專利名稱：一種抱莖苦荬菜總酚酸及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抱莖苦荬菜總酚酸及其制備方法，本發(fā)明還涉及含該抱莖苦荬菜總酚酸的凍干粉針及其制備方法和質(zhì)量控制方法，屬于藥學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
抱莖苦荬菜，俗稱苦碟子、滿天星等，為菊科苦荬菜屬抱莖苦荬菜[Ixeris sonchifolia (Bge)Hance]的兩年生干燥地上部分，具有清熱解毒，化瘀止痛的功效，臨床應(yīng)用以苦碟子注射液較為廣泛。苦碟子注射液由抱莖苦荬菜單味藥制成，主要成分有黃酮、 酚酸、腺苷、氨基酸等，用于治療冠心病、心絞痛及心肌梗死等缺血性心腦血管疾病。近幾年對該藥物的研究有很大進展，但多集中于黃酮類化合物，對另一有效部位總酚酸類化合物的單獨研究未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是提供一種抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法。本發(fā)明的另一目的是提供該抱莖苦荬菜總酚酸凍干粉針劑的制備方法和凍干針劑的質(zhì)量控制方法。采用的技術(shù)方案是
一種抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，包括下述工藝步驟
1、將抱莖苦荬菜藥材粉碎后加入0.1%-0. 5%的碳酸氫鈉溶液作溶劑進行滲漉，收集 10-15倍量的滲漉液，用稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至2-3，濾過，沉淀備用；
2、將步驟一獲得的濾液通過聚酰胺柱，先用1-5倍量水洗去雜質(zhì)，繼用90%乙醇洗脫， 收集5-15倍量乙醇洗脫液，備用；
3、將步驟一獲得的沉淀用2-10倍量90%乙醇提取3次，濾過，濾液與步驟二所得乙醇液合并，40-70°C回收乙醇，減壓濃縮，加4%氫氧化鈉溶液使溶解，濾過，干燥，即得抱莖苦荬菜總酚酸。本發(fā)明采用弱堿滲漉初提，過聚酰胺柱除雜，高濃度乙醇精提的方法，即采用低濃度弱堿將酸性較強的成分如酚酸、鞣質(zhì)等有選擇性地提取出來，研究中，對不同濃度的碳酸鈉和碳酸氫鈉作為提取溶劑分別進行了比較，結(jié)果表明，以0. 2%-0. 5%的碳酸氫鈉作為溶劑提取效率最高且所含雜質(zhì)最少；為了維持抱莖苦荬菜酚酸類化合物的穩(wěn)定，避免酚酸類成分在高溫下發(fā)生氧化降解，采用滲漉法進行提??；由于堿提取可能會帶入鞣質(zhì)類雜質(zhì)，而鞣質(zhì)在聚酰胺柱上吸附性很強，需用強堿才能洗去，故用90%乙醇對聚酰胺柱進行洗脫，便在將有效成分洗脫下來的同時將鞣質(zhì)除去；最后采用高濃度醇將游離的總酚酸精制出來。 本法所得最終提取物中抱莖苦荬菜總酚酸的含量高，雜質(zhì)少，其總酚酸含量在80%以上，生理活性強，且工藝過程簡單易行、安全可控，為所得抱莖苦荬菜總酚酸應(yīng)用于各種制劑奠定了基石出。利用本發(fā)明方法得到的抱莖苦荬菜總酚酸可以用來制備任何一種藥劑學(xué)上所說的制劑。例如，用于口服時，可以制成相應(yīng)的片劑，顆粒劑或膠囊劑等形式；還可以制成粉針劑、注射用的溶液等形式。本發(fā)明還涉及抱莖苦荬菜總酚酸粉針劑的制備方法，其技術(shù)要點是取抱莖苦荬菜總酚酸，加入適量注射用水使溶解，用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7. 0，加入支撐劑甘露醇，加入量以重量比計抱莖苦荬菜總酚酸比甘露醇為1 :0. 1-1，再加入保護劑硫代硫酸鈉， 加入量以重量百分比計為0. 1-1%，以及適量的注射用水，每IOOOml溶液中加入5g活性炭， 調(diào)節(jié)PH值至7. 0，加熱至沸并保持微沸15分鐘，冷卻，濾過，滅菌，濾過，灌裝，冷凍干燥，壓蓋，艮口得。以本發(fā)明方法制得的抱莖苦荬菜總酚酸粉針劑克服了酚酸類化合物在制備和儲存過程中易分解變質(zhì)的缺陷，保證了有效成分的穩(wěn)定性，從而確保了抱莖苦荬菜總酚酸粉針劑的質(zhì)量和療效。
具體實施例方式實施例一
一種抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，包括下述工藝步驟
1、將抱莖苦荬菜藥材粉碎成IOcm長的小段后加入0.5%碳酸氫鈉溶液作溶劑進行滲漉，收集10倍量的滲漉液，用稀硫酸調(diào)節(jié)PH值至2. 0，濾過，沉淀備用；
2、將步驟一獲得的濾液通過聚酰胺柱，先用5倍量水洗去雜質(zhì)，繼用90%乙醇洗脫，收集8倍量乙醇洗脫液，備用；
3、將步驟一獲得的沉淀用5倍量90%乙醇提取3次，濾過，濾液與步驟二所得乙醇液合并，50°C回收乙醇，減壓濃縮，加4%氫氧化鈉溶液使溶解，濾過，干燥，即得抱莖苦荬菜總酚酸 108g。實施例二
