專利名稱：刺五加總皂苷提取物及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總地涉及天然植物總皂苷提取物，特別是涉及天然藥用植物刺五加葉總皂苷提取物、其制備方法、含有所說(shuō)的總皂苷提取物的藥物組合物，以及所說(shuō)的藥物組合物在治療/預(yù)防心腦血管性疾病和生產(chǎn)治療/預(yù)防心腦血管性疾病的藥物中應(yīng)用。
刺五加(Acanthopanax senticosus(Rupr.et Maxim.)Harms)是五加科人參屬藥用植物刺五加的根和根莖，主要分布在中國(guó)的東北和華北地區(qū)，其次是俄羅斯的遠(yuǎn)東地區(qū)，以及朝鮮半島和日本。在古代中國(guó)的傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)中，人們很早就發(fā)現(xiàn)刺五加是一種具有“補(bǔ)中益氣、堅(jiān)筋骨、強(qiáng)志意”的有價(jià)值天然藥物。隨著現(xiàn)代化學(xué)、生理學(xué)和藥理學(xué)在中醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域里的應(yīng)用和研究進(jìn)展，近三十多年來(lái)，人們對(duì)刺五加的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了較為深入的研究?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，刺五加的主要化學(xué)成分是三萜皂苷，特別是齊墩果酸皂苷。例如，Suprunov(Suprunov，NIChemical Abstract 73127741e，1970)首先從刺五加葉中分離得到了六種單體皂苷，并分別鑒定為齊墩果酸皂苷A、B、C、D、E和F。繼后，F(xiàn)rolova等人(Frolova，GM.et al.，Chemical Abstract 7670053n，1972；Frolova，GM.et al.，Chemical Abstract 7659965r，1972)又進(jìn)一步分離得到了齊墩果皂苷I、K、L和M等四種單體。在這些研究的基礎(chǔ)上，邵春杰等(Shao，C.J.et al.，Chem.Pham.Bull.，36(2)601，1988)首次從刺五加葉中分離得到十三種新的三萜皂苷，并分別命名為刺五加皂苷(Ciwujianoside)A1、A2、A3、A4、B、C1、C2、C3、C4、D1、D2、D3及E。邵春杰等人的研究證實(shí)，這些三萜皂苷的配基(甙元)均屬于齊墩果烷型化合物，其中包括齊墩果酸皂苷元、羥甲齊墩果酸皂苷元，和去甲齊墩果酸皂苷元。糖基包括葡萄糖、鼠李糖及阿拉伯糖，并分別通過(guò)糖苷鍵和酯苷鍵連接到配基的C3羥基和C28羧基上。另外，作者還從同一原料中得到三種已知的皂苷Hederasaponin B、Eleutheroside K，和微量的Seponin-1。
生理學(xué)、藥理學(xué)和臨床藥理學(xué)研究進(jìn)一步證實(shí)，刺五加確實(shí)是一種典型的固本強(qiáng)壯類藥物，具有顯著的扶正固本和鎮(zhèn)靜安神作用。現(xiàn)代生理學(xué)和藥理學(xué)研究表明，刺五加提取物對(duì)循環(huán)和心腦血管系統(tǒng)具有突出的生物學(xué)活性，主要表現(xiàn)為(1)改善動(dòng)物的耐缺氧能力和抗應(yīng)變能力(參見吳秉純等，中成藥研究，增刊(2)，1984和Golotin，V.G.，et al.，Chemical Abstract 110128610f，1989)；(2)增加離體動(dòng)物的冠脈血流量(參見田葆杰等，中國(guó)中藥雜志，14(8)493，1989和馬麗娜等，中國(guó)藥學(xué)雜志，29(11)654，1994)；以及(3)減少(小)血小板聚集和血液粘滯度(參見楊秋生等，首都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，12(3)171，1991和劉玉蘭等，沈陽(yáng)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，6(1)57，1989)。目前為止，已有許多關(guān)于使用刺五加根為原料，單獨(dú)或配合其他天然藥物成分，制成臨床上普遍適用的保健飲料和輔助治療劑的報(bào)道(參見中國(guó)專利92109660.7、93100533.7、94109342.5、9612145.6、99126793.1和00108022.9)。這些現(xiàn)有技術(shù)的主要缺陷在于(1)大規(guī)模開發(fā)和利用刺五加根將造成自然資源的嚴(yán)重破壞；(2)只利用簡(jiǎn)單的水提取物將不利于對(duì)有效部位或成分的深入分析與研究。
作為本發(fā)明密切相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)，宋士岳的已授專利94107718.7號(hào)公開了以刺五加根、莖或葉為原料，制備適于靜脈內(nèi)給藥的水和醇提取物的方法。該方法包括用終濃度75％的乙醇提取濃縮的水提物后，再使用大孔樹脂脫色。可見，該專利描述的方法只是最簡(jiǎn)單的常規(guī)方法，而且產(chǎn)物(主要是黃酮類化合物)的純度難以保證。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供生產(chǎn)刺五加總皂苷提取物的方法，該方法包括首先用CaO將刺五加的水煎煮液制成石灰乳；然后在中性pH條件下使所說(shuō)的石灰乳通過(guò)大孔吸附樹脂柱吸附并用乙醇洗脫；最后再使所得到的洗脫物通過(guò)弱酸型離子交換樹脂并進(jìn)行常規(guī)脫色。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的石灰乳的pH約為10-12。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的刺五加是刺五加植物的葉和/或莖。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的刺五加是刺五加植物的葉。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的再一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中用于洗脫的乙醇濃度約為70-95％(V/V)。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的再一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的常規(guī)脫色方法包括使用弱堿型陰離子樹脂脫色和/或活性炭脫色。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的再一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的刺五加總皂苷提取物的產(chǎn)率為1-3％(W/W)。