專利名稱：Slc19a3基因的一種應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體是一個(gè)新抑癌基因SLC19A3基因在制備腫瘤 診斷、預(yù)防和治療藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多步驟的每次過(guò)程，涉及到癌基因的活化和抑癌基因的失 活。通過(guò)檢測(cè)這些發(fā)生改變的癌基因和抑癌基因，可以在分子水平上早期檢測(cè)到腫瘤的發(fā) 生，從而為及時(shí)的干預(yù)阻擋創(chuàng)造機(jī)會(huì)。隨著對(duì)腫瘤研究的深入，目前腫瘤的診斷和臨床治療 都已經(jīng)開(kāi)始在分子水平展開(kāi)。通過(guò)PCR和蛋白組學(xué)等技術(shù)，開(kāi)發(fā)新的腫瘤相關(guān)標(biāo)記物，正在 日益提高腫瘤的早期診斷水平。而早期診斷和早期治療是提高腫瘤治愈率的關(guān)鍵。同時(shí)， 在分子診斷腫瘤的基礎(chǔ)上，開(kāi)展針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性治療，可以避免對(duì)正常細(xì)胞的毒副 作用，從而可以增加治療劑量，提高治療效果。由于抑癌基因一般在腫瘤細(xì)胞中異常失活，因此恢復(fù)抑癌基因的功能一直以來(lái)被 認(rèn)為是抑制腫瘤進(jìn)展的有效方法。而且，抑癌基因本身在正常組織細(xì)胞中表達(dá)并發(fā)揮防治 腫瘤發(fā)生的重要作用，因此，增加抑癌基因的功能一般對(duì)正常細(xì)胞沒(méi)有明顯毒副作用，是一 種相對(duì)安全的腫瘤特異性治療方法。目前，已經(jīng)有以恢復(fù)抑癌基因?yàn)槟康牡哪[瘤治療手段 應(yīng)用于腫瘤的臨床防治，例如P53腺病毒等。隨著分子生物學(xué)的進(jìn)展，越來(lái)越多的抑癌基因被發(fā)現(xiàn)和鑒定，不僅拓展了我們對(duì) 腫瘤發(fā)生的認(rèn)識(shí)，也為腫瘤診治手段的開(kāi)發(fā)提供了更多的機(jī)會(huì)。人SLC19A3基因(solute carrier family 19 member 3)(Genbank No. NM—025243. 3)，又名 Thiamine transporter 2 (ThTr-2)是一種跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，與腫瘤發(fā)生的關(guān)系尚未清楚，有待進(jìn)一步研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種新的抑癌基因在制備腫瘤診斷、預(yù)防或治療藥物中的應(yīng)用。為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的，發(fā)明人提供如下技術(shù)方案
SLC19A3基因的一種應(yīng)用，是指SLC19A3基因在制備腫瘤診斷、預(yù)防或治療藥物中的應(yīng)用。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，SLC19A3基因是一種新的抑癌基因，該抑癌基因在腫瘤細(xì)胞以及 腫瘤組織中特異性低表達(dá)，并且具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，因此，在篩選SLC19A3基因 低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的基礎(chǔ)上，特異性恢復(fù)該抑癌基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)，有望成為腫瘤 靶向治療的一種新方法和手段。作為優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其中，所述的腫瘤診斷藥 物中至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增SLC19A3基因的引物，所述的引物由上游引物和下游引物組 成，其中，所述的上游引物(SLC19A3-F)具有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列；下游引物 (SLC19A3-R)具有如SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列。作為優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其中，所述的腫瘤診斷藥物以SLC19A3基因?yàn)榛A(chǔ)的檢測(cè)手段，所述的檢測(cè)手段包括RT-PCT和實(shí)時(shí)定量PCR。