專利名稱：用于診斷不同亞型肺癌的基于組織的微-rna方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及已經(jīng)過證實(shí)的miRNA生物標(biāo)記和相應(yīng)的方法，以用于可靠地在外科手術(shù)和活組織檢查肺組織中組織中不同亞型的肺癌，特別是用于區(qū)別不同亞型的肺癌。所述肺癌亞型包括腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌。
背景技術(shù)：
肺癌依然是世界上男性和女性癌相關(guān)死亡中最常見的原因。據(jù)估計(jì)在2009年有約1400000新增病例，伴隨平均2. 51%的年增長(zhǎng)率(Frost&SulIivan估計(jì))，這些在2009年診斷為肺癌15的患者絕大多數(shù)將會(huì)死于該疾病(Higgins, M. J. et al. (2009) Expert RevAnticancer Ther 9，1365-1378)。盡管在過去的幾十年中外科技術(shù)和聯(lián)合治療有了一定的改進(jìn)，但在美國和歐洲不同分期肺癌患者的總5年存活率僅約15%。 肺癌分類為小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)或非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)。主要的(80%)肺癌組織學(xué)類型為NSCLC包括腺癌和鱗狀細(xì)胞狀細(xì)胞癌。吸煙是發(fā)生肺癌的最重要風(fēng)險(xiǎn)因子，占世界范圍內(nèi)男性肺癌病例中的80%和女性肺癌患者中的50%。肺癌治療依不同的癌亞型而異。對(duì)早期NSCLC的治療選擇是外科手術(shù)，有40%的總5年存活率。但是，多數(shù)患者在診斷時(shí)已處于晩期，使得ー線治療僅局限于多藥聯(lián)合化療而且預(yù)期存活率少于8個(gè)月。在靶向治療方面的近期進(jìn)展要求對(duì)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC) 30更準(zhǔn)確地亞型分類。癌血管生成抑制劑可使鱗狀細(xì)胞狀細(xì)胞癌患者更易于發(fā)生異常反應(yīng)(Lebanoy, D. (2009) J Clin Oncol 27,2030-2037)。小細(xì)胞肺癌(SCLC)患者是肺癌中致死性最高的亞型，患者死亡率高于90%。盡管在早中期患者中常觀察到高初始反應(yīng)率，中位存活率也有約20個(gè)月。但外科手術(shù)對(duì)SCLC的治療幾乎是無效的，化療或化療放療聯(lián)合才是治療選擇。除了對(duì)不同亞型和不同病因肺癌的不同治療，監(jiān)測(cè)者間的差異和缺乏特異、標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)也限制了當(dāng)下對(duì)患者實(shí)施充分策略化合適治療的能力。對(duì)肺癌患者個(gè)體的治療決策很快將基于詳細(xì)的癌和宿主特征。用于區(qū)分肺癌亞型的特異性分子生物標(biāo)記是絕對(duì)需要的。許多診斷性檢測(cè)也受限于一般是基于對(duì)單一分子指標(biāo)的分析，而這種分析可能影響檢測(cè)的可信度和/或準(zhǔn)確性。此外，單一指標(biāo)通常并不能對(duì)潛伏階段、癌進(jìn)展等進(jìn)行詳細(xì)預(yù)測(cè)的。因此，仍然需要發(fā)掘可供選擇的分子指標(biāo)和檢測(cè)方式來克服這些局限。解決這ー問題的方法之一可以基于調(diào)控性RNA分子，特別是基于由20-25個(gè)核酸大小的進(jìn)化保守的內(nèi)源性表達(dá)的非編碼RNA，該類RNA可介導(dǎo)靶mRNA表達(dá)并以此自從其在10年前發(fā)現(xiàn)以來被證實(shí)參與細(xì)胞發(fā)育、分化、増殖和凋亡的微RNA(miRNA)(Bartel, D. P. (2004) Cell 116, 281-297, Ambros, V. (2004) Nature 431, 350-355; He, L.et al. (2004)Nat Rev Genet 5,522-531)。而且，由于其在體外非常穩(wěn)定和在體內(nèi)的長(zhǎng)期存在，miRNA有作為癌生物標(biāo)記的其他mRNA所沒有的優(yōu)勢(shì)(Lu，J. et al.，(2005) Nature435, 834-838; Lim, L. P. et al. , (2005) Nature 433,769-773)。
miRNA產(chǎn)生于原發(fā)轉(zhuǎn)錄并被RNase III Drosha加工成莖-環(huán)狀結(jié)構(gòu)的前體(pre-miRNA)。轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)后，另一名為Dicer的RNase III剪切pre-miRNA發(fā)夾的環(huán)形成短雙鏈RNA，其中一條鏈以成熟miRNA整合成miRNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體(miRNP)。其中的 miRNA 引導(dǎo) miRNP 到靶 mRNA 發(fā)揮功能(Bartel, D. P. (2004) Cell 23，281-292;He, L. andHannon, G. J. (2004)Nat Rev Genet 5,522-531)。根據(jù)miRNA與其目標(biāo)間的互補(bǔ)程度，miRNA可引導(dǎo)不同的調(diào)控過程。與miRNA高互補(bǔ)的mRNA通過與RNA干擾(RNAi)相同的機(jī)制被特異性剪切。因此，在這種情況下，miRNA作為短干擾RNA(SiRNA)發(fā)揮功能。靶向與miRNA互補(bǔ)性較弱的mRNA要么被導(dǎo)向細(xì)胞降解途徑或在不影響mRNA水平的狀態(tài)下被翻譯抑制。但，miRNA如何抑制靶mRNA的翻譯機(jī)制仍有爭(zhēng)議。高通路miRNA定量技術(shù)，如miRNA芯片、以實(shí)時(shí)RT-PCR為基礎(chǔ)的TaqMan miRNA檢測(cè)，已被證實(shí)為研究全癌基因組整體miRNA譜的有力工具。越來越多的數(shù)據(jù)顯示miRNA表 達(dá)的異常調(diào)節(jié)與特定類型癌的發(fā)生和/或進(jìn)展相關(guān)。例如兩個(gè)miRNA，miR-15和miR-16-l被證實(shí)位于在慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)中缺失的遺傳位點(diǎn)，并且在70%的CLL患者中有miRNA基因的缺失或下調(diào)。而且，miR-15和miR-16-l的下調(diào)在結(jié)直腸瘤變中也有發(fā)現(xiàn)，而 miRNA let-7 的表達(dá)常在肺癌中減少(Michael, M. Z. et al. (2003)Mol Cancer Res
I,882-891 ;Mayr, C. et al. (2007) Science 315,1576-1579)。事實(shí)上，根據(jù) miRNA 表達(dá)的癌相關(guān)性改變和miRNA常位干與癌相關(guān)的遺傳區(qū)推測(cè)miRNA可是癌抑制基因和癌基因(Esquela-Kerscher, A. and Slack, F. J(2006)Nat Rev Cancer 6, 259-269;Calin, G. A. andCroce, C.M. (2007) J Clin Invest 117, 2059-2066;Blenkiron, C. and Miska1E. A. (2007)Hum Mol Genet 16，R106-R113)。已有描述的人癌中miRNA表達(dá)模式凸顯了其可被用于診斷和預(yù)后生物標(biāo)記的潛能。一些研究報(bào)道m(xù)iRNA在肺癌中的表達(dá)譜(Johnson, S. M. et al. (2005)Cell 120，635-647 ; Liang, Y. et al. (2008) BMC Med Genomics 1,61; Kumar, M.S. et al. (2008)Proc Natl Acad Sci USA 105, 3903-3908;Miko, E. et al. (2009)Exp Lung Res 35，646-664;Xie, Y et al. (2009)Lung Cancer May 13;Lebanony, D.etal. (2009)J Clin Oncol 27, 2030-2037;Kauppinen, S. et al. (2009)Clin Cancer Res15, 1177-1183;Mascaux, C. et al. (2009) Eur Respir 了33，352-359)。相同地，這些研究都表明特定miRNA與非惡性肺組織相比在惡性組織中有異常表達(dá)。而且，研究表明ー些miRNA可能與預(yù)后相關(guān)(Yu，S. L. et al. (2008) Cancer Cell 13，48-57; Raponi, M. et al (2009)Cancer Res69，5776-5783)。因此，這些miRNA可對(duì)與惡性轉(zhuǎn)化和進(jìn)展相關(guān)的細(xì)胞過程提供線索。由此，仍然需要(一系列)的診斷指標(biāo)，尤其是以“表達(dá)特征(signature) ”或“分子印跡”形式能進(jìn)行快速、可靠和節(jié)省花費(fèi)性鑒定和/或治療表現(xiàn)為或有可能發(fā)展為不同類型肺癌的細(xì)胞。