專利名稱：用于治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗腫瘤藥物組合物，特別涉及一種左旋棉酚及其醋酸鹽的環(huán)糊精 包合物。
背景技術(shù)：
棉酚(Gossypol)，CAS號303-45-7，是一種黃色的酚類化合物，由左旋棉酚和右旋 棉酚兩種光學(xué)異構(gòu)體組成。天然棉酚存在于錦葵科棉屬植物棉花的種子、葉、莖及根部等器 官中。棉酚的殺精作用已為人們所熟知，可以作為男性節(jié)育藥使用。目前已有醋酸棉酚 口服制劑上市，作為男用避孕藥或用于治療婦科疾病，包括子宮內(nèi)膜異位癥、月經(jīng)過多或失 調(diào)等。中國專利200510022777.9(申請人沈陽藥科大學(xué)，公開號CN1827117，授權(quán)公告日 期2009年12月16日)公開了一種用于治療婦科疾病的醋酸棉酚緩釋片劑將醋酸棉酚加 入緩釋材料形成緩釋制劑避免出現(xiàn)“峰谷”現(xiàn)象，用于解決“峰谷”現(xiàn)象。近年來研究發(fā)現(xiàn)，棉酚對各種腫瘤細(xì)胞具有廣泛的殺傷作用，如子宮肌瘤、前列腺 癌、結(jié)腸癌、肺癌、肝癌、喉癌、頭頸部腫瘤和膠質(zhì)瘤等。進(jìn)一步的研究表明，左旋棉酚是棉酚 的有效成分，而右旋棉酚不僅無效，甚至?xí)l(fā)不良反應(yīng)。因此，單一的左旋棉酚或左旋棉 酚醋酸鹽的抗腫瘤效果優(yōu)于棉酚或棉酚醋酸鹽。常溫下，左旋棉酚易溶于乙醇、丙酮、三氯甲烷等有機(jī)溶劑，亦溶于油脂，但不溶于 水。其中大部分有機(jī)溶劑對人體毒性較大，不適于作為藥物載體，很難制成注射制劑。左旋 棉酚醋酸鹽也難溶于水。因此，與棉酚用于節(jié)育及婦科疾病的制劑相同，目前處于研發(fā)階段 的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽用于抗腫瘤的制劑也是采用口服固體制劑。然而，研究表明，棉酚在大鼠體內(nèi)的口服生物利用度可達(dá)86%左右，在小鼠體內(nèi)的 口服生物利用度則僅為14. 3%左右。左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的口服生物利用度也較 低。因此，左旋棉酚制成口服固體制劑作為抗腫瘤藥物并不理想。處于臨床試驗階段的左 旋棉酚制劑AT-101是左旋棉酚醋酸鹽的普通速釋片劑，為達(dá)到有效的血藥濃度，設(shè)計的人 體每日使用劑量已高達(dá)20mg 80mg。此外，棉酚在高溫、高濕等條件下不穩(wěn)定，40°C下放置10天即會出現(xiàn)顯著的減少； 與水分接觸時穩(wěn)定性會降低，高濕環(huán)境下棉酚含量會快速下降。因此左旋棉酚及左旋棉酚 醋酸鹽的制劑需要盡可能控制和降低水分含量或與水隔絕，才能保證其穩(wěn)定性。雖然片劑 水分含量低于液體制劑，但是，由于左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的熱不穩(wěn)定性，在片劑的制 備工藝下，如需保持左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的穩(wěn)定性，制劑中殘留的水分仍會較多。因此，需要研發(fā)左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的生物利用度高且穩(wěn)定性強(qiáng)的藥物制 劑。降低左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽制劑中的水分含量是提高其穩(wěn)定性的途徑之一，而目 前除片劑外，尚無其它劑型的左旋棉酚及左旋棉酚醋酸鹽的藥物制劑研發(fā)成功。環(huán)糊精包合物是將藥物分子包藏于環(huán)糊精分子空穴內(nèi)形成的超微囊狀包合物。將 藥物制備成環(huán)糊精包合物有利于提高藥物的溶解性、穩(wěn)定性和生物利用度，并掩蓋藥物的不良?xì)馕逗徒档痛碳ば浴５黔h(huán)糊精包合物技術(shù)中，沒有一個通用的方法適合所有的藥物，需要根據(jù)環(huán)糊 精和藥物的溶解度、投料比例、設(shè)備條件、包合溫度和時間等選擇合適的制備方法，需要采 用正交優(yōu)選設(shè)計、均勻設(shè)計、單因素輪換法等試驗設(shè)計方法找出試驗方案和最佳工藝條件。 其環(huán)糊精包合物的產(chǎn)率和穩(wěn)定性也是制約環(huán)糊精包合物發(fā)展的主要因素。文獻(xiàn)報道顯示 (王齊放，修銳，趙哲，郭晶，蘇德森.聚維酮和聚乙二醇對吡羅昔康- β -環(huán)糊精包合的影 響.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報.2000，17 ) J40-312.)，聚維酮和聚乙二醇4000可提高吡羅昔 康- β -環(huán)糊精包合物的穩(wěn)定性和包和率，但所采用的吡羅昔康- β -環(huán)糊精包合物制備方 法為研磨法和振蕩混合，溫度為室溫，研究顯示在環(huán)糊精包合物的凍干或噴霧干燥等工藝 中其穩(wěn)定作用較低，而且聚維酮和聚乙二醇4000濃度在3 5g/L范圍外會出現(xiàn)穩(wěn)定作用 不理想或藥物釋放過緩等問題。中國專利200510026877. 9 (專利權(quán)人上海艾力斯醫(yī)藥科 技有限公司，授權(quán)公告號CN100508969C)公開了一種紫杉烷的羥丙基_ β _環(huán)糊精包合物， 采用聚維酮作為穩(wěn)定劑，但凍干過程額外需要加入甘露醇等膨松劑以保持凍干粉的飽滿和 復(fù)溶性。

發(fā)明內(nèi)容