作為優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其中，所述的腫瘤預(yù)防或 治療藥物以SLC19A3基因?yàn)榘悬c(diǎn)。作為優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其中，所述的腫瘤包括但 不限于胃癌腫瘤和乳腺癌腫瘤。作為優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其中，所述的藥物為藥劑 學(xué)上可接受的任何一種劑型，包括粉劑、注射液、膠囊、片劑或口服液等。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明提供了一種新抑癌基因在制備腫瘤診斷、預(yù)防或治療藥物中的應(yīng)用，以SLC19A3 基因?yàn)榛A(chǔ)的診斷藥物可方便快捷的在分子水平上實(shí)現(xiàn)腫瘤的檢測(cè)，同時(shí)，以SLC19A3基 因?yàn)榘悬c(diǎn)和核心的藥物可望成為腫瘤靶向治療的一種新手段。


圖1是SLC19A3基因在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)分析(RT-PCR法)。SLC19A3基因在大部 分胃癌細(xì)胞中的表達(dá)降低。圖2是SLC19A3基因在胃癌組織中的表達(dá)分析(RT-PCR法)。相對(duì)于正常對(duì)照組 織，腫瘤組織中的SLC19A3基因表達(dá)明顯下調(diào)。胃癌(T)與正常胃粘膜組織(N)，22對(duì)，/7 < 0. 05。圖3是SLC19A3基因在胃癌組織中的表達(dá)分析(RT-PCR法)。相對(duì)于正常對(duì)照組織， 腫瘤組織中的SLC19A3表達(dá)明顯下調(diào)。乳腺癌(T)與正常乳腺組織(N)，19對(duì)，/7 < 0.05。圖4是SLC19A3基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程示意圖。A:表達(dá)載體構(gòu)建示意 圖；B:SLC19A3基因表達(dá)載體構(gòu)建的酶切鑒定圖。箭頭所指分別是載體以及插入子即 SLC19A3cDNA。圖5是應(yīng)用集落形成實(shí)驗(yàn)來(lái)分析SLC19A3基因的抑癌功能。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染SLC19A3基 因表達(dá)載體以恢復(fù)SLC19A3基因在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的集落形成能力受到明顯 抑制(/7 < 0.05)。對(duì)照組是空載體(pcDNA3. 1);數(shù)據(jù)來(lái)自3次不同的實(shí)驗(yàn)(均值士標(biāo)準(zhǔn)差 的形式)。圖6是應(yīng)用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)來(lái)分析SLC19A3基因的抑癌功能。數(shù)據(jù)來(lái)自3次不 同的實(shí)驗(yàn)(均值士標(biāo)準(zhǔn)差的形式)。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染SLC19A3基因表達(dá)載體以恢復(fù)SLC19A3基因 在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)后，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)受到明顯抑制(P < 0.05)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例和說(shuō)明書附圖，更具體地說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的 實(shí)施并不局限于下面的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本 發(fā)明保護(hù)范圍。在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原料等均 可從市場(chǎng)購(gòu)得或是本行業(yè)常用的。若無(wú)特別指明，實(shí)施例采用的方法為本領(lǐng)域通用技術(shù)。本發(fā)明所述的新抑癌基因SLC19A3基因在開(kāi)發(fā)腫瘤診斷、預(yù)防和治療手段中的應(yīng) 用，可參考常規(guī)的藥物配置方法和試劑開(kāi)發(fā)。藥物劑型和生物制劑為醫(yī)學(xué)上認(rèn)可的任何一種劑型，例如為粉劑、注射液、膠囊、片劑或口服液。