專利名稱：白介素-1β突變蛋白偶聯(lián)物在糖尿病治療中的用途的制作方法
白介素突變蛋白偶聯(lián)物在糖尿病治療中的用途技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明提供了用于治療、改善和/或預防II型糖尿病的組合物、藥物組合物和疫苗。本發(fā)明的組合物、藥物組合物和疫苗包含RNA噬菌體的病毒樣顆粒和抗原，其中所述抗原包括白介素(IL-Ιβ)突變蛋白。當給藥于動物、優(yōu)選人時，所述組合物、藥物組合物和疫苗能誘導有效的免疫應答，尤其是抗體應答，其中所述抗體應答通常優(yōu)選針對IL-I β。 因此，本發(fā)明提供了通過針對IL-I β的主動免疫來治療、改善或預防II型糖尿病的方法。
背景技術(shù)：
2型糖尿病是一種慢性代謝失調(diào)，其特征為存在由于缺陷性胰島素分泌、胰島素作用或兩者組合而引起的高血糖癥。盡管2型糖尿病中胰島β細胞障礙的機理沒有完全闡明，但是應激和炎癥途徑已經(jīng)表明與之有關(guān)。重復性血糖波動、血脂異常和脂肪因子導致的代謝應激誘導胰腺的炎癥應答，其特征為本地細胞因子分泌、胰島免疫細胞浸潤、β細胞凋亡、淀粉樣沉積和纖維化。IL-I β作為關(guān)鍵細胞因子出現(xiàn)，能調(diào)節(jié)胰島趨化因子的產(chǎn)生并導致胰島素生成的損害和β細胞凋亡。通過施用重組IL-I受體拮抗劑或中和性單克隆抗體來阻斷IL-I信號傳導已經(jīng)顯示能改善2型糖尿病動物模型中的血糖控制(Sauter等人， 2008，Endocrinology, Vol.149 (5)pp. 2208—18 ；Osborn et al. 2008，Cytokine, Vol.44(1) pp. 141-8)。而且，用重組人IL-I受體拮抗劑(Anakinra)治療2型糖尿病導致了糖化血紅蛋白水平的降低(長期糖血癥的可靠觀察)和β細胞功能的改善(Larsen等人，2007，N Engl J Med，Vol.356 (15)ρρ· 1517-1526，2007)。發(fā)明內(nèi)容
我們發(fā)現(xiàn)包含至少一種IL-I β突變蛋白的本發(fā)明組合物不僅能誘導針對IL-I β 的免疫應答，尤其是抗體應答，而且在體內(nèi)能中和IL-I的促炎癥活性。這在小鼠模型(實施例幻以及被認為接近模擬人類狀況的猴模型(實施例11)中已經(jīng)顯示。
我們驚訝地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的組合物的主動免疫導致了在糖尿病小鼠模型(Surwit 等人，DIABETES, Vol. 37，1988，1163-1167)中膳食誘導的糖尿病表型的改善(實施例5)。 還驚訝地發(fā)現(xiàn)通過用氨基酸序列MDI替換人IL-I β的N末端氨基酸殘基可以降低其受體結(jié)合力及生物活性(實施例6)。也發(fā)現(xiàn)N末端的突變與014 突變協(xié)同作用，已知后者降低人IL-I β的生物活性(實施例6)。包含這兩種突變的IL-I β突變蛋白顯示出非常低的生物活性。在靈長類研究中，包含014 突變和N末端氨基酸序列MDI的人IL-I β突變蛋白顯示出相比于野生型人類和靈長類IL-I β顯著降低的反應原性(實施例7)。IL-I β突變蛋白的低生物活性降低了疫苗在體內(nèi)的反應原性(實施例10)，因此這最終表現(xiàn)為疫苗的安全性。
因此，本發(fā)明的一個方面是用于治療糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的方法中的組合物，所述組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；和(b) 至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原包含或優(yōu)選由IL-I β突變蛋白組成，其中所述IL-Ιβ突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人IL-I β，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列 MDI (SEQ ID NOj)所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一氨基酸殘基所替換；以及其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接。
本發(fā)明的還有一方面是下面公開的疫苗組合物、藥物組合物、方法和用途。


本申請無附圖。
發(fā)明詳述
佐劑本文所用的術(shù)語“佐劑”是指免疫應答的非特異性刺激物，或者是指允許宿主產(chǎn)生駐留(depot)的物質(zhì)，當其分別與疫苗或藥物組合物結(jié)合時，能產(chǎn)生甚至更強的免疫應答。優(yōu)選佐劑為完全或不完全弗氏佐劑，含鋁佐劑，優(yōu)選氫氧化鋁，最優(yōu)選明礬和改良胞壁酰二肽。更優(yōu)選的佐劑為如氫氧化鋁等礦物膠，如溶血卵磷脂、普朗尼克多元醇(pluronic polyols)、聚陰離子、多肽、油乳膠、鑰孔慽血蘭蛋白(keyhole limpet hemocyanins)、二硝基酚等表面活性物質(zhì)，以及如BCG(卡介苗)和短小棒狀桿菌 (Corynebacterium parvum)等人用佐劑。可以與本發(fā)明的組合物一起施用的其他佐劑包括，但不限于，單磷酰基脂質(zhì)免疫調(diào)節(jié)劑、AdjuVax 100a、QS-21、QS-18、CRL1005、鋁鹽(明礬)、MF-59、0M-174、0M-197、0M-294和病毒體佐劑技術(shù)。術(shù)語佐劑也包括這些物質(zhì)的混合物。VLP通常被描述為佐劑。然而，本申請文中所用的術(shù)語“佐劑”是指用于發(fā)明組合物的非VLP的佐劑，相反它涉及一種額外的獨特組分。術(shù)語佐劑尤其不是指RNA噬菌體的病毒樣顆粒。
抗原本文所用的術(shù)語“抗原”是指能被抗體或T細胞受體(TCR)(如果被MHC分子遞呈)結(jié)合的分子?？乖鼙幻庖呦到y(tǒng)識別和/或能誘導體液免疫應答和/或引起B(yǎng)和 /或T淋巴細胞激活的細胞免疫應答。然而，這可能需要，至少在某種情況下，抗原包含或連接于Th細胞表位并存在于佐劑中?？乖哂幸粋€或多個表位(B細胞和T細胞表位)。上面所指特異性反應是指抗原優(yōu)選、通常以高選擇性方式，與其對應的抗體或TCR反應，而不與眾多可能被其它抗原激活的其他抗體或TCR反應。本文所用抗原也可能是數(shù)種單個抗原的混合物。本文所用的術(shù)語“抗原”優(yōu)選指多肽，其中所述多肽包含或由IL-I β突變蛋白組成。然而，本文所用的術(shù)語“抗原”不是指病毒樣顆粒，尤其不是指RNA噬菌體的類病毒。
特異性結(jié)合(抗體/抗原)在本申請中，當抗體以IO6M-1或更高，優(yōu)選IO7M-1或更高，更優(yōu)選IO8M4或更高，最優(yōu)選IO9M4或更高的結(jié)合力(Ka)與抗原結(jié)合時，抗體被定義為特異性結(jié)合?？贵w結(jié)合力可以用例如katchard分析、ELISA或Biacore分析而測定。
特異性結(jié)合((IL-I β /IL-I受體)受體和受體配體的相互作用可以用本領(lǐng)域通常所知的生物物理方法鑒定，包括，例如ELISA或Biacore分析。當所述IL-I β分子或所述 IL-I β突變蛋白與所述IL-I受體的結(jié)合力(Ka)至少為105Μ_\優(yōu)選至少IO6M4,更優(yōu)選至少ΙΟΙ1，仍更優(yōu)選至少108Μ_\最優(yōu)選至少愈1時，IL-I β分子(包括IL-I β突變蛋白) 被視作能特異性結(jié)合IL-I受體；其中所述IL-I受體是人IL-I受體。優(yōu)選地，所述IL-I受體包含或更優(yōu)選由序列SEQ ID NO :1或SEQ ID NO :2的任一個組成，其中所述IL-I受體更優(yōu)選包含或更優(yōu)選由序列SEQ ID NO 1組成。
結(jié)合本文所用的術(shù)語“結(jié)合的”或“結(jié)合”是指兩個分子連接在一起的所有可能方式，優(yōu)選化學相互作用。結(jié)合優(yōu)選通過共價相互作用的方式，其中所述共價相互作用優(yōu)選自酯鍵、醚鍵、磷酸酯鍵、酰胺鍵、肽鍵、碳磷鍵、如硫醚的碳硫鍵或酰亞胺鍵。