一種抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，包括下述工藝步驟
1、將抱莖苦荬菜藥材粉碎成12cm長的小段后加入0.3%碳酸氫鈉溶液作溶劑進行滲漉，收集12倍量的滲漉液，用稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至2. 5，濾過，沉淀備用；
2、將步驟一獲得的濾液通過聚酰胺柱，先用8倍量水洗去雜質(zhì)，繼用90%乙醇洗脫，收集10倍量乙醇洗脫液，備用；
3、將步驟一獲得的沉淀用8倍量90%乙醇提取3次，濾過，濾液與步驟二所得乙醇液合并，55°C回收乙醇，減壓濃縮，加4%氫氧化鈉溶液使溶解，濾過，干燥，即得抱莖苦荬菜總酚酸 113g。實施例三
一種抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，包括下述工藝步驟
1、將抱莖苦荬菜藥材粉碎成15cm長的小段后加入0.洲碳酸氫鈉溶液作溶劑進行滲漉，收集15倍量的滲漉液，用稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至3，濾過，沉淀備用；
2、將步驟一獲得的濾液通過聚酰胺柱，先用10倍量水洗去雜質(zhì)，繼用90%乙醇洗脫，收集15倍量乙醇洗脫液，備用；
3、將步驟一獲得的沉淀用10倍量90%乙醇提取3次，濾過，濾液與步驟二所得乙醇液合并，60°C回收乙醇，減壓濃縮，加4%氫氧化鈉溶液使溶解，濾過，干燥，即得抱莖苦荬菜總
4酚酸115g。實施例四
一種抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，包括下述工藝步驟
取抱莖苦荬菜總酚酸20g，加入適量注射用水使溶解，用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7. 0，加入支撐劑甘露醇4g，再加入保護劑硫代硫酸鈉0. Ig,以及適量的注射用水，每 IOOOml溶液中加入5g活性炭，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加熱至沸并保持微沸15分鐘，冷卻，濾過， 滅菌，濾過，灌裝，冷凍干燥，壓蓋，即可得到1000支注射用凍干粉。抱莖苦荬菜注射用凍干粉針中總酚酸的含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明采用紫外分光光度法對總酚酸進行含量測定，經(jīng)方法學(xué)驗證該方法準(zhǔn)確可靠、 簡便易行。分別以咖啡酸、菊苣酸和蒲公英素B為對照品進行考察，結(jié)果蒲公英素B的最大吸收波長與供試品溶液相一致且含量最高，故選用蒲公英素B為對照品。在線性關(guān)系考察中發(fā)現(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)過原點，故采用對照品比較法作為含量計算方法。具體方法如下 對照品溶液的制備
取蒲公英素B對照品約8mg，精密稱定，置IOml量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻；精密量取1ml，置IOOml量瓶，加50%乙醇至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備取本品10mg，精密稱定，加水5ml使溶解，通過15g已處理好的 AB-8型大孔樹脂柱，以水洗脫，IOOml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，精密量取1ml，至IOml 量瓶中，加入無水乙醇5ml，再加水至刻度，搖勻，即得。測定法
分別取對照品溶液與供試品溶液，在328nm波長處測定吸光度，按對照品比較法計算
樣品含量。抱莖苦荬菜注射用凍干粉針中蒲公英素B的含量測定方法
為進一步控制產(chǎn)品質(zhì)量，本發(fā)明采用高效液相色譜法對總酚酸中含量最高的蒲公英素 B進行含量測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.4%磷酸溶液(20 80)為流動相；檢測波長為；理論板數(shù)以蒲公英素B峰記算應(yīng)不低于 5000 ；
對照品溶液的制備精密稱取蒲公英素B對照品適量，加50%乙醇制成每Iml含0. Img 的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液制備取本品50mg，精密稱定，置IOOml量瓶中，加入50%乙醇至刻度，搖勻，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。抱莖苦荬菜總酚酸的藥效學(xué)試驗及毒性試驗
利用本發(fā)明方法制得的抱莖苦荬菜總酚酸不但質(zhì)量穩(wěn)定，而且富含中藥抱莖苦荬菜的活性成分，具有優(yōu)異的抗血細(xì)胞聚集、抗心肌缺血、缺氧等藥理作用，因此可以用來制備療效好，安全可靠的防治心腦血管疾病的藥物。以下抱莖苦荬菜總酚酸的藥效學(xué)試驗充分證明了抱莖苦荬菜總酚酸及其粉針劑具有良好的藥理作用。實驗例1抱莖苦荬菜總酚酸和抱莖苦荬菜總酚酸粉針劑對大鼠血瘀證模型血細(xì)胞聚集作用的影響
