專利名稱：一種具有抗焦慮作用的藥物組合物的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物的檢測方法，特別涉及一種具有抗焦慮作用的藥物組合物的檢測方法。
背景技術(shù)：
焦慮癥是一種以急性焦慮反復發(fā)作為特征的神經(jīng)官能癥，包括廣泛性焦慮及驚恐障礙，發(fā)作時常伴有頭暈、胸悶、心悸、呼吸困難、口干、尿頻、尿急、出汗、震顫和運動性不安，以及睡眠障礙等，并伴有植物神經(jīng)功能紊亂。隨著現(xiàn)代社會的發(fā)展，人們的生活節(jié)奏普遍加快，來自于社會、生活和工作等方面的壓力越來越大，因此焦慮癥患者日漸增多。目前臨床常用的抗焦慮藥分為苯二氮卓類和非苯二氮卓類。苯二氮卓類如氯氮革(利眠寧)、地西泮和硝西泮等；非苯二氮革類如丁螺環(huán)酮、黛力新和抗抑郁藥等。長期使用 易成癮、耐受，存在記憶力下降、胃腸道反應、療效降低等不良反應。本發(fā)明在中醫(yī)臨床的基礎上，篩選、提供一種有效性高、安全性好的中藥組合物用于治療焦慮癥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗焦慮作用的藥物組合物的檢測方法，本發(fā)明的另一個目的在于提供一種具有抗焦慮作用的藥物組合物的膠囊制劑的檢測方法。本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種具有抗焦慮作用的藥物組合物的檢測方法，該方法采用高效液相色譜法檢測色譜及檢測條件Agilent C18色譜柱；以10-30 70-90的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相；檢測波長280nm ；以橙皮苷溶于有機溶劑制備對照品溶液；有機溶劑提取該組合物制劑，制備樣品溶液；分別吸取對照品溶液與樣品溶液注入液相色譜儀，測定。本發(fā)明藥物組合物的檢測方法優(yōu)選為高效液相色譜法色譜及檢測條件Agilent C18色譜柱；以10-30 70-90的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相；柱溫35°C ;流速lmL/min，檢測波長280nm ；對照品溶液的制備取橙皮苷用甲醇溶解；樣品溶液的制備取該藥物組合物制劑，粉碎，用甲醇回流提取制得；測定法分別精密吸取對照品溶液與樣品溶液注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明藥物組合物中橙皮苷含量為O. 4-0. 8mg/g。本發(fā)明藥物組合物的檢測方法優(yōu)選為色譜及檢測條件AgilentC18 色譜柱(4. 6mmX 250mm, 5 μ m);以 20 : 80 的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相；柱溫35°C ;流速lmL/min，檢測波長280nm。
對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷9. 8mg,用甲醇溶解并定容至25mL容量瓶，搖勻，即得。樣品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物制劑，粉碎，稱取5g，置索氏提取器中，力口適量甲醇，置水浴上回流提取至提取液無色，放冷，濾過，濾液濃縮至近干，置于IOOmL容量瓶瓶中，甲醇定容至100mL。測定法分別精密吸取對照品溶液5μ I與樣品溶液15 μ 1，注入液相色譜儀，測
定，即得。
本發(fā)明藥物組合物中橙皮苷含量為O. 68mg/g。本發(fā)明藥物組合物膠囊制劑的檢測方法為色譜及檢測條件AgilentC18 色譜柱(4. 6mmX 250mm，5 μ m);以 10-30 70-90的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相；柱溫35°C ;流速lmL/min，檢測波長280nm。對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷9. 8mg,用甲醇溶解并定容至25mL容量瓶，搖勻，即得。樣品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物膠囊制劑去殼，稱取2-8重量份顆粒，置索氏提取器中，加適量甲醇，置水浴上回流提取至提取液無色，放冷，濾過，濾液濃縮至近干，置于IOOmL容量瓶瓶中，甲醇定容至100mL。測定法分別精密吸取對照品溶液O. 002-0. 008體積份與樣品溶液O. 01-0. 