第一結(jié)合位點本文所用的短語“第一結(jié)合位點”是指天然存在于RNA噬菌體的 VLP的或人為加入RNA噬菌體的VLP的并且第二結(jié)合位點能連接的元件。第一結(jié)合位點優(yōu)選包含或更優(yōu)選是氨基酸殘基或如氨基等化學活性基團。第一結(jié)合位點優(yōu)選是氨基酸殘基的氨基。在一個更優(yōu)選實施方式中，第一結(jié)合位點為賴氨酸。在一個仍更優(yōu)選實施方式中， 第一結(jié)合位點為賴氨酸的氨基。在一個優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為賴氨酸的氨基，其中所述賴氨酸殘基優(yōu)選為天然存在于RNA噬菌體的VLP的賴氨酸殘基。第一結(jié)合位點通常優(yōu)選位于RNA噬菌體的VLP，最優(yōu)選在RNA噬菌體Q β的表面，更優(yōu)選在其外表面。 多個第一結(jié)合位點通常優(yōu)選以重復結(jié)構(gòu)位于RNA噬菌體的VLP、最優(yōu)選在RNA噬菌體的VLP Q^的表面、優(yōu)選在其外表面。在一個優(yōu)選實施方式中，第一結(jié)合位點通過至少一個共價鍵、 優(yōu)選通過至少一個肽鍵與RNA噬菌體的VLP結(jié)合。在一個更優(yōu)選實施方式中，第一結(jié)合位點天然存在于RNA噬菌體的VLP、優(yōu)選RNA噬菌體的VLP Qβ。在一個優(yōu)選實施方式中，第一結(jié)合位點通過至少一個共價鍵、優(yōu)選通過至少一個肽鍵與所述RNA噬菌體的VLP結(jié)合，其中所述RNA噬菌體優(yōu)選為Q β。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基的氨基，其中所述賴氨酸殘基為RNA噬菌體、最優(yōu)選RNA噬菌體Q β的外殼蛋白的賴氨酸殘基。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為RNA噬菌體的外殼蛋白的賴氨酸殘基的氨基，其中所述外殼蛋白優(yōu)選包含或優(yōu)選由氨基酸序列SEQ ID Ν0:3組成。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基，其中所述賴氨酸殘基為RNA噬菌體、最優(yōu)選RNA噬菌體Qi3的外殼蛋白的賴氨酸殘基。
第二結(jié)合位點本文所用的短語“第二結(jié)合位點”是指天然存在于或人為加入抗原的、優(yōu)選加入所述抗原包含的IL-I β突變蛋白的并且第一結(jié)合位點能連接的元件。第二結(jié)合位點優(yōu)選為氨基酸殘基。更優(yōu)選地，第二結(jié)合位點為化學活性基團，優(yōu)選氨基酸殘基的化學活性基團。更優(yōu)選地，所述第二結(jié)合位點為巰基，優(yōu)選半胱氨酸殘基的巰基。因此，術(shù)語 “具有至少一種第二結(jié)合位點的抗原”是指具有抗原、優(yōu)選IL-I β突變蛋白以及至少一個第二結(jié)合位點的構(gòu)建體。然而，尤其對于非天然存在于抗原的第二結(jié)合位點，這種構(gòu)建體還通常優(yōu)選包括一個“連接子”。在一個優(yōu)選實施方式中，第二結(jié)合位點通過至少一個共價鍵、優(yōu)選通過至少一個肽鍵與抗原、優(yōu)選與IL-I β突變蛋白相結(jié)合。在一個進一步實施方式中， 第二結(jié)合位點天然存在于抗原、優(yōu)選IL-I β突變蛋白中。在另一個優(yōu)選實施方式中，第二結(jié)合位點優(yōu)選通過一個連接子人為加入抗原中，其中所述連接子進一步優(yōu)選包括或由一個半胱氨酸殘基組成。所述連接子優(yōu)選通過肽鍵的方式融合于IL-I β突變蛋白。
連接的本文所用的術(shù)語“連接的”或“連接”是指至少一個第一結(jié)合位點和至少一個第二結(jié)合位點連接在一起的所有可能方式，優(yōu)選化學相互作用。連接優(yōu)選通過共價相互作用的方式。共價相互作用是優(yōu)選自酯鍵、醚鍵、磷酸酯鍵、酰胺鍵、肽鍵、碳磷鍵、如硫醚等碳硫鍵或酰亞胺鍵的共價鍵。在特定實施方式中，第一結(jié)合位點和第二結(jié)合位點通過至少一個共價鍵、優(yōu)選通過至少一個非肽鍵、甚至更優(yōu)選通過獨有的非肽鍵連接。然而，本文所用的術(shù)語“連接”不僅是指至少一個第一結(jié)合位點和至少一個第二結(jié)合位點的直接連接，而且另外優(yōu)選至少一個第一結(jié)合位點和至少一個第二結(jié)合位點通過中間分子、優(yōu)選通過使用至少一種、優(yōu)選一種異型雙功能交聯(lián)劑的間接連接。因此，在一個優(yōu)選實施方式中，所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點通過最少一個、優(yōu)選恰好一個異型雙功能交聯(lián)劑而共價連接，其中所述第一結(jié)合位點優(yōu)選是賴氨酸的氨基，其中所述第二結(jié)合位點進一步優(yōu)選是半胱氨酸殘基的巰基。
連接子本文所用的“連接子”結(jié)合第二結(jié)合位點與IL-Ιβ突變蛋白，或者包含或由第二結(jié)合位點組成。本文所用的“連接子”優(yōu)選包含第二結(jié)合位點，通常優(yōu)選-但非必須-作為一個氨基酸殘基，優(yōu)選半胱氨酸殘基。在一個優(yōu)選實施方式中，所述連接子是氨基酸連接子。在一個優(yōu)選實施方式中，所述連接子恰好包含一個半胱氨酸殘基，所述第二結(jié)合位點是所述恰好一個半胱氨酸殘基的巰基。連接子與IL-I β突變蛋白的結(jié)合優(yōu)選通過至少一個共價鍵的方式、更優(yōu)選通過至少一個肽鍵的方式。
氨基酸連接子術(shù)語“氨基酸連接子”是指包括至少一個氨基酸殘基的連接子。在一個優(yōu)選實施方式中，所述氨基酸連接子僅包含氨基酸殘基。
有序重復的抗原陣列本文所用的“有序重復的抗原陣列”通常分別是指抗原的重復模式或特征為抗原在病毒樣顆粒上空間排列的通常優(yōu)選高度有序一致的結(jié)構(gòu)。在一個優(yōu)選實施方式中，重復模式可能是一種幾何模式。本發(fā)明的某些實施方式，如偶聯(lián)于RNA噬菌體的VLP的抗原，是合適的有序重復的抗原陣列的代表性優(yōu)選示例，而且其具有抗原的嚴格重復的次晶體序列，間距優(yōu)選1至30納米，優(yōu)選2至15納米，甚至更優(yōu)選2至10納米， 再甚至更優(yōu)選2至8納米，再更優(yōu)選1. 6至7納米。
人IL-I β 術(shù)語人 IL-I β 是指由與人 IL-I β 116-269 (SEQ ID NO 4)至少 90%, 優(yōu)選至少95%、更優(yōu)選至少96%、仍更優(yōu)選至少97%、仍更優(yōu)選至少98%、仍更優(yōu)選至少 99%、最優(yōu)選100%相同的氨基酸序列組成的任何多肽。在一個優(yōu)選實施方式中，人IL-I β 是指由SEQ ID NO 4組成的多肽。人IL-I β也包括重組表達的人IL-I β。在如大腸桿菌等原核表達系統(tǒng)中表達的多肽的代表性特征為N末端的甲硫氨酸殘基。因此，術(shù)語人IL-I β 進一步優(yōu)選指的是SEQ ID NO 20和指的是SEQ ID NO 20和SEQ ID NO 4的混合物。
人IL-I β突變蛋白本文所用的術(shù)語“IL-1 β突變蛋白”是指包含突變氨基酸序列的多肽，其中待突變的氨基酸序列是人IL-I β。IL-I β突變蛋白的生物活性通常優(yōu)選為由所述待突變的氨基酸序列組成的多肽的生物活性的少于80%、更優(yōu)選少于60%、仍更優(yōu)選少于40%、仍更優(yōu)選少于20%、最優(yōu)選少于10%，其中所述生物活性優(yōu)選通過所述多肽在人細胞中、優(yōu)選在PBMC或HeLa細胞中誘導IL-6形成的能力而測定。當引入動物中時， 包含優(yōu)選IL-I β突變蛋白的發(fā)明組合物通常優(yōu)選誘導具有與由所述待突變的氨基酸序列組成的多肽交叉反應活性的抗體。因此，當引入動物中時，包括優(yōu)選的IL-I β突變蛋白的發(fā)明組合物通常優(yōu)選誘導能特異性結(jié)合人IL-I β、優(yōu)選SEQ ID NO :4的抗體。本發(fā)明文中優(yōu)選的是包含突變的N末端的IL-I β突變蛋白。IL-Ιβ突變蛋白優(yōu)選包含N末端氨基酸序列MDI(SEQ ID Ν0:5)。IL-Ιβ突變蛋白優(yōu)選由突變的氨基酸序列組成，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO 5)所替換。IL-I β突變蛋白更優(yōu)選包含至少一種、優(yōu)選恰好另一種導致IL-I β突變蛋白與由所述待突變的氨基酸序列組成的多肽相比生物活性降低的突變。IL-I β突變蛋白優(yōu)選由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列為人IL-I β，優(yōu)選SEQ ID NO :4，其中所述待突變的氨基酸序列、優(yōu)選SEQ ID NO :4的第145位的氨基酸殘基被另一氨基酸殘基所替換。IL-I β突變蛋白仍更優(yōu)選由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列為人IL-I β、優(yōu)選SEQ ID NO :4，其中所述待突變的氨基酸序列、優(yōu)選SEQ ID NO 4的第145位的氨基酸殘基是天冬氨酸殘基，其中所述天冬氨酸殘基被賴氨酸殘基所替換。IL-I β突變蛋白仍更優(yōu)選由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列為人IL-I β，優(yōu)選SEQ ID NO :4，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NOj)所替換，其中所述待突變的氨基酸序列、優(yōu)選SEQ ID Ν0:4的第145位的氨基酸殘基進一步被另一氨基酸殘基、優(yōu)選被賴氨酸殘基所替換。
氨基酸替換氨基酸替換的表述是指在氨基酸序列的特定位置的氨基酸殘基被任何其它氨基酸殘基的替換。
