專利名稱：刺玫果總黃酮提取物及其提取方法和其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥的提取物及其提取方法和其藥物用途。
背景技術(shù)：
山刺玫(Rosa davurica Pall.)，薔薇科薔薇屬落葉灌木植物，主要分布于我國東北地區(qū)，其果實又名刺玫果，野薔薇果，民間把它作為一種營養(yǎng)豐富的野果，大量采食，制成果酒、泡茶等，刺玫果味微酸，性溫。傳統(tǒng)醫(yī)學將刺玫果列為補藥，據(jù)《中華大辭典》稱刺玫果具有健脾理氣、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)之功效。現(xiàn)代醫(yī)學研究發(fā)現(xiàn)，刺玫果具有抗衰老、抗疲勞、耐缺氧，增強人體免疫功能作用，長期服用能顯著提高人體中SOD含量。果肉內(nèi)含有豐富的維生素，刺玫果是Vc含量最高的果實之一，還含有生物活性物質(zhì)齊敦果酸和白樺脂酸。此外，刺玫果中還含有有機酸，黃酮類化合物、香豆素、留醇類化合物、三萜類化合物、烯烴類、皂甙、 揮發(fā)油、多種礦物質(zhì)、微量元素。刺玫果含有大量的活性物質(zhì)，其中的黃酮類化合物具有抗氧化、降低脂質(zhì)過氧化反應、降低心肌耗氧量、防治血管硬化、降壓、抗衰老、抗自由基和抗癌、防癌等作用。張振杰，等對刺玫果萃取液進行了研究，發(fā)表了刺玫果膠囊的制備方法，并申請了專利，發(fā)明名稱刺玫果萃取膠囊，申請?zhí)?1109615. 2，同時有許多關(guān)于刺玫果的研究報道。國內(nèi)外有少量有關(guān)刺玫果的生態(tài)學、活性成分提取、化學成分、藥理作用的研究。 未見基于醇提熱回流法、聚酰胺純化法，使刺玫果有效部位總黃酮含量> 50%的報道；未見有刺玫果有效部位、其提取物中總黃酮含量>50%有抗心肌缺血、降血脂、抗心律失常作用的研究報道。刺玫果自然資源豐富，藥理活性廣泛，但開發(fā)應用較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種刺玫果總黃酮提取物及其提取方法和其醫(yī)藥用途，目的之一是提供刺玫果總黃酮提取物，其中總黃酮含量大于50% ；目的之二是提供了該刺玫果總黃酮提取物的新的藥物用途。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采取刺玫果總黃酮提取方法如下a.將刺玫果干燥粉碎，用6-10倍量65_75%乙醇熱回流提取3次，每次^i、3h、lh, 過濾，合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上30-60目聚酰胺柱，經(jīng)水洗至無色后，繼用65_75%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇得浸膏，干燥至恒重。通過采用上述刺玫果總黃酮提取方法，得到的刺玫果總黃酮提取物，其總黃酮含量大于50%，為淺黃色至褐色，粉末狀，味苦，可溶于乙醇。本發(fā)明刺玫果總黃酮提取物、其總黃酮含量大于50%在制備治療冠心病，心肌缺血，高血脂，心律不齊的藥物中的應用。
當本發(fā)明用于制備治療冠心病，心肌缺血，高血脂，心律不齊的藥物時，其口服或胃腸外給藥，均是安全的，在口服情況下，其可以任何常規(guī)形式給藥，例如散劑、粒劑、片劑、 膠囊劑、丸劑、溶液劑、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下含片等；當該藥腸胃外給藥時，可采用任何常規(guī)形式，例如注射劑如靜脈內(nèi)注射、軟膏劑、栓劑、經(jīng)皮給藥、吸入劑等。本發(fā)明制備治療冠心病，高血脂，心肌缺血和心律不齊的藥物是由有效部位或有效部位與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，下面舉幾個具體例子，散劑是內(nèi)服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、 碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂、碳酸氫鈉、干燥酵母等；溶液劑的賦形劑有水、甘油、丙二醇、單糖漿、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油、含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蠟、木蠟、液體石蠟、樹脂、高級蠟等組合成的疏水劑或親水劑。本發(fā)明的有益效果是，山刺玫為直立灌木，其果實每年都可以利用，資源非常豐富，經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)刺玫果中含總黃酮達27% -30%之多，刺玫果提取物中總黃酮含量大于 50 %的提取、精制方法未見報道，其治療冠心病，高血脂，心肌缺血和心律不齊的藥物用途屬首次發(fā)現(xiàn)。刺玫果總黃酮提取物、其總黃酮含量大于50%的特征為淺黃色至褐色，粉末狀，味苦，可溶于乙醇。有效物質(zhì)的劑量可以根據(jù)服用方式，病人的年齡和體重及病情嚴重程度和其它類似的因素而改變，口服量為100-200mg/次，每日2-3次服用；注射80_120mg/次，每日2_3次。
