專利名稱：：佐劑組合物及使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本公開涉及佐劑組合物及其使用方法。背景疫苗是非常有成本效益的醫(yī)療干預(yù)。然而，雖然許多疾病已通過疫苗接種而被預(yù)防，許多其它疾病仍有待預(yù)防。此外，對于許多已存在針對其的疫苗的疾病，需要改進的疫苗。產(chǎn)生疫苗的主要病癥是疫苗缺乏免疫原性或免疫原性低。疫苗的功效可通過使用佐劑和遞送系統(tǒng)而被增強。特別感興趣的是增加通過經(jīng)由粘膜途徑的無針方法施用的疫苗的免疫原性的佐劑。概述本公開提供了能夠調(diào)節(jié)受試者中免疫應(yīng)答的佐劑組合物。此類佐劑組合物還可用于通過增強抗原遞呈、通過例如天然殺傷細胞的活化和/或直接的B細胞活化而增強先天免疫應(yīng)答，來增強抗原的免疫原性。還提供了制備所述佐劑組合物的方法以及使用所述佐劑組合物的方法。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油；和下列的至少一種(a)類黃酮，或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽；和(b)維生素，或者其衍生物或鹽，其中所述維生素選自維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。在某些情況下，所述組合物包含芥子油和類黃酮(例如兒茶素)或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽。在某些情況下，所述類黃酮是兒茶素、或者其衍生物或鹽。在某些情況下，所述組合物包含芥子油和維生素，或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、類黃酮，或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽以以及維生素，或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油并且所述維生素可以是維生素E或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油和維生素A或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油和維生素C或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、兒茶素或者其衍生物或鹽以及維生素A或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、兒茶素，或者其衍生物或鹽以及維生素E，或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、類黃酮(例如兒茶素)或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽，以及異硫氰酸烯丙酯。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、維生素(例如維生素A)或者其衍生物或鹽，以及異硫氰酸烯丙酯。在某些實施方案中，所述組合物包含芥子油、類黃酮(例如兒茶素)或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽、維生素(例如維生素A)或者其衍生物或鹽、以及異硫氰酸烯丙酯。在某些方面，所述組合物還包含抗原。在某些實施方案中，所述佐劑組合物包含異硫氰酸烯丙酯以及類黃酮和維生素的至少一種。可通過許多途徑例如鼻內(nèi)、經(jīng)肺、舌下、口服、含服(buccal)、陰道內(nèi)、直腸內(nèi)、經(jīng)眼、真皮內(nèi)、經(jīng)皮膚、經(jīng)皮(transcuataneous)、皮下、靜脈內(nèi)和肌內(nèi)向受試者(例如哺乳動物)施用所述組合物。還提供了制備所述組合物的方法，所述方法包括將芥子油與下列的至少一種混合類黃酮，或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽，以及維生素或者其衍生物或鹽。本申請還提供了包含藥學(xué)上可接受的植物油；類黃酮或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽；以及維生素或維生素衍生物或維生素衍生物鹽的組合物，其中所述維生素選自維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。在某些情況下，所述組合物包含植物油和類黃酮(例如兒茶素)或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽。在某些情況下，所述類黃酮為兒茶素或者其衍生物或鹽。某些情況下，所述組合物包含植物油和維生素或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、類黃酮或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽以及維生素或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油并且所述維生素可以是維生素E或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油和維生素A或其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油和維生素C或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、兒茶素或者其衍生物或鹽、以及維生素A或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、兒茶素或者其衍生物或鹽、以及維生素E或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、類黃酮(例如兒茶素)或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽以及異硫氰酸烯丙酯。