生物活性本文所用的關(guān)于包括IL-I β突變蛋白的IL-I β分子的術(shù)語“生物活性”或“生物活性的”是指在系統(tǒng)性給藥于動物、優(yōu)選人后，IL-I β分子和/或IL-I β突變蛋白誘導IL-6產(chǎn)生的能力。IL-I β分子和/或IL-I β突變蛋白體內(nèi)誘導IL-6產(chǎn)生的能力如實施例2Α和7所述測定。術(shù)語“生物活性”或“生物活性的”也指IL-I β分子和/或 IL-I β 突變蛋白誘導胸腺細胞(Epps 等人，Cytokine 9(3) 149-156 (1997)、D10. G4. 1 輔助 T 細胞(Orencole 和 Dinarello，Cytokine 1(1) :14-22(1989))增殖的能力，或從 MG64 或 HaCaT 細胞(Boraschi 等人，J. Immunol. 155 :4719-4725(1995))或成纖維細胞(Dinarello 等人，Current Protocols in Immunology 6· 2· 1-6-2-7 UOOO))誘導 IL-6 產(chǎn)生，或從 EL-4 胸腺瘤細胞(Simon 等人，J. Immunol. Methods 84(1-2) :85-94(1985))誘導 IL-2 產(chǎn)生的能力，或抑制人黑色素瘤細胞株A375(Nakai等人，Biochem. Biophys. Res. Commun. 154 1189-1196(1988))生長的能力。術(shù)語IL-1 β分子或IL-I β突變蛋白的生物活性優(yōu)選指的是它們在人細胞中、優(yōu)選在PBMC或在HeLa細胞中誘導IL-6形成的能力。
多肽本文所用的術(shù)語“多肽”是指由酰胺鍵(也被稱為肽鍵)線性連接的單體 (氨基酸)組成的分子。它是氨基酸的一個分子鏈，而不是指特定長度的產(chǎn)物。
多肽的氨基酸序列特性可以用如Bestfit程序等已知的計算機程序常規(guī)確定。當使用Bestfit或任何其它序列比對程序、優(yōu)選使用Bestfit來確定特定序列是否，例如與參照氨基酸序列95%相同，參數(shù)設置為相對于參照氨基酸序列計算相同百分比，允許缺口大于參照序列中氨基酸殘基總數(shù)的5%。
外殼蛋白術(shù)語“外殼蛋白”是指能被包入病毒衣殼或VLP中的病毒(優(yōu)選RNA噬菌體)的天然衣殼的病毒蛋白、優(yōu)選亞單位。外殼蛋白也被稱為衣殼蛋白。
重組VLP 本文所用的術(shù)語“重組VLP”是指通過包括至少一步重組DNA技術(shù)的方法獲得的VLP。
本文所用的病毒樣顆粒(VLP)是指非復制性或非感染性、優(yōu)選非復制性和非感染性的病毒顆粒，或指非復制性或非感染性、優(yōu)選非復制性和非感染性的類似于病毒顆粒、優(yōu)選病毒衣殼的結(jié)構(gòu)。本文所用的術(shù)語“非復制性”是指不能復制VLP所含的基因組。本文所用的術(shù)語“非感染性”是指不能進入宿主細胞。本發(fā)明的病毒樣顆粒是非復制性和/或非感染性的，因為它缺少全部或部分病毒基因組或基因組功能。在一個實施方式中，病毒樣顆粒是病毒基因組被物理或化學失活的病毒顆粒。病毒樣顆粒通常更優(yōu)選缺少所有或部分病毒基因組的復制和感染組分。本發(fā)明的病毒樣顆?？赡馨煌诨蚪M的核酸。本發(fā)明的一個典型優(yōu)選實施方式是病毒衣殼，比如相應的病毒、優(yōu)選噬菌體、最優(yōu)選RNA噬菌體的病毒衣殼。術(shù)語“病毒衣殼”或“衣殼”是指由病毒蛋白亞單位組成的大分子裝配體。代表性地，存在60、120、180、240、300、360和多于360個病毒蛋白亞單位。這些亞單位的相互作用通常優(yōu)選導致形成具有固有重復結(jié)構(gòu)的病毒衣殼或類病毒衣殼結(jié)構(gòu)，其中所述結(jié)構(gòu)通常為球狀或管狀。例如，RNA噬菌體的衣殼具有二十面對稱的球形。本文所用的術(shù)語“類衣殼結(jié)構(gòu)”是指類似于上述定義的衣殼形態(tài)但偏離代表性對稱裝配體、同時又保持足夠有序度和重復度的由病毒蛋白亞單位組成的大分子裝配體。因此病毒樣顆粒的代表性特征是其亞單位的高度有序重復排列。
RNA噬菌體的病毒樣顆粒本文所用的術(shù)語“RNA噬菌體的病毒樣顆?！笔侵赴騼?yōu)選主要由或由RNA噬菌體的外殼蛋白、其突變體或片段組成的病毒樣顆粒。另外，RNA 噬菌體的病毒樣顆粒類似于RNA噬菌體的結(jié)構(gòu)。而且，RNA噬菌體的病毒樣顆粒是非復制性和/或非感染性的。RNA噬菌體的病毒樣顆粒通常優(yōu)選缺少編碼RNA噬菌體的復制體系的至少一種基因、優(yōu)選所有基因。RNA噬菌體的病毒樣顆粒進一步優(yōu)選也缺少編碼負責病毒附著或進入宿主的一種蛋白或多種蛋白的一個基因或多個基因。然而，該定義也涵蓋RNA 噬菌體的病毒樣顆粒，其中上面提及的一個基因或多個基因仍然存在但失活了，因此也會導致RNA噬菌體的病毒樣顆粒的非復制性和/或非感染性。來自RNA噬菌體的優(yōu)選VLP顯示二十面對稱并由180個亞單位(單體)組成。使RNA噬菌體的病毒樣顆粒非復制性和/ 或非感染性的優(yōu)選方法是通過物理、化學的失活，比如UV照射、甲醛處理、通常優(yōu)選基因操作。
糖尿病術(shù)語糖尿病是指任何類型的糖尿病。糖尿病優(yōu)選指的是I型糖尿病和/ 或II型糖尿病。糖尿病最優(yōu)選指的是II型糖尿病。
劑量術(shù)語劑量是指一天內(nèi)給藥于動物、優(yōu)選人的本發(fā)明的組合物、本發(fā)明的疫苗組合物或本發(fā)明的藥物組合物的總量。通常優(yōu)選地，但非必須，將一個劑量一次性、優(yōu)選通過單一注射給藥于所述動物、優(yōu)選所述人。
本發(fā)明提供了用于治療、改善或預防糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的方法的組合物， 所述組合物包括(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；和(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原包括或優(yōu)選由IL-I β突變蛋白組成，其中所述IL-Ιβ突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人IL-Ιβ，其中待突變的所述氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO 5)所替換，其中待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一個氨基酸殘基所替換；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接。
所述IL-I β突變蛋白優(yōu)選連接至所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒以形成有序重復的抗原-VLP陣列。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中，至少20個、優(yōu)選至少30個、更優(yōu)選至少60個、再更優(yōu)選至少120個、進一步更優(yōu)選至少180個IL-I β突變蛋白分子被連接至所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒。在一個優(yōu)選實施方式中，所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒是重組的病毒樣顆粒。
在一個優(yōu)選實施方式中，RNA噬菌體的病毒樣顆粒包括、主要由或由RNA噬菌體組成的重組外殼蛋白。RNA噬菌體優(yōu)選自(a)噬菌體Q β ； (b)噬菌體R17 ； (c)噬菌體fr ；(d)噬菌體GA ； (e)噬菌體SP ； (f)噬菌體MS2 ； (g)噬菌體Mll ； (h)噬菌體MXl ；⑴噬菌體NL95 ； (k)噬菌體f2 ； (1)噬菌體PP7 ； (m)噬菌體PRRl，以及(η)噬菌體ΑΡ205。
在一個更優(yōu)選實施方式中，RNA噬菌體的病毒樣顆粒包括、主要由或由RNA噬菌體 Q^組成的重組外殼蛋白。WO 02/056905中公開了 RNA噬菌體、尤其是RNA噬菌體Qβ的病毒樣顆粒。WO 02/056905的實施例18尤其提供了 RNA噬菌體Qβ的VLP的制備的詳細描述。
在一個更優(yōu)選實施方式中，RNA噬菌體的病毒樣顆粒包括、主要由或由重組外殼蛋白組成，其中所述重組外殼蛋白包含或優(yōu)選由氨基酸序列SEQ ID Ν0:3組成。
在一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明的組合物和疫苗的抗原密度為0. 5至4. 0。本文所用的術(shù)語“抗原密度”是指RNA噬菌體、優(yōu)選RNA噬菌體Qi3的VLP的每個亞單位、優(yōu)選每個外殼蛋白連接的IL-I β突變蛋白分子的平均數(shù)。因此，該數(shù)值計算為在本發(fā)明的組合物和疫苗中RNA噬菌體的VLP的所有亞單位的平均值。