此外，仍需相應(yīng)的能同時(shí)鑒定和治療有癌表型的靶細(xì)胞的方法發(fā)明目的和發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供已經(jīng)過證實(shí)的miRNA生物標(biāo)記和相應(yīng)的方法，以用于可靠地在外科手術(shù)和活組織檢查肺組織中不同亞型的肺癌，特別是用于區(qū)別不同亞型的肺癌。具體來說，通過確定多種核酸分子，肺癌表現(xiàn)為腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞癌和小細(xì)胞肺癌，每種核酸分子編碼miRNA序列，而所述多種核酸分子中的一種或多種在被分析的靶細(xì)胞中與在對(duì)照細(xì)胞中相比差異表達(dá)，而ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起可作為ー種指征肺癌存在的核酸表達(dá)生物標(biāo)記。更具體地，本發(fā)明的目標(biāo)是提供有效的miRNA生物標(biāo)記，以用于鑒定一或多種展現(xiàn)出肺癌的哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞、和/或區(qū)別腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌或小細(xì)胞肺癌。另外，本發(fā)明的目的還在于提供相應(yīng)的方法，以用于鑒定ー或多種展現(xiàn)出肺癌的哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞、區(qū)別不同亞型的肺癌、以及預(yù)防或治療此類疾病。這些及其它目的從以下描述將變得清楚，其通過獨(dú)立權(quán)利要求的主題來達(dá)成。本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施方案則通過從屬權(quán)利要求的主題來限定。在第一方面，本發(fā)明涉及用于鑒定展現(xiàn)出腺癌肺癌的ー種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列， 其中所述多種核酸分子的一種或多種在靶細(xì)胞和在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表ー種核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該生物標(biāo)記是腺癌肺癌存在的指征。本文限定的核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包括至少四種核酸分子。在具體的實(shí)施方案中，所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比被上調(diào)；以及包括至少ー種編碼微RNA序列的核酸分子,其表達(dá)在ー種或多種祀細(xì)胞中與ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比被下調(diào)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括編碼hsa-miR_27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-34a 和 hsa-miR-375.的任意一種或多種核酸分子。特別優(yōu)選地，與所述ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比，在所述ー種或多種靶細(xì)胞中hsa-miR-34a 和 hsa-miR-375 表達(dá)上調(diào)以及編碼 hsa_miR-27a 和 hsa_miR-29a 的任意一種或多種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。在更優(yōu)選實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括編碼hsa-miR-34a/hsa-miR_27a和hsa-miR-34a/hsa-miR-29a中任一或多個(gè)核酸組合。尤其是核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括編碼hsa_miR-29a、hsa_miR-27a 和 hsa_miR-34a 的一種核酸組合。第二方面，本發(fā)明涉及用于鑒定ー個(gè)或多個(gè)展現(xiàn)出鱗狀細(xì)胞肺癌的哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一種或多種在靶細(xì)胞和在ー種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表ー種核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該生物標(biāo)記是鱗狀細(xì)胞肺癌存在的指征。本文所定義的核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少四種核酸分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比被上調(diào)；以及包括至少一種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比被下調(diào)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括編碼hsa-miR-205、hsa_miR-25、hsa-miR-29a和hsa-miR-375的任意一種或多種核酸分子。
尤其優(yōu)選的是，與所述ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比，在所述ー種或多種靶細(xì)胞中hsa-miR-205和hsa-miR-25被上調(diào)，而編碼hsa_miR-29a和hsa-miR-375的核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括編碼hsa-miR-205/hsa-miR-29a, hsa-miR-25/hsa-miR-29a, hsa-miR-205/hsa-miR-375 和 hsa-miR-25/hsa-miR-375的任意ー種或多種核酸組合。尤其是，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205、hsa-miR-25 和 hsa_miR-29a 的一種核酸組合。在第三方面，本發(fā)明涉及用于鑒定一個(gè)或多個(gè)展現(xiàn)出小細(xì)胞肺癌的哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一種或多種在靶細(xì)胞和在ー種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表ー種核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該生物標(biāo)記是小細(xì)胞肺癌存在的指征。
本文所定義的核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少五種核酸分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比被上調(diào)；以及包括至少一種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比被下調(diào)。在更優(yōu)選實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括編碼hsa-miR-25、hsa_miR-27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b和hsa-miR-375的任意一種或多種核酸分子。尤其優(yōu)選的是，與所述ー種或多種正常對(duì)照細(xì)胞相比，在所述ー種或多種靶細(xì)胞中 hsa-miR-25 和 hsa-miR-375 被上調(diào)，而編碼 hsa-miR-27a、hsa_miR-29a 和 hsa_miR-29b的核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25/hsa-miR-27a、hsa-miR-375/hsa_miR-27a、hsa-miR-25/hsa_miR-29a 和 hsa-miR-375/hsa_miR-29a 的任意ー種或多種核酸組合。尤其是，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-29a和hsa-miR-375的ー種核酸組合。第四方面，本發(fā)明涉及用于將鱗狀細(xì)胞肺癌與腺癌肺癌區(qū)別開的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一種或多種在靶細(xì)胞和在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表ー種核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該生物標(biāo)記是鱗狀細(xì)胞肺癌或腺癌肺癌存在的指征。本文所定義的核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少四種核酸分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與一種或多種對(duì)照細(xì)胞相比被上調(diào)；以及包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與一種或多種對(duì)照細(xì)胞相比被下調(diào)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括編碼hsa-miR-205、hsa-miR-25、hsa-miR-27a和hsa-miR-375的任意一種或多種核酸分子。