專利名稱：一種治療更年期綜合癥藥物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及大豆異黃酮及其大豆甙元的新用途，即大豆異黃酮及其大豆甙元在制備治療更年期綜合癥地藥物中的應用。
更年期婦女由于卵巢功能衰退，體內雌激素水平逐漸下降，常常伴有一系列癥狀，如潮熱、盜汗、心慌氣短、四肢酸懶、失眠健忘等；同時體重增加、腰圍增大、呈中心性肥胖、血甘油三酯與膽固醇增加；性器官萎縮，如陰道變小變窄，分泌粘液減少，嚴重影響更年期婦女的生活質量。同時由于脂代謝紊亂，致使動脈硬化、腦動脈硬化和冠心病加重加速，明顯使心血管病的發(fā)病率和死亡率增加，嚴重時常常影響患者的正常工作和生活。雌激素替代療法(ERT)是現代醫(yī)學用來有效治療更年期疾患的主要方法。補充雌激素可有效預防絕經后雌激素降低所導致的一系列植物神經和中樞神經紊亂。但由于雌激素替代療法可能引起婦女子宮不規(guī)則出血、乳腺脹痛等不適，也有增加乳腺癌和子宮內膜癌發(fā)病的危險性。因此，人們力圖尋找既具有雌激素作用，又可避免長期應用過強雌激素所導致某些器官和組織毒副作用的藥物。
植物雌激素大致可分為三類異黃酮、木質素和香豆素類化合物。目前研究較多的為大豆異黃酮。大豆異黃酮主要包括兩種異黃酮甙金雀異黃素和大豆甙。金雀異黃素又名染料木素(英文名genistein)，大豆甙又名黃豆甙(daidzin)。它們在人體腸道內轉化為相應的甙元后，才能被機體吸收利用。其中大豆甙被轉變?yōu)榇蠖惯霸?，大豆甙元又名大豆素、黃豆甙元，大豆黃酮(daidzein)。雖然大豆甙元可以工業(yè)合成，但本發(fā)明所用大豆甙元是從大豆中提取而成。純度為95％以上，分子結構如下
其中R1＝HR2＝H
發(fā)明內容
本發(fā)明目的是提供一種大豆異黃酮及大豆甙元的新用途；本發(fā)明目的還在于提供一種治療更年期綜合癥藥物。
本發(fā)明藥物由大豆異黃酮或大豆甙元制成；本發(fā)明藥物制成的組合物由下述原料藥制成大豆異黃酮或大豆甙元1-3重量份 枸杞提取物1-3重量份；本發(fā)明藥物可制成任何臨床可接受的劑型。
本發(fā)明大豆甙元是由如下工藝制成的大豆粕30-95％乙醇加熱回流提取2-6次，每次2-8小時，合并醇液，濾過；醇液減壓濃縮成浸膏；浸膏加濃鹽酸在水浴上攪拌加熱回流2-8小時，放冷，濾過；水解液加乙酸乙酯萃取2-10次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯后，加于大孔樹脂AB8；依次用水、10-90％乙醇洗脫；可得到大豆甙元部分，70℃下蒸干，殘留物用甲醇重結晶2-5次，得純度在98％以上的單體。
本發(fā)明是基于發(fā)明人的實驗與臨床研究而完成的。本發(fā)明藥物經臨床實踐證實，日服含50-100mg大豆異黃酮或大豆甙元的藥物，臨床總有效率達90％。發(fā)明人還發(fā)現，主要來源于食品的植物雌激素大豆異黃酮及大豆甙元具有極低的毒性，作為植物雌激素受體調節(jié)劑，其化學結構與雌激素相似，在動物與人體內有雌激素樣作用，而且與雌激素受體有不同程度的結合力，因此可以發(fā)揮雌激素受體激活劑或雌激素受體拮抗劑的雙重調節(jié)作用。
實驗例1大豆異黃酮用于治療更年期綜合癥的臨床觀察
1、實驗方法
使用雙盲、隨機、安慰劑對照門診病人觀察的方法研究，28名受試者分為兩組大豆異黃酮組每日服用100mg大豆異黃酮，對照組服用淀粉制劑。在治療期間禁止服用其它豆類食品或雌激素等制劑。
整個觀察期2個月，第一次為篩選病人，即稱為第一日，之后每月二次共四次進行接診。第一次給病人按7個癥狀進行分級打分。(潮熱面紅、自汗盜汗、心煩不寧、失眠多夢、頭暈耳鳴、腰膝酸軟、手足心熱)，每一癥狀打分標準為1-3分
3分，癥狀中最嚴重者。其嚴重程度為患者不能忍受，不能堅持正常工作，影響到日常生活，必需去醫(yī)院就醫(yī)。