Q^的VLP或衣殼的外殼蛋白在其表面有確定數(shù)量的賴氨酸殘基，其確定的拓撲結(jié)構(gòu)為三個賴氨酸殘基指向衣殼內(nèi)部并與RNA相互作用，而四個其它賴氨酸殘基向衣殼外部暴露。至少一個第一結(jié)合位點為指向或在VLP的外部的賴氨酸殘基。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為SEQ ID NO :3的賴氨酸的氨基。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為SEQ ID而3的第2、13、16、46、60、63和67位賴氨酸殘基中任一個的氨基。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為衣殼蛋白、優(yōu)選SEQ ID NO :3的向衣殼外暴露的賴氨酸殘基中任一個的氨基。
在一個進一步實施方式中，所述IL-I β突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列為人IL-I β，其中待突變的氨基酸序列優(yōu)選為SEQ ID NO :4，其中所述氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO : 所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被賴氨酸殘基所替換。因此，在一個優(yōu)選實施方式中，所述IL-Ιβ突變蛋白由氨基酸序列SEQ ID N0:6組成。
所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原通過重組表達的方法、優(yōu)選通過在細菌系統(tǒng)中表達的方法、最優(yōu)選在大腸桿菌中制備。所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原可能包括氨基酸連接子，其中所述氨基酸連接子包括所述第二結(jié)合位點。此外或另外，所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原可能包括一個如His標簽、Myc 標簽、Fc標簽或HA標簽等標簽以幫助純化。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒和所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原通過共價鍵的方式、優(yōu)選通過非肽共價鍵的方式結(jié)合。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點和所述第二結(jié)合位點通過共價鍵的方式、優(yōu)選通過非肽共價鍵的方式結(jié)合。
在一個更優(yōu)選實施方式中，僅一個所述第二結(jié)合位點與所述第一結(jié)合位點通過至少一種非肽共價鍵結(jié)合，導致所述抗原單一均勻地結(jié)合于所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒， 其中所述僅一個與所述第一結(jié)合位點結(jié)合的第二結(jié)合位點為巰基，其中所述抗原和所述 RNA噬菌體的病毒樣顆粒通過所述結(jié)合相互作用以形成有序重復的抗原陣列，其中所述第一結(jié)合位點優(yōu)選為賴氨酸殘基的氨基。
在一個優(yōu)選實施方式中，第一結(jié)合位點包括或優(yōu)選為氨基，優(yōu)選為賴氨酸殘基的氨基。在另一個優(yōu)選實施方式中，第二結(jié)合位點包括或優(yōu)選為巰基，優(yōu)選半胱氨酸殘基的巰基。
在一個更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為氨基，所述第二結(jié)合位點為巰基。 在一個仍更優(yōu)選實施方式中，所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基的氨基，所述第二結(jié)合位點為半胱氨酸殘基的巰基。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原通過化學交聯(lián)方式、通常優(yōu)選用異型雙功能交聯(lián)劑連接至VLP。在一個優(yōu)選實施方式中，異型雙功能交聯(lián)劑包含能與VLP的優(yōu)選第一結(jié)合位點、優(yōu)選與氨基、更優(yōu)選與賴氨酸殘基的氨基反應的一個官能團，以及能與固有的、或人為加入IL-I β突變蛋白、也可選通過還原反應制備獲得的優(yōu)選第二結(jié)合位點、優(yōu)選與巰基、最優(yōu)選與半胱氨酸的巰基反應的另一個官能團。異型雙功能交聯(lián)劑優(yōu)選自 SMPH(Pierce)、Sulfo-MBS, Sulfo-EMCS, Sulfo-GMBS, Sulfo-SIAB, Sulfo-SMPB, Sulfo-SMCC, SVSB和SIA。所有上面提及的交聯(lián)劑在氨基和巰基的硫醚連接反應后都能導致酰胺鍵的形成。最優(yōu)選地，所述異型雙功能交聯(lián)劑為琥珀酰亞胺基_6-[ β -馬來酰亞胺丙酰胺基]己酸酯(SMPH)。
在一個更優(yōu)選實施方式中，所述至少一種具有所述至少一個第二結(jié)合位點的抗原還包括連接子，其中所述連接子包含所述第二結(jié)合位點，其中所述連接子通過肽鍵與所述抗原結(jié)合。在一個優(yōu)選實施方式中，所述連接子與IL-I β突變蛋白通過至少一個共價鍵、 更優(yōu)選通過至少一個、優(yōu)選一個肽鍵的方式相結(jié)合。連接子優(yōu)選包括或由第二結(jié)合位點組成。在一個更優(yōu)選實施方式中，連接子包含巰基，優(yōu)選半胱氨酸殘基的巰基。在另一個優(yōu)選實施方式中，氨基酸連接子為半胱氨酸殘基。
在一個更優(yōu)選實施方式中，連接子被加至IL-I β突變蛋白的C末端。本發(fā)明的優(yōu)選連接子為還包含作為第二結(jié)合位點的半胱氨酸殘基的甘氨酸連接子(G)n。在一個優(yōu)選實施方式中，所述連接子為 GGCG (SEQ ID NO 7)或 GGC (SEQ ID NO 8)，優(yōu)選 GGCG (SEQ ID NO: 7)。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述連接子GGCG (SEQ ID NO :7)，其中所述連接子被加至所述IL-I β突變蛋白的C末端。
在一個更優(yōu)選實施方式中，所述連接子還包含His標簽，其中所述His標簽位于所述IL-I β突變蛋白和C末端的含半胱氨酸殘基的甘氨酸連接子之間。因此，在一個優(yōu)選實施方式中，所述連接子包括或優(yōu)選由LEHHHHHHGGCG(SEQ ID NO :9)或LEHHHHHHGGC (SEQ ID N0:10)組成，其中所述連接子最優(yōu)選由LEHHHHHHGGCG(SEQ ID NO 組成。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述連接子包含LEHHHHHHGGCG(SEQ ID NO :9)，其中所述連接子被加至所述 IL-I β突變蛋白的C末端。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述至少一種具有所述至少一個第二結(jié)合位點的抗原由 SEQ ID NO 11至14或21中的任一個組成。一個優(yōu)選實施方式中，所述至少一種具有所述至少一個第二結(jié)合位點的抗原由SEQ ID NO 11至14中的任一個組成，其中所述至少一種具有所述至少一個第二結(jié)合位點的抗原由SEQ ID NO 11或12中的任一個組成。所述至少一種具有所述至少一個第二結(jié)合位點的抗原最優(yōu)選由SEQ ID Ν0:11組成。
一種或數(shù)種抗原分子，即IL-I分子，可以優(yōu)選通過RNA噬菌體外殼蛋白的暴露賴氨酸殘基(如果空間允許)結(jié)合至VLP、優(yōu)選RNA噬菌體外殼蛋白的一個亞單位。因此，RNA 噬菌體的VLP和尤其是Qi3外殼蛋白VLP的一個特定特征是每個亞單位偶聯(lián)數(shù)個抗原的可能性。這允許產(chǎn)生致密的抗原陣列。
發(fā)現(xiàn)本發(fā)明組合物的穩(wěn)定性可以通過加入鹽來改善。因此，在一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明組合物還包括穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定劑優(yōu)選為無機鹽。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述穩(wěn)定劑是氯化鈉或氯化鉀，最優(yōu)選氯化鈉。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述穩(wěn)定劑、 優(yōu)選所述無機鹽、最優(yōu)選氯化鈉的所述穩(wěn)定劑在所述組合物中的濃度為5至200mM、更優(yōu)選 10至100mM、更優(yōu)選25至75mM、最優(yōu)選50mM。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述氯化鈉在所述組合物中的濃度為5至200mM、更優(yōu)選所述氯化鈉在所述組合物中的濃度為10至100mM、 更優(yōu)選所述氯化鈉在所述組合物中的濃度為25至75mM、最優(yōu)選所述氯化鈉在所述組合物中的濃度為50mM。
