1.0% (w/v)的CTAB溶液，構(gòu)成水相。取40mL CTAB溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min速度進行攪拌。把油相以10mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實施例5 精密稱取紫杉醇10mg，單硬脂酸甘油酯80mg，大豆油50mg，油酸30mg， 和卵磷脂lOOmg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的CTAB用水溶解，形成濃度為1.0% (w/v)的CTAB溶液，構(gòu)成水相。取40mL CTAB溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用 800r/min速度進行攪拌。把油相以10mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實施例6 精密稱取紫杉醇5mg，單硬脂酸甘油酯30mg，硬脂酸20mg，大豆油50mg 和卵磷脂lOOmg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的LHLN用水溶解，形成濃度為5. 0% (w/v)的LHLN溶液，構(gòu)成水相。取40mL的LHLN溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min速度進行攪拌。把油相以10mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實施例7 精密稱取紫杉醇5mg，單硬脂酸甘油酯50mg，大豆油15mg，辛/癸酸甘油酯15mg和卵磷脂60mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的LHLN用水溶解，形成濃度為5.0% (w/v)的LHLN溶液，構(gòu)成水相。取40mL的LHLN溶液在控溫攪拌下加熱至 70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實例8 精密稱取紫杉醇5mg，三硬脂酸甘油酯40mg，癸酸甘油酯20mg，大豆油 20mg，油酸IOmg和卵磷脂50mg，用2mL氯仿溶解，形成油相。精密稱取一定量的類脂十二烷酸6-(2，5-二氨基-戊酰氧基)己酯用水溶解，形成濃度為2.0% (w/v)的類脂十二烷酸6-(2，5-二氨基-戊酰氧基)己酯溶液，構(gòu)成水相。取40mL類脂十二烷酸6-(2，5-二氨基-戊酰氧基)己酯溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min速度進行攪拌。把油相以20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實例9 精密稱取紫杉醇5mg，膽甾醇油酸酯30mg，山崳酸甘油酯20mg，大豆油 250mg，辛/癸酸甘油酯15mg和卵磷脂50mg，用2mL乙酸乙酯溶解，形成油相。精密稱取一定量的十六烷基氯化吡啶，用水溶解，形成濃度為0.5% (w/v)的十六烷基氯化吡啶溶液， 構(gòu)成水相。取40mL十六烷基氯化吡啶溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以10mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化40min。 然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌3h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實例10 精密稱取紫杉醇10mg，二月桂酸甘油酯50mg，十六醇30mg，大豆油20mg， 油酸20mg和卵磷脂50mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的雙十八烷基溴化銨用水溶解，形成濃度為5.0% (w/v)的雙十八烷基溴化銨溶液，構(gòu)成水相。取40mL雙十八烷基溴化銨溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以20mL/h 的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴， 并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。實例11 精密稱取紫杉醇10mg，癸酸甘油酯60mg，鯨蠟醇十六醇酯20mg，大豆油 30mg, Miglyol 812稱取20mg和卵磷脂50mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的類脂十二烷酸6-(2，6-二氨基-己酰氧基)用水溶解，形成濃度為3.0% (w/v)的類脂十二烷酸6-(2，6-二氨基-己酰氧基)溶液，構(gòu)成水相。取40!^類脂十二烷酸6-(2，6-二氨基_己酰氧基)溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以 20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體的制備實施例12 精密稱取紫杉醇5mg，單硬脂酸甘油酯40mg，大豆油30mg和卵磷脂 50mg,用2mL丙酮溶解，形成油相。精密稱取一定量的CTAB用水溶解，形成濃度為0. 5% (w/v)的CTAB溶液，構(gòu)成水相。取40mL CTAB溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min 速度進行攪拌。把油相以20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化 30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。精密稱取一定量的透明質(zhì)酸(50萬)用水溶解配制得到2mg/mL的透明質(zhì)酸溶液。在600r/min的攪拌速度下，把制備好的NLC(3mg/mL)混懸液以40mL/h速度滴加至等體積的HA溶液中，并繼續(xù)攪拌lh，制得HA修飾的NLC，其透射電鏡圖如圖2所示，從圖中看出，透明質(zhì)酸修飾的納米脂質(zhì)載體的粒徑在100 400nm，其粒徑分布如圖4所示。