2分，癥狀中等程度?；蛘唠m有較重癥狀，但還能忍受，堅持一般的日常工作。
1分，癥狀中最輕者。癥狀相對比較輕，患者能進行一般工作。注意力轉移時，癥狀相對減輕。
0分，沒有任何癥狀。
上述七個主觀癥狀，重度者總分為3×7＝21分，中度為14分，輕度為5分以下。
2、受試納入標準所有參加觀察者均為已婚健康婦女，并符合以下條件
①有典型的更年期綜合癥狀，綜合評分在5以上
②血中雌激素水平下降，而FSH與LH增高
③3個月內未服用過類固醇等激素。
④無乳癌、子宮癌、妊娠、陰道出血、心血管病、肝病、過敏等既往病史。
將受試者隨機分為2組，其基本情況見附表。兩組患者均進行常規(guī)物理檢查和實驗室檢查。
3、療效判定
按7個癥狀治療前后綜合評分改變判定療效，并經統計學處理。
藥物安全性分析采用定期血、尿、肝、腎功能常規(guī)檢查。
4、結果
28例患者隨機分為兩組，異黃酮組受試者平均年齡為51.5±4.69，更年期癥狀綜合平均分數為14.64±2.58，而安慰組患者平均年齡為50.29±4.66歲，更年期癥狀綜合平均分數為14.79±2.27，詳見下表。在服藥前兩組資料無統計學差異。
服用大豆異黃酮與安慰劑前后更年期癥狀綜合評分比較(X±D)
治療前后相比*P＜0.05；**p＜0.01
異黃酮組與安慰劑組相比#p＜0.05；##p＜0.01
異黃酮組受試者服藥2月后，更年期7項主要主觀癥狀明顯好轉，癥狀總分下降為8.71±2.58，與治療前及安慰組治療后相比均有顯著性差異。而安慰組受試者治療前后，更年期7項主要主觀癥狀無明顯好轉，癥狀總分仍為14.57±1.68
兩組受試者服藥2月后，無一例檢查發(fā)現血、尿、肝、腎功能異常。
發(fā)明人采用隨機、雙盲和安慰劑方法觀察了異黃酮對更年期綜合癥的治療作用。通過上述的臨床實驗觀察，可以發(fā)現，大豆異黃酮在治療更年期綜合癥方面具有明顯的療效。結果表明兩組受試者在服藥前各觀察資料無統計學差異。異黃酮組受試者服藥2月后，更年期7項主要主觀癥狀明顯好轉；而安慰組受試者治療前后，更年期7項主要主觀癥狀無明顯好轉，表明服用異黃酮對改善更年期癥狀是有益的。
實驗例2服用加味異黃酮(大豆異黃酮或大豆甙，枸杞提取物)與安慰劑前后更年期癥狀綜合評分比較(X±SD)
治療前后相比*P＜0.05；**p＜0.01
加味異黃酮組與安慰劑組相比#p＜0.05；##p＜0.01
異黃酮組受試者服藥2月后，更年期7項主要主觀癥狀明顯好轉，癥狀總分下降為8.71±2.58，與治療前及安慰組治療后相比均有顯著性差異。而安慰組受試者治療前后，更年期7項主要主觀癥狀無明顯好轉，癥狀總分仍為14.57±1.68
動物實驗也表明大豆甙元組及大豆異黃酮組均不同程度減少去卵巢引起的能量代謝改變，減少切除卵巢后引起的動物進食量增加、體重明顯增加、體重系數增加和腹部脂肪堆積。大豆甙元組及大豆異黃酮組表現不同程度降低去勢引起的大鼠血清膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、肝組織甘油三脂及膽固醇增高，但大豆多糖無作用。雌二醇雖可有效的減輕去卵巢引起的動物一系列病理改變，但雌二醇卻能導致部分動物不規(guī)則陰道出血，6周后肝臟病理切片顯示，部分肝細胞呈空泡樣變性。表明長期使用人工合成的雌激素會導致明顯的毒副作用。實驗例3大豆甙元對去卵巢大鼠肝臟脂代謝的影響
1、實驗材料
實驗動物Wister雌性大鼠40只，體重220±10g，購自醫(yī)學科學院動物研究所實驗動物繁育所。適應性喂養(yǎng)1周，飼料為該所提供的固體全價飼料，飲用自來水。實驗期間飼養(yǎng)于二級動物室，溫度25±1℃。
實驗藥物大豆甙元，制成濃度為10g/L的懸濁液，放入0～4℃冰箱待用。陽性藥物為尼爾雌醇(nilestrioli)，北京四環(huán)制藥二廠生產制成蒸餾水懸濁液。
主要試劑總膽固醇試劑盒，甘油三酯試劑盒，購自中生生物工程高科技公司。
2、實驗方法