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、維生素(例如維生素A)或者其衍生物或鹽以及異硫氰酸烯丙酯。在某些實施方案中，所述組合物包含植物油、類黃酮(例如兒茶素)或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽、維生素(例如維生素A)或者其衍生物或鹽和異硫氰酸烯丙酯。在某些方面，所述組合物還包含抗原。附圖簡述圖1顯示在單一肌內(nèi)(IM)疫苗接種后3周時抗-HAIgGl抗體和抗-流感-HAIgG2a抗體的血清滴度。圖2顯示在第二次肌內(nèi)(IM)疫苗接種后1周時抗-流感-HAIgGl抗體和抗-流感-HAIgG^i抗體的血清滴度。圖3顯示在第二次肌內(nèi)(IM)疫苗接種后1周時抗-流感-HAIgA抗體的血清滴度。圖4顯示在第二次肌內(nèi)(IM)疫苗接種后1周時陰道灌洗(vaginallavage)中抗-流感-HAIgGl抗體的滴度。圖5顯示在第二次肌內(nèi)(IM)疫苗接種后1周時陰道灌洗中抗-流感-HAIgA抗體的滴度。圖6顯示在第二次肌內(nèi)(IM)疫苗接種后1周時用流感-HA離體活化后的TH1、TH2和Treg應(yīng)答。圖7顯示在第二次鼻內(nèi)(IN)疫苗接種后2周時抗_HIVgpl20IgGl抗體和抗-HIVgp-120IgGh抗體的血清滴度。圖8顯示在第二次IN疫苗接種后2周時陰道灌洗中抗-HIVgpl20IgGl抗體和抗-HIVgpl20IgA抗體的滴度。圖9顯示在兩次IN/SL(鼻內(nèi)/舌下)和兩次IM疫苗接種后1周時抗-HIVgp120IgGl、IgG2a和IgA抗體的血清滴度。圖10顯示在兩次IN/SL(鼻內(nèi)/舌下)和兩次IM疫苗接種后1周時陰道灌洗中抗-HIVgp120IgGl和IgA抗體的滴度。在描述本發(fā)明和本發(fā)明的特定示例性實施方案之前，要理解本發(fā)明不限定于所描述的特定實施方案，這樣其當(dāng)然可以變化。還應(yīng)理解，本申請中所使用的術(shù)語僅是為了描述特定實施方案的目的，而不意欲是限制性的，因為本發(fā)明的范圍將僅由所附的權(quán)利要求限定。當(dāng)提供數(shù)值范圍時，應(yīng)理解除非語境中另有明確的指示，否則在所述范圍的上限和下限之間的各個中間值(interveningvalue)(至下限的單位的十分之一)和在該所述范圍內(nèi)的任何其它的所述值或中間值均被包括在本發(fā)明內(nèi)?？杀华毩⒌匕ㄔ谒龈》秶械倪@些更小范圍的上限和下限也被包括在本發(fā)明中，受所述范圍內(nèi)任何被特別排除的限制所限。當(dāng)所述范圍包括所述界限的一個或兩個時，排除這兩個所包括的界限的范圍也被包括在本發(fā)明中。除非另有定義，否則本申請中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員通常理解的意義相同的意義。雖然與本申請中描述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料也可用于本發(fā)明的實施或測試，但現(xiàn)在描述了優(yōu)選的方法和材料。本申請中提及的所有出版物均通過引用而被并入，以公開和描述與所述出版物被引用相關(guān)聯(lián)的方法和/或材料。當(dāng)此類出版物可能展示與本公開所明示或暗示的定義矛盾的術(shù)語定義時，以本公開的定義為準(zhǔn)。必須指出，如本申請中和所附權(quán)利要求中所使用的，除非語境中清楚地另外指出，否則單數(shù)形式“a”、“an”和“the”包括復(fù)數(shù)所指物。因此，例如，提及“一種(an)佐劑組合物”包括多種佐劑組合物，提及“一種(a)維生素”包括1、2或更多種維生素，以及提及“一種(a)類黃酮”包括1、2或更多種類黃酮等等。術(shù)語佐劑和遞送系統(tǒng)可互換地使用。本申請中所談?wù)摰某霭嫖飪H為了其在本申請的申請日之前的公開而被提供。本申請中沒有任何內(nèi)容將被解釋為承認本發(fā)明無權(quán)因為是在先發(fā)明而局先于此類出版物。此外，所提供的出版物的日期可能與可能需要獨立地確認的實際出版日期不同。示例性實施方案詳述本公開提供能夠調(diào)節(jié)受試者中免疫應(yīng)答的佐劑組合物。此類佐劑組合物還可被用于通過增強抗原遞呈、通過例如天然殺傷細胞的活化和/或直接的B細胞活化而增強先天免疫應(yīng)答，來增強抗原的免疫原性。還提供了制備所述佐劑組合物的方法以及使用所述佐劑組合物的方法。^X短語“佐劑組合物”是指當(dāng)向受試者施用時能夠誘導(dǎo)受試者中的免疫應(yīng)答的組合物。當(dāng)與抗原組合而被施用時，“佐劑組合物”能夠引起抗原特異性免疫應(yīng)答。對抗原或組合物的“免疫應(yīng)答”是受試者中對存在于目的抗原或組合物中的分子的體液和/或細胞免疫應(yīng)答的發(fā)生。“體液免疫應(yīng)答”是指主要由抗體分子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，而“細胞免疫應(yīng)答”是主要由T淋巴細胞和/或其它白血細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。