02體積份，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明藥物組合物膠囊制劑中橙皮苷含量為O. 4-0. 8mg/g。本發(fā)明藥物組合物的檢測方法優(yōu)選為色譜及檢測條件AgilentC18 色譜柱(4. 6mmX 250mm, 5 μ m);以 20 : 80 的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相；柱溫35°C ;流速lmL/min，檢測波長280nm。對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷9. 8mg,用甲醇溶解并定容至25mL容量瓶，搖勻，即得。樣品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物膠囊制劑去殼，稱取5. 00重量份顆粒，置索氏提取器中，加適量甲醇，置水浴上回流提取至提取液無色，放冷，濾過，濾液濃縮至近干，置于IOOmL容量瓶瓶中，甲醇定容至100mL。測定法分別精密吸取對照品溶液0. 005體積份與樣品溶液0. 015體積份，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明藥物組合物膠囊制劑中橙皮苷含量為0. 68mg/g。本發(fā)明所述的重量份與體積份為g/ml的關(guān)系。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成為蜘蛛香 5-20重量份合歡皮 5-15重量份酸棗仁 5-15重量份燈心草 0.5-4重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選為蜘蛛香 8-16重量份合歡皮 6-12重量份酸棗仁 6-14重量份燈心草 0.6-2重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選為蜘蛛香 12重量份合歡皮 9重量份
炒酸棗仁9重量份燈心草 I重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選為蜘蛛香 8重量 份合歡皮 12重量份炒酸棗仁14重量份燈心草 O. 8重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選為蜘蛛香 18重量份合歡皮 6重量份炒酸棗仁8重量份燈心草 I. 2重量份。本發(fā)明藥物組合物的制備方法，包括如下步驟步驟I :選取上述比例原料藥；步驟2 :取蜘蛛香粉碎成粗粉，用乙醇提?。徊襟E3 :將酸棗仁與合歡皮粉碎成粗粉，水提取；步驟4 :將燈心草用乙醇提取；將以上提取液分別回收溶劑，濃縮成干膏，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液。上述步驟2中，蜘蛛香藥材用15-55%乙醇回流提取；優(yōu)選提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；乙醇優(yōu)選35% ；上述步驟3中，酸棗仁與合歡皮加5-15重量倍的水，回流提取2-5次，每次1_3小時；上述步驟4中，燈心草用40-60重量倍的60-99%乙醇回流提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；乙醇優(yōu)選95%。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如填充齊U、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括甜味劑及各種香精；防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)中藥藥劑學，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學》，上?？茖W出版社1997年12月第I版中各劑型記載的輔料)。本發(fā)明藥物組合物膠囊劑的制備方法為取蜘蛛香粉碎成粗粉，用相當于蜘蛛香藥材5-15重量倍的35%乙醇，回流提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；將酸棗仁與合歡皮粉碎成粗粉，加5-15重量倍的水，回流提取2-5次，每次1_3小時；將燈心草粉碎成粗粉，用40-60重量倍的95%乙醇，回流提取2_5次，每次O. 5-1. 5 小時；將以上提取液分別回收溶劑，濃縮成干膏，各成分干膏按處方比例混合，加入O. 2-0. 8重量倍干膏量的糊精，混勻，80-95%乙醇作為潤濕劑，進行制粒，過20目篩，顆粒應保存在臨界相對濕度70-90%以下，即得。