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供按如上限定的方法制備刺五加總皂苷提取物。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的刺五加總皂苷提取物的純度為80％(W/W)以上。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供含有如上限定的刺五加總皂苷提取物的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物除含有作為基本活性成分的治療有效量的刺五加總皂苷提取物外，還含有一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的藥物組合物被制成適于胃腸道途徑給藥的各種劑型。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的藥物組合物被制成適于胃腸道外途徑給藥的各種劑型。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的再一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的藥物組合物除含有作為基本活性成分的刺五加皂苷提取物外，還可含有一種或多種具有相同、相似或不同生物學(xué)活性，并與所說(shuō)的基本活性成分有輔助或協(xié)同作用但又互不拮抗的天然或合成的其他藥物成份或其混合物。
本發(fā)明總地涉及天然植物總皂苷提取物，特別是涉及天然藥用植物刺五加葉總皂苷提取物、其制備方法、含有所說(shuō)的總皂苷提取物的藥物組合物，以及所說(shuō)的藥物組合物在治療/預(yù)防心腦血管性疾病和生產(chǎn)治療/預(yù)防心腦血管性疾病的藥物中應(yīng)用。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供生產(chǎn)刺五加總皂苷提取物的方法，該方法包括首先在中性條件下使刺五加的水煎煮液通過(guò)大孔吸附樹脂柱吸附，并用乙醇洗脫；然后再使洗脫物通過(guò)弱酸型離子交換樹脂，并進(jìn)行常規(guī)脫色。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中用石灰乳將所說(shuō)的水提取物濾液的pH調(diào)到大約10-12。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的刺五加是刺五加植物的葉或莖。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的刺五加是刺五加植物的葉。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中用于洗脫的乙醇濃度約為70-95％(V/V)。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的常規(guī)脫色方法包括使用弱堿型陰離子樹脂脫色和/或活性炭脫色。
眾所周知，刺五加是中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)中已知的可藥用植物，并已于1977年收入《中華人民共和國(guó)藥典》。已知刺五加植物的根主要含有刺五加苷A-E、酸或酯類化合物以及很少量刺五加多糖；莖皮主要含有丁香酚-β-D-葡糖苷等葡萄糖或半乳糖苷類化合物；葉則主要含有刺五加苷I-M，以及前述的十三種刺五加葉苷。因此，當(dāng)選擇使用刺五加植物的不同解剖部位或組織作為原料以制備生物學(xué)活性組份或單體成分時(shí)，即使使有同樣的方法，也可能因所使用的原料不同而得到成分和/或比例完全不同的化合物或組分。當(dāng)然，所使用的提取方法不同，例如使用不同的試劑和/或步驟，也必將得到不同的活性組份(即所謂“活性部位”)或成分。
一般所來(lái)，相對(duì)于刺五加根，刺五加葉和莖中均含有較高比例的皂苷類化合物，例如刺五加根中總皂苷含量(干重)為0.6-0.9％(w/w)。而莖葉中總皂苷含量(干重)甚至可高達(dá)1.5％(W/W)(Chemical Abstract，7219118r，1970)。因此，為本發(fā)明的目的，我們優(yōu)選的原料是刺五加葉和莖，而且特別優(yōu)選的原料是刺五加葉。
簡(jiǎn)單地說(shuō)，為了得到所需的刺五加總皂苷，首先在裝有經(jīng)過(guò)預(yù)處理的刺五加葉的容器內(nèi)加入體積過(guò)量的水，并加熱煮沸1-4小時(shí)。為了盡可能地增加水提取物的收率，可按照常規(guī)制備中草藥煎劑的方法，在加熱煮沸條件下用過(guò)量的水將原料生藥反復(fù)提取2-4次。然后收集并過(guò)濾如此得到的水提取物。
攪拌下用生石灰(CaO)制成石灰乳，將所得濾液(水提取物)制成pH大約10-12，以使其中所含有的黃酮及鞣質(zhì)以與固體物結(jié)合的方式沉淀下來(lái)。再次過(guò)濾后，用酸將主要含有皂苷成分和糖類物質(zhì)的濾液的pH調(diào)至中性，以利于繼后使濾液中的皂苷吸附于大孔吸附樹脂柱上。然后用水洗柱以除去濾液中含有的以糖類化合物為主的雜質(zhì)。水洗至無(wú)色后，便可使用一般濃度為70-95％，較好濃度為80-90％(v/v)的乙醇洗脫吸附柱結(jié)合的、以皂苷為主的被結(jié)合物。對(duì)柱洗脫的流速?zèng)]有具體限制，一般保持洗脫液的自然流速即可。
收集洗出液后，例如可使之首先通過(guò)弱酸型陽(yáng)離子交換樹脂柱預(yù)處理，然后再使用例如弱堿型陰離子交換樹脂柱脫色。經(jīng)過(guò)樹脂柱脫色處理的產(chǎn)物可能仍帶有淺淡的黃顏色，為了進(jìn)一步改善產(chǎn)物的純度和外觀，必要時(shí)可再次使用活性炭處理，以使通過(guò)脫色樹脂的洗脫物進(jìn)一步脫色。經(jīng)過(guò)活性炭脫色后，雖然可使產(chǎn)物的純度提高到95％，但有時(shí)也可能導(dǎo)致產(chǎn)物收率的降低。一般說(shuō)來(lái)，按干重計(jì)算，依照本發(fā)明方法制得的刺五加總皂苷的產(chǎn)率約為1-3％。同時(shí)，使用齊墩果皂苷B作為標(biāo)準(zhǔn)品，以比色法或分光光度法測(cè)得的產(chǎn)物純度為大約85％(僅一次樹脂脫色)至大約95％(w/w)(樹脂脫色加活性炭脫色)。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供按上述方法制備的刺五加總皂苷提取物，特別是刺五加葉總皂苷提取物。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的刺五加總皂苷提取物的純度為80％以上，而且在經(jīng)過(guò)二次(活性炭)脫色后其純度甚至可達(dá)到大約95％(w/w)或更高。
另外，按刺五加原料的干重計(jì)算，根據(jù)本發(fā)明的刺五加總皂苷提取物的收率約為1-3％。