短語“藥學(xué)上可接受的”是指通常是安全的、并且當(dāng)受試者是非人時對于獸醫(yī)用途而言是可接受的物質(zhì)。對于人“藥學(xué)上可接受的”是指通常是安全的、并且對于人的藥物用途而言是可接受的物質(zhì)。術(shù)語“抗原”是指可在適當(dāng)?shù)臈l件下被免疫系統(tǒng)所識別(例如，被抗體結(jié)合或經(jīng)加工以引起由例如T細胞產(chǎn)生的細胞免疫應(yīng)答)的任何物質(zhì)?？乖粋€或多個表位。B細胞表位包括至少約3至5個氨基酸，例如4個或更多個氨基酸。半抗原或多糖也可作為B細胞表位。T細胞表位(例如細胞毒性T細胞(CTL)表位)可包括至少約7至9個氨基酸，例如8個或更多個氨基酸。輔助T細胞表位可包括至少約12至20個氨基酸。術(shù)語“抗原”表示亞單位抗原(即，與抗原天然所結(jié)合的完整生物體相分離的抗原)以及被殺死的、減毒的或滅活的細菌、病毒、真菌、寄生蟲或其它微生物、朊病毒、變應(yīng)原或任何其它引起疾病的試劑?？乖梢允墙?jīng)修飾的蛋白質(zhì)，其包括修飾(例如對天然蛋白質(zhì)序列的缺失、添加和置換(通常在性質(zhì)上是保守的))。術(shù)語抗原還表示編碼蛋白質(zhì)或肽抗原的核酸(DNA或RNA)。如本申請中所使用的，“穿透促進(Penetrationenhancement)”或“滲透促進(permeationenhancement)”是指增加皮膚或粘膜層對抗原的滲透性以增加抗原穿過皮膚或粘膜層并進入淋巴結(jié)或血流的速度?！爸委熡行Я俊被颉坝行Я俊笔侵府?dāng)向哺乳動物或其它受試者施用以預(yù)防或治療疾病時，足以實現(xiàn)對疾病的所述預(yù)防或治療的化合物的量。“治療有效量”將取決于化合物，疾病及其嚴重度，和待治療的受試者的年齡、體重等而變化。概述本公開提供能夠引起免疫應(yīng)答的佐劑組合物。此類佐劑組合物也可被用于通過增強抗原遞呈、通過例如天然殺傷細胞的活化和/或直接的B細胞活化而增強先天免疫應(yīng)答，來增強抗原的免疫原性。還提供了制備所述佐劑組合物的方法以及使用所述佐劑組合物的方法。佐劑組合物本申請中提供的佐劑組合物包含藥學(xué)上可接受的植物油；類黃酮，或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽；以及維生素或者其衍生物或鹽。所述維生素可以是維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。在另一個實施方案中，本申請中所提供的組合物包含具有或不具有異硫氰酸烯丙酯的芥子油(芥子精油)；以及下列的至少一種(a)類黃酮或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽；和(b)維生素，或者其衍生物或鹽。所述維生素可以是維生素A、維生素E、維生素D、維生素C或者其衍生物或鹽。在某些實施方案中，所述類黃酮是黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、兒茶素、花色素或異黃酮，或其衍生物或衍生物的鹽。在某些實施方案中，所述佐劑組合物包含芥子油和兒茶素(例如兒茶素水合物)。在某些實施方案中，所述佐劑組合物包含一種或多種維生素(例如維生素A、維生素E、維生素D、維生素C、其衍生物和鹽)以及植物油載體(例如芥子油)。此類佐劑組合物可任選地包含類黃酮或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽。在某些實施方案中，所述佐劑組合物包含維生素A和油載體(例如芥子油)。在某些實施方案中，所述佐劑組合物包含維生素E和油載體(例如芥子油)。所述佐劑組合物可任選地包含其它添加劑，例如防腐劑、著色劑、香料(flavorant)等。所述佐劑組合物可還包含抗原。藥學(xué)上可接警的棺物油載體如本申請中所使用的“藥學(xué)上可接受的植物油載體”是指適合于通過所需的途徑(例如全身性或粘膜途徑，包括口服和局部遞送途徑)向人或非人動物施用的植物油。本公開包括了可食用的佐劑組合物?！爸参镉汀笔侵缚蓮闹参锘蛑参锂a(chǎn)品中獲得的油，并包括可從種子(包括堅果、谷物)、果實、根、花、莖等獲得的油。實例包括玉米油、芥子油、橄欖油、椰子油、紅花油、豆油等。本公開的植物油包括可從非遺傳修飾和經(jīng)遺傳修飾的植物獲得的油。植物油包括具有發(fā)紅劑性質(zhì)的植物油，即，例如當(dāng)局部用于皮膚時促進毛細血管的擴張和增加血液循環(huán)的油。植物油可源自植物或植物產(chǎn)品(例如，非遺傳修飾或經(jīng)遺傳修飾的植物或植物產(chǎn)品)，或可被合成產(chǎn)生，例如通過混合在植物油中發(fā)現(xiàn)的單個組分，其中所述單個組分可源自植物或植物產(chǎn)品，或被合成產(chǎn)生。所述提供植物油或單個脂肪酸的來源的植物可以是經(jīng)遺傳修飾的。在某些實施方案中，所述植物油是芥子油。如本申請中所使用的“芥子油”是指可從十字花科(Brassicacae)的芥屬植物的種子獲得的油，其中所述油可在提取過程中不加熱而從芥屬植物獲得(例如，可通過冷榨提取法獲得)?？刹患訜岫鴱慕鎸僦参锏姆N子獲得的芥子油比使用基于加熱的提取法(例如，通過使用蒸氣)而可從相同種子獲得的油具有更少量的(例如，不顯著的或不可檢測的)異硫氰酸烯丙酯?？蓮钠浍@得在本公開的組合物中用作載體的芥子油的十字花科的芥屬植物包括但不必限定于芫菁(Brassicarapa)(食用綠植)、黑芥(Brassicanigra)(黑芥)、印度芥菜(Brassicajuncea)(棕芥)、白芥(Brassicahirta)(白芥或黃芥)、埃塞俄比亞芥(Brassicacarinata)(埃塞俄比亞芥)、甘藍(Brassicaoleracea)(里予生芥)、油菜(Brassicacampestris)(包括大油胃(BrassicanapusL.)