本發(fā)明藥物組合物膠囊劑的制備方法優(yōu)選為取蜘蛛香粉碎成粗粉，用相當于蜘蛛香藥材10重量倍的35%乙醇，回流提取3次，每次I小時；將酸棗仁與合歡皮粉碎成粗粉，加10重量倍的水，回流提取3次，每次2小時；將燈心草粉碎成粗粉，用50重量倍的95%乙醇，回流提取3次，每次I小時；將以上提取液分別回收溶劑，濃縮成干膏，各成分干膏按處方比例混合，加入O. 5重量倍干膏量的糊精，混勻，90 %乙醇作為潤濕劑，進行制粒，過20目篩，顆粒應保存在臨界相對濕度80 %以下，即得。經(jīng)過線性關(guān)系考察、精密度試驗、重復性試驗、穩(wěn)定性試驗以及回收率試驗等一系列考察，本發(fā)明藥物組合物的檢測方法準確、有效，能夠較好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量。實驗例I :本發(fā)明藥物組合物膠囊劑藥效學實驗 I材料與方法I. I 材料I. I. I實驗動物SD大鼠，雄性，初始體重140 180g，隨機分為5組，每組10只。I. I. 2藥品與試劑地西泮、嗎啡用生理鹽水調(diào)成所需的濃度溶液。本發(fā)明藥物組合物膠囊按實施例I方法制備，用生理鹽水調(diào)成所需的濃度溶液。I. I. 3實驗儀器大鼠高架十字迷宮、Vogel飲水沖突實驗裝置和輻射熱刺激誘發(fā)疼痛儀器。I. 2實驗方法1.2. I大鼠高架十字迷宮實驗SD雄性大鼠隨機分為本發(fā)明藥物組合物膠囊高、中、低劑量組、地西泮組和空白組共5組，其中本發(fā)明藥物組合物低劑量組、中劑量組、高劑量組分別按原生藥O. 75g/kg/d、I. 5g/kg/d和3g/kg/d給予灌胃，地西泮按lmg/kg/d給藥，空白組灌服等容積的生理鹽水。連續(xù)IOd灌胃給藥，給藥體積為lml/100g。于第IOd中藥組和鹽水對照組末次給藥Ih后，地西泮組給藥O. 5h后，于8:00 14:OOAm做行為測試。高架十字迷宮包括兩個開臂(50.8cmX10.2cmXl.3cm)、兩個閉臂(50. 8cmX 10. 2cmX40. 6cm)和中央?yún)^(qū)(10. 2cmX 10. 2cm)，距地面72. 4cm。迷宮測試前將每只大鼠放入I個45cmX30cmX 15cm塑料盒中，任其自由探究5min后迅速置于EPM的中央平臺處，使其頭部正對其中I個開放臂，采用紅外線技術(shù)記錄5min內(nèi)動物進入開臂次數(shù)(open arm entry, 0E)、閉臂次數(shù)(closearm entry,CE)及迷宮中央?yún)^(qū)內(nèi)的次數(shù)及在開臂與閉臂內(nèi)的運動時間。以進入開臂次數(shù)與總?cè)氡鄞螖?shù)的百分比(the percentage of entries to the open arms, OE% )及在開臂內(nèi)運動時間與開臂閉臂內(nèi)的總時間的百分比(the percentage of time spent in the openarms, OT% )代表抗焦慮作用指標。每次測試完成后用濕布擦拭迷宮，清除糞便，繼用干布擦凈后再進行下一只大鼠的測試。I. 2. 2大鼠Vogel飲水沖突實驗大鼠分組與給藥劑量同I. 2. 1，大鼠Vogel飲水沖突實驗在日光燈照下分兩個階段進行。第一階段，非懲罰飲水訓練將大鼠禁水24h后單個置于操作箱，讓其充分探究，直到發(fā)現(xiàn)瓶嘴并開始舔水，記錄大鼠3min的舔水次數(shù)，淘汰舔水少于300次的大鼠。第二階段，懲罰實驗上述未被淘汰的大鼠繼續(xù)禁水24h(共48h)后置于操作箱。大鼠能很快找到瓶嘴并開始舔水，舔夠20次儀器自動開始計時并給予一次電擊(舔水與電擊次數(shù)之比為20 I)，電擊強度一般為O. 2-0. 5mA (懲罰期)，持續(xù)2s。記錄大鼠3min的舔水次數(shù)。I. 2. 3大鼠自發(fā)飲水實驗同方法I. 2. 2，只是在懲罰期內(nèi)撤除電擊，記錄大鼠在無電擊時3min內(nèi)的舔水次數(shù)。I. 2. 4痛閾實驗
大鼠分組與給藥劑量同I. 2. 1，另加10只嗎啡組，腹腔注射30min后進行輻射熱測試。通過一個100瓦的燈泡提供，光線經(jīng)聚焦后由直徑4_的小孔投射出來，透過1_厚的有機玻璃板垂直照射大鼠足底，動物出現(xiàn)回避行為后手動關(guān)閉輻射熱燈，在行為藥理學實驗過程中，需將正常大鼠的抬腳潛伏期調(diào)整到8s左右，設定最大結(jié)束時間為22s。這樣可以阻止組織損傷，其中抬腳潛伏期是指每次開始給與足底熱刺激直到大鼠抬腳之間的時間間隔。每只大鼠每只腳給與四次刺激，同一只大鼠兩次熱輻射刺激之間至少間隔5min，取最后三次熱輻射刺激的結(jié)果進行平均并用于統(tǒng)計學檢驗。I. 2. 5 數(shù)據(jù)用SAS8.2軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，用t檢驗進行組間比較，結(jié)果以無±觀表示。*P
