專利名稱：一種治療更年期綜合癥的淫羊藿提取物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種治療更年期綜合癥的淫羊藿提取物。
背景技術：
更年期綜合癥(征)(Climacteric Syndrome, CS)，是婦女常見病和多發(fā)病之一。 主要是由于卵巢功能衰退，引起機體內(nèi)分泌失調、免疫力地下和植物神經(jīng)紊亂的癥候群，導 致全身多個系統(tǒng)出現(xiàn)功能和病理病變。卵巢功能衰退是其核心病機和病理基礎。目前中老 年婦女中更年期綜合癥患病率約為70%，其中40%左右需要治療，已成為嚴重影響中老年 婦女生活質量的主要疾患之一?，F(xiàn)代醫(yī)學認為婦女更年期綜合征是由于年齡增長、操勞、產(chǎn)育、體弱多病、卵巢切 除或放射治療等因素，因雌激素水平過度降低引起下丘腦_垂體_卵巢軸或腎上腺功能紊 亂所致的神經(jīng)遞質、激素、細胞因子等產(chǎn)生失衡是更年期發(fā)病的主要原因。故神經(jīng)內(nèi)分泌 免疫與更年期綜合征的關系最為密切。西醫(yī)常采用激素替代療法(Hormon Replacement Therapy, HRT)，臨床上常用谷維素雙維B片、谷維素注射液、尼爾雌醇、復方炔雌醇甲羥孕 酮膠囊、復方鹽酸普魯卡因(膠囊)、氯烯雌醚滴丸、戊酸雌二醇等，HRT雖有很好的療效，但 臨床實踐發(fā)現(xiàn)，長期使用雌激素可增加子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌的發(fā)病率，2002年7月，美國國 立衛(wèi)生研究院心臟、肺和血液研究所宣布，婦女健康初始行動(WHI)在健康絕經(jīng)后婦女中 使用雌激素加孕激素的臨床試驗，由于乳腺癌發(fā)病相對風險增加26%，且并無總體益處予 以提前終止。不僅生殖系統(tǒng)增殖性病變，特別是近期所發(fā)現(xiàn)其可增加心腦血管危險性等嚴 重副作用的發(fā)生明顯限制了此法的臨床應用。更年期綜合癥是常見病、多發(fā)病，也是一種較難治療且易復發(fā)的疾病，它不僅表現(xiàn) 在婦科范圍，同時也涉及到內(nèi)科、精神科等領域。由于HRT的風險受益一直是國內(nèi)外同行關 注的焦點，所以尋求一種更為安全有效的治療方法顯得十分必要和迫切，在上述對HRT弊 端新認識的背景下，中醫(yī)中藥面臨著前所未有的走向世界的新契機。中醫(yī)學對本病的認識 已有數(shù)千年的歷史?！端貑枴ど瞎盘煺嬲摗吩啤芭悠咂撸蚊}虛，太沖脈衰少，天癸竭，地 道不通，故形壞而無子也?！迸赃M入更年期會發(fā)生一系列的生理、病理變化。腎氣虧虛，天 癸將竭，任沖脈衰，月經(jīng)出現(xiàn)紊亂，以至絕經(jīng)。同時，出現(xiàn)一系列因腎精虧虛而導致的腎水不 足，虛火內(nèi)生的證候。如潮熱、汗出、五心煩熱、失眠多夢、腰膝酸軟等。從臨床上看，更年期 綜合征大都表現(xiàn)為陰虛內(nèi)熱，其治療以滋陰清熱為要，其中應以滋補腎陰為主。從中醫(yī)的觀 點來看，“腎氣衰”是其主要內(nèi)因，根據(jù)近幾年來科學研究，腎的陰陽失調與自主神經(jīng)功能紊 亂密切相關，補腎藥物對生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)作用的臨床和實驗研究也證明了這一點。因此， 在臨床上，必須抓住“腎虛”這一主要病機，在治療上，必須強調以補腎為主，而究其本，兼調 心、肝、脾而顧其標，故對腎虛而導致心、肝、脾、陰陽失調諸證取究較好。更年期綜合征臨床表現(xiàn)常有有月經(jīng)紊亂、烘熱汗出、記憶力減退、眩暈耳鳴、心悸 失眠、腰背酸困、皮膚蟻行感、情緒不寧等。淫羊藿為小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.等同屬多種植物的干燥地上部分。性溫，味甘、辛，歸肝、腎經(jīng)，具有溫腎壯陽，強筋骨，祛風濕的功效。但淫羊 藿提取物作為用于治療更年期綜合癥的藥物至今未見有公開報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術的缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種治療更年期 綜合癥的淫羊藿提取物，可有效解決更年期綜合癥用藥治療的問題。