專利名稱：一種亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開一種亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法。屬于制藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
菊花是菊科植物菊花Dendranthema morifolium(Ramat.)的干燥頭狀花序，是我 國常用中藥，味甘、苦。歸肺、肝經(jīng)。2010版藥典上收錄了滁菊，亳菊，貢菊和杭菊，其中亳菊 和滁菊為安徽省道地藥材。菊花在我國的栽培歷史至少已有1500多年，其食用入藥早在 《神農(nóng)本草經(jīng)》就有記載“久服利血氣、輕身、耐老、延年?！薄侗静輦湟穭t云“菊花味兼甘 苦，性稟平和，備受四氣，飽經(jīng)霜露，得金水之精，益肺腎二臟”?！赌潦痖e談》曰“食菊延齡， 紫者入血分，可藥可餌，可釀可枕，仙經(jīng)重之”。皆說菊花有抗老防衰、滋潤肌膚的功效菊花在臨床上使用十分廣泛，用于多種疾病的治療。所含化學(xué)成分復(fù)雜，具有多種 生物活性，有揮發(fā)油、黃酮、多糖、綠原酸等。其中黃酮類化合物廣泛存在于植物體內(nèi)，無不 良反應(yīng)，分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，能進入脂肪組織，進而體現(xiàn)出如下 功能消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、 活化大腦及其它臟器細胞的功能，既可以開發(fā)為天然抗氧化劑，作為老年功能性食品、食品 的添加劑，同時對冠心病、心絞痛、高血壓、心血管疾病均具有很好的療效，極具廣闊的開發(fā) 前景，在天然藥物領(lǐng)域內(nèi)研究活躍。目前市場上菊花制劑甚少，大多由于生產(chǎn)工藝限制，含雜質(zhì)較多，服用劑量大，質(zhì) 量可控性差，直接影響產(chǎn)品質(zhì)量和臨床療效。隨著對菊花的化學(xué)成分、提取方法及藥理作用 等進行的一系列研究，菊花的開發(fā)價值和經(jīng)濟價值將日益體現(xiàn)。為此，本發(fā)明用現(xiàn)代科學(xué)的理論方法和技術(shù)，在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上，選取亳菊中總 黃酮含量為指標，對影響菊花黃酮含量的主要條件進行優(yōu)化，選出最佳提取工藝，并通過反 復(fù)試驗，選擇了一種最適合純化和精制的亳菊總黃酮的方法，對其進行了富集純化，使亳菊 總黃酮含量達到50%以上，從而適合作為中藥有效部位，適于進行現(xiàn)代藥物制劑的原料藥。

發(fā)明內(nèi)容
為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供一種亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法。具體通過如下技 術(shù)方案實現(xiàn)一種亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，包括如下步驟(1)亳菊花原藥材經(jīng)提取得到粗提取物；(2)步驟(1)所得到的粗提取物經(jīng)純化過程制得亳菊總黃酮；其特征在于，步驟O)中所述的純化是采用大孔樹脂純化，并且所述的大孔樹脂 是AB-8型大孔樹脂。上述所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟O)中，大孔樹脂采 用濕法裝柱，吸附容量為 8. 50mg/g, 10. 41mg/g, 12. 30mg/g，7. 95mg/g, 11. 67mg/g ；其中優(yōu) 選為12. 30mg/g(相當于0. 25g生藥/g樹脂)。
上述所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟O)中，上樣液濃度 為 4. 61mg/ml，l. 54mg/ml，0. 92mg/ml，0. 66mg/ml ；其中優(yōu)選為 4. 61mg/ml。(相當于 0. Ig 生 藥/ml)上述所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟O)中，上樣吸附速 率為 lBV/h，2BV/h，;3BV/h，4BV/h，5BV/h，優(yōu)選為 lBV/h。上述所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟O)中，用水和乙醇 梯度洗脫，具體是先用水洗脫除去雜質(zhì)，再用濃度為50 90%、優(yōu)選50 70%乙醇洗脫， 收集乙醇洗脫液。