禾口白(B.campestrisL.))(Brassicanapus)?！敖孀佑汀彼ǖ挠涂砂蓮挠筒俗勋@得的油。在某些實施方案中，所述植物油是芥花籽油。此類芥花籽油可具有下列組成6-8%的飽和脂肪酸(具有3.5棕櫚酸)；14.4%的單不飽和脂肪酸(具有60%的油酸)和69.3%的多不飽和脂肪酸類(具有20%亞油酸，10%的α亞麻酸)。在某些實施方案中，用于本申請所描述的組合物中的植物油可由約14%-70%的單不飽和脂肪酸、約18%-22%的多不飽和脂肪酸和約5%-12%的飽和脂肪酸構(gòu)成。所述單不飽和脂肪酸可具有約18%-51%的芥酸和約7%-22%的油酸，所述多不飽和脂肪酸可具有約9-15%的亞麻酸和約6-%的亞油酸，并且所述飽和脂肪酸可具有約3-4%的棕櫚酸。在某些實施方案中，本申請中描述的組合物中所使用的植物油可由14%-70%的單不飽和脂肪酸、18%-22%的多不飽和脂肪酸和5%-12%的飽和脂肪酸構(gòu)成。在某些實施方案中，本申請中描述的組合物中所使用的植物油可由14%-20%的單不飽和脂肪酸、18%-20%的多不飽和脂肪酸和5%-6%的飽和脂肪酸構(gòu)成。在某些實施方案中，本申請中描述的組合物中所使用的植物油可由約60%-70%8的單不飽和脂肪酸、約18%-22%的多不飽和脂肪酸和約5%-6%的飽和脂肪酸構(gòu)成。當(dāng)所述植物油是芥子油時，在某些實施方案中，所述芥子油可具有下列組成單不飽和脂肪酸(芥酸(18-51%)、油酸(7-22%))、多不飽和脂肪酸(亞麻酸(9-15%)和亞油酸(6-%))和5%的飽和脂肪酸。所述芥子油還可額外地包含其它組分，例如蛋白質(zhì)(30%)、酚醛樹脂、植酸鈣鎂和二巰基硫酮(dithiolthione)0芥子油還可含有490mg/100gm的鈣。芥子油還可含有9-15%的ω3脂肪酸。在一些實施方案中，所述芥子油是可從蕪青獲得的油?？蓮氖徢喃@得的芥子油包括具有下列組成的油5.4%的飽和脂肪酸(具有2.7%的棕櫚酸、1.0%的硬脂酸、0.6%的山崳酸、1.的其它)；67.3%的單不飽和脂肪酸(具有23.3%的油酸、10.0%的鱈烯酸、33.8%的芥酸)和20.6%的多不飽和脂肪酸(具有9.4%的亞油酸、9.9%的α亞麻酸)。在某些實施方案中，所述植物油載體(例如，芥子油)可以是一種或多種植物油的混合物，例如芥子油(添加或不添加AIT)和玉米油；芥子油(添加或不添加AIT)和豆油；芥子油(添加或不添加AIT)和椰子油。本公開還包括具有下列植物油載體的組合物所述植物油載體本身是發(fā)紅劑和/或與發(fā)紅劑油相結(jié)合。發(fā)紅劑油的實例包括冬青油(水楊酸甲酯)、芥子油和迷迭香油(迷迭香(Rosmarinusofficinalis))。類黃酮所述佐劑組合物可包括一種或多種類黃酮或其衍生物或鹽。類黃酮(也已知為生物類黃酮)是在水果和蔬菜中發(fā)現(xiàn)的植物素(phytochemical)。類黃酮有下列類型類黃酮(例如，芹菜素(apigenin)、木犀草素)、黃酮醇類(例如，槲皮素、楊梅黃酮)、黃素酮類(例如，柑桔素、橙皮苷)、兒茶素(例如，表兒茶素、兒茶素、表沒食子兒茶素、沒食子兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯和表沒食子兒茶素沒食子酸酯)、花色素/花青苷類(例如，花青定、花葵素)和異類黃酮(例如，染料木黃酮、黃豆苷元)。在某些實施方案中，所述佐劑組合物可包含表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、兒茶素的一種形式(多酚)。在一些實施方案中，所述佐劑組合物可包含兒茶素，例如兒茶素水合物。在一些實施方案中，所述兒茶素不是兒茶素的多聚體形式。維生素所述佐劑組合物可任選地包含一種或多種維生素，或者其衍生物或鹽。所述一種或多種維生素可以是維生素A、維生素E、維生素D、維生素C及其衍生物或鹽的一種或多種。維生素A.維生素A是脂溶性維生素，其源自兩個來源預(yù)形成的類維生素A(preformedretinoids)和維生素原類胡蘿卜素類。類維生素A(例如視黃醛和視黃酸)在動物來源(例如肝、腎、卵和乳制品)中被發(fā)現(xiàn)。類葫蘿卜素(例如胡蘿卜素(其具有最高的維生素A活性))在植物(例如深色蔬菜(darkvegetable)或黃色蔬菜(yellowvegetable)和胡蘿卜)中被發(fā)現(xiàn)。維生素A也已知為視黃醇、視黃酸、抗干眼醇、維生素A醇、維生素Al、全-反式-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烷-1-基)-2，4，6，8-任四烯-1-醇。在某些情況下，維生素A的酸衍生物全反式視黃酸(ATRA)可被包含在所述佐劑組合物中。在某些情況下，所述佐劑組合物可包含類維生素A，例如異維A酸(Ro4-3780)、阿維A酯(R010-9359;合成的類維生素A)或莫維A胺(Ro11-1430)。在某些情況下，維生素A棕櫚酸酯(VA)可被包含在所述佐劑組合物中。維生素E.在8種發(fā)揮維生素E活性的天然物質(zhì)(α-、β-、δ-和Y-生育酚類以及α-、β-、δ-和Y-生育三烯酚類)中，α-生育酚(α_Τ)傳統(tǒng)地被認為是最重要的維生素，因為當(dāng)在動物模型系統(tǒng)中評估時，其在所有維生素中發(fā)揮最高的生物學(xué)活性。維生素E也與(士)-α-生育酚和DL-all-rac-α-生育酚、5，7，8_三甲基母育酚、D-α-生育酚、2，5，7，8-四甲基-2-(4',8',12'-三甲基十三烷基)_6_色原烷醇和非氧化型(+)-α-乙酸生育酚和相關(guān)的all-rac-α-乙酸生育酚同義。相關(guān)的分子是D-α-琥珀酸生育酚、琥珀酸維生素Ε。在某些實施方案中，包含在所述佐劑組合物中的維生素E可以是α-生育酚(α-T)。