還發(fā)現(xiàn)加入非離子表面活性劑、優(yōu)選聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80可以改善本發(fā)明的組合物在水溶液中的溶解度。因此，在一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明組合物還包含非離子表面活性劑，其中所述非離子表面活性劑優(yōu)選聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，其中所述非離子表面活性劑更優(yōu)選為聚山梨醇酯20。在一個更優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明組合物所包含的非離子表面活性劑的濃度為0. 01至0. 5mg/ml、更優(yōu)選0. 05至0. 25mg/ml、更優(yōu)選0. 10mg/ml。在一個優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明組合物包含非離子表面活性劑，其中所述非離子表面活性劑優(yōu)選為聚山梨醇酯20，其中聚山梨醇酯20在所述藥物組合物中的濃度為0. 01至0. 5mg/ml，其中聚山梨醇酯20在所述藥物組合物中的濃度更優(yōu)選為0. 05至 0. 25mg/ml，其中聚山梨醇酯20在所述藥物組合物中的濃度還進一步優(yōu)選為0. 10mg/ml。
一方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的任一種組合物的疫苗組合物。另一方面，本發(fā)明提供了用于治療II型糖尿病的疫苗組合物，所述疫苗組合物包含或由有效量的組合物組成，該組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；和(b) 至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-I β突變蛋白組成，其中所述IL-Ιβ突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人 IL-Ιβ，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID Ν0 5)所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一個氨基酸殘基所替換；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接。
本發(fā)明組合物的有效量是在治療個體中、優(yōu)選在人中能誘導免疫應答、優(yōu)選針對人IL-I β的免疫應答的量，其中所述免疫應答在糖尿病、優(yōu)選在II型糖尿病中產(chǎn)生治療或預防效果。
在一個實施方式中，疫苗組合物還包括至少一種佐劑，優(yōu)選氫氧化鋁。然而，本發(fā)明的一個有利特征是組合物甚至在不含佐劑時的高免疫原性。因此，在一個優(yōu)選實施方式中，疫苗組合物不含佐劑。而且，不含佐劑將不想要的T細胞炎癥響應降低到最小，該響應為免疫中針對自身抗原的安全性顧慮。因此，將本發(fā)明的疫苗組合物施用于病人時，在疫苗組合物給藥之前、同時或之后，優(yōu)選不將至少一種佐劑施用于同一病人。然而，當施用佐劑時，在發(fā)明組合物或疫苗組合物給藥之前、同時或之后，可以將至少一種佐劑給藥。
當本發(fā)明的組合物和/或疫苗組合物施用于個體時，其形式可能包含鹽、緩沖液、佐劑或改善偶聯(lián)物效率所需的其它物質(zhì)。適用于制備疫苗或藥物組合物的材料的示 M^W^jfeiJI^il^,^ Remington' s Pharmaceutical Sciences (Osol, A, ed. ， Mack Publishing Co.，(1990))。這包括無菌水(例如生理鹽水)或非水溶液和懸液。非水溶劑的示例為丙二醇、聚乙二醇、如橄欖油等植物油以及如油酸乙酯等可注射的有機酯。載體或封閉輔料可以被用于增加皮膚滲透性并增加抗原的吸收。
如果其給藥可以被受體、優(yōu)選被人所接受，那么本發(fā)明的疫苗可以說是“藥學可接受的”。而且，本發(fā)明的疫苗是以“治療有效量”(即產(chǎn)生所需生理效果的量)給藥的。免疫應答的性質(zhì)或類型并不是本公開的限制性因素。不希望后面機械的解釋限制本發(fā)明，發(fā)明的疫苗組合物可以誘導結(jié)合IL-I β并降低其濃度和/或干擾其生理或病理功能的抗體。
另一方面，本發(fā)明提供了一種疫苗組合物，包括本發(fā)明的任一種組合物或疫苗組合物；和(b) —種藥學可接受的載體。
另一方面，本發(fā)明提供了一種用于治療糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的方法的藥物組合物，所述藥物組合物包括(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒； (b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-I β突變蛋白組成，其中所述IL-Ιβ突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人IL-I β，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO 5)所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一個氨基酸殘基所替換；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接；以及(c)藥學可接受的載體。
因此，本發(fā)明提供了用于治療、改善和/或預防糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的方法， 所述方法包括將本發(fā)明的任何一種組合物、疫苗組合物或藥物組合物施用于動物、優(yōu)選人。 本發(fā)明尤其提供了用于治療、改善和/或預防糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的方法，所述方法包括將一種組合物給藥于動物、優(yōu)選人，所述組合物包括(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的 RNA噬菌體的病毒樣顆粒；和(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-Ιβ突變蛋白組成，其中所述IL-I β突變蛋白由突變的氨基酸序列組成， 其中待突變氨基酸序列是人IL-I β，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NOj)所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一個氨基酸殘基所替換；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接。
本發(fā)明進一步提供了用于治療、改善和/或預防糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的方法， 所述方法包括將一種藥物組合物施用于動物、優(yōu)選人，該藥物組合物包括(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；和(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-I β突變蛋白組成，其中所述IL-I β突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人IL-I β，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO : 所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一個氨基酸殘基所替換；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接。
在一個更優(yōu)選實施方式中，所述方法包括將一種藥物組合物施用于動物、優(yōu)選人， 其中單一劑量的所述藥物組合物包含1至1500 μ g總蛋白，其中所述總蛋白優(yōu)選包含或組成為(a)所述具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；以及(b)所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原。在一個更優(yōu)選實施方式中，單一劑量的所述藥劑包含5至1000 μ g,更優(yōu)選5至900 μ g,更優(yōu)選5至600 μ g,更優(yōu)選5至400 μ g,更優(yōu)選10至300 μ g，更優(yōu)選10至100 μ g的總蛋白。在一個更優(yōu)選實施方式中，單一劑量的所述藥劑包含10、30、100或300yg的總蛋白，其中所述單一劑量最優(yōu)選包含IOOyg總蛋白，其中所述總蛋白包含(a)所述具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；以及(b) 所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原。在一個更優(yōu)選實施方式中，單一劑量的所述藥劑包含0. 1至5mg，優(yōu)選0. 2至ang，更優(yōu)選0. 5至1. 5mg,最優(yōu)選1. Omg氫氧化鋁。