<O. 05，林P < O. 01, #P < O. 05有顯著性差異。2.實驗結(jié)果2. I大鼠高架十字迷宮實驗表I本發(fā)明藥物組合物膠囊對大鼠高架十字迷宮模型的影響(E，n = 9-10)
劑量
組別，，Total entries 0T%0Ε%
_/g.kg_
空白對照組-17.22± 1.5133.43±5.9830.50±3.83
地西泮組 0.00119.10±0.4853.55 ±2.25*41.26 ±2.30*
0.7516.20± 1.1736.54±3.7328.27±3.42
中劑量組 1.514.60± 0.6748.15 ± 1.75*39.05 ±2.31
高劑量組 315.50± 1.0951.14 ±2.49*43.06 ±2.79*注與空白組相比，*P < O. 05。從表I結(jié)果可以看出，與空白對照組相比，地西泮組和本發(fā)明藥物組合物膠囊高劑量組可明顯增加大鼠OE%和OT% (P <0.05);同時與空白組相比，中劑量組可增加大鼠OT% (P < O. 05)，而總?cè)氡鄞螖?shù)則無明顯變化，其它各組間無顯著差異。實驗結(jié)果表明本發(fā)明藥物組合物膠囊劑量為3g/kg/d時，在此模型上具有抗焦慮作用。2. 2大鼠Vogel飲水沖突實驗
表2本發(fā)明藥物組合物膠囊對大鼠Vogel飲水沖突模型飲水次數(shù)的影響G±SE，η = 10)

權(quán)利要求
1.一種具有抗焦慮作用的藥物組合物制劑的檢測方法，其特征在于該方法為 該方法采用高效液相色譜法檢測； 色譜及檢測條件=Agilent C18色譜柱；以10-30 70-90的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相；檢測波長280nm ;以橙皮苷溶于有機溶劑制備對照品溶液；該組合物制劑由有機溶劑提取制備樣品溶液；分別吸取對照品溶液與樣品溶液注入液相色譜儀，測定； 其中所述藥物組合物制劑的原料藥組成為 蜘蛛香 5-20重量份合歡皮 5-15重量份 酸棗仁 5-15重量份燈心草 O. 5-4重量份。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述藥物組合物制劑的原料藥組成為蜘蛛香 8-16重量份合歡皮 6-12重量份酸冬仁 6-14重量份燈心草0.6-2重量份或蜘蛛香 12重量份合歡皮9重量份炒酸參仁 9重量份燈心草I重量份或蜘蛛香 8重量份合歡皮12重量份炒酸參仁 14重量份燈心草0.8重量份或蜘蛛香 18重量份合歡皮6重量份炒酸冬仁 8重量份燈心草 1.2重量份。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于藥物組合物制劑的制備方法為 選取上述比例原料藥，蜘蛛香藥材用15-55%乙醇回流提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；酸棗仁與合歡皮加5-15重量倍的水，回流提取2-5次，每次1-3小時；燈心草用40-60重量倍的60-99%乙醇回流提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；將以上提取液分別回收溶劑，濃縮成干膏，即得。
4.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于該方法為 高效液相色譜法色譜及檢測條件Agilent C18色譜柱；以10-30 70-90的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相；柱溫35°C ;流速lmL/min，檢測波長280nm ； 對照品溶液的制備取橙皮苷用甲醇溶解； 樣品溶液的制備取該藥物組合物制劑，粉碎，用甲醇回流提取制得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與樣品溶液注入液相色譜儀，測定，即得。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于該方法中 對照品溶液的制備方法為精密稱取橙皮苷9. 8mg,用甲醇溶解并定容至25mL容量瓶，搖勻，即得； 樣品溶液的制備方法為取本發(fā)明藥物組合物制劑，粉碎，稱取2-8g，置索氏提取器中，加適量甲醇，置水浴上回流提取至提取液無色，放冷，濾過，濾液濃縮至近干，置于IOOmL容量瓶瓶中，甲醇定容至100mL。