尤其優(yōu)選的是，與所述ー種或多種對(duì)照細(xì)胞相比，在所述ー種或多種靶細(xì)胞中hsa-miR-205>hsa-miR-25>hsa-miR-27a 被上調(diào)，而編碼 hsa-miR-375 的核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205/hsa-miR-375和hsa-miR-25/hsa-miR-375的任意ー種或多種核酸組合。尤其是，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼 hsa-miR-205、hsa-miR-25 和 hsa-miR-375 的一種核酸分子組合。第五方面，本發(fā)明涉及用于將小細(xì)胞肺癌與腺癌肺癌區(qū)別開的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一種或多種在靶細(xì)胞和在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表ー種核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該生物標(biāo)記是小細(xì)胞肺癌或腺癌肺癌存在的指征。本文所定義的核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少六種核酸分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分 子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與一種或多種對(duì)照細(xì)胞相比被上調(diào)；以及包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與一種或多種對(duì)照細(xì)胞相比被下調(diào)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25、hsa_miR-27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b、hsa_miR-34a 和 hsa-miR-375 的任意一種或多種核酸分子。尤其優(yōu)選的是，與所述ー種或多種對(duì)照細(xì)胞相比，在所述ー種或多種靶細(xì)胞中hsa-miR-25 和 hsa-miR-375 被上調(diào)，而編碼 hsa_miR-27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b 和hsa-miR-34a的核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25/hsa-miR_27a、hsa-miR-375/hsa_miR-27a、hsa-miR-25/hsa_miR-29a 和 hsa-miR-375/hsa_miR-29a 的任意ー種或多種核酸組合。尤其是，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25、hsa-miR-34a和hsa-miR-375的ー種核酸組合。第六方面，本發(fā)明涉及用于將小細(xì)胞肺癌與鱗狀細(xì)胞肺癌區(qū)別開的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一種或多種在靶細(xì)胞和在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表ー種核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該生物標(biāo)記是小細(xì)胞肺癌或鱗狀細(xì)胞肺癌存在的指征。本文所定義的核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包括至少六種核酸分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與一種或多種對(duì)照細(xì)胞相比被上調(diào)；以及包括至少ー種編碼miRNA序列的核酸分子，其表達(dá)在ー種或多種靶細(xì)胞中與一種或多種對(duì)照細(xì)胞相比被下調(diào)。在更優(yōu)選的所述方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205、hsa-miR_27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b、hsa_miR-34a 和 hsa-miR-375 的任意一種或多種核酸分子。尤其優(yōu)選的是，與所述ー種或多種對(duì)照細(xì)胞相比，在所述ー種或多種靶細(xì)胞中hsa-miR-375 被上調(diào)，而編碼 hsa-miR-205、hsa_miR-27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b 和hsa-miR-34a的核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。
在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-375/hsa-miR_27a和hsa-miR-375/hsa-miR-29a的任意ー種或多種核酸組合。尤其是，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-29b和hsa-miR-375核酸組合。第七方面，本發(fā)明涉及用于鑒定展現(xiàn)出腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌或小細(xì)胞肺癌的ー種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的方法，所述方法包括(a)收集患者的活組織檢查或外科手術(shù)組織；(b)在載玻片上制備組織切片；(c)將至少ー種編碼微RNA序列的核酸分子生物標(biāo)記物雜交到載玻片上的切片上；(d)在顯微鏡下或者通過數(shù)字病理學(xué)方案對(duì)miRNA的表達(dá)進(jìn)行定量；
(e)在所述的ー種或多種靶細(xì)胞中確定多種核酸分子表達(dá)水平，每種核酸分子均編碼微RNA序列；(f)在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中確定所述多種核酸分子的表達(dá)水平 '及(g)通過對(duì)比在步驟(e)和(f)中所獲得的各自的表達(dá)水平，從所述多種核酸分子中鑒定出在靶細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)的ー種或多種核酸分子，其中所述ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表如本文所定義的核酸表達(dá)生物標(biāo)記，其是腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌或者小細(xì)胞肺癌存在的指征。尤其優(yōu)選的是，該方法以原位雜交來實(shí)現(xiàn)。為了進(jìn)行定量的確定，使用7個(gè)經(jīng)驗(yàn)證的miRNA生物標(biāo)記hsa-miR-205、hsa-miR-25、hsa_miR-27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b、hsa_miR-34a 和 hsa-miR-375。為了將所獲得的編碼微RNA序列的核酸分子生物標(biāo)記的表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化，可優(yōu)選使用在肺組織中穩(wěn)定表達(dá)的編碼hsa-miR-24核酸表達(dá)分子。作為所獲得的編碼miRNA序列的核酸分子生物標(biāo)記表達(dá)水平的陰性對(duì)照，可優(yōu)選使用在肺組織中不表達(dá)的編碼hsa-miR-122核酸表達(dá)分子。第八方面，本發(fā)明涉及預(yù)防或治療肺癌的方法，該方法包括(a)通過使用本文所述的方法在ー種或多種靶細(xì)胞中鑒定核酸表達(dá)生物標(biāo)記 '及(b)在所述ー種或多種細(xì)胞中改變所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記所包含的編碼微RNA序列的ー種或多種核酸分子的表達(dá)，所述改變以如下的方式進(jìn)行，即其表達(dá)在所述ー種或多種靶細(xì)胞中被上調(diào)的核酸分子的表達(dá)被下調(diào)，而其表達(dá)在所述ー種或多種靶細(xì)胞中被下調(diào)的核酸分子的表達(dá)被上調(diào)。第九方面，本發(fā)明涉及用于預(yù)防和/或治療肺癌的藥物組合物，所述組合物包含ー種或多種核酸分子，每種核酸分子均編碼序列，所述序列與本文所定義的在所述ー種或多種靶細(xì)胞中其表達(dá)被上調(diào)的核酸分子所編碼的微RNA序列至少部分互補(bǔ)，和/或所述序列對(duì)應(yīng)于本文所定義的在所述ー種或多種靶細(xì)胞中其表達(dá)被下調(diào)的核酸分子所編碼的微RNA序列。最后，第十方面，本發(fā)明涉及上述藥物組合物在制備用于預(yù)防和/或治療肺癌的藥物中的用途。在隨后的詳細(xì)描述中本發(fā)明的其他實(shí)施方案將會(huì)闡明。附圖