關(guān)于本發(fā)明的方法，將所述組合物、所述疫苗和/或所述藥物組合物以免疫有效量施用于所述動物、優(yōu)選所述人。
在一個實施方式中，將組合物、疫苗和/或藥物組合物以注射、輸注、吸入、口服或其它合適的物理方法施用于所述動物、優(yōu)選所述人。在一個優(yōu)選實施方式中，將組合物、疫苗和/或藥物組合物以肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、跨粘膜、跨皮膚、鼻內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下或直接進入淋巴結(jié)的方式施用于所述動物、優(yōu)選所述人。
本發(fā)明的另一方面是本文所述的組合物、疫苗組合物和/或藥物組合物在糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的治療、改善和/或預防中的用途。
本發(fā)明的另一方面是本文所述的組合物、疫苗組合物和/或藥物組合物在制備用于治療、改善和/或預防糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的藥物中的用途。更詳細地，本發(fā)明提供了組合物在制備用于治療、改善和/或預防糖尿病、優(yōu)選II型糖尿病的藥物中的用途，所述組合物包括(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；和(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-I β突變蛋白組成，其中所述IL-I β突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人IL-I β，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO : 所替換， 其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一個氨基酸殘基所替換；其中 (a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接。
在一個更優(yōu)選實施方式中，單一劑量的所述藥劑包括1至1500 μ g的總蛋白，其中所述總蛋白優(yōu)選包含或組成為(a)所述具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；以及(b)所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原。在一個更優(yōu)選實施方式中，單一劑量的所述藥劑包含5至1000 μ g，更優(yōu)選5至900 μ g，更優(yōu)選5至600 μ g，更優(yōu)選 5至400 μ g，更優(yōu)選10至300 μ g，更優(yōu)選10至100 μ g的總蛋白。在一個更優(yōu)選實施方式中，單一劑量的所述藥劑包含10、30、100或300yg的總蛋白，其中所述單一劑量最優(yōu)選包括IOOyg總蛋白，其中所述總蛋白包含(a)所述具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；以及(b)所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原。在一個更優(yōu)選實施方式中，單一劑量的所述藥劑包含0. 1至5mg，優(yōu)選0. 2至ang，更優(yōu)選0. 5至1. 5mg,最優(yōu)選l.Omg氫氧化鋁。
可以理解本文所述的所有技術(shù)特征和實施方式，尤其那些對于本發(fā)明組合物的描述，可能以單獨或以任何可能的組合形式適用于本發(fā)明的所有方面，尤其是疫苗組合物、藥物組合物、方法及用途。在本文中，明確強調(diào)所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原的以下實施例是尤其優(yōu)選的。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體為噬菌體為噬菌體 Q^ ； (b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-I β突變蛋白組成，其中IL-I β突變蛋白由SEQ ID NO :6組成；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒包含、 主要由或由SEQ IN NO :3組成；(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-Ιβ突變蛋白組成，其中所述IL-Ιβ突變蛋白由SEQ ID N0:6組成；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體為噬菌體為噬菌體 Q^ ； (b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原為SEQ ID NO=Il ；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒包含、 主要由或由SEQ IN NO :3組成；(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原為SEQ ID NO 11 ；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體為噬菌體為噬菌體 Q^ ； (b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-I β突變蛋白組成，其中所述IL-I β突變蛋白由SEQ ID Ν0:6組成；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接；其中所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基的氨基，所述第二結(jié)合位點為半胱氨酸殘基的巰基，其中所述第一結(jié)合位點通過至少一個非肽共價鍵連接于所述第二結(jié)合位點。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒包含、 主要由或由SEQ IN NO :3組成；(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-Ιβ突變蛋白組成，其中所述IL-Ιβ突變蛋白由SEQ ID N0:6組成；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接；其中所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基的氨基，所述第二結(jié)合位點為半胱氨酸殘基的巰基，其中所述第一結(jié)合位點通過至少一個非肽共價鍵連接于所述第二結(jié)合位點。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體為噬菌體為噬菌體 Q^ ； (b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原為SEQ ID NO=Il ；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接；其中所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基的氨基，所述第二結(jié)合位點為半胱氨酸殘基的巰基，其中所述第一結(jié)合位點通過至少一個非肽共價鍵連接于所述第二結(jié)合位點。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒包含、 主要由或由SEQ IN NO :3組成；(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原為SEQ ID NO=Il ；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接；其中所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基的氨基，所述第二結(jié)合位點為半胱氨酸殘基的巰基，其中所述第一結(jié)合位點通過至少一個非肽共價鍵連接于所述第二結(jié)合位點。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物還包含穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定劑為無機鹽、優(yōu)選氯化鈉，其中所述穩(wěn)定劑在所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物中的濃度優(yōu)選5至200mM、更優(yōu)選10至100mM、更優(yōu)選25至75mM，其中最優(yōu)選50mM。