上述所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟O)中，洗脫速率為 lBV/h, 2BV/h, 3BV/h, 4BV/h, 5BV/h,優(yōu)選為 2BV/h。上述所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟( 所用樹脂用如下方法預(yù) 處理樹脂用95%乙醇浸泡Mh，待樹脂充分溶脹后濕法裝柱，用95%乙醇在柱上流動沖洗 至流出液與水(1 幻混合無白色混濁現(xiàn)象，再用蒸餾水反復(fù)沖洗至無醇味，備用。上述所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟( 用過的樹脂用如下方法 再生處理用3% -5%鹽酸溶液浸泡樹脂2-4小時，以5-7BV同濃度的鹽酸溶液沖淋樹脂 層，然后用蒸餾水洗至PH值呈中性；再用3% -5%的氫氧化鈉溶液浸泡樹脂2-4小時，以 5-7BV同濃度的氫氧化鈉溶液沖淋樹脂層，最后用蒸餾水洗至PH值呈中性。上述所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟(1)中，采用溶劑回 流提取，所述溶劑為水和/或乙醇，優(yōu)選為70%乙醇。作為本發(fā)明最佳實施方式之一，本發(fā)明提供了一種所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方 法，其特征在于(1)取亳菊花，加10倍量70%乙醇，回流提取2次，每次2h，合并提取液，回收乙醇 至無醇味，離心，取上清液，用蒸餾水定容至濃度為4. 61mg/ml (相當于0. Ig生藥/ml)，備 用；(2)將步驟⑴所得的溶液上樣于AB-8大孔吸附樹脂柱，上樣液濃度為4.61mg/ ml (相當于0. 25g生藥/g樹脂)，以lBV/h速率上樣吸附，先用IOBV蒸餾水洗脫除去雜質(zhì)， 再用4BV/h50%乙醇以2BV/h的流速進行洗脫，收集50%乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥， 得到亳菊總黃酮?？傸S酮含量的測定(1)對照品溶液的制備精密稱取120°C干燥至恒重的蘆丁對照品10mg，置50mL量瓶中，加甲醇適量，置水 浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，即得0. 2mg/mL蘆丁標準品溶液。(2)供試品溶液的制備將正交試驗提取所得溶液濃縮定容至IOOmL,精密量取50mL經(jīng)濃縮后真空干燥至 恒重，計算浸膏得率。另50ml中取適量于25mL容量瓶中，按標準曲線制作方法進行操作、 顯色，測定吸光度，計算總黃酮含量。(3)測定波長的選擇分別精密量取一定量的對照品溶液與樣品溶液，置25mL量瓶中，精密加入5%的 亞硝酸鈉溶液lmL，搖勻，放置6min ；加入10%硝酸鋁的溶液lmL，振搖，放置6min ；再加入
410%氫氧化鈉溶液10mL，振搖并加水至刻度，放置15min。另精密量取蒸餾水ImL置25mL 量瓶中，精密加入5%的亞硝酸鈉溶液lmL，搖勻，同上法操作，作為參比溶液。照紫外-可 見分光光度法，于400 600nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果樣品溶液和對照品溶液在510nm處有 均有最大吸收，故選擇510nm為測定波長。(4)標準曲線的制備精密量取蘆丁對照品溶液0. 0,1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. OmL,分別置于25mL容 量瓶中，加蒸餾水至6mL，加5% (g/v)亞硝酸鈉溶液lmL，混勻，放置6min，加10% (g/v) 硝酸鋁溶液lmL，搖勻，放置6min，加4% (g/v)氫氧化鈉溶液10mL，加水至刻度，搖勻，放 置15min，以第一份作為空白試劑，在510nm處測定各溶液吸光度。以吸光度為縱坐標，質(zhì) 量為橫坐標，繪制標準曲線。得回歸方程為y = 0. 5479x-0. 0107, r = 0.9996，可知在 0. 2-1. 2mg范圍呈良好的線性關(guān)系。本發(fā)明的從亳菊中生產(chǎn)得到亳菊總黃酮的方法，工藝簡單，環(huán)保，得到的亳菊總黃 酮純度超過50%，可以作為有效部位，當原料藥做成制劑，從而提高亳菊藥材的制劑水平和 臨床使用。本發(fā)明方法還易于工業(yè)化，適于大生產(chǎn)。
具體實施例方式以下通過最佳實施例來進一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但不構(gòu)成對本發(fā)明權(quán)利要 求保護范圍的限制。實施例1 最佳提取方法分別選定水提、醇提的各四個因素，每個因素3個水平。取亳菊花5g，按L9(34)正 交表進行試驗，以藥材中總黃酮提取率為評價指標，篩選最佳提取工藝。水提因素水平安排見表1，正交試驗結(jié)果表2，方差分析結(jié)果見表3，表4。表1水提因素水平表