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，是按照常規(guī)條件，例如Sambrook等作者的 分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York Co Id Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的 條件，或按照制造廠商說(shuō)明書建議的條件。試驗(yàn)試劑Highfidelity PFU DNA聚合酶，1Trizol試劑，小牛血清(FBS)，磷酸鹽 緩沖液(PBS)，RPMI-1640培養(yǎng)基，青霉素-鏈霉素(P/S)和0. 25%(ff/V)胰蛋白酶/1 mM EDTA (iTrypsin-EDTA)購(gòu)于 Invitrogen (USA)。GoTaq 聚合酶從 Promega (USA)購(gòu)得。月中 瘤細(xì)胞系(AGS, Kato III，MKN28, MKN45, NCI-N87, SNUl 和 SNU16)分別從日本的 Riken BioResource Center細(xì)胞庫(kù)和美國(guó)的ATCC購(gòu)買。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(RT)使用High Capacity cDNA Reverse Transcription 試劑盒(美國(guó) Applied Biosystem 公司)。實(shí)施例1 RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SLC19A3基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá) 1.細(xì)胞培養(yǎng)
所有細(xì)胞均采用RPMI-1640培養(yǎng)基，其中含100 U/ml青霉素，100 μ g/ml鏈霉素和 10%FBS，于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。2.總RNA抽提試劑盒
細(xì)胞的總RNA是用hvitrogen公司的Trizol試劑按照生產(chǎn)廠商提供的方法分離提 取。該試劑是基于酸性酚一步抽提法生產(chǎn)的。用于抽提RNA所用的器皿和水均要進(jìn)行無(wú) RNA酶處理，以保證實(shí)驗(yàn)中無(wú)RNA酶的環(huán)境。3.總RNA的抽提
培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，吸干培養(yǎng)液后，直接加入Iml Trizol，室溫下靜置5分鐘，收 集細(xì)胞到1. 5ml離心管中。加入氯仿后，4°C離心分層；將上層水相轉(zhuǎn)入新鮮1. 5ml離心 管，加入Iml異丙醇，4°C離心沉淀RNA ；用1. 5ml75%乙醇洗滌沉淀2次；用無(wú)RNA酶的去 離子水溶解沉淀。抽提的RNA質(zhì)量鑒定紫外分光光度計(jì)測(cè)定沈0/觀0比值(確認(rèn)比值均 在1. 7-2. 0)。并在MOPS甲醛變性膠中觀察有無(wú)降解。作為對(duì)照的正常胃組織的總RNA從 Clontech公司購(gòu)買。4. cDNA 的合成
逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(RT)使用美國(guó) Applied Biosystem 公司的 High Capacity cDNA Reverse Transcription試劑盒，每個(gè)反應(yīng)使用2微克總RNA。加入2 X RT bufferlO微升和總RNAlO 微升，反應(yīng)總體積為20微升。使用ABI PCR儀進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，具體運(yùn)行參數(shù)如下25°C 10分鐘；37° C 120分鐘；85° C 5分鐘；冷卻至4° C0 -20° C保存?zhèn)溆谩?. PCR
細(xì)胞SLC19A3的表達(dá)水平通過(guò)常規(guī)PCR法來(lái)檢測(cè)，使用美國(guó)Promega公司的GoTaq聚 合酶。反應(yīng)總體積為20微升采用1微升cDNA模板，加入2 XPCR bufferlO微升，高純?nèi)?離子水9微升。反應(yīng)參數(shù)如下95° C預(yù)變性2分鐘；35個(gè)循環(huán)設(shè)置如下，95° C變性30秒； 55° C退火30秒，72° C延伸30秒；最后72° C延伸10分鐘。1. 5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物(結(jié)果見(jiàn)圖1)。PCR使用所有引物均在hvitrogen公司合成。具體序列如下 SLC19A3 的 RT-PCR 引物
SLC19A3-F 上游引物為 5' -TTCTCCATGATGAGACCCTC-3‘ (SEQ ID NO. 1)；SLC19A3-R 下游引物 5' -ATGATGACTGGCTTGTAGCG-3‘ (SEQ ID NO. 2)， SLC19A2 的 RT-PCR 引物