分組隨機分4組大豆甙元組、雌激素組、模型組、假手術組，每組10只。
造模各組大鼠腹腔注射1.5％戊巴比妥鈉溶液麻醉，給藥量為0.3ml/100g體重。腹位固定，腋下2cm處剪毛，切開肌層1～1.5cm，用鑷子深入切口處，拽出卵巢，切除，止血(假手術組的大鼠不摘除卵巢，僅在卵巢與輸卵管連接處夾一下)。在腹腔內撒入青霉素藥粉，縫和肌層，縫皮。同樣摘除另一側的卵巢。
給藥方法手術后，各組大鼠正常飲食1周，以恢復創(chuàng)傷。術后第2周開始給藥，持續(xù)5周。模型組和假手術組每日蒸餾水10ml/kg體重灌胃；雌激素組每周一次灌胃尼爾雌醇懸濁液，劑量為1mg/kg體重；大豆甙元組每日100mg/kg體重灌胃。
取材給藥五周后，各組大鼠稱重、處死，取肝臟、腹部脂肪和子宮，分別稱重、部分組織冰凍，保存?zhèn)溆谩?br>
脂肪提取及測定方法取出冰凍保存的肝臟樣本在碎冰上緩慢解凍，用10倍Tris-鹽酸緩沖液(PH＝7.5)快速勻漿；取1ml勻漿液加入3.75ml提取液(氯仿∶甲醇＝1∶2)，旋渦混合3分鐘；加入氯仿1.25ml，旋渦混合1分鐘；再加入1.25ml蒸餾水，旋渦混合1分鐘；3000轉/分離心10分鐘，取下清液(含提取出的脂肪)，待有機溶劑完全揮發(fā)，用2ml溶劑(氯仿∶甲醇＝2∶1)溶解脂肪；用TC試劑盒、TG試劑盒在MD100型半動生化儀上測出相應指標。3、實驗結果
3.1大豆甙元對去卵巢大鼠體重增長的影響
結果見表1，模型組體重在術后迅速增長，大豆甙元組與模型組對比有顯著延緩體重增加的作用。模型組從給藥第一周起體重便遠遠超過了假手術組。大豆甙元組從給藥二、三周起其體重與模型組有顯著性差異。但從最終體重來看，大豆甙元可以控制由于去卵巢而引起的體重增長。雌激素組在飼喂過程中發(fā)現有陰道不規(guī)則出血，消瘦，食欲下降，毛色晦暗的現象，而大豆甙元組未見此類現象。
表1大豆甙元對去卵巢大鼠體重增長的影響(X±S，g)
N 術后 恢復期 第一周 第二周第三周 第四周 第五周大豆甙元10215.5±14.6233.3±15.7 243.0±16.6 250.6±20.3 249.1±16.2* 246.5±19.4* 245.0±17.0*雌激素組10236.5±17.4242.4±21.4 249.5±18.1 247.8±16.3* 239.0±13.9* 247.8±17.9* 239.0±18.7*模型組 8 214.7±14.7232.9±16.9 249.7±16.1 266.2±15.6△ 275.7±15.1△284.4±16.3△268.5±20.4△注*與模型組比較，p＜0.05；△與假手術比較，p＜0.053.2大豆甙元對去卵巢大鼠腹部脂肪的作用
結果見表2，模型組的腹部脂肪明顯多于假手術組，雌激素與大豆甙元均能顯著抑制因去卵巢而引起的腹部脂肪堆積，脂肪量的平均值僅有模型組的52.10％和64.35％。
表2大豆甙元對腹部脂肪重量和脂肪指數的影響(X±S，g)
腹部脂肪重量相當于模型 相當于模型
n (g)組(％) 脂肪指數(％) 組(％)大豆甙元組 10 8.46±2.49* 64.35 3.67±1.16* 72.10雌激素組10 6.85±3.61* 52.10 3.06±1.55* 60.14模型8 13.15±2.08△ —— 5.09±0.83△——假手術組9 10.57±3.2080.35 4.64±1.22 91.16注*與模型組比較，p＜0.05；△與假手術比較，p＜0.053.3大豆甙元對去卵巢大鼠肝臟中TG和TC含量的作用
結果見表3，模型組肝中TG和TC的含量都大于其它組，分別為118.59±26.44mg/dl和16.43±4.98mg/dl。而假手術組只有64.65±17.84mg/dl和11.35±4.42mg/dl，大豆甙元組與模型組對比有顯著性差異。
表3大豆甙元對去卵巢大鼠肝臟TG、TC的作用(X±S，mg/dl)