由以上的描述和事實(shí)可以看出，本發(fā)明的生產(chǎn)刺五加總皂苷提取物的方法和由該方法直接得到的刺五加總皂苷產(chǎn)物所具有的主要優(yōu)點(diǎn)包括(1)工藝相對(duì)比較簡(jiǎn)單，而且不需要特殊的或大型的設(shè)備；(2)方法中所使用的試劑或材料相對(duì)比較便宜，而且均無(wú)毒無(wú)害；(3)所得到的產(chǎn)品的純度相對(duì)較高，并已達(dá)到或超過(guò)了中國(guó)國(guó)家藥品監(jiān)督與管理局《新藥審評(píng)辦法》規(guī)定的中藥第二類新藥的標(biāo)準(zhǔn)。
因此，本發(fā)明的生產(chǎn)刺五加總皂苷提取物的方法不僅是一種十分有用的方法，而且是特別適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)使用的方法。如前所述，本發(fā)明方法不僅工藝簡(jiǎn)便、產(chǎn)品的收率較高，而且基本上不會(huì)造成環(huán)境污染。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供含有如上限定的刺五加總皂苷提取物的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物除含有作為基本活性成分的治療有效量的刺五加總皂苷提取物外，還含有一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑。
作為本發(fā)明的藥物組合物的基本活性成份，刺五加總皂苷和其相關(guān)成分，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)，心血管系統(tǒng)以及內(nèi)分泌和代謝系統(tǒng)均表現(xiàn)有不同程度的生物學(xué)活性。但如前所述，其中特別令人感興趣的是刺五加總皂苷對(duì)心血管系統(tǒng)和血小板聚集的影響。
我們利用各種不同的動(dòng)物模型，對(duì)本發(fā)明的刺五加總皂苷提取物的藥效學(xué)進(jìn)行了廣泛的研究(參見實(shí)施例3-7)。這些研究的結(jié)果包括1.對(duì)于犬和大鼠急性心肌梗死模型，本發(fā)明的刺五加總皂苷提取物(15、30mg/kg)能明顯地減輕實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心肌缺血(或心肌梗死)程度和范圍，并明顯地降低血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CK)及乳酸脫氫酶(LDH)活性；降低血小板粘附性及聚集性；明顯降低全血低切、高切粘度及血漿粘度。另外，對(duì)于大鼠垂體后葉素誘發(fā)的急性心肌缺血模型，不同劑量(25、50、100mg/kg)的本發(fā)明刺五加總皂苷提取物可明顯地減輕缺血性心電圖改變，并由此證明其具有抗急性心肌缺血活性。
2.在急性心肌梗死犬心功能及血流動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中，可見本發(fā)明的刺五加總皂苷提取物(15、30mg/kg)能夠明顯地減慢心率(HR)，降低左心室內(nèi)壓(LVP)、平均動(dòng)脈壓(MAP)及總外周阻力(TPR)，表明該提取物能夠減輕心臟前、后負(fù)荷，減少心臟作功和心肌氧耗。另外，該提取物還可使心室舒張期延長(zhǎng)，增加冠脈灌注時(shí)間，從而有利于縮小心肌梗死面積。
3.在急性心肌梗死犬冠狀循環(huán)及氧代謝試驗(yàn)中，本發(fā)明的刺五加總皂苷提取物(15、30mg/kg)可明顯地增加梗死后心肌血流量，降低冠脈血管阻力，并且兩者作用時(shí)程基本一致。該提取物(40、80、160mg/kg)亦能明顯地提高小鼠心肌86Rb攝取率，增加心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量。另外，本發(fā)明的刺五加總皂苷提取物(15、30mg/kg)還可明顯地降低心肌氧攝取率、心肌耗氧量及心肌耗氧指數(shù)。
4.在抗心律失常試驗(yàn)中，本發(fā)明的刺五加總皂苷提取物(50、100mg/kg)對(duì)BaCl2所致的大鼠心律失常具有明顯的預(yù)防及治療作用，并能顯著地提高豚鼠對(duì)哇巴因中毒誘發(fā)的室性早搏、室性心動(dòng)過(guò)速和心室纖顫的耐受量。
5.在大鼠高脂血癥模型中，本發(fā)明的刺五加總皂苷提取物(25、50、100mg/kg)可明顯地增加血清高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)，降低血清總膽固醇降低(TC)、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c的比例。
可按照制藥工業(yè)中已知的方法(參見Remington’s Pharmaceutical Science.15thed.，Mack Publishing Company，1980)，將含刺五加皂苷和其相關(guān)化合物的提取物與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑或稀釋劑按適當(dāng)?shù)谋壤旌希匆阎椒ǔ笾瞥杀景l(fā)明的各種不同劑型的藥物組合物。
例如，根據(jù)給藥途徑的不同，可將本發(fā)明的藥物組合物配制成適于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、體腔內(nèi)(如胸腔、腹腔、脊髓腔、顱內(nèi)及關(guān)節(jié)囊內(nèi))、組織內(nèi)、皮內(nèi)或皮下給藥的可注射的溶液劑或分散劑；或適于口服給藥的粉末劑、片劑、顆粒劑、丸劑、乳劑、懸浮劑、膠囊劑、酊劑；或適于局部給藥和通過(guò)皮膚或粘膜吸收給藥的噴霧劑、霜?jiǎng)?、乳劑、軟膏劑、凝膠劑、含片或栓劑等。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的藥物組合物可被制成適于胃腸道外途徑給藥的各種劑型。
為了制備適于胃腸道外途徑給藥的可注射溶液劑，例如可以使用無(wú)菌蒸餾水、注射用水、等滲氯化鈉或葡萄糖溶液，或低濃度(如1-100mmol)磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、以及含有乙醇、多元醇(如乙二醇、丙二醇及液態(tài)聚乙二醇等)的溶劑或分散介質(zhì)作為載體或稀釋劑。在任何情況下，所說(shuō)的可注射制劑均應(yīng)是無(wú)菌和可流動(dòng)并適于通過(guò)注射器注射給藥的。另外，在生產(chǎn)、運(yùn)輸和儲(chǔ)存條件下，所說(shuō)的制劑還必須是穩(wěn)定的，并能夠?qū)辜?xì)菌和真菌等微生物的污染。必要時(shí)，可加入抗氧化劑(如抗壞血酸)、抗生素(如青霉素和鏈霉素或其它抗真菌劑)及防腐劑(如苯甲酸鈉、三氯叔丁醇、度米酚、山梨酸等)，以及增溶劑和用于維持分散劑中所需顆粒大小的表面活性劑。