簡(jiǎn)述圖I :描繪了發(fā)明概要第七方面中根據(jù)檢測(cè)表現(xiàn)為腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌或小細(xì)胞肺癌的単一或多靶細(xì)胞的本發(fā)明用于確定某ー表達(dá)生物標(biāo)記的基本方法步驟的流程圖。尤其是運(yùn)用原位雜交方法區(qū)分不同肺癌亞型。圖2A :說明根據(jù)用于檢測(cè)表現(xiàn)為腺癌肺癌的單ー或多靶細(xì)胞的本發(fā)明在第一方面中屬于尤其優(yōu)選表達(dá)生物標(biāo)記的人miRNA。同時(shí)也顯示與正常肺組織相比腺癌肺癌患者中這些miRNA的表達(dá)水平和準(zhǔn)確性(即上調(diào)或下調(diào))。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的腺癌肺癌可與正常肺組織可靠地區(qū)分。圖2B :逐步描述了本發(fā)明第一方面中用于檢測(cè)FFPE外科手術(shù)組織中展現(xiàn)出腺癌肺癌的一或多個(gè)祀細(xì)胞對(duì)組一(hsa-miR-27a、hsa_miR-29a和hsa_miR-34a)的邏輯回歸分祈。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的腺癌肺癌可與正常肺組織(AUC=O. 925)可靠地區(qū)分。圖3A :說明根據(jù)用于檢測(cè)表現(xiàn)為鱗狀細(xì)胞肺癌的單ー或多靶細(xì)胞的本發(fā)明在第二方面中屬于尤其優(yōu)選表達(dá)生物標(biāo)記的人miRNA。也顯示與正常肺組織相比腺癌肺癌患者中這些miRNA的表達(dá)水平和準(zhǔn)確性(即上調(diào)或下調(diào))。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的鱗狀細(xì)胞肺癌可與正常肺組織可靠地區(qū)分。 圖3B:逐步描述了第二方面中根據(jù)用于檢測(cè)FFPE外科手術(shù)組織中表現(xiàn)為鱗狀細(xì)胞肺癌的單ー或多靶細(xì)胞的本發(fā)明對(duì)一組合的(hsa-miR-205、hsa-miR-25和hsa-miR-29a)的邏輯回歸分析。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的腺癌肺癌可與正常肺組織(AUC=O. 961)可靠地區(qū)分。圖4A :說明根據(jù)用于檢測(cè)表現(xiàn)為小細(xì)胞肺癌的単一或多靶細(xì)胞的本發(fā)明在第三方面中屬于尤其優(yōu)選表達(dá)生物標(biāo)記的人miRNA。也顯示與正常肺組織相比小細(xì)胞肺癌患者中這些miRNA的表達(dá)水平和準(zhǔn)確性(即上調(diào)或下調(diào))。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的小細(xì)胞肺癌可與正常肺組織可靠地區(qū)分。圖4B :逐步描述了第三方面中根據(jù)用于檢測(cè)FFPE外科手術(shù)組織中表現(xiàn)為小細(xì)胞肺癌的單ー或多祀細(xì)胞的本發(fā)明對(duì)一組合的(hsa-miR-29a和hsa-miR-375)的邏輯回歸分祈。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的小細(xì)胞肺癌可與正常肺組織(AUC=O. 998)可靠地區(qū)分。圖5A :說明根據(jù)用于鑒別鱗狀細(xì)胞肺癌和腺癌肺癌的本發(fā)明在第四方面中屬于尤其優(yōu)選表達(dá)生物標(biāo)記的人miRNA。也顯示與腺癌肺癌患者相比鱗狀細(xì)胞肺癌患者中這些miRNA的表達(dá)水平和準(zhǔn)確性(即上調(diào)或下調(diào))。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的鱗狀細(xì)胞肺癌可與腺癌肺癌可靠地區(qū)分。圖5B :逐步描述了第四方面中根據(jù)用于鑒別FFPE外科手術(shù)組織中鱗狀細(xì)胞肺癌可與腺癌肺癌的本發(fā)明對(duì)一組合的(hsa-miR-205、hsa-miR-25和hsa-miR-375)的邏輯回歸分析。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中鱗狀細(xì)胞肺癌可與腺癌肺癌(AUC=O. 922)可靠地區(qū)分。圖6A :說明根據(jù)用于鑒別小細(xì)胞肺癌和腺癌肺癌的本發(fā)明在第五方面中屬于尤其優(yōu)選表達(dá)生物標(biāo)記的人miRNA。也顯示與腺癌肺癌患者相比小細(xì)胞肺癌患者中這些miRNA的表達(dá)水平和準(zhǔn)確性(即上調(diào)或下調(diào))。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的小細(xì)胞肺癌可與腺癌肺癌可靠地區(qū)分。圖6B :逐步描述了第五方面中根據(jù)用于鑒別FFPE外科手術(shù)組織中小細(xì)胞肺癌可與腺癌肺癌的本發(fā)明對(duì)一組合的(hsa-miR-25、hsa_miR-34a和hsa-miR-375)的邏輯回歸分析。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中小細(xì)胞肺癌可與腺癌肺癌(AUC=O. 991)可靠地區(qū)分。圖7A :說明根據(jù)用于鑒別小細(xì)胞肺癌和鱗狀細(xì)胞肺癌的本發(fā)明在第六方面中屬于尤其優(yōu)選表達(dá)生物標(biāo)記的人miRNA。也顯示與鱗狀細(xì)胞肺癌患者相比小細(xì)胞肺癌患者中這些miRNA的表達(dá)水平和準(zhǔn)確性(即上調(diào)或下調(diào))。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中的小細(xì)胞肺癌可與鱗狀細(xì)胞肺癌可靠地區(qū)分。圖7B :逐步描述了第六方面中根據(jù)用于鑒別FFPE外科手術(shù)組織中小細(xì)胞肺癌可與鱗狀細(xì)胞肺癌的本發(fā)明對(duì)一組合的(hsa-miR-29b和hsa-miR-375)的邏輯回歸分析。數(shù)據(jù)表明FFPE外科手術(shù)組織中小細(xì)胞肺癌可與鱗狀細(xì)胞肺癌(AUC=O. 982)可靠地區(qū)分。發(fā)明詳述本發(fā)明是基于肺癌能根據(jù)高敏感性和特異性的特定miRNA表達(dá)譜進(jìn)行可靠地診斷和亞型區(qū)分，而且在此確定的這些表達(dá)生物標(biāo)記通常包括上和下調(diào)兩方面這ー預(yù)期之外 的發(fā)現(xiàn)。更具體來說，通過分析整體miRNA表達(dá)模式和/或單獨(dú)miRNA表達(dá)水平可以實(shí)現(xiàn)對(duì)肺癌的早期診斷和亞型區(qū)分。以下例證的本發(fā)明可以合適地在不存在未在本文中具體揭示的任何一或多個(gè)元件、一種或多種限制的條件下實(shí)施。本發(fā)明將根據(jù)特定的實(shí)施方案并參照附圖加以描述，但是本發(fā)明不受其限制，僅受權(quán)利要求書限制。所描述的附圖僅是示意性的，被認(rèn)為是非限制性的。當(dāng)術(shù)語“包含”被用于本發(fā)明說明書和權(quán)利要求書中時(shí)，其不排除其它元件或步驟。為本發(fā)明目的，術(shù)語“由…組成”被認(rèn)為是術(shù)語“包含”的優(yōu)選實(shí)施方案。如果在下文中組被限定為包含至少ー定數(shù)目的實(shí)施方案，這也被理解為掲示了優(yōu)選地僅由這些實(shí)施方案組成的組。當(dāng)指代単數(shù)形式名詞使用不定冠詞或定冠詞例如“ー個(gè)”或“ー種”，“所述”時(shí)，包括該名詞的復(fù)數(shù)形式，除非特別指出。術(shù)語“大約”在本發(fā)明中是指本領(lǐng)域技術(shù)人員理解仍能保證目的特征的技術(shù)效果的精確性區(qū)間。該術(shù)語通常表示偏離指示值的±10%，優(yōu)選±5%。另外，術(shù)語第一、第二、第三、(a)、(b)、(C)等在說明書和權(quán)利要求書中用于區(qū)分類似的元件，不是描述順序或時(shí)間次序必須的。應(yīng)理解如此應(yīng)用的術(shù)語在合適情況下可互換，并且本發(fā)明描述的實(shí)施方案能以不同于本文所述或例證的其它順序操作。術(shù)語的進(jìn)ー步定義在以下使用術(shù)語時(shí)給出。以下術(shù)語或定義僅為了理解本發(fā)明而提供。這些定義不應(yīng)被認(rèn)為具有小于本領(lǐng)域技術(shù)人員理解的范圍。本發(fā)明的目的是提供已經(jīng)過證實(shí)的miRNA生物標(biāo)記和相應(yīng)的方法，以用于可靠地在外科手術(shù)和活組織檢查肺組織中不同亞型的肺癌，特別是用于區(qū)別不同亞型的肺癌。具體來說，通過確定多種核酸分子，肺癌表現(xiàn)為腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞癌和小細(xì)胞肺癌，每種核酸分子編碼miRNA序列，而所述多種核酸分子中的一種或多種在被分析的靶細(xì)胞中與在對(duì)照細(xì)胞中相比差異表達(dá)，而ー種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起可作為ー種指征肺癌存在的核酸表達(dá)生物標(biāo)記。