在其它情況下，維生素E類似物(例如α琥珀酸生育酚(α_T0S))可被包含在所述佐劑組合物中。維生素D.維生素D是一組脂溶性激素原，其兩種主要形式是維生素D2(或麥角沉鈣醇)和維生素D3(或膽鈣化醇)。通過陽光照射、食物和補充物獲得的維生素D在生物學(xué)上是惰性的并且必須經(jīng)歷兩次羥化反應(yīng)而在體內(nèi)被活化。骨化三醇(1，25_二羥膽鈣化醇)是在體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的維生素D的活性形式。術(shù)語維生素D是指這些代謝產(chǎn)物和這些物質(zhì)的其它類似物。在某些實施方案中，所述佐劑組合物可包含1，25-二羥維生素D3(DHVD3)。維生素C.維生素C或L-抗壞血酸對于人而言是必需的營養(yǎng)物?？箟难猁}(抗壞血酸的離子)是所有動物和植物中許多關(guān)鍵的代謝反應(yīng)所需的。維生素C的藥效團是抗壞血酸鹽離子。在活的生物體中，抗壞血酸鹽是抗氧化劑，因為其保護身體免受氧化應(yīng)激，并且其是若干至關(guān)重要的酶促反應(yīng)中的輔因子。維生素C純粹是抗壞血酸的L-對映體；相反的D-對映體不具有生理學(xué)意義。添加劑在某些實施方案中，所述佐劑組合物的植物油載體可包含異硫氰酸烯丙酯(AIT)。異硫氰酸烯丙酯(AIT)也被稱為揮發(fā)性芥子油或芥子精油或芥子油。AIT是式為CH2CHCH2NCs的有機硫化合物。AIT導(dǎo)致芥子、辣根和綠芥末(wasabi)的辛辣味道。其微溶于水，但良好地溶于大多數(shù)有機溶劑中。異硫氰酸烯丙酯來自于黑芥或褐色印度芥(brownIndianmustard)的種子。當(dāng)這些芥籽破碎時，黑芥子硫苷酸酶被釋放并且作用于已知為黑芥子硫苷酸鉀(sinigrin)的硫代葡萄糖酸鹽上，以產(chǎn)生異硫氰酸烯丙酯。異硫氰酸烯丙酯對于植物是作為抵抗草食動物的防御；因為其對植物本身是有害的，所以其以無害的硫代葡萄糖酸鹽的形式貯存，與黑芥子硫苷酸酶分離。當(dāng)動物咀嚼植物時，異硫氰酸烯丙酯被釋放，從而驅(qū)趕動物。異硫氰酸烯丙酯在商業(yè)上通過烯丙基氯與硫氰酸鉀的反應(yīng)=CH2=CHCH2C1+KSCN—CH2=CHCH2NCS+KC1而產(chǎn)生。以這種方式獲得的產(chǎn)物有時已知為合成芥子油。異硫氰酸烯丙酯還可通過種子的干餾而被釋放。以這種方式獲得的產(chǎn)物已知為揮發(fā)性芥子油并且純度通常為約92%。其主要在食品中用作調(diào)味劑。合成的異硫氰酸烯丙酯用作殺蟲劑、殺菌劑和殺線蟲劑，并且在某些情況下被用于作物保護。在某些情況下，所述佐劑組合物可由AIT和維生素(例如，維生素A、C、D、E或者其鹽或衍生物的一種或多種)構(gòu)成。在某些情況下，所述佐劑組合物可由AIT和類黃酮(例如兒茶素，例如兒茶素水合物)構(gòu)成。在某些情況下，所述佐劑組合物可由AIT、維生素(例如，維生素A、C、D、E或者其鹽或衍生物的一種或多種)和類黃酮(例如兒茶素，例如兒茶素水合物)構(gòu)成。所述佐劑組合物可包含含有角鯊烯的MF59，其是已在動物和人研究中顯示出佐劑特性的類萜植物衍生物。然而，在某些實施方案中，所述佐劑組合物中可不包含MF59或角鯊烯。因此，在一些實施方案中，本申請中所提供的佐劑組合物包含類黃酮；藥學(xué)上可接受的油載體；和任選地選自維生素A、維生素E和維生素C的一種或多種維生素，但不包含MF59或角鯊烯。所述佐劑組合物可包含皂苷及其衍生物QS-21。然而，在某些實施方案中，皂苷可不被包含在所述佐劑組合物中。因此，在一些實施方案中，本申請中所提供的佐劑組合物包含類黃酮；藥學(xué)上可接受的油載體；和任選地選自維生素A、維生素E和維生素C的一種或多種維生素但不包含皂苷或其衍生物。在結(jié)構(gòu)上與天然存在的類異戊二烯佐劑相似的葉綠醇的衍生物膳食二萜醇(dietaryditerpenealcohol)引起所有主要IgG亞類(特別是IgG2a)的增加的滴度和細胞毒性效應(yīng)T細胞應(yīng)答。所述佐劑組合物可包含葉綠醇或其衍生物。然而，在某些實施方案中，葉綠醇可不被包含在所述佐劑組合物中。因此，在一些實施方案中，本申請中提供的佐劑組合物包含類黃酮；油載體和任選地選自維生素A、維生素E和維生素C的一種或多種維生素，但不包含葉綠醇或其衍生物。所述佐劑組合物可包含其它添加劑，例如明膠、抗生素、山梨醇、蔗糖、乳糖、其它糖類、生物粘附劑(bioadhesive)、粘膜粘著劑(例如透明質(zhì)酸或其衍生物，例如HYAFF)、親水性聚合物和水凝膠類、聚氧化乙烯同聚物、殼聚糖、蜂蠟等。所述佐劑組合物可包含免疫原性增強劑，例如脂多糖類、腸毒素類例如來自大腸桿菌(Escherichiacoli)的不耐熱毒素、來自霍亂弧菌(Vibriocholerae)的霍亂毒素、toll樣受體激動劑(例如，CpG或CpG寡核苷酸)。例如，可將所述佐劑組合物與其它疫苗遞送系統(tǒng)例如明礬、脂質(zhì)體、水包油乳劑組合?？捎么蟮?、被緩慢代謝的大分子(例如蛋白質(zhì)、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、多聚氨基酸、氨基酸共聚物和滅活的病毒顆粒)來配制所述佐劑組合物。微粒載體(particulatecarrier)的實例包括從聚甲基丙烯酸甲酯聚合物衍生的載體以及從聚(交酯類)和已知為PLG的聚(丙交酯-co-乙交酯)衍生的微粒。所述佐劑組合物可包括包含突變的A亞基和B亞基的全毒素的突變體形式(例如來自大腸桿菌的)，其可以是寡聚的，如在野生型全毒素中一樣。B亞基優(yōu)選是未突變的。然而，預(yù)期可與B亞基相分離而使用突變的A亞基，以基本上純的形式或與其它試劑相復(fù)合，所述其它試劑可替代B亞基和/或其功能性貢獻。