根據(jù)本發(fā)明這一目的的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說(shuō)的藥物組合物可被制成適于胃腸道途徑給藥的各種劑型。
為了制備適于口服給藥的片劑、粉末劑、膠囊劑、顆粒劑或乳劑，可以使用蔗糖、乳糖、半乳糖等糖，或甘露醇、山梨醇等六碳多羥基醇，以及玉米淀粉、明膠、脂質(zhì)、微晶纖維素等作為載體或賦形劑。必要時(shí)，也可在這些口服制劑中加入崩解劑、潤(rùn)滑劑、緩沖鹽、著色劑、甜味劑、香料、分散劑及表面活性劑。
另外，也可使用制藥工業(yè)中已知的方法和輔助成份，將本發(fā)明的藥物組合物制成微膠囊劑或脂質(zhì)體包裹劑。
為了制備適于外用或局部給藥的制劑，可以將刺五加總皂苷和其相關(guān)化合物溶解于含水介質(zhì)或其他適當(dāng)?shù)妮d體或基質(zhì)中，并與適當(dāng)?shù)耐钙の談┤缍谆鶃嗧炕蛟鹿鸬客旌?，制成噴霧劑或氣霧劑。另外，也可使用適當(dāng)?shù)幕|(zhì)或賦形劑將本發(fā)明的藥物組合物制成適于局部或通過(guò)皮膚或粘膜吸收給藥的乳劑、霜?jiǎng)?、軟膏、凝膠劑或栓劑(如陰道栓劑或直腸栓劑)。為此，可使用甘油、硬脂酸鎂、聚乙二醇、聚丙烯酰胺、膽固醇、卵磷脂、甲基纖維素或羧甲基纖維素、滑石粉、乳糖、葡聚糖、淀粉等作為基質(zhì)或賦形劑。
根據(jù)使用目的的不同，本發(fā)明的藥物組合物除含有作為基本活性成分的刺五加皂苷和其相關(guān)化合物外，還可含有一種或多種具有相同、相似或不同生物學(xué)活性，并與基本活性成分有輔助或協(xié)同作用的天然或合成的其他藥物成份或其混合物。
根據(jù)本發(fā)明，所說(shuō)的其它活性成分包括天然來(lái)源的或合成的心腦血管擴(kuò)張劑、抗腫瘤劑、抗菌劑或抗病毒劑、鎮(zhèn)靜劑、抗氧化劑、血栓形成抑制劑，以及免疫調(diào)節(jié)劑等。
一般說(shuō)來(lái)，本發(fā)明的藥物組合物的口服給藥劑量一般為0.1-100mg/kg/天，較好為1-80mg/kg/天，最好為5-50mg/kg/天；腹腔內(nèi)或肌肉內(nèi)注射給藥劑量一般為0.05-100mg/kg/天，較好為0.1-80m/kg/天，最好為0.5-50mg/kg/天；靜脈內(nèi)注射給藥劑量一般為0.01-100mg/kg/天，較好為0.05-80mg/kg/天，最好為0.1-50mg/kg/天。當(dāng)然，確切的給藥劑量應(yīng)根據(jù)待治療的病癥或病理狀態(tài)的性質(zhì)、嚴(yán)重程度、病人的年齡、體重、一般健康狀態(tài)，以及病人對(duì)所用藥物的敏感性、耐受性和給藥方式等因素，按照個(gè)體化的原則由臨床醫(yī)生確定。
鑒于按本發(fā)明方法制備的刺五加總皂苷提取物的上述已知藥理學(xué)活性，因此有可能使用本發(fā)明的藥物組合物治療或預(yù)防中樞系統(tǒng)興奮/抑制功能失調(diào)、中樞或組織缺血/缺氧、冠脈血管供血不足、心功能不全、血栓形成等疾病或病理狀態(tài)。另外，還可使用本發(fā)明的藥物組合物作為抗腫瘤劑、抗炎劑、血脂調(diào)節(jié)劑等的輔助治療劑。
下列實(shí)施例旨在進(jìn)一步舉例說(shuō)明，而不是限制本發(fā)明。應(yīng)明確指出的是，在不違背本發(fā)明精神和原則的前提下，對(duì)本發(fā)明個(gè)別非必要技術(shù)特征所作的任何改動(dòng)和改變都將落入本發(fā)明待批權(quán)利要求的范圍內(nèi)。實(shí)施例1刺五加葉總皂苷提取物的制備稱取仲秋季節(jié)收集的干燥的刺五加葉約1000克，洗凈并搗碎后向其中加入約13倍體積的水。浸泡2小時(shí)后加熱煮沸約2小時(shí)。如此在每次換液(浸泡用水)并煮沸后過(guò)濾的條件下，反復(fù)煎煮4次。同時(shí)，收集并合并每次煮沸后的濾液。攪拌下緩慢向所得濾液內(nèi)加入生石灰制成的石灰乳，以將pH調(diào)整到大約11。將濾液放置2小時(shí)后，再次過(guò)濾并使用約HCl(1mol/L)將此濾液的pH調(diào)到大約7.0。
然后將所得濾液上D101大孔吸附樹脂柱。充分吸附后，先用去離子水洗柱，直到流出液沒有肉眼可見的顏色為止。然后用大約80％(V/V)的乙醇洗脫，并洗至流出液的皂苷反應(yīng)呈陰性為止。收集洗脫物(液)并過(guò)732型弱酸性陽(yáng)離子交換樹脂柱。然后收集流出液并再次過(guò)D941型弱堿性陰離子交換樹脂柱。最后，收集所得到的流出液，減壓濃縮并蒸發(fā)干燥，得到大約24.3克白色粉末狀的刺五加葉總皂苷提取物。實(shí)施例2溶液態(tài)刺五加葉總皂苷提取物的制備稱取干燥的刺五加葉100kg，置提取罐中，加水煎煮三次。三次煎煮時(shí)間依次為2.5、2.0、1.5小時(shí)，加水量依次為藥材重量的10、8、6倍。煎煮完成后，合并煎煮液并常規(guī)過(guò)濾。濾液經(jīng)高位槽緩緩注入預(yù)先處理的200kg AB8型大孔吸附樹脂柱，并用水洗至流出液幾乎無(wú)色，然后再用85％(v/v)乙醇洗脫。收集至無(wú)色的洗脫液并移入減壓濃縮罐中。減壓回收乙醇，并將洗脫物濃縮至流浸膏狀，使其相對(duì)密度達(dá)到1.15(20℃)。在攪拌下向其中加入4倍量的95％乙醇，靜置24小時(shí)以使提出物沉淀析出。過(guò)濾后回收乙醇至相對(duì)密度達(dá)1.05～1.10(20℃)時(shí)，噴霧干燥得到粉末狀的刺五加總皂苷提出物。
精確稱取刺五加葉總皂苷粉末25g，加入注射用水2000ml溶解并將所得溶液調(diào)到pH＝6.5～7.5。然后，向其中加入活性碳6g(0.3％，w/v)，并在沸水浴中加熱10～15分鐘。常規(guī)過(guò)濾后再將濾液用0.02μ微孔濾膜過(guò)濾除菌，制得溶液態(tài)刺五加葉總皂苷。實(shí)施例3本發(fā)明的藥物組合物對(duì)犬急性心肌梗死(AMI)模型的影響體重12～15kg的健康成年雜種犬30只，隨機(jī)均分為5組，每組6只只注射鹽水的空白對(duì)照組、只注射鹽水的心肌梗死組(陰性對(duì)照組)、注射已知藥物碟脈靈(6ml/kg，相當(dāng)臨床日用量20ml/60kg的11.3倍)的陽(yáng)性對(duì)照組及注射本發(fā)明的藥物組合物(15、30mg/kg，相當(dāng)臨床日用量100mg/60kg的5.6、11.2倍)的實(shí)驗(yàn)組。用戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈注射麻醉動(dòng)物并頸部切開氣管插管后，于左第4肋間開胸，分離冠脈左回旋支的鈍緣支，LAD第1、2分支及與鈍緣支相連的各側(cè)支及吻合支以備結(jié)扎，使預(yù)定缺血區(qū)約相當(dāng)左室游離壁前表面的1/2。用多點(diǎn)濕布式吸附法標(biāo)測(cè)心外膜電圖(EECG)，取24個(gè)標(biāo)測(cè)點(diǎn)并分為正常區(qū)、梗死邊緣區(qū)和梗死中心區(qū)。