更具體地，本發(fā)明的目標(biāo)是提供有效的miRNA生物標(biāo)記，以用于鑒定ー或多種展現(xiàn)出肺癌的哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞、和/或區(qū)別腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌或小細(xì)胞肺癌。本文所用術(shù)語“癌癥”(也稱為“癌(carcinoma) ”)通常指任何類型的惡性贅生物，即與未受影響的(健康)野生型對(duì)照細(xì)胞相比顯示或具有發(fā)生癌癥傾向的靶細(xì)胞的任何形態(tài)學(xué)和/或生理學(xué)改變(基于遺傳重編程(geneticre-programming))。這種改變的例子可涉及細(xì)胞大小和形狀(變大或變小)、細(xì)胞增殖(細(xì)胞數(shù)增加)、細(xì)胞分化(生理學(xué)狀態(tài)變化)、凋亡(程序性細(xì)胞死亡)或細(xì)胞存活。本文所用術(shù)語“肺癌”指肺組織中失控性細(xì)胞生長(zhǎng)，或肺組織的癌性生長(zhǎng)。在此使用術(shù)語“肺癌的不同亞型”包括腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌?！跋侔┓伟被颉跋傩苑伟睘橐活惙切〖?xì)胞肺癌。80%的肺癌為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，其中50%是腺癌。腺癌肺癌發(fā)生于肺的周圍區(qū)，可在診斷前存在很長(zhǎng)時(shí)間。是女性中最常見的肺癌類型，在非吸煙者中也常見。“鱗狀細(xì)胞肺癌”是一類非小細(xì)胞肺癌。約30%NSCLC為鱗狀細(xì)胞肺癌。鱗狀細(xì)胞肺癌常發(fā)生于肺中央部的支氣管(大氣道)。很多人早期即有癥狀，常為咯血(咯出血液)。
“小細(xì)胞肺癌”(SCLC)被認(rèn)為是起源于構(gòu)成部分支氣管(氣道)上皮(襯附)的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞。SCLC占所有肺癌病例的18%。SCLC很具侵襲性。生長(zhǎng)很快并通過血流擴(kuò)散到肝臟、肺、骨和腦。在診斷時(shí)很容易在這些器官中發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移灶。在此所用術(shù)語“患者”指至少被懷疑患有肺癌，或某種類型肺癌的人；術(shù)語“健康個(gè)體”或“正常對(duì)照”常指無這種癌表型的健康人。但是，在某些應(yīng)用中，例如在比較不同類型肺癌時(shí)，有其他類型肺癌的個(gè)體常被認(rèn)為是“對(duì)照”。在本發(fā)明的體外方法中用于檢測(cè)的樣品通常應(yīng)以臨床可接受的方式收集，優(yōu)選以保護(hù)核酸(特別是RNA)或蛋白質(zhì)的方式收集。待分析的樣品典型地是組織。另外，血液及其它類型樣品也可以使用。本文所用術(shù)語“微RNA”(或“miRNA”)是其在本領(lǐng)域的普通含義(綜述參見例如 Bartel, D. P. (2004) Cell 23, 281-292 ；He, L. and Hannon, G. J. (2004) Nat. Rev.Genet. 5，522-531)。因此，“微RNA”是指衍生自基因組基因座的RNA分子，其從可以形成局部RNA前體miRNA結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄物加工而來。成熟miRNA通常長(zhǎng)度為20、21、22、23、24或25個(gè)核苷酸，其它數(shù)目的核苷酸也可存在，例如18、19、26或27個(gè)核苷酸。miRNA編碼序列具有與側(cè)翼基因組序列配對(duì)的潛力，使成熟miRNA放置在非完全配對(duì)的RNA雙鏈體之內(nèi)(本文也稱作莖-環(huán)或發(fā)夾結(jié)構(gòu)或pre-miRNA)，所述雙鏈體作為從更長(zhǎng)的前體轉(zhuǎn)錄物進(jìn)行miRNA加工的中間體。這一加工典型地通過分別稱為Drosha和Dicer的兩種特異的內(nèi)切核酸酶的連續(xù)作用而發(fā)生。Drosha從初級(jí)轉(zhuǎn)錄物(本文也稱作“pri-miRNA”)產(chǎn)生典型地折疊成發(fā)夾或莖-環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA前體(本文也稱作“pre-miRNA”)。從這個(gè)miRNA前體，通過Dicer切割miRNA雙鏈體，其在發(fā)夾或莖-環(huán)結(jié)構(gòu)的一條臂包含成熟miRNA，在另一條臂包含類似大小的節(jié)段(通常稱為miRNA*)。miRNA然后被導(dǎo)向其靶mRNA以發(fā)揮其功能，而miRNA*被降解。另外，miRNA典型地衍生自與預(yù)測(cè)的蛋白質(zhì)編碼區(qū)不同的基因組節(jié)段。本文所用術(shù)語“miRNA前體”(或“前體miRNA”或“pre-miRNA” )是指從其加工成熟miRNA的miRNA初級(jí)轉(zhuǎn)錄物的部分。典型地,pre-miRNA折疊成穩(wěn)定的發(fā)夾(即雙鏈體)或莖-環(huán)結(jié)構(gòu)。發(fā)夾結(jié)構(gòu)典型地長(zhǎng)度為50-80個(gè)核苷酸，優(yōu)選60-70個(gè)核苷酸(計(jì)數(shù)miRNA殘基，與miRNA配對(duì)的殘基，及任何間插節(jié)段，但排除更遠(yuǎn)端的序列)。本文所用術(shù)語“編碼微RNA序列的核酸分子”是指編碼微RNA (miRNA)的任何核酸分子。因此，該術(shù)語不僅指成熟miRNA,也指相應(yīng)的如上所述的前體miRNA及初級(jí)miRNA轉(zhuǎn)錄物。另外，本發(fā)明不限于RNA分子，也包括相應(yīng)的編碼微RNA的DNA分子，例如通過逆轉(zhuǎn)錄miRNA序列產(chǎn)生的DNA分子。編碼本發(fā)明的微RNA序列的核酸分子典型地編碼單個(gè)miRNA序列(即個(gè)體miRNA)。但是，也可能這種核酸分子編碼兩個(gè)或多個(gè)miRNA序列(即兩個(gè)或多個(gè)miRNA)，例如一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位包含在常用調(diào)節(jié)序列如啟動(dòng)子或轉(zhuǎn)錄終止子控制下的兩個(gè)或多個(gè)miRNA序列。本文所用術(shù)語“編碼微RNA序列的 核酸分子”也被理解為包括“有義核酸分子”(即核酸序列(5’ 一3’)匹配或相應(yīng)于所編碼的miRNA(5’ 一3’)序列的分子)及“反義核酸分子”(即核酸序列互補(bǔ)于所編碼的miRNA(5’ 一 3’)序列或者換句話說匹配所編碼的miRNA序列的反向互補(bǔ)序列(3’ 一5’)的分子)。本文所用術(shù)語“互補(bǔ)”是指“反義”核酸分子序列與相應(yīng)的“有義”核酸分子序列(具有互補(bǔ)于反義序列的序列)形成堿基對(duì)、優(yōu)選Watson-Crick堿基對(duì)的能力。在本發(fā)明范圍內(nèi)，兩個(gè)核酸分子(即“有義”和“反義”分子)可以完全互補(bǔ)，即它們不含有任何堿基錯(cuò)配和/或額外的或缺失的核苷酸?；蛘撸瑑蓚€(gè)分子包含一或多個(gè)堿基錯(cuò)配或者在它們的核苷酸總數(shù)上不同(由于添加或缺失導(dǎo)致)。優(yōu)選地，“互補(bǔ)”核酸分子包含與包含在相應(yīng)的“有義”核酸分子中的序列顯示完全互補(bǔ)性的至少10個(gè)連續(xù)核苷酸。因此，包含在本發(fā)明的診斷試劑盒中的編碼miRNA序列的多種核酸分子可包括一種或多種“有義核酸分子”和/或一種或多種“反義核酸分子”。有時(shí)，診斷試劑盒包括一種或多種“有義核酸分子”(即miRNA序列本身)，所述分子被認(rèn)為組成了差異表達(dá)的miRNA (即分子標(biāo)記)的全體或至少亞集合，所述差異表達(dá)的miRNA是存在或發(fā)生特定病癥傾向的指征，本文是肺癌。另一方面，當(dāng)診斷試劑盒包括一種或多種“反義核酸分子”(即與miRNA序列互補(bǔ)的序列)時(shí)，所述分子可包含適合用于檢測(cè)和/或定量給定樣品中的一種或多種特定(互補(bǔ))miRNA序列的探針分子(用于進(jìn)行雜交測(cè)定)和/或寡核苷酸引物(例如用于逆轉(zhuǎn)錄或PCR應(yīng)用)。在本發(fā)明中定義的多種核酸分子可以包含至少2種、至少10種、至少50種、至少100種、至少200種、至少500種、至少1000種、至少10000種或至少100000種核酸分子，每種分子編碼miRNA序列。本文所用術(shù)語“差異表達(dá)”是指特定miRNA在靶細(xì)胞中的表達(dá)水平相比于健康對(duì)照細(xì)胞或其他疾病類型樣品是改變的，其可以是上調(diào)(即在靶細(xì)胞中miRNA濃度增加)或下調(diào)(即在靶細(xì)胞中miRNA濃度降低或消失)。換句話說，核酸分子在靶細(xì)胞中被激活至比在對(duì)照細(xì)胞中更高或更低的水平。在本發(fā)明范圍內(nèi)，核酸分子被認(rèn)為是差異表達(dá)的，如果該核酸分子在靶細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞中的相應(yīng)表達(dá)水平典型地相差至少5%或至少10%，優(yōu)選地至少20%或至少25%，最優(yōu)選地至少30%或至少50%。因此，后者的值相應(yīng)于給定核酸分子在靶細(xì)胞中的表達(dá)水平相比于野生型對(duì)照細(xì)胞分別上調(diào)至少I. 3倍或至少I. 5倍，或者反之在靶細(xì)胞中的表達(dá)水平下調(diào)至少0. 7倍或至少0. 5倍。