具體實施例方式實施例1:a.將刺玫果干燥粉碎，用6倍量75%乙醇熱回流提取3次，每次^i、3h、lh，過濾， 合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上30目聚酰胺柱，經(jīng)水洗至無色后，繼用75%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇得浸膏，干燥至恒重。實施例2 a.將刺玫果干燥粉碎，用8倍量70%乙醇熱回流提取3次，每次^i、3h、lh，過濾， 合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上45目聚酰胺柱，經(jīng)水洗至無色后，繼用70%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇得浸膏，干燥至恒重。實施例3 a.將刺玫果干燥粉碎，用10倍量65%乙醇熱回流提取3次，每次證、〗!!、^，過濾， 合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上60目聚酰胺柱，經(jīng)水洗至無色后，繼用65%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇得浸膏，干燥至恒重。由本發(fā)明實施例得到的提取物中總黃酮含量分析方法的實驗例a對照品溶液的制備精密稱取在60°C干燥至恒重的蘆丁對照品20. 8mg,置于 IOOmL容量瓶中，加60 %乙醇適量，超聲15min使溶解，放冷，用60 %乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得每ImL含無水蘆丁 0. 208mg的蘆丁對照品溶液。b樣品溶液的制備取干浸膏樣品，研細，取約0. 3g，精密稱定后置于50mL容量瓶中，加60%乙醇適量，超聲使溶解，放冷并稀釋至刻度，搖勻，濾過棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液10mL，置50mL容量瓶中，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。c檢測波長的選擇取蘆丁對照品溶液、供試品溶液及空白溶液3mL，照分光光度法，在200-600nm之間進行光譜掃描，得蘆丁的最大吸收波長為507nm，供試品最大吸收波長為502nm，故選用502nm為檢測波長。d線性關(guān)系考察精密量取對照品溶液(0. 208mg · mL—1)及60%乙醇(配制空白溶液)lmL、anL、;3mL、％iL、5mL、6mL，分別置25mL容量瓶中各加60%乙醇10mL，搖勻，按C項下的測定方法，在502nm波長處測定吸收度。以濃度(C)為橫坐標，吸光度值(A)為縱坐標， 繪制標準曲線，進行線性回歸，得回歸方程A = 10. 489C+0. 0001，R = 0. 9995。結(jié)果表明蘆丁在8. 32-49. 92 μ g. mL—1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。e測定方法精密量取供試品溶液3mL，分別選自實施例1、實施例2和實施例3，置 25mL容量瓶中，加入60 %的乙醇10mL，搖勻，精密加入5 %的亞硝酸鈉溶液0. 5mL,搖勻，放置6min，加入10%的硝酸鋁溶液0. 5mL，搖勻，放置6min，加入4%的氫氧化鈉溶液5mL，然后加入60 %的乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置lOmin，于502nm處測定吸光值，根據(jù)標準曲線計算其濃度，分別為56%、80%和68%。本發(fā)明療效可通過下面的藥效學實驗進一步說明。刺玫果總黃酮提取物、其中總黃酮含量大于50%，以下簡稱DRFFE。實驗例1、DRFFE抗大鼠心肌缺血實驗一、實驗材料1、動物Wistar大鼠，雌雄各半，體重220_260g，動物合格證號 SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大學白求恩醫(yī)學院實驗動物中心提供。2、藥品及試劑DRFFE和刺玫果總黃酮粗提物(總黃酮含量為27% )均由吉林化工學院提供，黃褐色粉末狀，用生理鹽水配制成混懸液；生化試劑盒激酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)由中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號 090301. 200912,090511. 200911,090641. 200912 ；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二酸(MDA)由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，批號20100408、20100408 ；紅四氮唑(TTC)，分析純，上?；菔郎噭┯邢薰旧a(chǎn)，批號100708 ；山玫膠囊，承德御室金丹藥業(yè)有限公司生產(chǎn)， 批號100402 ；氯化鈉注射液，哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號100514B1 ；乙醚，分析純，天津市北聯(lián)精細化學品開發(fā)有限公司生產(chǎn)，批號208。3、儀器E0S-880半自動生化分析儀，意大利生產(chǎn)；UV-755B紫外分光光度計由上海精密科學儀器有限公司生產(chǎn)；BI-2000圖像分析儀，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。二、實驗方法1、分組及給藥劑量實驗大鼠隨機分為7組，每組12只。假手術(shù)對照組給予氯化鈉溶液(生理鹽水)10ml/kg ；模型對照組給予生理鹽水10ml/kg ；陽性對照組給予山玫膠囊 220mg/kg(2. 2% ) ；DRFFE 小劑量組;35mg/kg(0. ；35%，)；DRFFE 中劑量組 70mg/kg(0. 7% )； DRFFE大劑量組140mg/kg(l. 4% )；刺玫果粗提物組140mg/kg(l. 4% ) 0連續(xù)給藥6d。于末次給藥30min，制備心肌缺血模型。
