一種從菜芙蓉中提取總黃酮的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，具體是涉及一種從菜芙蓉中提取總黃酮的方法，特別是采用膜分離結(jié)合大孔樹脂純化菜芙蓉總黃酮的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]菜芙蓉(Hibiscus manihot)為錦葵科秋葵屬一年生草本植物。菜芙蓉，又名金花葵。菜芙蓉的花、葉、根、莖、種子中均含有豐富的黃酮，尤其是菜芙蓉花中生物黃酮的含量很高，比目前在黃酮生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的原料大豆、銀杏高近百倍，高居現(xiàn)在已知植物的首位。黃酮類化合物具有很強(qiáng)的抗氧化活性，它在抗心腦缺血、缺氧，增進(jìn)人體代謝中的抗氧化功能以及緩解抑郁緊張癥狀和增強(qiáng)腎功能等方面有顯著效果。
[0003]有關(guān)菜芙蓉總黃酮的提取分離目前已有報(bào)道，主要為醇水萃取，大孔樹脂分離純化。該方法存在提取率較低，機(jī)溶劑用量大、處理時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)。因此研宄綠色環(huán)保、簡(jiǎn)單方便的中藥成分提取分離方法已成為當(dāng)今生物醫(yī)藥的前沿課題之一。微波萃取是利用電磁場(chǎng)的作用使固體或半固體物質(zhì)中的某些有機(jī)物成分與基體有效的分離，并能保持分析對(duì)象的原本化合物狀態(tài)的一種分離方法，具有提取時(shí)間短、產(chǎn)率高、條件溫和等優(yōu)點(diǎn)。膜分離技術(shù)是一種使用半透膜分離方法，其分離原理是依據(jù)物質(zhì)分子尺度的大小，借助膜的選擇滲透作用，在外界能量或化學(xué)位差的推動(dòng)作用下對(duì)混合物中多組分溶質(zhì)和溶劑進(jìn)行分離、分級(jí)提純和富集，從而達(dá)到分離、提純和濃縮的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種從菜芙蓉中提取總黃酮的方法，該方法首先采用微波萃取法提取菜芙蓉中總黃酮，然后采用膜分離純化菜芙蓉總黃酮，最后采用樹脂吸附精制菜芙蓉總黃酮。
[0005]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
[0006](I)提取:將菜芙蓉根、莖、葉、種子或花烘干粉碎后，放入質(zhì)量濃度為40?99%的乙醇溶液中浸泡I?3h，菜芙蓉與乙醇的料液比為1: 10?1: 50，然后采用微波提取10?60min，過濾得到菜芙蓉總黃酮提取液；
[0007]所述微波功率為100?2000W ；
[0008](2)純化:將菜芙蓉提取液先通過截留分子量為10000?50000Da的中空纖維膜，跨膜壓差為0.1?1.0MPa,收集透過液；再通過截留分子量為2000?6000Da的中空纖維超濾膜，跨膜壓差為0.1?1.0MPa,收集透過液；最后通過截留分子量為100?500Da的納濾膜濃縮，跨膜壓差為1.0?5.0MPa，得到菜芙蓉總黃酮濃縮液；
[0009]所述中空纖維膜為聚砜或聚醚砜中空纖維膜，納濾膜為聚酰亞胺或醋酸纖維納濾膜；
[0010](3)精制:將菜芙蓉濃縮液流經(jīng)大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附I?6h，用水對(duì)已經(jīng)吸附濃縮液的大孔樹脂柱進(jìn)行水洗，然后用質(zhì)量濃度為30?95%的乙醇溶液對(duì)水洗過的大孔吸附樹脂柱進(jìn)行醇洗，將醇洗后得到的洗脫液放入冷凍干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行冷凍干燥，干燥得到菜芙蓉總黃酮。
[0011]所述大孔吸附樹脂為AB-8、NKA-9、HPD100、HPD400、HPD600、ADS-7、ADS-17、D11、XDA-6中的一種或幾種混合物。
[0012]本發(fā)明所述的一種菜芙蓉總黃酮的提取方法，通過該方法獲得的菜芙蓉總黃酮含量測(cè)定方法:黃酮類物質(zhì)在氧化劑亞硝酸鹽存在下，與硝酸鋁生成黃色的黃酮鋁絡(luò)合物，在堿性環(huán)境下顯紅色，因此采用NaNO2-Al (NO3) 3顯色法，加入鋁離子試劑使黃酮類化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物在可見光內(nèi)獲得穩(wěn)定的吸收峰，利用紫外可見分光光度計(jì)在較大穩(wěn)定吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，對(duì)照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得總黃酮的含量。