針對以上現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的目的之一是提供一種生物利用度高、穩(wěn)定性強(qiáng)、載藥 量大的用于治療腫瘤的左旋棉酚及其醋酸鹽的包合物，具體地說是一種用于治療腫瘤的左 旋棉酚及其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物及其膠囊劑和注射用凍干粉制劑。本發(fā)明的另一目的是提供一種適于規(guī)?；a(chǎn)的治療腫瘤的左旋棉酚及其醋酸 鹽的環(huán)糊精包合物的制備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種治療腫瘤的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環(huán)糊精包合物，由左旋棉酚或左旋 棉酚醋酸鹽、聚乙二醇和羥丙基-β-環(huán)糊精組成，所述聚乙二醇為聚乙二醇1500或聚乙 二醇2000中的一種，優(yōu)選聚乙二醇2000 ；所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的 質(zhì)量比為1 (0. 3 1.2)，優(yōu)選1 (0. 5 1.0)，最優(yōu)選1 (0. 6 0. 8)。所述羥丙 基-β -環(huán)糊精的平均取代度為4. 6 6. 5，優(yōu)選5. 1 5. 8 ；所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸 鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1 (7. 0 12.0)，優(yōu)選1 (7.0 10.0)。所述治療腫瘤的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環(huán)糊精包合物的制備方法，包括以 下步驟1)將羥丙基-β -環(huán)糊精、聚乙二醇和左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽按規(guī)定比例加 入到少量無水乙醇中，每Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽無水乙醇用量為2 6ml，然后加入 水定容，配制成每200ml 300ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪 拌5小時，分裝于西林瓶，半壓塞；2)凍干a、預(yù)凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_40°C _30°C，維持冷凍5小時；b、一次干燥抽真空至101 70Pa，然后以8 °C /小時的升溫速度升溫 至-12°C _5°C，恒溫干燥6小時；C、二次干燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至35°C 45°C，恒溫干燥2小時。所述步驟1)中，每Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽所需無水乙醇用量為細(xì)1，然后 加入水定容配制成每140ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液。所述步驟2) a中，預(yù)凍過程中預(yù)凍溫度為_32°C。所述步驟2) b中，一次干燥過程中抽真空至201 40Pa，升溫至_8°C。所述步驟2) c中，二次干燥過程中升溫至40°C。一種包含所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物的藥物制劑添 加醫(yī)學(xué)上可接受的常規(guī)藥用輔料后，制成膠囊劑或注射用凍干粉。本發(fā)明的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環(huán)糊精包合物也可以采用研發(fā)、噴霧干燥 法、自然干燥法、加熱干燥法等方法制備。制備的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環(huán)糊精包合物可直接裝分裝于西林瓶作為 注射用凍干粉使用，也可直接分裝于膠囊制成膠囊劑或與醫(yī)學(xué)上可接受的載體壓片制備成 片劑。本發(fā)明所用的術(shù)語“平均取代度”為描述羥丙基-環(huán)糊精性質(zhì)常用的指標(biāo)，其 涵義及測定方法是本領(lǐng)域技術(shù)人所公知的。本發(fā)明人通過采用正交優(yōu)選設(shè)計、單因素輪換法等試驗設(shè)計方法篩選發(fā)現(xiàn)，以平 均取代度5. 1 5. 8的羥丙基- β -環(huán)糊精包合左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽效果顯著優(yōu)于 其它環(huán)糊精及環(huán)糊精衍生物。并且本發(fā)明人在處方篩選及工藝研究中意外的發(fā)現(xiàn)，聚乙二 醇1500或聚乙二醇2000，尤其是聚乙二醇2000，在較寬的濃度范圍和溫度范圍內(nèi)均可顯著 提高包合物的產(chǎn)率及穩(wěn)定性，對各種左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽環(huán)糊精包合物的制備方法 均有廣泛的適用性，采用凍干工藝制備的凍干粉外形飽滿不宜塌陷，復(fù)溶效果好。此外，羥 丙基- β -環(huán)糊精和聚乙二醇1500或聚乙二醇2000在本發(fā)明的配比下對左旋棉酚或左旋 棉酚醋酸鹽具有意想不到的增溶作用，可顯著提高左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽在水中的溶 解度，顯著提高載藥量，并且可減少有機(jī)溶劑的用量。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋。應(yīng)當(dāng)理解的是，以下實施例僅用于解 釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實施例1制備左旋棉酚的環(huán)糊精包合物配方為左旋棉酚5g聚乙二醇20003. 5g羥丙基-β -環(huán)糊精(平均取代度為5. 4) 40. 5g步驟如下1)將羥丙基-β -環(huán)糊精、聚乙二醇2000和左旋棉酚按規(guī)定比例加入到少量無水 乙醇中，每Ig左旋棉酚無水乙醇用量為細(xì)1，然后加入水定容，配制成每140ml含Ig左旋棉 酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌5小時，分裝于西林瓶，半壓塞；2)凍干a、預(yù)凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_32°C，維持冷凍5小時；