本文所用術(shù)語“表達(dá)水平”是指特定的miRNA序列從其基因組基因座被轉(zhuǎn)錄的程度，即miRNA在一種或多種被分析細(xì)胞中的濃度。如上所述，術(shù)語“對(duì)照細(xì)胞”典型地是指采集于不具有肺癌表型特征的(健康)個(gè)體細(xì)胞樣品。但是，在一些應(yīng)用中，例如當(dāng)比較顯示不同類型肺癌時(shí)，來源于其他類型肺癌的細(xì)胞細(xì)胞典型地被認(rèn)為是“對(duì)照細(xì)胞”。表達(dá)水平的確定典型地遵循本領(lǐng)域熟知的已建立的標(biāo)準(zhǔn)程序(參見例如Sambrook, J. et al. (1989)Molecular Cloning:A Laboratory Manual. 2nd Ed., ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY ；AusubeI,F. M. et al. (2001)Current Protocols in Molecular Biology. Wiley&Sons, Hoboken, NJ)。確定可以在RNA水平進(jìn)行，例如使用miRNA特異性探針進(jìn)行Northern印跡分析,或者在逆轉(zhuǎn)錄(及克隆)RNA群后例如通過定量PCR或?qū)崟r(shí)PCR技術(shù)在DNA水平進(jìn)行。本文所用術(shù)語“確定”包括分析編碼上述miRNA序列的任何核酸分子。但是，由于pri-miRNA及re-mRNA半壽期短,典型地僅測(cè)量成熟miRNA的濃度。在具體的實(shí)施方案中，在給定樣品的若干獨(dú)立測(cè)量(例如兩個(gè)、三個(gè)、五個(gè)或十個(gè)測(cè)量)和/或在一群靶細(xì)胞或?qū)φ占?xì)胞內(nèi)的若干測(cè)量中獲得的表達(dá)水平的標(biāo)準(zhǔn)值被用于分析。標(biāo)準(zhǔn)值可以用本領(lǐng)域已知的任何方法獲得。例如，平均值±2SD(標(biāo)準(zhǔn)差)或平均值 ±3SD的范圍可被用作標(biāo)準(zhǔn)值。所獲得的一種或多種靶細(xì)胞和一種或多種對(duì)照細(xì)胞的表達(dá)水平之間的差異可以標(biāo)準(zhǔn)化(或歸一化，normalize)至進(jìn)一步的對(duì)照核酸例如管家基因的表達(dá)水平，管家基因的表達(dá)水平已知不根據(jù)細(xì)胞的疾病狀態(tài)而不同。舉例的管家基因包括￠-肌動(dòng)蛋白、甘油醛-3-磷酸脫氫酶和核糖體蛋白Pl等。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，對(duì)照核酸是已知在細(xì)胞的不同非癌和癌(前)狀態(tài)中穩(wěn)定表達(dá)的另一種miRNA。但是，代替在任何實(shí)驗(yàn)中確定一種或多種對(duì)照細(xì)胞的表達(dá)水平，也可以基于實(shí)驗(yàn)證據(jù)和/或現(xiàn)有技術(shù)數(shù)據(jù)定義針對(duì)特定細(xì)胞表型(即疾病狀態(tài))的一或多個(gè)截?cái)嘀?。在這種情況中，一種或多種靶細(xì)胞的相應(yīng)表達(dá)水平可以用用于標(biāo)準(zhǔn)化的穩(wěn)定表達(dá)的對(duì)照miRNA確定。如果計(jì)算的“標(biāo)準(zhǔn)化”的表達(dá)水平高于相應(yīng)定義的截?cái)嘀担瑒t這一發(fā)現(xiàn)是基因表達(dá)上調(diào)的指征。反之，如果計(jì)算的“標(biāo)準(zhǔn)化”的表達(dá)水平低于相應(yīng)定義的截?cái)嘀?，則這一發(fā)現(xiàn)是基因表達(dá)下調(diào)的指征。在本發(fā)明中，術(shù)語“診斷肺癌和/或區(qū)分不同肺癌亞型”也指預(yù)測(cè)和可能性分析(意為“診斷”)。在此描述的生物標(biāo)記和方法意欲用于與包括治療性干預(yù)、診斷標(biāo)準(zhǔn)如疾病分期已經(jīng)疾病監(jiān)測(cè)和監(jiān)視在內(nèi)的治療模式方面的臨床決策。根據(jù)本發(fā)明，可提供對(duì)一對(duì)象狀況檢測(cè)的中段結(jié)果。這種中段結(jié)果可連同其他信息輔助醫(yī)生、護(hù)士、或其他行醫(yī)者對(duì)患該疾病的個(gè)體進(jìn)行診斷。另外，該發(fā)明可被用作對(duì)細(xì)胞樣品進(jìn)行癌性改變檢測(cè)，并給醫(yī)生提供用以診斷的有利信息。再次，本發(fā)明可用于不同肺癌亞型的鑒別診斷。在本發(fā)明中，所鑒定的一種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表一種核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該核酸表達(dá)特征是在靶細(xì)胞中存在肺癌的指征。本文所用術(shù)語“表達(dá)生物標(biāo)記”是指一組核酸分子(例如miRNA)，其中各個(gè)核酸分子的表達(dá)水平在肺癌患者來源的細(xì)胞和正常對(duì)照細(xì)胞之間不同。本文中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記也指一組標(biāo)記并代表最低數(shù)目的(不同)核酸分子，每種核酸分子編碼能鑒定一個(gè)體的表型狀態(tài)的miRNA序列。在第一方面，本發(fā)明涉及用于鑒定展現(xiàn)出腺癌肺癌的一種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一種或多種在靶細(xì)胞和在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述一種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表一種核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該生物標(biāo)記是腺癌肺癌存在的指征。本文限定的核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包括至少四種核酸分子。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)特征(signature)包括一個(gè)或多個(gè)編碼hsa-miR-27a(SEQ ID NO:3)、hsa_miR-29a(SEQ ID NO:4)、hsa_miR-34a(SEQ ID NO:6)和hsa-miR-375 (SEQ ID NO:7)的核酸分子。尤其優(yōu)選的是，與一種或多種對(duì)照細(xì)胞相比，在一種或多種靶細(xì)胞中hsa-miR-34a(SEQ ID NO: 6)和 hsa-miR-375 (SEQ ID NO:7)被上調(diào)，而編碼(SEQ ID NO: 3)和hsa-miR-29a(SEQ ID NO:4)的任意一種或多種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含任意一種或多種編碼hsa-miR-34a(SEQ ID NO:6)/hsa_miR-27a (SEQ ID NO :3)和 hsa_miR-34a (SEQ IDN0:6)/hsa-miR-29a(SEQ ID NO:4)的核酸組合。尤其是核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼 hsa-miR-29a(SEQ ID NO:4)、hsa_miR-27a(SEQ ID NO:3)和 hsa_miR-34a (SEQ ID NO:6)的一種核酸分子組合。為了標(biāo)準(zhǔn)化獲得的編碼miRNA序列的核酸分子生物標(biāo)記，可優(yōu)選使用在肺組織中穩(wěn)定表達(dá)的編碼hsa-miR-24(SEQ ID N0:8)核酸表達(dá)分子。作為獲得的編碼miRNA序列的核酸分子生物標(biāo)記表達(dá)水平的陰性對(duì)照，可優(yōu)選使用在肺組織中不表達(dá)的編碼hsa-miR-122(SEQ ID NO:9)核酸表達(dá)分子。上述涉及的miRNA核酸序列列于表I。表I
miRNA序列(5’ 一 3’)
生物標(biāo)記
hsa—miR—27auucacaguggcuaaguuccgc
hsa—miR—29auagcaccaucugaaaucgguua
hsa—miR—34auggcagugucuuagcugguugu
hsa-miR-375uuuguucguucggcucgcguga
hsa—miR—24uggcucaguucagcaggaacag
hsa—miR—122uggagugugacaaugguguuug在此公開的所有miRNA序列均已經(jīng)保存在miRBase數(shù)據(jù)庫中(http://microrna.sanger.ac.uk/ ; 也參見 Griffiths-Jones S. et al. (2008) Nucl. AcidsRes. 36, D154-D158)。