本發(fā)明解決的技術方案是，將淫羊藿藥材粉碎成藥粉，用乙醇回流提取2次，每次 1. 5h，合并提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，濃縮，冷藏靜置12小時后過濾，用鹽 酸調PH值之后，通過吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用乙醇洗脫，棄去洗脫液，回收洗脫液 ，濃 縮干燥，得含總黃酮的淫羊藿提取物，可有效用于制備治療更年期綜合癥的藥物。本發(fā)明還可適用于箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb. et Zucc.)Maxim] 或柔毛淫羊藿[Epiimedium pubescens Maxim]或心葉淫羊藿[Epimedium breviicornum Maxim，也是藥典規(guī)定的淫羊藿正品，同樣的實驗也證明含有總黃酮的提取物有好的治療 更年期綜合癥的作用。本發(fā)明制備方法簡單，易操作，提取物中總黃酮含量高，效果好，有效實現(xiàn)在制備 治療更年期綜合癥藥物中的應用。
具體實施例方式以下結合具體情況和實驗資料，對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細說明。本發(fā)明在實施中，取淫羊藿藥材，粉碎成藥粉，每次加12倍藥粉重量的質量濃度 為70%的乙醇回流提取2次，每次1. 5h，合并提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，并 濃縮至50°C相對密度為1. 12-1. 15的濃縮液，冷藏靜置12小時，過濾，用lmol/L的鹽酸調 PH值為5. 0-5. 5，通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，先用4倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用4倍柱 體積的質量濃度為10%的乙醇洗脫，棄去洗脫液，繼用8倍柱體積的質量濃度為70%的乙 醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇并濃縮，干燥，得總黃酮含量達60%以上的淫 羊藿提取物，具有很好的治療更年期綜合癥之功效，有效用于制備治療更年期綜合癥的藥 物，并經(jīng)實驗得到了充分的證明，有關實驗資料如下實驗1淫羊藿提取物(淫羊藿總黃酮)對小鼠更年期模型的影響1實驗材料1.1實驗動物清潔級小鼠，昆明種，雌性，22 25g，由河南省實驗動物中心提供。合格證編號 SCXK (豫)2005-0001。1.2實驗藥物淫羊藿提取物(淫羊藿總黃酮)，西安市天園生物制劑廠，批號TY200080116 ；更 年安膠囊，長春英平藥業(yè)有限公司，批號20070521 ；倍諾康大豆異黃酮片，南寧富萊欣生物科技有限公司，南衛(wèi)食證字(2006)第 450101-000389。1. 3試劑與儀器戊巴比妥鈉，中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司，批號F20030816 ；甲醛，中國萊陽市雙雙化工有限公司，批號20040519 ；氯化鈉注射液，鄭州永和制藥股份有限公司，批 號20060302 ；注射用青霉素鈉，華北制藥股份有限公司，批號X0603113 ；雌二醇放射免 疫分析試劑盒，北京科美東雅生物技術有限公司，批號國藥準字S20063125 ；促黃體生成 激素放射免疫分析試劑盒，北京科美東雅生物技術有限公司，批號國藥準字S20063073 ； 促卵泡生成激素放射免疫分析試劑盒，北京科美東雅生物技術有限公司，批號國藥準字 S20063072。FA (N)/JA (N)系列電子天平，上海民橋精密儀器有限公司；SN-695B型智能放免Y 測量儀，上海原子核研究所日環(huán)儀器一廠。2實驗方法2. 1造模與給藥造模方法取昆明種小鼠80只，雌性，22 25g，隨機分為7組，分別為空白對照 組，模型組，更年安膠囊組，大豆異黃酮組，淫羊藿總黃酮高、中、低劑量組。除空白組外，其 他各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg麻醉后腹位固定，然后從小鼠背部最末肋骨下， 在腋中線和距脊柱外側約Icm交叉處剪毛，消毒后切開皮膚和背肌約0. 5 1cm，切口視野 中可見一乳白色發(fā)亮的脂肪團，卵巢即包埋其中。