SLC19A2-F 5' -GTTGCTGTGTTTGCAGTTGG -3‘ (SEQ ID NO. 3)； SLC19A2-R 5' -TTCCATGCTGAGGTTTGCAG -3‘ (SEQ ID NO. 4)， GAPDH 的 RT-PCR 引物
GAPDH-F 5' -GGAGTCAACGGATTTGGT-3‘ (SEQ ID NO. 5)； GAPDH-R 5' -GTGATGGGATTTCCATTGAT-3‘ (SEQ ID NO. 6)。6.結(jié)果分析
SLC19A3基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)明顯下降(見(jiàn)圖1)。實(shí)施例2 實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SLC19A3基因在腫瘤組織中的表達(dá) 1.組織分離
所有標(biāo)本均經(jīng)病理確認(rèn)。手術(shù)切除標(biāo)本一經(jīng)離體，迅速切取腫瘤病灶及癌旁組織，放入 液氮中保存。2.總 RNA 抽提
將勻漿器等在200°C干烤4小時(shí)，去除RNA酶，冷卻；將組織從液氮中迅速取出，碾成 粉末；用刮匙將組織放入預(yù)先加入TRIzoI試劑的勻漿器中，勻漿數(shù)分鐘；將勻漿后的液體 轉(zhuǎn)入無(wú)RNA酶的離心管中，加入氯仿后，4° C離心分層；將上層水相轉(zhuǎn)入一無(wú)RNA酶的離心 管中，加異丙醇，4° C離心沉淀RNA ；用75%乙醇洗滌沉淀2次；風(fēng)干后無(wú)RNA酶的去離子水 溶解沉淀。抽提的RNA質(zhì)量鑒定紫外分光光度計(jì)測(cè)定^OASOnm比值，比值均在1. 7-200 通過(guò)MOPS甲醛變性膠觀察有無(wú)RNA降解。3. cDNA合成均參照實(shí)施例1。4.實(shí)時(shí)定量PCR
采用定量實(shí)時(shí)RT-PCR來(lái)比較分析組織中SLC19A3的mRNA水平，用GAPDH作為對(duì)照。 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)使用美國(guó)Applied Biosystem公司的定量RT-PCR試劑盒(Power Sybr green)。反應(yīng)總體積為20微升采用1微升cDNA模板，加入2XPCR bufferlO微升，高純 去離子水9微升。反應(yīng)參數(shù)如下95°C預(yù)熱2分鐘；40個(gè)循環(huán)設(shè)置如下，95°C，30秒；60°C, 1分鐘；最后進(jìn)行溶解曲線分析(結(jié)果見(jiàn)圖2和圖3)。5.結(jié)果分析
SLC19A3基因在胃癌(見(jiàn)圖2)和乳腺(見(jiàn)圖3)腫瘤組織中的表達(dá)明顯下降。實(shí)施例3 SLC19A3 cDNA的克隆和表達(dá)載體的構(gòu)建 1.克隆專用cDNA的合成
逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(RT)使用美國(guó) hvitrogen 公司的 Supei^cipt III First Synthesis System for RT-PCR試劑盒，每個(gè)反應(yīng)使用2微克總RNA。反應(yīng)總體積為20微升10 X RT buffer 2 微升，總 RNA 5 微升，01igodT20 引物 1 微升，IOmM dNTPl 微升，25mM MgCl2 4 微 升，0. IM DTT 1微升，RNaseOUT 1微升，Superscript III逆轉(zhuǎn)錄酶1微升，高純?nèi)ルx子水 4微升。使用ABI PCR儀進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，具體運(yùn)行參數(shù)如下25°C 10分鐘；37°C 120分 鐘；85° C 5分鐘；冷卻至4° C。-20° C保存?zhèn)溆谩?0° C 50分鐘，85° C 5分鐘，冷卻至4° C后 加入RNaseH，37°C孵育20分鐘。-20° C保存?zhèn)溆谩?. SLC19A3 cDNA 的克隆全長(zhǎng)SLC19A3基因的開(kāi)放閱讀框采用RT-PCR的方法從正常胃組織的總RNA中擴(kuò)增獲 得，其中聚合酶連反應(yīng)(PCR)使用美國(guó)hvitrogen公司的highfidelity PFU DNA聚合酶。 反應(yīng)總體積為50微升5XPCR緩沖液10微升，IOmMdNTP 1微升，引物各1微升，PFU酶0. 4 微升，cDNA模板5微升，高純?nèi)ルx子水32. 6微升。PCR反應(yīng)參數(shù)如下96° C預(yù)變性4分鐘； 反應(yīng)37個(gè)循環(huán)95°C變性30秒；58°C退火30秒；72°C延伸1分鐘。