用于所述組合物的LT突變體包括具有一個或多個下列突變的突變體A亞基中位置63處的絲氨酸的突變和A亞基中位置72處的丙氨酸的突變，例如，位置63處的絲氨酸被賴氨酸置換以及位置72處的丙氨酸被精氨酸置換。所述佐劑組合物可包含霍亂毒素(“CT")或者其去毒突變體，或者從生物可降解的且無毒性的材料(例如，聚(α-羥酸)、聚羥丁酸、聚原酸酯、聚酐、聚己酸內(nèi)酯等)形成的微粒(即，直徑約IOOnm至約150μm,更優(yōu)選直徑約200nm至約30μm和更優(yōu)選直徑約500nm至約IOym的顆粒)?？墒褂镁?α-羥酸)，特別是由聚(丙交酯)(〃PLA")(其為D，L-丙交酯與乙交酯或乙醇酸的共聚物)例如聚(D，L-丙交酯-co-乙交酯)(〃PLG"或"PLGA")或D，L-丙交酯與己內(nèi)酯的共聚物，來將本申請中公開的佐劑組合物配制為微粒。所述微?？稍醋愿鞣N聚合起始材料的任一種，所述各種聚合起始材料具有各種分子量并且在共聚物(例如PLG)的情況下具有各種丙交酯乙交酯比率，對其的選取將主要是個選擇的問題，部分取決于共施用的抗原。如果所述組合物包含抗原，抗原可被圈閉在微粒內(nèi)，或者可被吸附于其表面上。在某些實施方案中，本申請中公開的組合物包含免疫調(diào)節(jié)因子，例如能夠調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的蛋白質(zhì)。免疫調(diào)節(jié)因子的非限制性實例包括淋巴因子(也已知為細胞因子)例如IL-6、TGF-i3、IL-l、IL-2、IL-3等)；和趨化因子(例如，分泌的蛋白質(zhì)例如巨噬細胞抑制因子)。某些細胞因子例如TRANCE、flt-3L和⑶40L的分泌形式能夠增強APC的免疫刺激能力。可被單獨使用或與本申請中公開的組合物結(jié)合使用的細胞因子的非限制性實例包括白細胞介素-2(IL-2)、干細胞因子(SCF)、白細胞介素3(IL-3)、白細胞介素6(IL-6)、白細胞介素12(IL-12)、G-CSF、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、白細胞介素_1α(IL-1.α)、白細胞介素-11(IL-Il)、MIP-Iγ、白血病抑制因子(LIF)、c-kit配體、血小板生成素(TP0)、CD40配體(CD40L)、腫瘤壞死因子相關(guān)激活誘導(dǎo)因子(TRANCE)和flt3配體(flt-3L)。所述佐劑組合物可包含乳化劑(例如卵磷脂)，例如為兩性的且對于人和/或獸醫(yī)學(xué)用途是可接受的磷脂類和/或表面活性劑。所述表面活性劑可以是離子性的(例如Tween80)、陽離子性的(例如CTAB)或兩性離子性的(例如CHAPS)。表面活性劑對于人和/或獸醫(yī)學(xué)用途的可接受性可由本領(lǐng)域技術(shù)人員來確定。如果表面活性劑分子的一部分是疏水性的而一部分是親水性的，則此表面活性劑是兩親的。用于本申請中公開的佐劑組合物的表面活性劑的實例包括但不限于Tween表面活性劑和Span表面活性劑。Tween和Span表面活性劑包括但不限于單月桂酸酯(Tween20,Tween21、Span20)、單棕櫚酸酯(Tween40、Span40)、單硬脂酸酯(Tween60、Tween61、Span60)、三硬酯酸酯(Tween65、Span65)、單油酸酯(Tween80、Tween81、Span80)和三油酸酯(Tween85、Span85).所述佐劑組合物可包含接近生理條件所需的藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)，例如pH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑等，例如醋酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、乳酸鈉、磷酸鹽緩沖液等。所述佐劑組合物可包含藥用發(fā)紅劑(medicinalrubefacient)，例如辣椒素(源自辣椒，辣椒(Capsicumminimum))、水楊酸鹽類(例如冬青油，水楊酸甲酯)、煙酸酯、擦洗用酒精、普通草本發(fā)紅劑包括丁香(Eugeniacaryphyllus)、大蒜(Alliumsativum)、姜(Zingiberofficinale)、辣根(Cochleariaarmoracia)、芥子(例如白芥或黑芥)、蕁麻(Urticadioica)、迷迭香油(Rosmarinusofficinalis)、蕓香(Rutagraveolens)。^M可將本申請中公開的佐劑組合物與一種或多種抗原組合施用?？墒褂闷谕T導(dǎo)針對其的免疫應(yīng)答的任何抗原。這樣的抗原可從病毒、真菌、或細菌或其它人和/或動物病原體、或癌細胞獲得。所述抗原可以是變應(yīng)原。全長蛋白質(zhì)或其片段以及經(jīng)修飾的或未修飾的蛋白質(zhì)可用作抗原。抗原還可包括多糖。在一些情況下，抗原可由DNA或RNA(例如源自病原體或癌細胞的)編碼。癌抗原。許多人類癌癥表達特異于癌細胞的細胞表面分子，即，它們不被正常人的體細胞以可檢測水平或顯著水平表達。此類抗原的實例包括但不限于下列各種糖脂類和多糖、A-甲胎蛋白(AFP)和癌抗原CA125、CA15-3和CA19-9。12AFP血清AFP上升到異常高的值發(fā)生在幾種惡性疾病(包括非精原細胞瘤睪丸癌和原發(fā)性肝細胞癌)和一些良性疾病(包括肝炎和肝硬化)中。CA125癌抗原125(CA125)是與上皮卵巢癌相關(guān)的表面抗原，并且迄今為止CA125是殘留上皮卵巢癌的最靈敏的標(biāo)志物。CA125也可在患有肺癌、宮頸癌、輸卵管癌以及子宮癌和子宮內(nèi)膜異位癥的患者中升高。CA15-3癌癥抗原15-3(CA15_3)用于就復(fù)發(fā)，特別是轉(zhuǎn)移性疾病而術(shù)后監(jiān)控乳腺癌患者。