術(shù)后穩(wěn)定15分鐘，記錄各點(diǎn)EECG作為給藥前值。除空白鹽水組只分離冠脈不結(jié)扎外，其它各組均施冠脈結(jié)扎。于結(jié)扎后5分鐘將藥液溶于200ml生理鹽水中恒速靜脈輸注90分鐘。記錄給藥30、60、90、120、180、240、300、360分鐘后的EECG，以ST段升高總mV數(shù)表示∑-ST值，并以ST段升高＞2mV的導(dǎo)聯(lián)數(shù)為N-ST。結(jié)扎后360分鐘從股動(dòng)脈取血，以COBAS-FAARA自動(dòng)生化分析儀測(cè)血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CK)及乳酸脫氫酶(LDH)活性；以LBY-F5血小板粘附儀計(jì)算血小板粘附率；采用LBY-NJ2血小板聚集儀測(cè)定3分鐘時(shí)的最大聚集率；使用LBY-N6A自清洗旋轉(zhuǎn)式粘度計(jì)測(cè)定全血低切(10/s)、中切(40/s)、高切(120/s)粘度及血漿粘度(120/s)。同時(shí)取心臟，去除心房及右室組織后稱取左室濕重。平行于房室溝將左室橫切4～5片，進(jìn)行N-BT染色。待梗死心肌界線清楚時(shí)立即取出，切取梗死心肌并稱重。以梗死心肌與左室濕重的百分比做為心肌梗死面積(MIS)。結(jié)果如下列表1-4所示。
(一)對(duì)AMI犬心肌缺血程度的影響從下列表1所示的結(jié)果可以看出，給模型動(dòng)物投用本發(fā)明的刺五加皂苷提出物(15mg/kg)后不同時(shí)間(90、120、240分鐘)，動(dòng)物的∑-ST值得到明顯改善，并且與陰性對(duì)照組相比較差異顯著(p＜0.05)。較大劑量用藥(30mg/kg)后60、90、120、180、240、300分鐘，可見模型動(dòng)物的∑-ST值明顯降低，而且與陰性對(duì)照組組比較差異顯著(p＜0.05或0.01)。
表1本發(fā)明的藥物組合物對(duì)AMI犬心肌缺血程度的影響(∑-ST，Mv)(x±s，n＝6)時(shí)間 陰性對(duì)照組 實(shí)驗(yàn)組 陽(yáng)性對(duì)照組(15mg/kg) (30mg/kg)(6ml/kg)藥前 5.80±1.31 5.60±2.05 5.50±1.28 5.90±1.47藥后30min 20.15±0.78 19.20±1.8118.75±2.37 19.26±2.5860min 18.49±0.91 17.50±1.9216.89±1.45*16.91±2.1290min 16.57±2.03 14.21±1.30*13.67±2.30*14.17±1.28*120min14.60±1.14 13.07±1.18*11.75±1.48**12.24±2.25*180min14.31±3.08 11.81±2.6010.61±1.06*11.11±1.20*240min13.54±1.37 10.94±1.40*10.31±1.70**10.50±1.52**300min11.80±1.76 10.82±2.489.78±1.16*9.98±0.96*360min11.50±2.54 10.40±1.529.56±2.14 9.70±1.48與陰性對(duì)照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
(二)對(duì)AMI犬心肌缺血范圍(N-ST)的影響從下列表2所示的結(jié)果可以看出，給模型動(dòng)物投用本發(fā)明的刺五加皂苷提出物(15mg/kg)不同時(shí)間(120、180、240、300分鐘)后，明顯降低了動(dòng)物的心肌缺血程度，并且與陰性對(duì)照組比較差異顯著(p＜0.05)。給藥30mg/kg后60、90、120、180、240、300分鐘，可見動(dòng)物的心肌缺血范圍明顯減小，并且與陰性對(duì)照組比較差異非常顯著(p＜0.05或0.01)。
表2本發(fā)明的藥物組合物對(duì)AMI犬心肌缺血范圍的影響(N-ST，點(diǎn))(x±s，n＝6)時(shí)間 陰性對(duì)照組 實(shí)驗(yàn)組 陽(yáng)性對(duì)照組(15mg/kg) (30mg/kg) (6ml/kg)藥前 15.80±4.3815.90±2.85 15.50±4.21 15.70±3.17藥后30min 110.2±19.2105.80±18.698.75±16.5 101.21±15.460min 108.9±16.196.50±11.9 85.80±14.5*89.91±12.2*90min 99.78±12.392.51±17.3 66.82±19.8**78.67±16.8*120min94.60±17.472.15±16.6*58.95±12.4**64.67±11.5**180min85.38±13.868.21±12.6*55.98±19.6*61.61±14.2*240min71.54±16.352.98±10.4*44.33±11.7**50.50±13.2*300min63.82±11.643.85±14.8*39.78±16.6*41.98±15.1*360min48.59±14.538.40±11.5 34.56±10.4 39.70±16.8與陰性對(duì)照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
(三)對(duì)AMI犬心肌梗死面積(MIS)及三種心肌酶(AST、CK、LDH)的影響從下列表3所示的結(jié)果可以看出陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組比較，MIS及血清AST、CK、LDH活性均明顯增加(P＜0.01或0.001)。實(shí)驗(yàn)組(15、30mg/kg)與陰性對(duì)照組比較，可見實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的急性心肌梗死面積(MIS)明顯縮小(P＜0.01或0.001)，并且血清AST、CK及LDH活性明顯降低(P＜0.05或0.01)。這些結(jié)果表明本發(fā)明的刺五加皂苷提出物具有顯著的抗心肌缺血作用。
表3本發(fā)明的藥物組合物對(duì)AMI犬的抗心肌缺血作用(x±S，n＝6)組別 MIS(％) AST(U/L) CK(U/L)LDH(U/L)空白對(duì)照組-43.8±12.5 579.2±142.5 396.0±101.5陰性對(duì)照組18.2±3.5165.5±74.2##1411.0±353.7###998.6±249.3###實(shí)驗(yàn)組15mg/kg 10.6±2.5** 76.5±21.2* 887.2±244.8* 610.5±201.4*30mg/kg 9.1±2.5*** 71.9±28.8* 794.6±229.4** 586.5±158.4**陽(yáng)性對(duì)照組6ml/kg10.4±2.7** 79.2±18.9* 812.3±185.0** 582.9±171.2**與空白對(duì)照組比較##P＜0.01 ###P＜0.001與陰性對(duì)照組比較*p＜0.05 **p＜0.01 ***p＜0.001(四)、對(duì)AMI犬血小板粘附性和聚集性的影響1.在前述方法中，于結(jié)扎冠狀血管后360分鐘從模型動(dòng)物的股動(dòng)脈采血1ml，用3.8％枸櫞酸鈉按1∶9比例抗凝處理后，取10ml加入1ml血小板稀釋液中。搖振混勻，滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板，靜置10分鐘，在光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)血小板數(shù)。剩余血加入LBY-F5血小板粘附儀球中，轉(zhuǎn)動(dòng)15分鐘后，在光鏡下計(jì)數(shù)粘附后的血小板數(shù)，并計(jì)算血小板粘附率。