實施例13 精密稱取紫杉醇5mg，單硬脂酸甘油酯40mg，大豆油30mg和卵磷脂 50mg，用2mL丙酮溶解，形成油相。精密稱取一定量的CTAB用水溶解，形成濃度為0. 5% (w/ ν)的CTAB溶液，構(gòu)成水相。取40mL CTAB溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min速度進行攪拌。把油相以20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。 然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。精密稱取一定量的透明質(zhì)酸(100萬)用水溶解配制得到2mg/mL的透明質(zhì)酸溶液。 在800r/min的攪拌速度下，把制備好的NLC(3mg/mL)混懸液以40mL/h速度滴加至2倍體積的HA溶液中，并繼續(xù)攪拌lh，制得HA修飾的NLC。實施例14 精密稱取紫杉醇8mg，單硬脂酸甘油酯60mg，大豆油45mg和卵磷脂 75mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的CTAB用水溶解，形成濃度為1. 0% (w/ ν)的CTAB溶液，構(gòu)成水相。取40mL CTAB溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用600r/min速度進行攪拌。把油相以10mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。 然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。精密稱取一定量的透明質(zhì)酸(100萬)用水溶解配制得到lmg/mL的透明質(zhì)酸溶液。 在800r/min的攪拌速度下，把NLC (6mg/mL)混懸液以40mL/h速度滴加至2倍體積的HA溶液中，并繼續(xù)攪拌lh，制得HA修飾的NLC。實施例15 精密稱取紫杉醇5mg，單硬脂酸甘油酯50mg，大豆油15mg，辛/癸酸甘油酯15mg和卵磷脂60mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的LHLN用水溶解， 形成濃度為5.0% (w/v)的LHLN溶液，構(gòu)成水相。取40mL的LHLN溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。精密稱取一定量的透明質(zhì)酸(100萬)用水溶解配制得到2mg/mL的透明質(zhì)酸溶液。在800r/min的攪拌速度下，把NLC(7mg/mL)混懸液以40mL/ h速度滴加至5倍體積的HA溶液中，并繼續(xù)攪拌lh，制得HA修飾的NLC。實施例16 精密稱取紫杉醇5mg，單硬脂酸甘油酯50mg，大豆油15mg，辛/癸酸甘油酯15mg和卵磷脂60mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的LHLN用水溶解， 形成濃度為5.0% (w/v)的LHLN溶液，構(gòu)成水相。取40mL的LHLN溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。精密稱取一定量的透明質(zhì)酸(50萬)用水溶解配制得到lmg/mL的透明質(zhì)酸溶液。在800r/min的攪拌速度下，把NLC(7mg/mL)混懸液以10mL/h 速度滴加至5倍體積的HA溶液中，并繼續(xù)攪拌lh，制得HA修飾的NLC。實例17 精密稱取紫杉醇5mg，膽甾醇油酸酯30mg，山崳酸甘油酯20mg，大豆油 250mg，辛/癸酸甘油酯15mg和卵磷脂50mg，用2mL乙酸乙酯溶解，形成油相。精密稱取一定量的十六烷基氯化吡啶，用水溶解，形成濃度為0.5% (w/v)的十六烷基氯化吡啶溶液， 構(gòu)成水相。取40mL十六烷基氯化吡啶溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以10mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化40min。 然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌3h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。精密稱取一定量的透明質(zhì)酸(50萬)用水溶解配制得到lmg/mL的透明質(zhì)酸溶液。在 800r/min的攪拌速度下，把NLC(7mg/mL)混懸液以10mL/h速度滴加至5倍體積的HA溶液中，并繼續(xù)攪拌lh，制得HA修飾的NLC。實例18 精密稱取紫杉醇10mg，二月桂酸甘油酯50mg，十六醇30mg，大豆油20mg， 油酸20mg和卵磷脂50mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的雙十八烷基溴化銨用水溶解，形成濃度為5.0% (w/v)的雙十八烷基溴化銨溶液，構(gòu)成水相。取40mL雙十八烷基溴化銨溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以20mL/h 的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴， 并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。精密稱取一定量的透明質(zhì)酸(100萬)用水溶解配制得到2mg/mL的透明質(zhì)酸溶液。在800r/min的攪拌速度下，把NLC (9mg/mL)混懸液以40mL/h速度滴加至3倍體積的HA溶液中，并繼續(xù)攪拌lh，制得HA修飾的NLC。 實例19 精密稱取紫杉醇10mg，癸酸甘油酯60mg，鯨蠟醇十六醇酯20mg，大豆油 30mg, Miglyol 812稱取20mg和卵磷脂50mg，用2mL乙醇溶解，形成油相。精密稱取一定量的類脂十二烷酸6-(2，6-二氨基-己酰氧基)用水溶解，形成濃度為3.0% (w/v)的類脂十二烷酸6-(2，6_ 二氨基-己酰氧基)溶液，構(gòu)成水相。取40!^類脂十二烷酸6-(2，6-二氨基_己酰氧基)溶液在控溫攪拌下加熱至70°C并用800r/min速度進行攪拌。把油相以 20mL/h的速度滴加至攪拌下的水相中，滴加完后繼續(xù)攪拌乳化30min。然后轉(zhuǎn)至冰浴下進行冰浴，并繼續(xù)600r/min攪拌2h，制備得到陽離子型載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。精密稱取一定量的透明質(zhì)酸(50萬)用水溶解配制得到2mg/mL的透明質(zhì)酸溶液。在600r/min的攪拌速度下，把制備好的NLC(10mg/mL)混懸液以40mL/h速度滴加至等體積的HA溶液中，并繼續(xù)攪拌Ih，制得HA修飾的NLC。