在此使用的術(shù)語“至少一種核酸”可為核酸分子多形性的任何亞群，S卩任一、任二、任三、任四、任五、任六、任七、任八、任九、任十以此類推的核酸分子，每一核酸分子編碼一包含于在此確定的核酸表達(dá)生物標(biāo)記的miRNA序列。在第二方面，本發(fā)明涉及用于鑒定展現(xiàn)出鱗狀細(xì)胞肺癌的一或多個(gè)哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子編碼微RNA序列，其中所述多種核酸分子的一種或多種在靶細(xì)胞和在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述一種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表核酸表達(dá)生物標(biāo)記，該生物標(biāo)記是存在鱗狀細(xì)胞肺癌的指征。本文限定的核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包括至少四種核酸分子。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含一個(gè)或多個(gè)編碼hsa-miR-205 (SEQ ID NO: I)、hsa-miR-25 (SEQ ID NO: 2)、hsa_miR-29a (SEQ ID NO:4)和hsa-miR-375 (SEQ ID NO :7)的核酸分子。 尤其優(yōu)選的是，與一種或多種對(duì)照細(xì)胞相比，在一種或多種靶細(xì)胞中hsa-miR-205 (SEQ ID NO: I)、hsa-miR-25 (SEQ ID NO: 2)被上調(diào)而編碼 hsa_miR-29a (SEQID NO:4)和hsa-miR-375 (SEQ ID NO:7)的任意一種或多種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。在更進(jìn)一步優(yōu)選方案中，核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含任意一或多種編碼hsa-miR-205(SEQ ID NO:I)/hsa_miR-29a(SEQ ID NO:4)、hsa-miR-25(SEQ ID NO:2)/hsa-miR-29a (SEQ ID NO:4)、hsa-miR-205(SEQ ID NO:I)/hsa-miR-375(SEQ IDNO: 7)、hsa-miR-25 (SEQ ID NO: 2)/hsa-miR-375 (SEQ ID NO:7)的核酸組合。尤其是核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼 hsa-miR-205 (SEQ ID NO: I)、hsa-miR-25 (SEQ ID NO:2)和hsa-miR-29a(SEQ ID NO:4)的一種核酸組合。為了標(biāo)準(zhǔn)化獲得的編碼miRNA序列的核酸分子生物標(biāo)記，可優(yōu)選使用在肺組織中穩(wěn)定表達(dá)的編碼hsa-miR-24(SEQ ID N0:8)核酸表達(dá)分子。作為獲得的編碼miRNA序列的核酸分子生物標(biāo)記表達(dá)水平的陰性對(duì)照，可優(yōu)選使用在肺組織中不表達(dá)的編碼hsa-miR-122(SEQ ID NO:9)核酸表達(dá)分子。上述涉及的miRNA核酸序列列于表2。表權(quán)利要求
1.用于鑒定展現(xiàn)出肺癌的一種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的分子標(biāo)記的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，每種核酸分子均編碼微RNA序列， 其中所述多種核酸分子的一種或多種在所述靶細(xì)胞中和在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)，并且其中所述一種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表核酸表達(dá)特征，所述特征是肺癌，和/或不同亞型肺癌存在的指征， 其中不同的肺癌由腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌或者小細(xì)胞肺癌所組成。
2.權(quán)利要求I的試劑盒，其中所述肺癌是腺癌肺癌。
3.權(quán)利要求I或2的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少四種核酸分子。
4.權(quán)利要求1-3的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比被上調(diào)；及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比被下調(diào)。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的試劑盒,其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-34a及hsa-miR-375的任意一種或多種核酸分子。
6.權(quán)利要求5的試劑盒，其中在所述一種或多種靶細(xì)胞中與在所述一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比，hsa-miR-34a和hsa-miR-375的表達(dá)被上調(diào)，而編碼hsa_miR-27a和hsa-miR-29a的任意一種或多種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。
7.權(quán)利要求5的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-34a/hsa-miR-27a及hsa-miR-34a/hsa-miR-29a的任意一種或多種核酸組合。特別是，所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR_29a、hsa_miR-27a及hsa_miR-34a的一種核酸組合。
8.權(quán)利要求I的試劑盒，其中所述肺癌是鱗狀細(xì)胞肺癌。
9.權(quán)利要求I或8的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少四種核酸分子。
10.權(quán)利要求I或8-9的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比被上調(diào)；及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比被下調(diào)。
11.權(quán)利要求I或8-10任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼sa-miR-205、hsa-miR-25、hsa_miR-29a 和 hsa-miR-375 的任意一種或多種核酸分子。
12.權(quán)利要求11的試劑盒，其中在所述一種或多種靶細(xì)胞中與在所述一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比，hsa-miR-205和hsaiiR-25的表達(dá)被上調(diào)，而編碼hsa_miR-29a和hsa-miR-375的任意一種或多種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。
13.權(quán)利要求11的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205/hsa_miR-29a、hsa-miR-25/hsa_miR-29a、hsa-miR-205/hsa_miR-375、hsa-miR-25/hsa-miR-375的任意一種或多種核酸組合。特別是，所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205、hsa-miR-25 及 hsa_miR-29a 的一種核酸組合。
14.權(quán)利I的試劑盒，其中所述肺癌是小細(xì)胞肺癌。
15.權(quán)利要求I或14的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少五種核酸分子。
16.權(quán)利要求I或14-15的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比被上調(diào)；及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比被下調(diào)。
17.權(quán)利要求I或14-16任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25、hsa_miR-27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b 及 hsa-miR-375 的任意一種或多種核酸分子。
18.權(quán)利要求17的試劑盒，其中在所述一種或多種靶細(xì)胞中與在所述一種或多種正常對(duì)照細(xì)胞中相比，hsa-miR-25和hsa-miR-375的表達(dá)被上調(diào)，而編碼hsa_miR-27a、hsa-miR-29a和hsa_miR-29b的任意一種或多種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。
19.權(quán)利要求17的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25/hsa_miR-27a、hsa-miR-375/hsa_miR-27a、hsa-miR-25/hsa_miR-29a 和 hsa-miR-375/hsa-miR-29a的任意一種或多種核酸組合。特別是，所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-29a 和 hsa-miR-375 的一種核酸組合。
20.權(quán)利要求1-19的試劑盒，進(jìn)一步用于將鱗狀細(xì)胞肺癌與腺癌肺癌區(qū)別開。
21.權(quán)利要求I或20的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少四種核酸分子。