采用反復(fù)注射腎上腺素和施以冰水浸泡的方法制作急性血瘀證大鼠模型，以全血粘度和紅細(xì)胞聚集指數(shù)等指標(biāo)，以比濁法測定血小板最大聚集率，結(jié)果如下。( 1)對大鼠急性血瘀模型全血粘度的影響
急性血瘀模型組與正常對照組比較其全血高、中、低切黏度值均明顯升高，表明模型大鼠的血液流變學(xué)狀態(tài)出現(xiàn)異常改變，提示大鼠急性血瘀證造模成功。結(jié)果如表4所示，采用實施例1得到的抱莖苦荬菜總酚酸10、20mg/kg，實施例4得到的抱莖苦荬菜總酚酸粉針劑13. 5、27mg/kg，均可明顯降低急性血瘀大鼠的全血黏度值，與模型組比較，有顯著差異， 表明有明顯改善急性血瘀模型大鼠全血黏度的作用。抱莖苦荬菜總酚酸10mg/kg、抱莖苦荬菜總酚酸粉針劑13. 5mg/kg與苦碟子注射液lg/kg作用相當(dāng)。表1對急性血瘀模型大鼠全血粘度的影響Cr士A二幻
權(quán)利要求
1.一種抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，其特征在于包括下述工藝步驟將抱莖苦荬菜藥材粉碎后加入0. 19Γ0. 5%碳酸氫鈉溶液作溶劑進行滲漉，收集5 15倍量的滲漉液，用稀硫酸調(diào)節(jié)PH值至2 3，濾過，沉淀備用；濾液通過聚酰胺柱，先用廣5倍量水洗去雜質(zhì)，繼用90%乙醇洗脫，收集5 15倍量乙醇洗脫液，備用；上述沉淀用2 10倍量 90%乙醇提取3次，濾過，濾液與上述乙醇液合并，4(T70°C回收乙醇，減壓濃縮，加4%氫氧化鈉溶液使溶解，濾過，干燥，即得抱莖苦荬菜總酚酸；抱莖苦荬菜總酚酸以重量百分比計不少于16% ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，其特征在于制備成的抱莖苦荬菜總酚酸能制成注射用凍干粉針，含抱莖苦荬菜總酚酸不少于80%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述抱莖苦荬菜總酚酸的注射用凍干粉針，其特征在于制備方法包括下列步驟取抱莖苦荬菜總酚酸，加入適量注射用水使溶解，用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至 7.0，加入支撐劑甘露醇，加入量以重量比計抱莖苦荬菜總酚酸比甘露醇為1 :0. 1-1，再加入保護劑硫代硫酸鈉，加入量以重量百分比計為0. 1-1%，以及適量的注射用水，每IOOOml 溶液中加入5g活性炭，調(diào)節(jié)pH值至7. 0，加熱至沸并保持15分鐘，冷卻，濾過，滅菌，濾過， 灌裝，冷凍干燥，壓蓋，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，其特征在于制備成的注射用凍干粉針的總酚酸測定方法，包括下述工藝步驟a.對照品溶液的制備取蒲公英素B對照品8mg，精密稱定，置IOml量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻；精密量取lml，置IOOml量瓶，加50%乙醇至刻度，搖勻，即得；b.供試品溶液的制備取本品10mg，精密稱定，加水5ml使溶解，通過15g已處理好的AB-8型大孔樹脂柱，以水洗脫，IOOml量瓶收集洗脫液至刻度，搖勻，精密量取1ml，至IOml量瓶中，加入無水乙醇 5ml，再加水至刻度，搖勻，即得；c.測定法分別取對照品溶液與供試品溶液，在328nm波長處測定吸光度，按對照品比較法計算樣品含量。
全文摘要
一種抱莖苦荬菜總酚酸的制備方法，包括下述工藝步驟將抱莖苦荬菜藥材粉碎后加入0.1%~0.5%碳酸氫鈉溶液作溶劑進行滲漉，收集5~15倍量的滲漉液，用稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至2~3，濾過，沉淀備用；濾液通過聚酰胺柱，先用1~5倍量水洗去雜質(zhì)，繼用90%乙醇洗脫，收集5~15倍量乙醇洗脫液，備用；上述沉淀用2~10倍量90%乙醇提取3次，濾過，濾液與上述乙醇液合并，40~70℃回收乙醇，減壓濃縮，加4%氫氧化鈉溶液使溶解，濾過，干燥，即得。本發(fā)明方法制得的抱莖苦荬菜總酚酸粉針劑克服了酚酸類化合物在制備和儲存過程中易分解變質(zhì)的缺陷，保證了有效成分的穩(wěn)定性，從而確保了抱莖苦荬菜總酚酸粉針劑的質(zhì)量和療效。
文檔編號A61K36/28GK102293805SQ201110001528
公開日2011年12月28日 申請日期2011年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月6日
發(fā)明者呂志會, 王學(xué)東, 王淞淋, 生可心, 馬占芝 申請人:沈陽雙鼎制藥有限公司