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b、一次干燥抽真空至20Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫至_8°C，恒溫干燥 6小時；C、二次干燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至40°C，恒溫干燥2小 時，即得。將所制的藥物粉末分裝于膠囊即得左旋棉酚-羥丙基-β -環(huán)糊精包合物膠囊劑。實施例2制備左旋棉酚醋酸鹽的環(huán)糊精包合物配方為左旋棉酚醋酸鹽5g聚乙二醇15003. Og羥丙基-β -環(huán)糊精(平均取代度為5. 7) 50g步驟如下1)將羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇1500和左旋棉酚醋酸鹽按規(guī)定比例加入到 少量無水乙醇中，每Ig左旋棉酚醋酸鹽無水乙醇用量為:3ml，然后加入水定容，配制成每 160ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌5小時，分裝于西林瓶，半
壓塞；2)凍干a、預(yù)凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_40°C，維持冷凍5小時；b、一次干燥抽真空至40Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫至_12°C，恒溫干 燥6小時；C、二次干燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至40°C，恒溫干燥2小 時，即得。將所制的藥物粉末分裝于西林瓶作為注射用凍干粉。實施例3制備左旋棉酚醋酸鹽的環(huán)糊精包合物配方為左旋棉酚醋酸鹽5g聚乙二醇20003. Og羥丙基-β -環(huán)糊精(平均取代度為5. 5) 45g步驟如下1)將羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇2000和左旋棉酚醋酸鹽按規(guī)定比例加入到 少量無水乙醇中，每Ig左旋棉酚醋酸鹽無水乙醇用量為細(xì)1，然后加入水定容，配制成每 180ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌5小時，分裝于西林瓶，半
壓塞；2)凍干a、預(yù)凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_32°C，維持冷凍5小時；b、一次干燥抽真空至30Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫至_12°C，恒溫干 燥6小時；C、二次干燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至40°C，恒溫干燥2小 時，即得。將所制的藥物粉末分裝于西林瓶作為注射用凍干粉。
實施例4制備左旋棉酚的環(huán)糊精包合物配方為左旋棉酚5g聚乙二醇20002. 5g羥丙基- β -環(huán)糊精(平均取代度為6. 2) 45g步驟如下1)將羥丙基-β -環(huán)糊精、聚乙二醇2000和左旋棉酚按規(guī)定比例加入到少量無水 乙醇中，每Ig左旋棉酚無水乙醇用量為6ml，然后加入水定容，配制成每IOOml含Ig左旋棉 酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌5小時，分裝于西林瓶，半壓塞；2)凍干
a、預(yù)凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_32°C，維持冷凍5小時；
b、一次干丨燥抽真空至20Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫至_12°C，恒溫干燥6小‘時；
C、二次干丨燥一次干燥后，以12°C /小時的升溫速度升溫至32°C，恒溫干燥2小時，即得。
將所制的藥物粉末分裝于膠囊作為膠囊劑。
實施例5 丨隱定性考察
實施例1-4制備的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環(huán)糊精包合物制劑各3份，分別
置光照(4500士500) lx、高溫(50士》°C及高濕(70士幻條件下放置60天，分別于第10天、 30天及60天時取樣，觀察其外觀性狀有無變化，干燥失重及主藥含量。主藥含量測定方 法如下以重蒸氯仿為溶劑，配制質(zhì)量濃度為0. 2mg/ml的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽對照 品及樣品溶液，分別以自動定量點樣器點樣30 μ 1于聚酰胺板。于20°C下，以正己烷-氯 仿-冰醋酸(80 20 7)為展開劑上行展開1.25小時，采用紫外法在364. 5nm處測定左 旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的含量。各制劑外觀性狀、干燥失重、主藥含量等無顯著變化。實施例6生物利用度考察KM小鼠30只，4周齡，雌性，18 20g，隨機(jī)分為5組，每組6只，其中四組分別 灌胃或尾靜脈注射給予實施例1-4制備的制劑，其中膠囊劑去除膠囊殼溶于生理鹽水后 灌胃給藥，凍干粉溶于生理鹽水后注射給藥，另1組灌胃給予左旋棉酚混懸液或左旋棉酚 醋酸鹽混懸液，給藥劑量均為IOmg/只，給藥前及給藥后第30分鐘、1小時、3小時、12小 時、M小時、36小時采血，置抗凝采血管中，3000r/min離心取血漿，血漿中左旋棉酚或左 旋棉酚醋酸鹽的含量測定采用文獻(xiàn)(Abou-Donia MB, Othman MA, Obih P. Interspecies comparison ofpharmacokinetic profile and bioavailability of(+/-)-gossypol in male Fischer-344 rats and maleB6C3F mice. Toxicology, 1989,55 (1-2) :37-51.)報道 的方法。左旋棉酚混懸液和左旋棉酚醋酸鹽混懸液的生物利用度分別為16. 9%和22. 4%0 實施例1-4制備的左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的環(huán)糊精包合物制劑制劑的生物利用度見 下表1 表 權(quán)利要求