22.權(quán)利要求I或20-21的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比被上調(diào)；及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比被下調(diào)。
23.權(quán)利要求I或20-22任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205、hsa-miR-25、hsa_miR-27a 及 hsa-miR-375 的任意一種或多種核酸分子。
24.權(quán)利要求23的試劑盒，其中在所述一種或多種靶細(xì)胞中與在所述一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比，hsa-miR-205、hsa-miR-25 和 hsa_miR-27a 的表達(dá)被上調(diào)，而編碼 hsa-miR-375的一種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。
25.權(quán)利要求23的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205/hsa-miR-375和hsa-miR-25/hsa_miR-375的任意一種或多種核酸組合。特別是，所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205、hsa-miR-25和hsa-miR-375的一種核酸組合。
26.權(quán)利要求1-19的試劑盒，進(jìn)一步用于將小細(xì)胞肺癌與腺癌肺癌區(qū)別開。
27.權(quán)利要求I或26的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少六種核酸分子。
28.權(quán)利要求I或26-27的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比被上調(diào)；及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比被下調(diào)。
29.權(quán)利要求I或26-28任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25、hsa_miR-27a、hsa_miR-29a、hsa_miR-29b、hsa_miR-34a 及 hsa-miR-375 的任意一種或多種核酸分子。
30.權(quán)利要求29的試劑盒，其中在所述一種或多種靶細(xì)胞中與在所述一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比，hsa-miR-25和hsa-miR-375的表達(dá)被上調(diào)，而編碼hsa_miR-27a、hsaniR-29a、hsaniR-29b和hsaniR-34a的任意一種或多種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。
31.權(quán)利要求I或26-30的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25/hsa_miR-27a、hsa-miR-375/hsa_miR-27a、hsa-miR-25/hsa_miR-29a 和 hsa-miR-375/hsa-miR-29a的任意一種或多種核酸組合。特別是，所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-25、hsa_miR-34a 和 hsa-miR-375 的一種核酸組合。
32.權(quán)利要求1-19的試劑盒，進(jìn)一步用于將小細(xì)胞肺癌與鱗狀細(xì)胞肺癌區(qū)別開。
33.權(quán)利要求32的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記可包含至少六種核酸分子。
34.權(quán)利要求I或32-33的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比被上調(diào)；及包含至少一種編碼微RNA序列的核酸分子，其表達(dá)在一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比被下調(diào)。
35.權(quán)利要求I或32-34任一項(xiàng)的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-205、hsa-miR-27a、hsa-miR-29a、hsa-miR-29b、hsa-miR-34a 及 hsa-miR-375 的任意一種或多種核酸分子。
36.權(quán)利要求35的試劑盒，其中在所述一種或多種靶細(xì)胞中與在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中相比，hsa-miR-375 的表達(dá)被上調(diào)，而編碼 hsa-miR-205、hsa_miR-27a、hsa_miR-29a、hsa-miR-29b和hsa_miR-34a的任意一種或多種核酸分子的表達(dá)被下調(diào)。
37.權(quán)利要求35的試劑盒，其中所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR-375/hsa-miR-27a和hsa-miR-375/hsa_miR-29a的任意一種或多種核酸組合。特別是，所述核酸表達(dá)生物標(biāo)記包含編碼hsa-miR_29b和hsa-miR-375的一種核酸組合。
38.用于鑒定展現(xiàn)出腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌或小細(xì)胞肺癌的一種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的方法，所述方法包括 (a)收集患者的活組織檢查或外科手術(shù)組織； (b)在載玻片上制備組織切片； (c)將至少一種編碼微RNA序列的核酸分子生物標(biāo)記物雜交到載玻片上的切片上； (d)在顯微鏡下或者通過數(shù)字病理學(xué)方案對(duì)miRNA的表達(dá)進(jìn)行定量； (e)在所述的一種或多種靶細(xì)胞中確定多種核酸分子表達(dá)水平，每種核酸分子均編碼微RNA序列； (f)在一種或多種對(duì)照細(xì)胞中確定所述多種核酸分子的表達(dá)水平；及 (g)通過對(duì)比在步驟(e)和(f)中所獲得的各自的表達(dá)水平，從所述多種核酸分子中鑒定出在靶細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)的一種或多種核酸分子，其中所述一種或多種差異表達(dá)的核酸分子一起代表如本文所定義的核酸表達(dá)生物標(biāo)記，其是腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌或者小細(xì)胞肺癌存在的指征。
39.權(quán)利要求38的方法，進(jìn)一步用于區(qū)別選自腺癌肺癌、鱗狀細(xì)胞肺癌及小細(xì)胞肺癌的肺癌。
40.在一種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞中預(yù)防或治療肺癌的方法，所述方法包括 (a)通過使用權(quán)利要求53-54的方法在一種或多種靶細(xì)胞中鑒定核酸表達(dá)特征；及 (b)在所述一種或多種細(xì)胞中改變所述核酸表達(dá)特征所包含的編碼微RNA序列的一種或多種核酸分子的表達(dá)，所述改變以如下的方式進(jìn)行，即其表達(dá)在所述一種或多種靶細(xì)胞中被上調(diào)的核酸分子的表達(dá)被下調(diào)，而其表達(dá)在所述一種或多種靶細(xì)胞中被下調(diào)的核酸分子的表達(dá)被上調(diào)。
41.用于在一種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞中預(yù)防和/或治療肺癌的藥物組合物，所述組合物包含一種或多種核酸分子，每種核酸分子均編碼序列， 所述序列與如1-55任一項(xiàng)所定義的在所述一種或多種靶細(xì)胞中其表達(dá)被上調(diào)的核酸分子所編碼的微RNA序列至少部分互補(bǔ),和/或所述序列對(duì)應(yīng)于如權(quán)利要求1-40任一項(xiàng)所定義的在所述一種或多種靶細(xì)胞中其表達(dá)被下調(diào)的核酸分子所編碼的微RNA序列。
42.權(quán)利要求41的藥物組合物在制備預(yù)防和/或治療肺癌的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于鑒定展現(xiàn)出肺癌的一種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的診斷試劑盒，所述試劑盒包含多種核酸分子，其中所述核酸分子在靶細(xì)胞中和在對(duì)照細(xì)胞中差異表達(dá)。本發(fā)明還提供了通過使用所述核酸分子來鑒定展現(xiàn)出肺癌的一種或多種哺乳動(dòng)物靶細(xì)胞的方法，以及同于預(yù)防或治療肺癌的方法和藥物組合物。
文檔編號(hào)A61K31/7105GK102770561SQ201080064794
公開日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月24日
發(fā)明者盧韶華, 吳瑩, 朱虹光, 李健, 黃威 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)