已顯示CA15-3在卵巢癌復(fù)發(fā)的早期檢測中是有用的。CA15-3水平也在結(jié)腸腫瘤、肺腫瘤和肝腫瘤中增加。CA19-9血清CA19-9水平通常在患有某些胃腸惡性腫瘤(例如胰腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌和肝癌)的受試者中升高。持續(xù)升高的血清CA19-9值可能與進行性的惡性病和不良治療反應(yīng)相關(guān)聯(lián)。減小的CA19-9值可標(biāo)示著有利的預(yù)后和對治療良好的反應(yīng)。朊病毒抗原。傳播性海綿狀腦病(TSE)是特征在于快速進行性衰退(progressivedeterioration)(在認知功能和/或協(xié)調(diào)方面)的一組神經(jīng)退行性疾病，其總是導(dǎo)致死亡。TSE在人和動物中發(fā)生。TSE的最可能的原因是根據(jù)羊瘙癢癥(朊病毒疾病最古老的已知形式)命名的被稱為I^rPSc的朊蛋白形式，其其源自綿羊和山羊。朊病毒如何引起腦損傷目前還不清楚，但所有的假設(shè)都暗示I^rrec對天然朊蛋白(PrPC)的翻譯后修飾以形成淀粉樣蛋白纖維是發(fā)病機制中的中心事件。在人中，克羅伊茨費爾特-雅各布病(CJD)是最普遍的TSE(發(fā)病率1/百萬/年)。臨床上，患者可被診斷為可能的或很可能CJD患者，但神經(jīng)病理學(xué)確認是獲得確切診斷所必需的。神經(jīng)病理學(xué)檢查基于組織學(xué)損害的三元素棘細胞層水腫、神經(jīng)元喪失和反應(yīng)性星形膠質(zhì)化。朊病毒蛋白最初被描述為導(dǎo)致傳播性海綿狀腦病(TSE)的傳染劑的關(guān)鍵組分。TSE是一組神經(jīng)退行性病癥，其包括人中的克羅伊茨費爾特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakobdisease)和庫魯病、牛海綿狀腦病、綿羊瘋癢病以及鹿和麋鹿中的慢性消耗性疾病。雖然對TSE的病理生理學(xué)仍然知之甚少，但幾乎不變的特征是PrP(羊瘙癢癥ft~P，稱為ft~PSC)的異常同種型在患病個體被感染的組織中的積累。發(fā)現(xiàn)PrP是由宿主的獨特基因ftTip(在人中為PRNP)編碼的，其結(jié)構(gòu)在物種之間非常保守。其生理學(xué)產(chǎn)物以可變的水平在許多組織中被表達為稱作細胞I^rP(ft~PC)的GPI錨定膜蛋白。病原體。與本申請中描述的佐劑組合物組合使用的抗原包括源自任何病原體(包括病毒、細菌或真菌、或癌癥)的抗原。此類抗原包括，例如病原體的結(jié)構(gòu)以及非結(jié)構(gòu)蛋白(以它們的天然形式或以經(jīng)優(yōu)化而增強免疫原性的形式)例如HIV的Env、Gag和Pol，或RSV的F蛋白、或流感病毒的HA。可包含在所述佐劑組合物中的其它抗原是來自腦膜炎奈瑟氏菌(N.meningitidis)血清群B的蛋白質(zhì)抗原，例如國際專利申請公開案W099/24578；W099/36544；W099/57280；WO00/2M30和W096/29412中的蛋白質(zhì)抗原；來自腦膜炎奈瑟氏菌血清群B的外膜囊泡(outermembranevesicle)(OMV)制備物，例如國際專利申請W00152885中公開的那些；來自腦膜炎奈瑟氏菌血清群A、C、W135和/或Y的寡糖抗原；來自肺炎鏈球菌(Str印tococcuspneumoniae)的糖類抗原、來自甲型肝炎病毒的抗原(例如滅活的病毒)、來自乙型肝炎病毒的抗原(例如表面和/或核心抗原)、來自丙型肝炎病毒、百日咳博德特菌(Bordetellapertussis)的抗原(例如百日咳全毒素(pertussisholotoxin)(PT))和來自百日咳博德特菌的絲狀血球凝集素(FHA)(任選地也與百日咳桿菌粘附素和/或凝集原2相組合)、白喉抗原(例如白喉類毒素)、破傷風(fēng)抗原(例如破傷風(fēng)類毒素)、來自流感嗜血桿菌B型(HaemophilusinfluenzaeB)的糖類抗原、來自淋球菌(N.gonorrhoeae)的抗原(例如國際專利申請公開案W099/24578；W099/36544；W099/57280)。其它目的抗原包括來自下列的抗原肺炎衣原體(Chlamydiapneumoniae)(例如國際專利申請W00202606；國際專利申請公開案:W099/27105；W000/27994；W000/37494)、沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis)(例如國際專利申請W099/28475)、齦紫單胞菌(Porphyromonasgingivalis)、脊髓灰質(zhì)炎抗原(例如IPV或0PV)、狂犬病抗原(例如凍干的滅活病毒(例如77，RabAvert.TM))、麻疹、腮腺炎和/或風(fēng)疹抗原、流感抗原(例如血球凝集素和/或神經(jīng)氨酸苷酶表面蛋白、呼吸道合胞病毒(例如F或G蛋白)、病毒的嵌杯病毒科(例如諾羅病毒(norovirus)和沙波病毒(sapovirus))、呼腸孤病毒科(例如輪狀病毒)、單純皰疹病毒、朊病毒、沙門氏菌(Salmonellakicteria)、大腸桿菌、霍亂弧菌(Vibriocholera)、粘膜炎莫拉菌(Moraxellacatarrhalis)、無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)(B組鏈球菌(streptococcus))[例如國際專利申請PCT/GB01/04789]、釀膿鏈球菌(Streptococcuspyogenes)(Α組鏈球菌)[例如國際專利申請PCT/GB01/04789]、金黃色葡萄球菌(Maphlylococcusaureus)、呼吸道合胞病毒(例如F或G蛋白)、病毒的嵌杯病毒科(例如諾羅病毒和沙波病毒(sapovirus))、呼腸孤病毒科(例如輪狀病毒)、單純皰疹病毒、沙門氏菌?？