[0013]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明技術(shù)可大幅提高菜芙蓉黃酮提取率，同時(shí)能降低產(chǎn)品中大分子糖類、蛋白質(zhì)的含量，降低產(chǎn)品中金屬離子和無機(jī)鹽含量，提高產(chǎn)品純度。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，其目的僅在于更好理解本發(fā)明的內(nèi)容而非限制本發(fā)明的保護(hù)范圍:
[0015]實(shí)施例1
[0016]將菜芙蓉花烘干粉碎過60?100目篩，取菜芙蓉花粉末1g放入40mL質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液中浸泡lh，然后調(diào)節(jié)微波功率200W，采用微波提取30min，過濾得到菜芙蓉總黃酮提取液；
[0017]將菜芙蓉提取液先通過截留分子量為30000Da的聚砜中空纖維膜，跨膜壓差為0.25MPa收集透過液；再通過截留分子量為6000Da的聚砜中空纖維超濾膜，跨膜壓差為0.25MPa收集透過液；最后通過截留分子量為200Da的聚酰亞胺納濾膜濃縮，跨膜壓差為
2.0MPa，收集濃縮液，得到菜芙蓉總黃酮濃縮液；
[0018]將菜芙蓉濃縮液流經(jīng)AB-8大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附2h，用水對(duì)已經(jīng)吸附濃縮液的大孔樹脂柱進(jìn)行水洗至水洗出液接近無色，棄去水洗液，然后用質(zhì)量濃度為60%的乙醇溶液對(duì)水洗過的大孔吸附樹脂柱進(jìn)行醇洗，將醇洗后得到的洗脫液先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，然后用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，干燥得到菜芙蓉總黃酮，含總黃酮(以蘆丁記)為92.
[0019]實(shí)施例2
[0020]將菜芙蓉種子烘干粉碎過60?100目篩，取菜芙蓉種子粉末1g放入40mL質(zhì)量濃度為60%的乙醇溶液中浸泡3h，然后調(diào)節(jié)微波功率400W，采用微波提取20min，過濾得到菜芙蓉總黃酮提取液；
[0021]將菜芙蓉提取液先通過截留分子量為40000Da的聚砜中空纖維膜，跨膜壓差為0.5MPa收集透過液；再通過截留分子量為4000Da的聚砜中空纖維超濾膜，跨膜壓差為0.5MPa收集透過液；最后通過截留分子量為10Da的聚酰亞胺納濾膜濃縮，跨膜壓差為
3.0MPa，收集濃縮液，得到菜芙蓉總黃酮濃縮液；
[0022]將菜芙蓉濃縮液流經(jīng)HPD400大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附2h，用水對(duì)已經(jīng)吸附濃縮液的大孔樹脂柱進(jìn)行水洗至水洗出液接近無色，棄去水洗液，然后用質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液對(duì)水洗過的大孔吸附樹脂柱進(jìn)行醇洗，將醇洗后得到的洗脫液先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，然后用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，干燥得到菜芙蓉總黃酮，含總黃酮(以蘆丁記)為91.
[0023]實(shí)施例3
[0024]將菜芙蓉莖烘干粉碎過60?100目篩，取菜芙蓉莖粉末1g放入200mL質(zhì)量濃度為40%的乙醇溶液中浸泡3h，然后調(diào)節(jié)微波功率400W，采用微波提取40min，過濾得到菜芙蓉總黃酮提取液；
[0025]將菜芙蓉提取液先通過截留分子量為40000Da的聚醚砜中空纖維膜，跨膜壓差為0.5MPa收集透過液；再通過截留分子量為4000Da的聚醚砜中空纖維超濾膜，跨膜壓差為0.5MPa收集透過液；最后通過截留分子量為200Da的醋酸纖維素納濾膜濃縮，跨膜壓差為
3.0MPa，收集濃縮液，得到菜芙蓉總黃酮濃縮液；
[0026]將菜芙蓉濃縮液流經(jīng)DlOl大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附2h，用水對(duì)已經(jīng)吸附濃縮液的大孔樹脂柱進(jìn)行水洗至水洗出液接近無色，棄去水洗液，然后用質(zhì)量濃度為40%的乙醇溶液對(duì)水洗過的大孔吸附樹脂柱進(jìn)行醇洗，將醇洗后得到的洗脫液先用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，然后用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，干燥得到菜芙蓉總黃酮，含總黃酮(以蘆丁記)為80.