6.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于該方法為該方法采用高效液相色譜法檢測； 色譜及檢測條件Agilent C18色譜柱(4. 6mmX 250mm, 5 μ m);以20 : 80的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相；柱溫35°C ;流速lmL/min，檢測波長280nm ； 對照品溶液的制備精密稱取橙皮苷9. 8mg，用甲醇溶解并定容至25mL容量瓶，搖勻，即得； 樣品溶液的制備取本發(fā)明藥物組合物制劑，粉碎，稱取5重量份，置索氏提取器中，力口適量甲醇，置水浴上回流提取至 提取液無色，放冷，濾過，濾液濃縮至近干，置于IOOmL容量瓶瓶中，甲醇定容至IOOmL ； 測定法分別精密吸取對照品溶液5μ I與樣品溶液15 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即 得;本發(fā)明藥物組合物中橙皮苷含量為O. 68mg/g。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于色譜及檢測條件中以20 80的乙腈-O. 3%磷酸溶液為流動相。
8.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于該方法中所述藥物組合物的膠囊制劑由如下方法制備 取蜘蛛香粉碎成粗粉，用相當于蜘蛛香藥材5-15重量倍的35%乙醇，回流提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；將酸棗仁與合歡皮粉碎成粗粉，加5-15重量倍的水，回流提取2-5次，每次1-3小時；將燈心草粉碎成粗粉，用40-60重量倍的95%乙醇，回流提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；將以上提取液分別回收溶劑，濃縮成干膏，各成分干膏按處方比例混合，力口入O. 2-0. 8重量倍干膏量的糊精，混勻，80-95%乙醇作為潤濕劑，進行制粒，過20目篩，顆粒應保存在臨界相對濕度70-90%以下，即得。
9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于該藥物組合物的膠囊制劑由如下方法制備 取蜘蛛香粉碎成粗粉，用相當于蜘蛛香藥材5-15重量倍的35%乙醇，回流提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；將酸棗仁與合歡皮粉碎成粗粉，加5-15重量倍的水，回流提取2-5次，每次1-3小時；將燈心草粉碎成粗粉，用40-60重量倍的95%乙醇，回流提取2-5次，每次O. 5-1. 5小時；將以上提取液分別回收溶劑，濃縮成干膏，各成分干膏按處方比例混合，力口入O. 2-0. 8重量倍干膏量的糊精，混勻，80-95%乙醇作為潤濕劑，進行制粒，過20目篩，顆粒應保存在臨界相對濕度70-90%以下，即得。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于藥物組合物的膠囊制劑由如下方法制備 取蜘蛛香粉碎成粗粉，用相當于蜘蛛香藥材10重量倍的35%乙醇，回流提取3次，每次I小時；將酸棗仁與合歡皮粉碎成粗粉，加10重量倍的水，回流提取3次，每次2小時；將燈心草粉碎成粗粉，用50重量倍的95%乙醇，回流提取3次，每次I小時；將以上提取液分別回收溶劑，濃縮成干膏，各成分干膏按處方比例混合，加入O. 5重量倍干膏量的糊精，混勻，90%乙醇作為潤濕劑，進行制粒，過20目篩，顆粒應保存在臨界相對濕度80%以下，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有抗焦慮作用的藥物組合物的檢測方法以及一種具有抗焦慮作用的藥物組合物的膠囊制劑的檢測方法，該方法采用高效液相色譜法檢測，并且經(jīng)過線性關(guān)系考察、精密度試驗、重復性試驗、穩(wěn)定性試驗以及回收率試驗等一系列考察，本發(fā)明藥物組合物的檢測方法準確、有效，能夠較好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
文檔編號A61K9/48GK102716275SQ20111008006
公開日2012年10月10日 申請日期2011年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月31日
發(fā)明者劉勇, 彭敏, 王延麗, 石晉麗, 翟玉靜, 趙保勝, 鄭虎占, 郭建友 申請人:石晉麗