蓪⑻腔蛱穷惪乖Y合至載體蛋白。例如，示例性的載體蛋白是細菌毒素或類毒素(例如白喉毒素、霍亂毒素、大腸桿菌不耐熱類毒素或破傷風(fēng)類毒素、CRM.sub.197白喉類毒素)，腦膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白[歐洲專利申請0372501]，合成肽[歐洲專利申請0378881和0427347]，熱激蛋白[國際專利申請W093/17712]，百日咳蛋白[國際專利申請W098/58668；也參見EP04711771]，來自流行性嗜血桿菌(H.influenzae)的蛋白D[國際專利申請WO00/56360.]，來自艱難梭菌(C.difficile)的毒素A或B[國際專利申請WO00/61761]?？墒褂萌魏芜m當(dāng)?shù)木Y合反應(yīng)，必要時使用任何適當(dāng)?shù)倪B接體。編碼抗原的核酸。所公開的免疫調(diào)節(jié)/佐劑組合物可包含編碼抗原、編碼上述多肽抗原或蛋白質(zhì)抗原的核酸?？捎珊怂峋幋a并且作為基于DNA或RNA的疫苗和載體疫苗被提供的抗原的實例包括用于HIV、皰疹、肝炎和流感的疫苗。組合物的實例示例性組合物提供于下面的表1中。表權(quán)利要求1.一種組合物，其包含芥子油；和如下至少一種(a)類黃酮或類黃酮衍生物或類黃酮衍生物的鹽；和(b)維生素或者其衍生物或鹽，其中所述維生素選自維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包含所述類黃酮。3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包含所述維生素。4.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包含所述類黃酮和所述維生素。5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述類黃酮是兒茶素。6.權(quán)利要求1的組合物，其中所述維生素是維生素E。7.權(quán)利要求1的組合物，其中所述維生素是維生素A。8.權(quán)利要求5的組合物，其還包含維生素A。9.權(quán)利要求1的組合物，其中所述維生素是維生素C。10.權(quán)利要求5的組合物，其中所述維生素是維生素E。11.權(quán)利要求1的組合物，其還包含異硫氰酸烯丙酯。12.權(quán)利要求1的組合物，其還包含抗原。13.調(diào)節(jié)受試者中免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所述受試者施用權(quán)利要求1的佐劑組合物。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述受試者是哺乳動物。15.權(quán)利要求13的方法，其中所述施用是通過選自下列的途徑鼻內(nèi)、經(jīng)肺、舌下、口服、含服、陰道內(nèi)、直腸內(nèi)、經(jīng)眼、真皮內(nèi)和血管內(nèi)。16.制備權(quán)利要求1的組合物的方法，所述方法包括將所述芥子油與下列的至少一種混合所述類黃酮，或所述類黃酮衍生物或所述類黃酮衍生物的鹽；和所述維生素或者其衍生物或鹽，其中所述維生素選自維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。17.一種組合物，其包含藥學(xué)上可接受的植物油；類黃酮，或類黃酮衍生物，或類黃酮衍生物的鹽；和維生素，或者其衍生物或鹽，其中所述維生素選自維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。18.權(quán)利要求17的組合物，其中所述藥學(xué)上可接受的油是發(fā)紅劑油。19.權(quán)利要求17的組合物，其中所述類黃酮是兒茶素。20.權(quán)利要求17的組合物，其中所述維生素是維生素E。21.權(quán)利要求17的組合物，其中所述維生素是維生素A。22.權(quán)利要求17的組合物，其中所述維生素是維生素C。23.權(quán)利要求19的組合物，其還包含維生素A。24.權(quán)利要求17的組合物，其還包含異硫氰酸烯丙酯。25.權(quán)利要求17的組合物，其還包含抗原。26.調(diào)節(jié)受試者中免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括向所述受試者施用權(quán)利要求17的佐劑組合物。27.權(quán)利要求17的方法，其中所述受試者是哺乳動物。28.權(quán)利要求17的方法，其中所述施用是通過選自下列的途徑鼻內(nèi)、經(jīng)肺、舌下、口服、含服、經(jīng)眼、陰道內(nèi)、直腸內(nèi)、真皮內(nèi)和血管內(nèi)。29.制備權(quán)利要求17的組合物的方法，所述方法包括將下列混合所述藥學(xué)上可接受的油；所述類黃酮，或所述類黃酮衍生物，或所述類黃酮衍生物的鹽；和所述維生素，或者其衍生物或鹽，其中所述維生素選自維生素A、維生素E、維生素D、維生素C。全文摘要本發(fā)明提供了能夠調(diào)節(jié)受試者中的免疫應(yīng)答的佐劑組合物。此類佐劑組合物還可用于增強抗原的免疫原性。還提供了制備所述佐劑組合物的方法以及使用所述佐劑組合物的方法。文檔編號A61K31/00GK102307477SQ201080006958公開日2012年1月4日申請日期2010年1月4日優(yōu)先權(quán)日2009年1月5日發(fā)明者M·瓦吉蒂,S·派德拉申請人:埃皮托吉尼西斯股份有限公司