專利名稱：人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明特別涉及一種人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用，屬于日化產(chǎn)品領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
皮膚被細(xì)分為表淺較薄的表皮、含更多纖維的真皮及皮下組織。表皮由覆蓋于 胚胎表面的外胚層分化而來(lái)，由多層鱗狀上皮構(gòu)成，從厚厚的頭皮到全身最薄的眼瞼皮膚 (0.04mm)，其厚度各有所不同。表皮又可以細(xì)分為角朊細(xì)胞、樹枝狀細(xì)胞和麥克爾細(xì)胞； 真皮主要由中胚層發(fā)育而來(lái)，位于表皮之下，與表皮之間靠一層基底膜帶分開(kāi)。真皮主要 由結(jié)締組織構(gòu)成，也包括了血管、神經(jīng)、肌肉、淋巴、汗腺和皮脂腺，淺在較薄的被稱為乳頭 層，而深層較厚的則被稱為網(wǎng)狀層。真皮的主要成分是膠原，膠原纖維在乳頭層含量很少 且排列不規(guī)則，但在網(wǎng)絡(luò)層則呈束狀平行于表面排列；皮下組織或稱脂膜，是體表的淺筋 膜，由疏松結(jié)締組織和脂肪組織構(gòu)成。真皮向皮下組織內(nèi)伸出許多大小不等的膠原纖維 束，使皮膚與皮下組織牢固連接，兩者之間無(wú)明顯界限(Wayne F. Larrabee, Jr. Kathleen H. Makielski, Jenifer L. Henderson，主譯王原路、張金明、何禎平，第二版，面部外科解剖 圖解[M].廣東廣東科技出版社，2006,45-46;王德昌，傅洪濱，王一兵主編.人體皮膚組 織學(xué)彩色圖譜[M].山東山東科學(xué)技術(shù)出版社，1999，4-8)。細(xì)胞老化就是人體衰老的根本原因。25歲以后，人自身的生理功能自行性減退，衰 老的細(xì)胞大于新生細(xì)胞。加上外界影響(自然環(huán)境、生活壓力、特別是女性生育哺乳后自然 環(huán)境的傷害、輻射、接觸性傷害等)和機(jī)體自身的原因(免疫力低下、內(nèi)分泌失調(diào)、臟器功能 減弱、病毒侵害、自由基侵入等)以致人會(huì)整體開(kāi)始衰老。人體的衰老外部最明顯的表現(xiàn)是 皮膚，開(kāi)始出現(xiàn)皺紋，皮膚老化，失去光澤等。美國(guó)科學(xué)家LEVI博士發(fā)現(xiàn)GF細(xì)胞因子，這些 除皺肽是由多種生長(zhǎng)因子組成的多肽生物制品，主要有SCGF(干細(xì)胞生長(zhǎng)肽)、AFGF(酸性 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)肽)、CCTF(細(xì)胞智能調(diào)控肽)和EGF(表皮細(xì)胞生長(zhǎng)肽)組成。SCGF作用 于真皮層的成纖維干細(xì)胞，使處于休眠、損傷的成纖維干細(xì)胞被激活和修復(fù)并成熟分化大 量的成纖維細(xì)胞。人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子(humanstem cell growth factor, hSCGF，又名 LSLCL)是一 種在骨髓造血微環(huán)境中起作用的早期造血刺激因子，具有多種生物活性。其基因定位于人 染色體19ql3. 3，由4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子組成。已知人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有兩種形式，全長(zhǎng)分子hSCGF-α (成熟mRNA完全開(kāi) 放讀碼框972bp，編碼323個(gè)氨基酸)和在C端保守的Ca2+依賴糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域(calcium dependent carbohydrate recognition domain, CRD)內(nèi)缺失 M基酸(erythropoietin， Epo)協(xié)同作用對(duì)紅細(xì)胞系有紅細(xì)胞樣爆發(fā)促進(jìn)活性的截短型分子hSCGF-β (成熟mRNA長(zhǎng) 738bp，編碼245個(gè)氨基酸)，因此屬于C型凝集素(C_type lectin)超家族成員。SCGF作為一種生物活性蛋白，應(yīng)用于化妝品中的關(guān)鍵問(wèn)題是在制備化妝品過(guò)程中 必須要保持SCGF的活性。目前還未有關(guān)于SCGF應(yīng)用于化妝品中的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品 中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用，是 通過(guò)均質(zhì)工藝將人細(xì)胞生長(zhǎng)因子添加在化妝品中，其中，每克化妝品的人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 含量為0. 1 20. Ong，純度為85 99% ；所述的均質(zhì)工藝具體包括以下步驟將化妝品的原料中需要加熱的成分分為油性 組分和水性組分，分別加熱后混合，接著均質(zhì)乳化，再冷卻至37 50°C，加入含有人干細(xì)胞 生長(zhǎng)因子的溶液以及不需加熱的組分，攪拌均勻，真空脫氣；所述的人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子可以是用基因工程方法制備的重組人干細(xì)胞生長(zhǎng)因 子，也可以是應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)液天然分離的人源人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子，人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子包括 hSCGF- α和hSCGF- β兩個(gè)亞型；所述的化妝品包括護(hù)膚類及抗皺產(chǎn)品、清潔類化妝品、功能性化妝品和美容化妝
P
m ；所述的護(hù)膚類及抗皺產(chǎn)品包括潤(rùn)膚霜、冷霜、雪花膏、乳液、眼霜、護(hù)手霜、日霜、晚 霜、防裂膏、花露水、收縮水和化妝水；所述的清潔類化妝品包括清潔霜、洗面乳、沐浴液和剃須用品；所述的功能性化妝品包括美白護(hù)膚品、抗皺護(hù)膚品、保濕護(hù)膚品、祛痘護(hù)膚品和抗 汗護(hù)膚品；
子；


所述的美容化妝品包括粉底霜、香粉、面膜、唇膏和胭脂。
一種抗皺的化妝品，含有相當(dāng)于化妝品質(zhì)量0. 1 20. Oppm的人干細(xì)胞生長(zhǎng)因
一種含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的護(hù)手霜，主要含有如下按質(zhì)量百分比計(jì)的成分