權(quán)利要求
1.一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，其特征在于，是由以下組分組成的紫杉醇，固態(tài)脂質(zhì)材料，液態(tài)脂質(zhì)材料，乳化劑，水，其中，各組分的濃度為紫杉醇0. 5 10mg/mL，固態(tài)脂質(zhì)材料10 150mg/mL,液態(tài)脂質(zhì)材料5 100mg/mL,乳化劑0. 1 50mg/mL,余量為水；或 是由以下組分組成的紫杉醇，固態(tài)脂質(zhì)材料，液態(tài)脂質(zhì)材料，乳化劑，水，透明質(zhì)酸，其中， 各組分的濃度為紫杉醇0. 5 10mg/mL，固態(tài)脂質(zhì)材料10 150mg/mL，液態(tài)脂質(zhì)材料5 100mg/mL，乳化劑0. 1 50mg/mL，透明質(zhì)酸0. 1 5mg/mL，余量為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，其特征在于所述載紫杉醇納米脂質(zhì)載體的粒徑為50 300nm ；所述經(jīng)透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體的粒徑為 100 400nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，其特征在于所述固態(tài)脂質(zhì)材料為硬脂酸，單硬脂酸，單硬脂酸甘油酯，三硬脂酸甘油酯，三月桂酸甘油酯，三肉豆蔻酸甘油酯，癸酸甘油酯，PEG-2硬脂酸，蜂蠟，鯨蠟醇十六醇酯，二月桂酸甘油酯，十六醇，山崳酸甘油酯，膽留醇油酸酯，卵磷脂中的任意一種或任意兩種的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，其特征在于所述液態(tài)脂質(zhì)材料為大豆油，辛/癸酸甘油酯，油酸，花生油，三油酸甘油酯，杏仁油聚乙二醇-6-酯， Miglyol 812中的一種或任意兩種的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，其特征在于所述乳化劑為十六烷基三甲基溴化銨，雙十八烷基溴化銨，N-[l-(2，3-二油酰氧基)]-N，N, N-三甲基氯化銨，類脂十二烷酸6-(2，5- 二氨基-戊酰氧基)己酯，十六烷基氯化吡啶，[1-(2, 3- 二油?；?]"N, N, N-三甲胺丙烷甲基硫酸鹽和類脂十二烷酸6- (2,6- 二氨基-己酰氧基)己酯中任一種或者任意兩種的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體，其特征在于所述透明質(zhì)酸為分子量為50 200萬的透明質(zhì)酸。
7.權(quán)利要求1所述的一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體的制備方法，其特征在于步驟如下(1)將紫杉醇、固態(tài)脂質(zhì)材料、液態(tài)脂質(zhì)材料混合，用有機溶劑溶解，按每15 ^Omg溶質(zhì)用Iml溶劑，形成油相，備用；(2)將乳化劑溶于水中，形成濃度為0.5 5.0%的溶液，為水相，備用；(3)將水相加熱至50 80°C，在200 800r/min的攪拌速度下，把油相滴加至水相中， 滴加完畢后，乳化10 60min，得混懸液；(4)將混懸液轉(zhuǎn)移至冰浴條件下低溫固化，并繼續(xù)攪拌2 3h，即得粒徑在50 300nm 的納米脂質(zhì)載體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于還包括步驟(5)把制備好的納米脂質(zhì)載體在攪拌下滴加至濃度為0. 1 5. 0mg/mL的透明質(zhì)酸水溶液中，并在200 800r/min 的攪拌速度下繼續(xù)攪拌lh，即得透明質(zhì)酸修飾的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中，有機溶劑為無水乙醇，甲醇，二氯甲烷，氯仿，乙酸乙酯，丙酮中的任意一種或任意兩種及兩種以上的混合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中的滴加速度為 10 50mL/h，所述步驟(5)中的滴加速度為10 100mL/h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種載紫杉醇納米脂質(zhì)載體及其制備，包含以下組分紫杉醇，固態(tài)脂質(zhì)，液態(tài)脂質(zhì)，水，透明質(zhì)酸，其中各組分的濃度為紫杉醇0.5～10mg/mL，固態(tài)脂質(zhì)5～100mg/mL，液態(tài)脂質(zhì)5～100mg/mL，乳化劑0.1～5mg/mL，透明質(zhì)酸0.1～3mg/mL。本發(fā)明制備的載紫杉醇納米脂質(zhì)載體外觀圓整，質(zhì)量均一，包封率大于80％，經(jīng)透明質(zhì)酸修飾后質(zhì)量外觀均一。本發(fā)采用生物相容性和生物可降解性的脂質(zhì)載體包載紫杉醇，提高了紫杉醇的溶解度，并采用透明質(zhì)酸作為腫瘤的靶向因子，對納米脂質(zhì)載體進行表面修飾，不僅具有在血液中長循環(huán)的作用，還可以達到腫瘤主動靶向性，降低毒副作用的目的。
文檔編號A61K47/36GK102178652SQ20111011565
公開日2011年9月14日 申請日期2011年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月5日
發(fā)明者劉永軍, 張娜, 楊曉燕 申請人:山東大學