運(yùn)用TOPO技術(shù)，連接到TOPO PCR Blunt載體(美國(guó)hvitrogen公司)。具體步驟 如下取新鮮PCR產(chǎn)物2微升，加入TOPO載體1微升，試劑盒中氯化鈉溶液1微升，高純無(wú) 離子水2微升。室溫下孵育10分鐘后。開(kāi)始細(xì)菌轉(zhuǎn)化將TOPO反應(yīng)產(chǎn)物加入冰浴融化的感受態(tài)細(xì)菌中，冰浴孵育半小 時(shí)，42° C熱休克90秒，加入試劑盒中SOB培養(yǎng)液1毫升，37° C低速培養(yǎng)1小時(shí)，再將細(xì)菌培 養(yǎng)液接種在含青霉素培養(yǎng)LB板中繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng)過(guò)夜。第二天，挑取克隆培養(yǎng)，經(jīng)測(cè)序選擇 正確克隆。3. SLC19A3的克隆引物
SLC19A3-cF: GCCACCATGGATTACAAGGATGACGATGACAAGGATTGTTACAGAACTTC (SEQ ID NO. 7)
SLC19A3-cR: GTTAGAGTTTTGTTGACATGATGA (SEQ ID NO. 8) 4. SLC19A3表達(dá)載體的構(gòu)建(圖4)
抽提正確克隆的質(zhì)粒，用EcoR I酶切后，經(jīng)1%瓊脂糖電泳分離回收目的片段，連入線 性化的pcDNA3. 1。連接反應(yīng)如下載體1微升，回收插入子5微升，連接酶緩沖液2微升， T4 DNA連接酶1微升(Roche Applied Science公司產(chǎn)品)。16°C連接過(guò)夜。過(guò)夜連接產(chǎn) 物參照步驟2中的細(xì)菌轉(zhuǎn)化程序進(jìn)行轉(zhuǎn)化和細(xì)菌接種。挑取克隆培養(yǎng)，經(jīng)酶切和測(cè)序雙鑒 定后，保存正確克隆，使用Qiagen公司的質(zhì)粒抽提試劑盒抽提質(zhì)粒，用于基因轉(zhuǎn)染。5.結(jié)果分析
SLC19A3基因的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體構(gòu)建成功(見(jiàn)圖4)。實(shí)施例4集落形成法分析SLC19A3基因的抑癌功能 1.操作過(guò)程
利用克隆形成實(shí)驗(yàn)(Colony Fomation Assay)來(lái)檢測(cè)SLC19A3基因?qū)δ[瘤癌細(xì)胞生 長(zhǎng)的作用。100000個(gè)細(xì)胞接種于12孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)過(guò)夜，使用德國(guó)Roche Applied Science公司的FUGENE 6試劑轉(zhuǎn)染SLC19A3質(zhì)粒，并使用空的pcDNA3. 1載體作為對(duì)照。轉(zhuǎn) 染48小時(shí)后，轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均分成分成三組重新接種，并使用含有400微克每毫升G418的 RPMI-1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)10-15天，形成的克隆先用甲醇固定，然后用龍膽紫染色，大于 等于50個(gè)細(xì)胞的克隆被統(tǒng)計(jì)用于分析。2.結(jié)果分析
在AGS和MKN^細(xì)胞中，當(dāng)外源轉(zhuǎn)入SLC19A3基因后，腫瘤細(xì)胞形成克隆的能力被明顯 抑制(見(jiàn)圖5)。實(shí)施例5細(xì)胞生長(zhǎng)曲線法分析SLC19A3的功能 1.操作過(guò)程
利用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)SLC19A3基因?qū)δ[瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用?；蜣D(zhuǎn)染同實(shí)施 例4。轉(zhuǎn)染細(xì)胞用含有400微克每毫升G418的RPMI-1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選，獲得的穩(wěn)定細(xì)胞株在12孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)并連續(xù)4-5天使用臺(tái)酚藍(lán)染色進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，所得結(jié) 果如圖6所示，穩(wěn)定表達(dá)SLC19A3基因的細(xì)胞株的增殖能力顯著低于對(duì)照的空載體細(xì)胞株。2.結(jié)果分析