權(quán)利要求
1.一種亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，包括如下步驟(1)亳菊花原藥材經(jīng)提取得到粗提取物；(2)步驟(1)所得到的粗提取物經(jīng)純化過程制得亳菊總黃酮；其特征在于，步驟O)中所述的純化是采用大孔樹脂純化，并且所述的大孔樹脂是 AB-8型大孔樹脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟( 中，大孔 樹脂采用濕法裝柱，吸附容量分別為 8. 50mg/g, 10. 41mg/g, 12. 30mg/g, 7. 95mg/g, 11. 67mg/ g，優(yōu)選為 12. 30mg/g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟( 中，上樣 液濃度為 4. 61mg/ml, 1. 54mg/ml，0. 92mg/ml，0. 66mg/ml，優(yōu)選為 4. 61mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟( 中，上樣 吸附速率為 lBV/h，2BV/h，;3BV/h，4BV/h，5BV/h，優(yōu)選為 lBV/h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟( 中，用水 和乙醇梯度洗脫，具體是先用水洗脫除去雜質(zhì)，再用濃度為50 90%、優(yōu)選50 70%乙醇 洗脫，收集乙醇洗脫液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟( 中，洗脫 速率為 lBV/h，2BV/h，;3BV/h，4BV/h，5BV/h，優(yōu)選為 2BV/h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟( 所用樹脂用 如下方法預(yù)處理樹脂用95%乙醇浸泡Mh，待樹脂充分溶脹后濕法裝柱，用95%乙醇在柱 上流動沖洗至流出液與水(1 幻混合無白色混濁現(xiàn)象，再用蒸餾水反復(fù)沖洗至無醇味，備 用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于步驟( 用過的樹脂 用如下方法再生處理用3% -5%鹽酸溶液浸泡樹脂2-4小時，以5-7BV同濃度的鹽酸溶液 沖淋樹脂層，然后用蒸餾水洗至PH值呈中性；再用3% -5%的氫氧化鈉溶液浸泡樹脂2-4 小時，以5-7BV同濃度的氫氧化鈉溶液沖淋樹脂層，最后用蒸餾水洗至PH值呈中性。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的步驟(1)中，采 用溶劑回流提取，所述溶劑為水和/或乙醇，優(yōu)選為70%乙醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述的亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，其特征在于(1)取亳菊花，加10倍量70%乙醇，回流提取2次，每次2h，合并提取液，回收乙醇至無 醇味，離心，取上清液，用蒸餾水定容。濃度為4.61mg/ml(相當于0. Ig生藥/ml)，備用；(2)將步驟(1)所得的溶液上樣于AB-8大孔吸附樹脂柱，上樣液濃度為4.61mg/ml(相 當于0. 25g生藥/g樹脂)，以lBV/h速率上樣吸附，先用IOBV蒸餾水洗脫除去雜質(zhì)，再用 4BV/h50%乙醇以2BV/h的流速進行洗脫，收集50%乙醇洗脫液，回收溶劑，減壓干燥，得到 亳菊總黃酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種亳菊總黃酮的生產(chǎn)方法，包括亳菊花原藥材經(jīng)提取得到粗提取物和粗提取物經(jīng)純化過程制得亳菊總黃酮，其特征在于所述的純化是采用大孔樹脂純化，并且所述的大孔樹脂是AB-8型大孔樹脂。本發(fā)明方法制得的亳菊總黃酮含量高于50％，達到75％，純度較高，產(chǎn)率等較好，并且工藝環(huán)保、易于工業(yè)大生產(chǎn)。
文檔編號A61P9/10GK102100721SQ201110027770
公開日2011年6月22日 申請日期2011年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月26日
發(fā)明者吳德玲, 李素亮, 金傳山, 陳慧芳 申請人:安徽中醫(yī)學(xué)院, 安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司