結(jié)果表明，陰性對(duì)照組的血小板粘附性明顯提高，與空白對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.01)，而注射本發(fā)明的刺五加皂苷提出物(15、30mg/kg)的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物則明顯地降低了血小板粘附性(P＜0.05或P＜0.01)(見表4)。
2.在前述方法中，于結(jié)扎冠狀血管后360分鐘從模型動(dòng)物的股動(dòng)脈采血3ml，按1∶9比例用3.8％枸櫞酸鈉抗凝混勻，以180轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。然后取上清作為富血小板血漿(PRP)，放入0.5ml道夫管中，置恒溫孔中備用。剩余的抗凝血以300轉(zhuǎn)/min離心10分鐘，將所得上清作為貧血小板血漿(PPP)。取PPP和PRP各200μl，采用LBY-NJ2血小板聚集儀測(cè)定3分鐘時(shí)的最大聚集率。
結(jié)果表明，陰性對(duì)照組的血小板聚集性明顯提高，與空白對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05)，而注射本發(fā)明的刺五加皂苷提出物(15、30mg/kg)的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物則明顯地降低了血小板聚集和粘附能力(P＜0.05或P＜0.01)(見表4)。
表4本發(fā)明的藥物組合物對(duì)AMI犬血小板粘附性及聚集性的影響(x±s)組別 動(dòng)物數(shù) 血小板粘附率(％) 3min最大聚集率(％)空白對(duì)照組6 0.113±0.049 59.58±21.60陰性對(duì)照組6 0.226±0.059##99.98±28.52#實(shí)驗(yàn)組15mg/kg 6 0.150±0.061* 66.42±20.13*30mg/kg 6 0.121±0.060** 60.54±22.65*陽(yáng)性對(duì)照組6ml/kg6 0.124±0.057** 62.78±25.20*與空白對(duì)照組比較#P＜0.05 ##P＜0.01與陰性對(duì)照組比較*p＜0.05 **p＜0.01(五)、對(duì)AMI犬全血及血漿粘度的影響在前述方法中，于結(jié)扎冠狀血管后360分鐘從模型動(dòng)物的股動(dòng)脈采血3ml，加1％肝素抗凝，從中取1ml加入LBY-N6A自清洗旋轉(zhuǎn)式粘度計(jì)內(nèi)測(cè)定全血低切(10/s)、中切(40/s)、高切(120/s)粘度，剩余2ml血以3000轉(zhuǎn)/min離心10分鐘，取上層血漿測(cè)血漿粘度(120/s)。
結(jié)果表明，陰性對(duì)照組全血低切、高切粘度及血漿粘度均明顯提高，與空白對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)，但全血中切粘度無(wú)明顯改變。而注射本發(fā)明的刺五加皂苷提出物(15、30mg/kg)的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物則明顯地降低了全血低切、高切粘度及血漿粘度(P＜0.05或P＜0.01)。對(duì)中切粘度雖有降低作用，但與陰性對(duì)照組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。結(jié)果如下列表5所示。
表5本發(fā)明的藥物組合物對(duì)AMI犬全血及血漿粘度的影響(n＝6，x±s)全血粘度組別 血漿粘度10/s 40/s120/s (120/s)空白對(duì)照組 10.15±2.856.05±1.624.73±1.251.50±0.65陰性對(duì)照組 18.75±5.52##6.95±2.126.96±2.08#2.59±0.82#實(shí)驗(yàn)組15mg/kg 11.82±3.24* 5.57±2.464.82±1.09* 1.62±0.58*30mg/kg 10.29±3.45** 5.12±2.324.38±1.16* 1.28±0.44**陽(yáng)性對(duì)照組6ml/kg 10.85±4.67* 4.71±1.60* 4.06±0.56** 1.19±0.49**與空白對(duì)照組比較#P＜0.05 ##P＜0.01與陰性對(duì)照組比較*p＜0.05 **pp＜0.01實(shí)施例4本發(fā)明的藥物組合物對(duì)AMI犬血流動(dòng)力學(xué)及心肌氧代謝的影響本實(shí)驗(yàn)是在實(shí)施例3所述實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，同時(shí)對(duì)模型動(dòng)物進(jìn)行右頸總動(dòng)脈插管，經(jīng)壓力換能器接AP-621G載波放大器記錄動(dòng)脈血壓(SBP、DBP)。分離右側(cè)股動(dòng)脈，切開插入8#心導(dǎo)管至左室腔內(nèi)，連壓力換能器接AP-621G載波放大器，記錄左室內(nèi)壓(LVP)(定標(biāo)敏度為100mmHg/10mm)。將LVP電信號(hào)放大10倍，描記曲線基部，于曲線緩慢微升轉(zhuǎn)變?yōu)榧眲∩仙霓D(zhuǎn)折點(diǎn)讀取左室舒張期末壓(LVEDP)。同時(shí)，將LVP電信號(hào)輸入微分器，描記左室內(nèi)壓變化最大速率(±dp/dtmax)。其中微分器時(shí)間常數(shù)為1ms，高頻濾波50Hz，定標(biāo)敏度為零線±1000mmHg/s/5mm。分離冠狀動(dòng)脈左旋支及主動(dòng)脈根部，放置適當(dāng)內(nèi)徑的電磁流量計(jì)探頭后，接MF-27型電磁流量計(jì)測(cè)定冠脈血流量及主動(dòng)脈流量。四肢連接肢體導(dǎo)聯(lián)，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)心電圖(ECG)并計(jì)算心率(HR)。將上述各指標(biāo)于給藥前及給藥后30、60、90、120、180、240、300、360分鐘同步定時(shí)記錄于RM-6000型多道生理記錄儀上。于給藥前及給藥后60、120、180、240、300、360分鐘分別從冠狀靜脈竇及左股動(dòng)脈同時(shí)取血，用CORNING178型血?dú)夥治鰞x測(cè)定血氧。并按文獻(xiàn)(Chun-Jie Shao，et al，Chem Pharm Bull，1988；36(2)601)中描述的通用公式計(jì)算下列各參數(shù)平均動(dòng)脈壓(MAP)、總外周阻力(TPR)、心臟指數(shù)(CI)、心搏指數(shù)(SI)、左室作功指數(shù)(LVWI)、心肌血流量(MBF)、冠狀血管阻力(CVR)、心肌氧耗量、心肌氧攝取率及心肌耗氧指數(shù)。