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物還包含穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定劑為氯化鈉，其中氯化鈉在所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物中的濃度優(yōu)選5至200mM、更優(yōu)選10至100mM、更優(yōu)選25至75mM，其中最優(yōu)選50mM。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物還包含非離子表面活性劑，其中所述非離子表面活性劑優(yōu)選為聚山梨醇酯20，其中所述非離子表面活性劑在所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物中的濃度優(yōu)選0. 01至0. 5mg/ml、優(yōu)選0. 05至 0. 25mg/ml、更優(yōu)選 0. lOmg/ml。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物還包含非離子表面活性劑，其中所述非離子表面活性劑優(yōu)選為聚山梨醇酯20，其中所述聚山梨醇酯20在所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物中的濃度優(yōu)選0. 01至0. 5mg/ml、優(yōu)選0. 05至0. 25mg/ ml、更優(yōu)選 0. 10mg/ml。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒包含、 主要由或由SEQ IN NO :3組成；(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原為SEQ ID NO 11 ；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接；其中所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基的氨基，所述第二結(jié)合位點為半胱氨酸殘基的巰基，其中所述第一結(jié)合位點通過至少一個非肽共價鍵連接于所述第二結(jié)合位點，其中所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物還包含穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定劑為無機鹽、優(yōu)選氯化鈉，其中氯化鈉在所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物中的濃度優(yōu)選5至200mM、更優(yōu)選10至100mM、更優(yōu)選25至75mM，其中最優(yōu)選50mM。。
在一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒，其中所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒包含、 主要由或由SEQ IN NO :3組成；(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原為SEQ ID NO 11 ；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點相連接；其中所述第一結(jié)合位點為賴氨酸殘基的氨基，所述第二結(jié)合位點為半胱氨酸殘基的巰基，其中所述第一結(jié)合位點通過至少一個非肽共價鍵連接于所述第二結(jié)合位點，其中所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物還包含非離子表面活性劑，其中所述非離子表面活性劑優(yōu)選為聚山梨醇酯20，其中所述聚山梨醇酯20在所述組合物、疫苗組合物或藥物組合物中的濃度優(yōu)選0. 01至0. 5mg/ml、優(yōu)選0. 05 至 0. 25mg/ml、更優(yōu)選 0. 10mg/ml。
在一個更優(yōu)選實施方式中，將所述組合物、所述疫苗組合物和/或所述藥物組合物施用于動物、優(yōu)選人，其中施用于所述動物、優(yōu)選所述人的單一劑量包括1至1500μ g總蛋白，其中所述總蛋白優(yōu)選包含或組成為(a)所述具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；以及(b)所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述單一劑量包括5至1000 μ g，更優(yōu)選5至900 μ g，更優(yōu)選5至600 μ g，更優(yōu)選5至400 μ g，更優(yōu)選10至300 μ g，更優(yōu)選10至100 μ g的總蛋白。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述單一劑量包括10、30、100或300μ g的總蛋白，其中所述單一劑量最優(yōu)選包括 IOOyg總蛋白，其中所述總蛋白包含(a)所述具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；以及(b)所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原。在一個更優(yōu)選實施方式中，所述單一劑量進一步包括0. 1至5mg，優(yōu)選0. 2至ang，更優(yōu)選0. 5至1. 5mg,最優(yōu)選l.Omg氫氧化鋁。實施例
實施例1
A. hIL-Ι β 116_269 和 hIL-Ι β 116_269 (D145K)的克隆、表達和純化
根據(jù)W02008/037504A1的實施例IOA和IOB公開的操作步驟克隆、表達和純化人 hIL-Ι β 116_269 和 IL-I β 突變蛋白 hIL-Ι β 116_269 (D145K)。
實施例2
A. hIL-1 β 116_269 和 hIL-1 β 116_269 (D145K)在小鼠中的生物活性
每組三只雌性C3H/HeJ小鼠靜脈注射10 μ g野生型人hIL_l β 116_269蛋白或 hIL-li3116_269 (D145K)突變蛋白。在注射之前和之后3小時收集血清樣品，分析促炎癥細胞因子IL-6的相對增加。注射野生型人hIL-Ι β 116_269蛋白的小鼠表現(xiàn)出血清IL-6濃度 2. 38士0. 69ng/ml的增加，而注射hIL_l β 116_269 (D145K)突變蛋白的小鼠表現(xiàn)出血清IL-6濃度 1. 39 士 0. 26ng/ml 的增加。
B. hIL-Ι β 116_269 和 hIL-Ι β 116_269 (D145K)在人 PBMC 中的生物活性
用Ficoll密度梯度離心法從健康供體的肝素化血液中分離外周血單核細胞 (PBMCs)。將每孔切105個細胞與滴定量的111卜13116_269或111卜13116_269 (014阢)孵育。結(jié)果如表1中所示。
表1 人IL-I β 116_269和IL-I β 116_269 (D145K)突變蛋白在人PBMC中的生物活性。
權(quán)利要求
1.一種用于治療II型糖尿病的方法中的組合物，所述組合物包括(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；和(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-Iβ突變蛋白組成，其中所述IL-I β突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人IL-I β，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO 5)所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一氨基酸殘基所替換；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述待突變的氨基酸序列為SEQID NO :4。
3.權(quán)利要求1或2的組合物，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位氨基酸殘基被賴氨酸殘基所替換。
4.權(quán)利要求1-3中任一項的組合物，其中所述IL-Iβ突變蛋白由氨基酸序列SEQ ID NO 6組成。
5.權(quán)利要求1-4中任一項的組合物，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原包括或優(yōu)選由以下組成(i)所述IL-I β突變蛋白；和( )連接子，其中所述連接子包括所述第二結(jié)合位點，其中所述連接子包括或優(yōu)選由 GGCG (SEQ ID NO 7)組成；其中所述連接子優(yōu)選通過肽鍵的方式共價連接于所述IL-I β突變蛋白的C末端。
6.權(quán)利要求1-5中任一項的組合物，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原為SEQ ID NO :11-14中任一個，其中所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原優(yōu)選是 SEQ ID NO =Ilo