用小鑷子輕輕夾住脂肪團拉出切口外，分 離脂肪團，即可見到一團細線狀不規(guī)則呈黃紅色的卵巢。剪取時先將卵巢下輸卵管(包括 脂肪)用細線結扎，再摘除卵巢，術后順勢將子宮角放回腹腔中，縫合肌肉及皮膚，同法摘 除雙側卵巢。術后精心飼養(yǎng)，肌肉注射青霉素預防感染，連續(xù)3d。手術5d后開始逐只進行 大鼠陰道涂片檢查，每天1次，連續(xù)5d，以確定卵巢是否完全切除。涂片呈現(xiàn)動情反應的動 物棄去不用，選擇60只去勢完全的動物隨機均勻分為6組供實驗用。給藥方法將CMC-Na溶解于煮沸的蒸餾水中，制成0. 5%的溶液做為溶媒，將以 下各藥物混懸其中。取淫羊藿總黃酮高、中、低劑量:20mg · mlAlOmg · mlASmg · mL-1，按 400mg · kg-\200mg · kg—1、IOOmg · kg-1灌胃(相當于生藥臨床用量的30倍，15倍，7. 5倍)； 更年安膠囊33.751^.111廠1，按6751^.1^1灌胃(相當于臨床用量的15倍)；大豆異黃酮 6. 25mg · mL—1，按125mg · kg—1灌胃；模型組和空白組給予同體積的CMC-Na濟液，給藥體積 為0. 2mL/10g,每天1次，連續(xù)3周。2. 2觀察項目及檢測方法各組小鼠末次灌胃后2h (禁食15小時)，眶靜脈取血，分離血清，采用放射免疫法 測定血清中E2、LH、FSH的含量；解剖小鼠，摘除胸腺、脾臟、子宮組織，稱量其濕重并計算臟 器指數(shù)(臟器指數(shù)=臟器濕重mg/大鼠體重g)；將胸腺、脾臟、子宮、腦組織固定于10%福 爾馬林溶液中，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察各組的組織形態(tài)學變化。2. 2. 1雌二醇的測定方法測定原理本實驗采用放射免疫分析方法。先將校準品或樣品、標記物和抗體按程 序規(guī)定依次加入試管中，使標記和非標記抗原與有限量抗體互相競爭結合，待反應平衡后， 加入分離劑，離心沉淀，使游離抗原與抗原抗體復合物分離，測量沉淀物的放射性強度。隨 E2含量增加，其放射性強度則相應降低。校準試劑=125I-E2, 1瓶(紅色液體)；抗體，1瓶(藍色液體)；校準品，7瓶(液體)，濃度為 0、10、50、100、250、750、2000pg/mL ；
分離劑，1瓶(懸浮液)用前搖勻；質控血清，2瓶(液體)，含低、高兩個劑量。操作程序將圓底聚苯乙烯試管編號(按復管操作)，按下表程序操作加樣測定程序表單位μ L
權利要求
1.一種治療更年期綜合癥的淫羊藿提取物，其特征在于，該提取物是，取淫羊藿藥材， 粉碎成藥粉，每次加12倍藥粉重量的質量濃度為70%的乙醇回流提取2次，每次1. 5h，合 并提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，并濃縮至50°C相對密度為1. 12-1. 15的濃縮 液，冷藏靜置12小時，過濾，用lmol/L的鹽酸調pH值為5. 0-5. 5，通過AB-8型大孔吸附樹 脂柱，先用4倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用4倍柱體積的質量濃度為10%的乙醇洗脫，棄去 洗脫液，繼用8倍柱體積的質量濃度為70%的乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，減壓回收乙 醇并濃縮，干燥，得總黃酮含量達60%以上的淫羊藿提取物。
2.權利要求1所述的淫羊藿提取物為在制備治療更年期綜合癥藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療更年期綜合癥的淫羊藿提取物，可有效解決更年期綜合癥用藥治療的問題，本發(fā)明解決的技術方案是，將淫羊藿藥材粉碎成藥粉，用乙醇回流提取2次，每次1.5h，合并提取液，過濾，濾液減壓回收乙醇至無醇味，濃縮，冷藏靜置12小時后過濾，用鹽酸調pH值之后，通過吸附樹脂柱，先用水洗脫，再用乙醇洗脫，棄去洗脫液，回收洗脫液，濃縮干燥，得含總黃酮的淫羊藿提取物，可有效用于制備治療更年期綜合癥的藥物，本發(fā)明制備方法簡單，易操作，提取物中總黃酮含量高，效果好，有效實現(xiàn)在制備治療更年期綜合癥藥物中的應用。
文檔編號A61P15/12GK102091115SQ20111005369
公開日2011年6月15日 申請日期2011年3月7日 優(yōu)先權日2011年3月7日
發(fā)明者劉會麗, 苗明三, 苗艷艷 申請人:河南中醫(yī)學院