2、手術(shù)操作方法大鼠乙醚全身麻醉，行開胸手術(shù)，采取冠狀動脈前降支結(jié)扎M 小時，造成心肌缺血模型。M小時后進行股動脈取血，離心取血清待測生化指標(CK、 LDH、AST、SOD、MDA)；開胸術(shù)取心臟剪除右心室，將左心室切心肌片5片，用TTC溶液染色 l-3min，用BI-2000圖像分析儀照相、測量心肌梗塞面積，計算心肌梗塞面積占左心室百分率。剪取冠脈結(jié)扎線下方小塊心肌組織放入10%福爾馬林溶液中固定，待做光學顯微鏡病理學檢查。三、實驗結(jié)果1、對心肌缺血大鼠血清酶含量的影響CK:模型組血清CK含量與假手術(shù)組比較明顯升高，有顯著性差異，P <0.05 ； DRFFE大劑量組、刺玫果粗提物組與模型組比較，CK含量明顯降低，有顯著性差異，P <0. 05 ；DRFFE小劑量組、中劑量組以及陽性藥組與模型組比較，血清CK含量雖然有下降趨勢，但統(tǒng)計學無明顯差異，P > 0. 05，見表1。LDH:模型組血清LDH含量與假手術(shù)組比較明顯升高，有顯著性差異，P < 0. 05 ； DRFFE大劑量組、刺玫果粗提物組以及陽性藥組與模型組比較，LDH含量明顯降低，有顯著性差異，P < 0. 05 ；DRFFE小劑量組、中劑量組LDH含量雖然有下降趨勢，但與模型組比較無明顯差異，無統(tǒng)計學意義，P > 0. 05，見表1。AST 模型組血清AST含量與假手術(shù)組比較明顯升高，有統(tǒng)計學意義，P < 0. 05 ； DRFFE中劑量組、大劑量組與模型組比較，AST血清含量明顯降低，有顯著性差異，P < 0. 05 ； DRFFE小劑量組、刺玫果粗提物以及陽性藥組與模型組比較，AST含量雖然有下降趨勢，但與模型組比較均無明顯差異，無統(tǒng)計學意義，P > 0. 05，見表1。表IDRFFE對心肌缺血大鼠血清酶含量的影響( ± “ η = 12)
組別劑量(mg.kg-1)CK (U.L-1)LDHOJ-L-1)AST (U-L"1)假手術(shù)組328.93士113.67378.87±163.11185.80土 47.78模型組~589.47±232.01#946.43±418.54#327.28士126.55#山玫膠囊220383.30±206.27437.15±61.71*244.63±98.6935554.23士220.25627.23±273.43240.40±93.19DRFFE70407.32±144.48619.15±176.37192.58±56.19*140302.88±33.86*324.62±100.88**180.75±59.53*刺玫果粗提物140282.40±134.39*315.33 士 165.31*172.98士 111.23與假手術(shù)組比較flP < 0. 05與模型組比較*Ρ < 0. 05**Ρ < 0.012、對心肌缺血大鼠血清SOD、MDA活性的影響模型組血清SOD活性明顯低于假手術(shù)組，而MDA含量明顯高于假手術(shù)組，均有統(tǒng)計學意義，P < 0. 05 ；DRFFE小、中、大3個劑量組，刺玫果粗提物組以及陽性藥組與模型組比較，血清SOD、MDA含量無明顯差異，均無統(tǒng)計學意義，P > 0. 05，見表2。 表2DRFFE對心肌缺血大鼠血清SOD、MDA活性的影響( ± s，η = 12)
權(quán)利要求
1.一種刺玫果總黃酮提取物，其特征在于由下述方法制備得到的a.將刺玫果干燥粉碎，用6-10倍量65-75%乙醇熱回流提取3次，每次^、3h、lh，過濾，合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上30-60目聚酰胺柱，經(jīng)水洗至無色后，繼用65-75%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇得浸膏，干燥至恒重；其總黃酮含量大于50%。
2.如權(quán)利要求1所述的刺玫果總黃酮提取物的提取方法。
3.如權(quán)利要求1所述的刺玫果總黃酮提取物在制備治療冠心病、抗心肌缺血、降血脂、 抗心律失常的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種刺玫果總黃酮提取物及其提取方法和其醫(yī)藥用途，屬于中藥的有效藥用部位中的提取物及其提取方法和其藥物用途。將中藥刺玫果干燥粉碎后用65-75％乙醇熱回流提取，提取液上30-60目聚酰胺柱，經(jīng)水洗脫無色后，繼用65-75％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇可得到用于中藥新藥研究的原料藥，采用紫外分光光度法測定其浸膏中總黃酮含量大于50％。本發(fā)明提取純化的刺玫果總黃酮提取物，具有治療冠心病、心肌缺血、心律不齊及高血脂等疾病的作用。
文檔編號A61P9/06GK102228539SQ20111009157
公開日2011年11月2日 申請日期2011年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月13日
發(fā)明者李平亞, 王曉林, 鐘方麗 申請人:吉林化工學院