7.權(quán)利要求1-6中任一項的組合物，其中所述RNA噬菌體選自于(a)噬菌體Qβ ；(b)噬菌體AP205；(c)噬菌體fr；和(d)噬菌體GA；其中所述RNA噬菌體優(yōu)選是噬菌體Q β。
8.權(quán)利要求1-7中任一項的組合物，其中所述RNA噬菌體的病毒樣顆粒包括、主要由或由RNA噬菌體的重組外殼蛋白組成，其中所述重組外殼蛋白包括或優(yōu)選由SEQ ID NO :3組成。
9.權(quán)利要求1-8中任一項的組合物，其中所述第一結(jié)合位點通過至少一個共價鍵連接于所述第二結(jié)合位點，其中所述至少一個共價鍵優(yōu)選為非肽鍵。
10.權(quán)利要求1-9中任一項的組合物，其中所述第一結(jié)合位點包括或優(yōu)選是氨基，優(yōu)選是賴氨酸殘基的氨基。
11.權(quán)利要求1-10中任一項的組合物，其中所述第二結(jié)合位點包括或優(yōu)選是巰基，優(yōu)選是半胱氨酸殘基的巰基。
12.權(quán)利要求1-11中任一項的組合物，其中所述第一結(jié)合位點為氨基，其中所述第二結(jié)合位點為巰基；其中所述第一結(jié)合位點優(yōu)選是賴氨酸殘基的氨基，所述第二結(jié)合位點優(yōu)選是半胱氨酸殘基的巰基。
13.權(quán)利要求1-12中任一項的組合物，其中僅一個所述第二結(jié)合位點與所述第一結(jié)合位點通過至少一種非肽共價鍵結(jié)合，導致所述抗原單一均勻地結(jié)合于所述病毒樣顆粒，其中與所述第一結(jié)合位點結(jié)合的所述僅一個第二結(jié)合位點為巰基，其中所述抗原和所述病毒樣顆粒通過所述結(jié)合相互作用形成有序重復的抗原陣列。
14.權(quán)利要求1-13中任一項的組合物，其中所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點通過異型雙功能交聯(lián)劑共價連接，其中所述異型雙功能交聯(lián)劑優(yōu)選是琥珀酰亞胺基6-[ β-馬來酰亞胺丙酰胺基]己酸酯(SMPH)。
15.權(quán)利要求1-14中任一項的組合物，還包含穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定劑為無機鹽、優(yōu)選氯化鈉，其中所述穩(wěn)定劑在所述組合物中的濃度再優(yōu)選為5至200mM，其中所述穩(wěn)定劑在所述組合物中的濃度更優(yōu)選為10至IOOmM,其中所述穩(wěn)定劑在所述組合物中的濃度再更優(yōu)選為25至75mM，其中所述穩(wěn)定劑在所述組合物中的濃度最優(yōu)選為50mM。
16.權(quán)利要求1-15中任一項的組合物，還包含非離子表面活性劑，其中所述非離子表面活性劑優(yōu)選為聚山梨醇酯20，其中所述非離子表面活性劑在所述組合物中的濃度再優(yōu)選為0. 01至0. 5mg/ml，其中所述非離子表面活性劑在所述組合物中的濃度再優(yōu)選為0. 05至 0. 25mg/ml，其中所述非離子表面活性劑在所述組合物中的濃度再優(yōu)選為0. 10mg/ml。
17.一種疫苗組合物，包括或由有效量的權(quán)利要求1-16中任一項的組合物組成。
18.一種用于治療II型糖尿病的疫苗組合物，其中所述疫苗組合物包括或由有效量的包含如下組分的組合物組成(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；和(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-Iβ突變蛋白組成，其中所述IL-Ιβ突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人IL-I β，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO 5)所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一氨基酸殘基所替換；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接。
19.權(quán)利要求18的疫苗組合物，其中所述組合物如權(quán)利要求1-16中任一項所定義。
20.權(quán)利要求17-19中任一項的疫苗組合物，其中所述疫苗組合物包含佐劑，優(yōu)選氫氧化鋁。
21.一種藥物組合物，包含(a)權(quán)利要求1-16中任一項的組合物或權(quán)利要求17-20中任一項的疫苗組合物；和(b)藥學可接受的載體。
22.一種用于治療II型糖尿病的方法中的藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；(b)至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原，其中所述至少一種抗原由IL-Iβ突變蛋白組成，其中所述IL-Ιβ突變蛋白由突變的氨基酸序列組成，其中待突變的氨基酸序列是人IL-Ιβ，其中所述待突變的氨基酸序列的N末端氨基酸殘基被氨基酸序列MDI (SEQ ID NO 5)所替換，其中所述待突變的氨基酸序列的第145位的氨基酸殘基被另一氨基酸殘基所替換；其中(a)和(b)通過所述至少一個第一結(jié)合位點和所述至少一個第二結(jié)合位點連接；以及(c) 一種藥學可接受的載體。
23.權(quán)利要求21或22的藥物組合物，其中所述組合物如權(quán)利要求1-16中任一項所定義。
24.權(quán)利要求21-23中任一項的藥物組合物，還包含穩(wěn)定劑，其中所述穩(wěn)定劑為無機鹽、優(yōu)選氯化鈉，其中所述穩(wěn)定劑在所述藥物組合物中的濃度優(yōu)選為5至200mM，其中所述穩(wěn)定劑在所述藥物組合物中的濃度更優(yōu)選為10至IOOmM,其中所述穩(wěn)定劑在所述藥物組合物中的濃度再更優(yōu)選為25至75mM，其中所述穩(wěn)定劑在所述藥物組合物中的濃度最優(yōu)選為 50mM。
25.權(quán)利要求21-24中任一項的藥物組合物，還包含非離子表面活性劑，其中所述非離子表面活性劑優(yōu)選為聚山梨醇酯20，其中所述非離子表面活性劑在所述藥物組合物中的濃度優(yōu)選為0. 01至0. 5mg/ml，其中所述非離子表面活性劑在所述藥物組合物中的濃度再優(yōu)選為0. 05至0. 25mg/ml，其中所述非離子表面活性劑在所述藥物組合物中的濃度再優(yōu)選為 0. 10mg/mlo
26.一種治療II型糖尿病的方法，所述方法包括將免疫有效量的權(quán)利要求1-16中任一項的組合物、權(quán)利要求17-20中任一項的疫苗組合物和/或權(quán)利要求21-25中任一項的藥物組合物施用于動物，優(yōu)選人。
27.權(quán)利要求1-16中任一項的組合物、權(quán)利要求17-20中任一項的疫苗組合物和/或權(quán)利要求21-25中任一項的藥物組合物在制備用于治療動物、優(yōu)選人中II型糖尿病的藥物中的用途。
28.權(quán)利要求1-16中任一項的組合物、權(quán)利要求17-20中任一項的疫苗組合物和/或權(quán)利要求21-25中任一項的藥物組合物、權(quán)利要求沈的方法或權(quán)利要求27的用途，其中將所述組合物、所述疫苗組合物或所述藥物組合物施用于動物、優(yōu)選人，其中施用于所述動物、優(yōu)選所述人的單一劑量包含1至1500 μ g、優(yōu)選5至1000 μ g、更優(yōu)選5至900 μ g、仍更優(yōu)選5至600 μ g、仍更優(yōu)選5至400 μ g、仍更優(yōu)選10至300 μ g、仍更優(yōu)選10至100 μ g、最優(yōu)選100 μ g總蛋白，其中所述總蛋白優(yōu)選由如下組成(a)所述具有至少一個第一結(jié)合位點的RNA噬菌體的病毒樣顆粒；以及(b)所述至少一種具有至少一個第二結(jié)合位點的抗原。
29.權(quán)利要求觀的組合物、疫苗組合物、藥物組合物、方法或用途，其中所述單一劑量進一步包含0. 1至5mg、優(yōu)選0. 2至ang、更優(yōu)選0. 5至1. 5mg、最優(yōu)選1. Omg氫氧化鋁。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于治療、改善和/或預防II型糖尿病的組合物、藥物組合物和疫苗。本發(fā)明的組合物、藥物組合物和疫苗包含RNA噬菌體的病毒樣顆粒和抗原，其中所述抗原包括白介素-1β(IL-1β)突變蛋白。當施用于動物、優(yōu)選人時，所述組合物、藥物組合物和疫苗誘導有效免疫應答，尤其是抗體應答，其中所述抗體應答通常優(yōu)選針對IL-1β。因此，本發(fā)明提供了通過針對IL-1β的主動免疫來治療、改善或預防II型糖尿病的方法。
文檔編號A61K39/385GK102497885SQ201080040521
公開日2012年6月13日 申請日期2010年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月10日
發(fā)明者G·施波恩, M·巴赫曼, P·毛雷爾 申請人:賽托斯生物技術(shù)公司