注*與模型組比較，p＜0.05；△與假手術比較，p＜0.053.4大豆甙元對去卵巢大鼠子宮濕重的影響
結果見表4，去卵巢6周后，模型組子宮嚴重萎縮，只有假手術組的1/4左右，經過5周給藥，雌激素維持子宮重量并超過了假手術組，大豆甙元對維持子宮重量也有一定作用(p＜0.05)。
表4大豆甙元對去卵巢大鼠子宮的作用(X±S，g)
n 子宮(g) 子宮指數(‰)大豆甙元10 0.15±0.3* 0.70±0.10*雌激素 10 0.46±0.34* 2.10±1.50*模型 8 0.11±0.02△ 0.40±0.10△假手術 9 0.39±0.141.70±0.60
注*與模型組比較，p＜0.05；△與假手術比較，p＜0.054結論
從實驗結果看，模型組大鼠體重、腹部脂肪、肝臟TC、TG均明顯高于假手術組，子宮濕重明顯低于假手術組，補充雌激素可以糾正這種改變，因此說明這種脂代謝紊亂是由雌激素降低所引起的。大鼠去卵巢后，補充大豆甙元5周，結果表現大豆甙元在維持體重和降脂方面都有較好的作用，并且可以減輕由于雌激素降低引起的子宮萎縮。本實驗證實了大豆甙元的雌激素作用。
實施例1大豆異黃酮2kg，可制成膠囊80000粒，每粒含大豆異黃酮25mg。日服2次，2-4粒/次。
實施例2大豆甙元2kg，可制成膠囊80000粒，每粒含大豆甙元25mg。日服2次，2-4粒/次。
實施例3大豆甙元的制備方法
大豆粕75％乙醇加熱回流提取2次，每次4小時，合并醇液，濾過；醇液減壓濃縮成浸膏；浸膏加濃鹽酸在水浴上攪拌加熱回流6小時，放冷，濾過；水解液加乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯后，加于大孔樹脂AB8；依次用水、60％乙醇洗脫；可得到大豆甙元部分，70℃下蒸干，殘留物用甲醇重結晶2-5次，得純度在98％以上的單體大豆甙元。
實施例4大豆異黃酮2kg枸杞提取物2kg，制成膠囊80000粒，每粒含大豆異黃酮25mg。日服2次，2-4粒/次。
實施例5大豆甙元2kg枸杞提取物2kg，制成膠囊80000粒，每粒含大豆甙元25mg。日服2次，2-4粒/次。
權利要求
1、大豆異黃酮在制備治療更年期綜合癥藥物中的應用。
2、大豆甙元在制備治療更年期綜合癥藥物中的應用。
3、大豆甙元在制備補充雌激素的藥物中的應用。
4、大豆甙元的制備方法，其特征在于該方法為大豆粕30-95％乙醇加熱回流提取2-6次，每次2-8小時，合并醇液，濾過；醇液減壓濃縮成浸膏；浸膏加濃鹽酸在水浴上攪拌加熱回流2-8小時，放冷，濾過；水解液加乙酸乙酯萃取2-10次，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯后，加于大孔樹脂AB8；依次用水、10-90％乙醇洗脫；可得到大豆甙元部分，70℃下蒸干，殘留物用甲醇重結晶2-5次，得純度在98％以上的單體。
5、一種治療更年期綜合癥的藥物，其特征在于該藥物是由大豆異黃酮1-3重量份 枸杞提取物1-3重量份制成。
6、一種治療更年期綜合癥的藥物，其特征在于該藥物是由大豆甙元1-3重量份 枸杞提取物1-3重量份制成。
7、如權利要求5所述的藥物，其特征在于該藥物是由大豆異黃酮2重量份 枸杞提取物2重量份制成。
8、如權利要求6所述的藥物，其特征在于該藥物是由大豆甙元2重量份 枸杞提取物2重量份制成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大豆異黃酮及大豆甙元治療更年期綜合癥的藥物新用途；本發(fā)明還公開了一種治療更年期綜合癥的藥物。本發(fā)明藥物制成的組合物由下述原料藥制成大豆異黃酮或大豆甙元1－3重量份，枸杞提取物1－3重量份，本發(fā)明藥物可制成任何臨床可接受的劑型。
文檔編號A61P15/12GK1401320SQ02131289
公開日2003年3月12日 申請日期2002年9月24日 優(yōu)先權日2001年10月26日
發(fā)明者牛建昭 申請人:牛建昭