1.一種治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物，其特征在于由左旋棉酚 或左旋棉酚醋酸鹽、聚乙二醇和羥丙基-β-環(huán)糊精組成，所述聚乙二醇為聚乙二醇1500 或聚乙二醇2000中的一種，所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的質(zhì)量比為 1 (0.3 1. ，所述羥丙基-β-環(huán)糊精的平均取代度為4. 6 6. 5，所述左旋棉酚或左 旋棉酚醋酸鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1 (7.0 12.0)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物，其特征在 于所述聚乙二醇為聚乙二醇2000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物，其特征在 于所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的質(zhì)量比為1 (0. 5 1. 0)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物，其特征在 于所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的質(zhì)量比為1 (0. 6 0. 8)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物，其特征在 于所述羥丙基-β -環(huán)糊精的平均取代度為5. 1 5. 8。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物，其特征在 于所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1 (7.0 10.0)。
7.—種權(quán)利要求1-6中任一項所述的治療腫瘤的左旋棉酚其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物 的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將羥丙基-β-環(huán)糊精、聚乙二醇和左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽按規(guī)定比例加入到 無水乙醇中，每Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽所需無水乙醇用量為2 6ml，然后加入水 定容，配制成每IOOml 200ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液，40°C下磁力攪拌 5小時，分裝于西林瓶，半壓塞；2)凍干a、預(yù)凍將分裝于西林瓶的溶液迅速冷凍至_40°C _30°C，維持冷凍5小時；b、一次干燥抽真空至10 70Pa，然后以8°C /小時的升溫速度升溫 至-12°C _5°C，恒溫干燥6小時；c、二次干燥一次干燥后，以12°C/小時的升溫速度升溫至35°C 45°C，恒溫干燥2小 時，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于所述步驟1)中，每Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽所需無水乙醇用量為細(xì)1，然后加入 水定容配制成每140ml含Ig左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽的溶液；所述步驟2)a中，預(yù)凍過程中預(yù)凍溫度為-32°C ；所述步驟2)b中，一次干燥過程中抽真空至201 40Pa，升溫至_8°C ；所述步驟^c中，二次干燥過程中升溫至40°C。
9.一種包含權(quán)利要求1-6中任一項所述的治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精 包合物的藥物制劑，其特征在于添加醫(yī)學(xué)上可接受的常規(guī)藥用輔料后，制成膠囊劑或注射 用凍干粉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療腫瘤的左旋棉酚或其醋酸鹽的環(huán)糊精包合物，由左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽、聚乙二醇和羥丙基-β-環(huán)糊精組成，所述聚乙二醇為聚乙二醇1500或聚乙二醇2000中的一種，所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與聚乙二醇的質(zhì)量比為1∶(0.3～1.2)，所述羥丙基-β-環(huán)糊精的平均取代度為4.6～6.5，所述左旋棉酚或左旋棉酚醋酸鹽與羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量比為1∶(7.0～12.0)。本發(fā)明的產(chǎn)品具有生物利用度高、穩(wěn)定性強(qiáng)、載藥量大等優(yōu)點。
文檔編號A61K9/48GK102138916SQ20111005133
公開日2011年8月3日 申請日期2011年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月3日
發(fā)明者厲保秋 申請人:山東弘立醫(yī)學(xué)動物實驗研究有限公司