當(dāng)外源轉(zhuǎn)入SLC19A3基因后，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)能力被明顯抑制(見(jiàn)圖6)。結(jié)論
SLC19A3基因在腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中表達(dá)下降；通過(guò)克隆SLC19A3 cDNA,構(gòu)建 SLC19A3基因的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體，發(fā)現(xiàn)恢復(fù)SLC19A3基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)，可以抑制 腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。以上結(jié)果表明SLC19A3基因是一個(gè)新的抑癌基因。檢測(cè)SLC19A3基因 的表達(dá)可以用于腫瘤的診斷。而恢復(fù)SLC19A3基因的抑癌功能可以達(dá)到治療腫瘤的目的。 因此，SLC19A3基因在腫瘤的診斷、預(yù)防以及治療中均有一定的應(yīng)用價(jià)值。盡管發(fā)明人已經(jīng)對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做了較為詳細(xì)的闡述和列舉，應(yīng)當(dāng)理解，對(duì) 于本領(lǐng)域一個(gè)熟練的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，對(duì)上述實(shí)施例作出修改和/或變通或者采用等同的替 代方案是顯然的，都不能脫離本發(fā)明精神的實(shí)質(zhì)，本發(fā)明中出現(xiàn)的術(shù)語(yǔ)用于對(duì)本發(fā)明技術(shù) 方案的闡述和理解，并不能構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。
權(quán)利要求
1.SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其特征在于，所述的應(yīng)用是指SLC19A3基因在制備腫瘤診 斷、預(yù)防或治療藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤診斷藥 物中至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增SLC19A3基因的引物，所述的引物由上游引物和下游引物組 成，其中，所述的上游引物具有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列；下游引物具有如SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤診斷 藥物以SLC19A3基因?yàn)榛A(chǔ)的檢測(cè)手段，所述的檢測(cè)手段包括RT-PCT和實(shí)時(shí)定量PCR。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤預(yù)防或治 療藥物以SLC19A3基因?yàn)榘悬c(diǎn)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤包括胃癌 腫瘤和乳腺癌腫瘤。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或4或5所述的SLC19A3基因的一種應(yīng)用，其特征在于，所述的 藥物為藥劑學(xué)上可接受的任何一種劑型，包括粉劑、注射液、膠囊、片劑或口服液。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體是一個(gè)新抑癌基因SLC19A3基因在制備腫瘤診斷、預(yù)防和治療藥物中的應(yīng)用。該抑癌基因在腫瘤細(xì)胞以及腫瘤組織中特異性低表達(dá)，并且具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，因此篩選低表達(dá)該抑癌基因的腫瘤，特異性恢復(fù)該抑癌基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)，為腫瘤靶向治療提供了一種新方法。
文檔編號(hào)A61K48/00GK102146454SQ20111002678
公開(kāi)日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2011年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月25日
發(fā)明者馮利鋒, 吳啟安, 王嫻, 金洪傳 申請(qǐng)人:杭州博譜醫(yī)藥科技有限公司