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從菜芙蓉中提取總黃酮的方法，其特征在于包含以下步驟: (1)提取:將菜芙蓉根、莖、葉、種子或花烘干粉碎后，放入質(zhì)量濃度為40?99%的乙醇溶液中浸泡I?3h，菜芙蓉與乙醇的料液比為1: 10?1: 50，然后采用微波提取10?60min，過濾得到菜芙蓉總黃酮提取液； 所述微波功率為100?2000W ； (2)純化:將菜芙蓉提取液先通過截留分子量為10000?50000Da的中空纖維膜，收集透過液；再通過截留分子量為2000?6000Da的中空纖維超濾膜，收集透過液；最后通過截留分子量為100?500Da的納濾膜濃縮，得到菜芙蓉總黃酮濃縮液； (3)精制:將菜芙蓉濃縮液流經(jīng)大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附I?6h，用水對(duì)已經(jīng)吸附濃縮液的大孔樹脂柱進(jìn)行水洗，然后用質(zhì)量濃度為30?95%的乙醇溶液對(duì)水洗過的大孔吸附樹脂柱進(jìn)行醇洗，將醇洗后得到的洗脫液放入冷凍干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行冷凍干燥，干燥得到菜芙蓉總黃酮。 所述大孔吸附樹脂為 AB-8、NKA-9、HPD100、HPD400、HPD600、ADS-7、ADS-17、D101、XDA-6中的一種或幾種混合物。
2.如權(quán)利要求1所述的一種從菜芙蓉中提取總黃酮的方法，其特征在于所述步驟(I)提取菜芙蓉總黃酮的方法為微波法，微波功率為100?2000W，微波提取時(shí)間為20?60mino
3.如權(quán)利要求1所述的一種從菜芙蓉中提取總黃酮的方法，其特征在于所述步驟(2)所用的中空纖維膜為聚砜或聚醚砜中空纖維膜，跨膜壓差為0.1?1.0MPa ;納濾膜為聚酰亞胺或醋酸纖維納濾膜，跨膜壓差為1.0?5.0MPa0
4.如權(quán)利要求1所述的一種從菜芙蓉中提取總黃酮的方法，其特征在于所述步驟(3)所用大孔乙吸附樹脂為 AB-8、NKA-9、HPD100、HPD400、HPD600、ADS-7、ADS-17、D101、XDA-6中的一種或幾種混合物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從菜芙蓉中提取總黃酮的方法，該方法包含以下步驟：(1)提?。阂再|(zhì)量濃度40～99％的乙醇溶液為提取液，采用微波提取得到菜芙蓉總黃酮提取液；(2)純化：將菜芙蓉總黃酮提取液依次通過截留分子量為10000～50000Da和2000～6000Da的中空纖維超濾膜，收集透過液；再通過截留分子量為100～500Da的納濾膜濃縮，得到菜芙蓉總黃酮濃縮液；(3)精制：采用大孔吸附樹脂吸附菜芙蓉濃縮液，依次采用水洗和醇洗，冷凍干燥得到菜芙蓉總黃酮。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明技術(shù)可大幅提高菜芙蓉黃酮提取率，同時(shí)能降低產(chǎn)品中大分子糖類、蛋白質(zhì)的含量，降低產(chǎn)品中金屬離子和無機(jī)鹽含量，提高產(chǎn)品純度。
【IPC分類】A61K36-185
【公開號(hào)】CN104814987
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510259254
【發(fā)明人】嚴(yán)峰, 胡常樂, 冷微, 王明霞, 許愿, 龍雪元
【申請(qǐng)人】天津工業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2015年5月18日