空白對(duì)照組在觀察期360分鐘內(nèi)血流動(dòng)力學(xué)各參數(shù)基本保持穩(wěn)定。陰性對(duì)照組血流動(dòng)力學(xué)各參數(shù)出現(xiàn)明顯變化，表現(xiàn)為HR明顯減慢，SBP、DBP、MAP、LVP、CO、SI、CI及MBF明顯降低，TPR、CVR、LVWI及LVEDP明顯增高(數(shù)據(jù)未示出)。與陰性對(duì)照組比較，可見投用本發(fā)明藥物組合物(15、30mg/kg)的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的HR明顯減慢，LVP、MAP、TPR、LVWI及LVEDP降低，表明心臟前、后負(fù)荷減輕，心臟作功和心肌氧耗減少，并且心室舒張期延長(zhǎng)，從而增加了冠脈的灌注時(shí)間。本發(fā)明的藥物組合物對(duì)模型動(dòng)物的心肌氧代謝、心肌氧攝取率、心肌耗氧量及心肌耗氧指數(shù)的影響如下列表6所示。
表6本發(fā)明的藥物組合物對(duì)AMI犬心肌氧代謝的影響(x±s，n＝6)給藥后組別 給藥前60’ 120’ 180’ 240’ 300’心肌耗氧量(ml/100g/min)陰性對(duì)照組 8.70±1.7 8.40±1.29.19±1.29.70±1.7 10.6±1.3 10.2±1.8實(shí)驗(yàn)組15mg/kg 8.80±1.4 7.60±1.87.21±1.8*7.50±1.4*8.20±1.8*8.80±2.030mg/kg 8.65±1.3 7.40±1.67.20±1.2*7.30±1.5*8.10±1.7*7.60±1.4*陽(yáng)性對(duì)照組6ml/kg 9.04±2.7 7.75±1.37.25±1.4*7.42±1.2*8.25±1.4*8.90±1.8心肌氧攝取率(％)陰性對(duì)照組 54.1±7.9 58.0±8.762.1±9.666.2±8.7 76.2±12.6 77.1±13.6實(shí)驗(yàn)組15mg/kg 54.8±6.0 56.7±6.147.6±9.5*51.6±8.5*62.6±16.2 64.6±12.530mg/kg 59.1±8.6 57.2±6.848.2±8.9*47.9±9.8*57.1±9.5*61.2±7.5*陽(yáng)性對(duì)照組6ml/kg 61.1±9.2 59.5±8.949.0±6.7*52.7±7.5*59.0±8.7*60.6±8.7*心肌耗氧指數(shù)陰性對(duì)照組 22.9±4.3 20.5±3.118.6±2.416.4±3.6 14.8±2.9 13.7±3.2實(shí)驗(yàn)組15mg/kg 23.5±3.0 21.4±3.019.8±2.718.3±4.8 16.9±3.5 15.8±2.230mg/kg 23.4±4.6 21.0±4.720.8±5.219.1±6.9 17.2±6.2 16.0±5.8陽(yáng)性對(duì)照組6ml/kg 23.7±5.1 21.3±4.720.8±4.719.9±7.1 18.0±3.1*16.4±3.3*與陰性對(duì)照組比較，*p＜0.05實(shí)施例5本發(fā)明的藥物組合物對(duì)BaCl2誘發(fā)的大鼠心律失常的預(yù)防及治療作用體重190～280g的Wistar大鼠100只(雌雄各半)，隨機(jī)分為5組空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(維拉帕米1mg/kg)、及三個(gè)注射本發(fā)明的藥物組合物(25、50、100mg/kg)的實(shí)驗(yàn)組，每組10只動(dòng)物。靜脈注射10％水合氯醛(300mg/kg)麻醉后，仰位固定動(dòng)物并描記II導(dǎo)聯(lián)心電圖。由舌下靜脈注射0.4％BaCl2(4mg/kg)誘發(fā)心律失常。預(yù)防給藥于注射BaCl2前3分鐘分別經(jīng)舌下靜脈注射維拉帕米1mg/kg及本發(fā)明的藥物組合物25、50、100mg/kg。對(duì)照組則給予等體積生理鹽水。治療給藥于注射BaCl2出現(xiàn)心律失常后1分鐘分別經(jīng)舌下靜脈注射維拉帕米1mg/kg及本發(fā)明的藥物組合物25、50、100mg/kg。對(duì)照組給予等體積生理鹽水。然后，觀察并記錄是否出現(xiàn)心律失常及心律失常持續(xù)時(shí)間和恢復(fù)竇性心律的時(shí)間。
結(jié)果可見，對(duì)照組10只動(dòng)物舌下靜脈注射BaCl2后，在0.42±0.10分鐘內(nèi)出現(xiàn)多源性室性心動(dòng)過(guò)速，并持續(xù)10-15分鐘。不同劑量的本發(fā)明藥物組合物(25mg/kg-100mg/kg)可使10只動(dòng)物在4.80±2.10分鐘至7.20±2.60分鐘內(nèi)未出現(xiàn)心律失常(與對(duì)照組比較p＜0.001)，表明本發(fā)明的藥物組合物對(duì)BaCl2所致的大鼠心律失常具有預(yù)防作用。另一方面，在觀察的15分鐘內(nèi)，空白對(duì)照組10只動(dòng)物給生理鹽水后均未見室性心動(dòng)過(guò)速轉(zhuǎn)為竇性正常心律(0/10)，而投用本發(fā)明的藥物組合物(25mg/kg-100mg/kg)則可使2-8只大鼠室性心動(dòng)過(guò)速在1分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)為竇性正常心律，并持續(xù)7-15min以上。另有2只大鼠室速減輕?？梢婈?yáng)性對(duì)照組(維拉帕米1mg/kg)9只動(dòng)物室性心動(dòng)過(guò)速在1分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)為竇性正常心律(9/10)并持續(xù)15分鐘以上，其中1只動(dòng)物室速減輕。經(jīng)四格表X2檢驗(yàn)表明，本發(fā)明的藥物組合物(50、100mg/kg)及維拉帕米(1mg/kg)對(duì)BaCl2所致的大鼠心律失常均具有治療作用(與對(duì)照組比較p＜0.05或p＜0.01)。實(shí)施例6本發(fā)明的藥物組合物對(duì)高脂血癥大鼠膽固醇及脂蛋白-膽固醇代謝的影響體重205～225g的雄性Wistar大鼠60只，按體重隨機(jī)分為6組正常對(duì)照組、高脂對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(非諾貝特200mg/kg)及三個(gè)實(shí)驗(yàn)組(本發(fā)明的藥物組合物25、50、100mg/kg)，每組10只動(dòng)物。高脂飲食在給藥前一天開始，每晚6:00～7:00給予高脂飼料(配方2％膽固醇、0.2％丙基硫氧嘧啶、0.3％膽酸鈉、7.5％豬油、90％普通飼料)，白天補(bǔ)充普通飼料，共喂飼12天。除非諾貝特組灌胃給藥外，各實(shí)驗(yàn)組均每目8時(shí)靜脈注射給藥1次，連續(xù)12日。最后1日晚禁食不禁水。次日上午用戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉后，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血并分離血清。按文獻(xiàn)(黃德才，中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1985，8(3)142)中所述的酶學(xué)方法檢測(cè)甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)。
結(jié)果可見，高脂對(duì)照組與正常組比較，血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c均顯著升高，HDL-c則顯著下降，表明高脂模型復(fù)制成功。本發(fā)明的藥物組合物50、100mg/kg組與高脂對(duì)照組比較，能明顯降低血清TG、LDL-c、TC/HDL-c及LDL-c/HDL-c(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)，100mg/kg組能明顯降低血清TC(P＜0.05)(見表7)。
表7本發(fā)明的藥物組合物對(duì)高脂血癥大鼠血脂代謝的影響(x±s，n＝10)組別TG TC LDL-c HDL-c TC/HDL-c LDL-c/HDL-c(mmol/L)(mmol/L) (mmol/L)(mmol/L)正常對(duì)照組 0.67±0.24*2.98±0.85**4.25±0.88**1.10±0.32*2.71±0.85***3.86±1.32***高脂對(duì)照組 1.14±0.54 4.72±1.23 7.20±2.310.70±0.31 6.74±2.5810.28±3.82實(shí)驗(yàn)組25mg/kg 0.98±0.284.55±2.02 6.14±2.020.75±0.35 6.07±1.568.19±2.5750mg/kg 0.65±0.27*4.17±1.35 4.31±1.33**1.02±0.27*4.09±1.76*4.23±1.78***100mg/kg0.62±0.35*3.52±1.01*4.27±1.32**1.08±0.19**3.26±1.39**3.95±1.45***陽(yáng)性對(duì)照組200mg/kg0.69±0.21*3.38±1.02*4.75±1.61*0.92±0.20 3.67±1.60**5.16±2.38**與高脂對(duì)照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.00權(quán)利要求
1.生產(chǎn)刺五加總皂苷提出物的方法，該方法包括首先用CaO制成的石灰乳，將刺五加的水煎煮液調(diào)成pH值為堿性；然后在中性pH條件下使刺五加濾液通過(guò)大孔吸附樹脂柱吸附并用乙醇洗脫；最后再使所得到的洗脫物通過(guò)弱酸型離子交換樹脂并進(jìn)行常規(guī)脫色。
2根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的石灰乳的pH約為10-12。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的刺五加是刺五加植物的葉和/或莖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的刺五加是刺五加植物的葉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中用于洗脫的乙醇濃度約為70-95％(v/v)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的常規(guī)脫色方法包括使用弱堿型陰離子樹脂脫色和/或活性炭脫色。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的刺五加總皂苷的產(chǎn)率為1-3％(w/w)。
8.按照權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法制備刺五加總皂苷提出物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7的刺五加總皂苷提出物，其中所說(shuō)的刺五加總皂苷的純度為80％(w/w)以上。
10.含有根據(jù)權(quán)利要求7的刺五加總皂苷提出物的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物除含有作為基本活性成分的治療有效量的刺五加總皂苷外，還含有一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求9的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物被制成適于胃腸道途徑給藥的各種劑型。
12.根據(jù)權(quán)利要求9的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物被制成適于胃腸道外途徑給藥的各種劑型。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的藥物組合物，其中所說(shuō)的藥物組合物除含有作為基本活性成分的刺五加皂苷提取物外，還可含有一種或多種具有相同、相似或不同生物學(xué)活性的天然或合成的其他藥物成份或其混合物。
全文摘要
本發(fā)明總地涉及天然植物總皂苷提取物。特別是涉及天然藥用植物刺五加葉總皂苷提取物、其制備方法、含有所說(shuō)的總皂苷提取物的藥物組合物，以及所說(shuō)的藥物組合物在治療/預(yù)防心腦血管性疾病和生產(chǎn)治療/預(yù)防心腦血管性疾病的藥物中應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/704GK1468860SQ0212553
公開日2004年1月21日 申請(qǐng)日期2002年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月19日
發(fā)明者陳燕萍, 馬興元, 睢大員, 朱吉滿, 王東緒, 魏學(xué)寧, 張春英 申請(qǐng)人:哈爾濱譽(yù)衡藥業(yè)有限公司