鯨蠟醇4.0-9.0%
精制蜂蠟5.0-8.0%
葵花籽油30-45%
貂油4.0-9.0%
尼泊金甲酯0.01-0.5%
人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 0. 000001 0. 0002% ；
一種含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的眼霜，主要含有如下按質(zhì)量百分比計(jì)的成分
PEA (乳化劑) IPP (棕櫚酸異丙酯) 合成角鯊?fù)?br> 1. 0-3. . 5% 3. 5-5. 5% 0. 5-3. 5% C16-180H(16_18 醇) 0. 3-2.0%AVC (丙烯酸聚合物)Polylift (緊膚劑)Fermiskin (去皺劑)極美人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子
0. 5-2. 5% ； 2. 0-3. 5% 0. 5-2. 3% 0. 5-2. 5% 0. 000001 0. 0002%
5
一種含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的潤(rùn)膚霜，主要含有如下按質(zhì)量百分比計(jì)的成分
ZY-92 (乳化劑)1. 5-3. 5%
ZY-921 (乳化劑)2. 0-4. 5%
C16-180H(16-18 醇)2. 0-4. 5%
白油5. 0-17. 0%
DC-200 (乳化劑)0. 1-1. 0%
硬脂酸1. 0-3. 0%
BTH (抗氧化劑)0. 1-0. 35%
甘油1. 5-4. 5%
漢生膠0. 01-0. 15%
EDTA-2Na (乙二胺四乙酸二鈉)0. 01-0. 15%
三乙醇胺0. 1-0. 35%
極美0. 1-1. 0% ；
人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子0.000001 0. 0002% ；
一種含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的洗手液，主要含有如下按質(zhì)量百分比計(jì)的成分
AC-208 (乳化劑)20ι. 0-45. 0%
6501(椰油酰胺丙基甜菜堿) 2.0-10. 0%
AES-70 (脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉)3.0-7. 0%
氧化胺5. 0-10. 0%
PX(氯二甲苯酚)0.1-1. 0%
IG-300(三氯生)0.1-1. 0% ；
檸檬酸0. 1-1. 0% ；
DMDMH (防腐劑)0.1-0. 5%
人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子0. 000001 0. 0002%。
本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果
(1)本發(fā)明首次將人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子應(yīng)用于化妝品中，含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的化妝品中于4°C環(huán)境中保存，一-個(gè)月內(nèi)仍可檢測(cè)到人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的活性。(2)將人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子按0. 1 20. Ong/g化妝品的量添加于化妝品中，得到的 含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的化妝品于4°C環(huán)境中保存一個(gè)月后，其抗皺性能仍然保持良好。


圖1是hSCGF作用人真皮成纖維細(xì)胞HDF的效果圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。實(shí)施例1人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的獲取從人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中抽提總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。根據(jù)人SCGF全長(zhǎng)基因序列(GenBank Accession No. NM_002975),設(shè)計(jì) PCR 引物。SCGFl 上 游引物序列5 ‘ -CAAGAGTCCAGCTTAATGCAGGCAG-3 ‘，SCGFl 下游引物序列 5' -GCTAGAAGGGGAACTCGCAGACGTA-3‘。以上所獲 CDNA 為模板，通過(guò) PCR 獲取 SCGFl 基因。 SCGF成熟肽編碼序列(SCGF2)PCR引物(GenBank :AB009244. 1)設(shè)計(jì)SCGF2上游5' -ATTT AAAACATATGGGTGCTCGGGGAGCAGAGAG-3 ‘，SCGF2 下游5 ‘ -ATTGGATCCCTAGAAGGGGAACTCGCAG -3'。以 SCGFl 為模板，PCR 反應(yīng)獲得 SCGF2。用 Nde I.BamH I 雙酶切 SCGF2 和 pET_28a(+) 質(zhì)粒，T4 DNA連接酶連接，連接物轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌DH5 α，重組質(zhì)粒pET48a-SCGF構(gòu)建 成功后，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE!3)表達(dá)。表達(dá)的重組人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子通過(guò)Ni2+-NTA柱 純化，獲得目標(biāo)重組蛋白。實(shí)施例2將護(hù)手霜成分進(jìn)行分組，如表1所示，制備得到3種配方的含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 的護(hù)手霜
權(quán)利要求
1.人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用，其特征是通過(guò)均質(zhì)工藝將人細(xì)胞生長(zhǎng)因子 添加在化妝品中，其中，每克化妝品的人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量為0. 1 20. Ong,純度為85 99%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用，其特征是所述的均質(zhì) 工藝具體包括以下步驟將化妝品的原料中需要加熱的成分分為油性組分和水性組分，分 別加熱后混合，接著均質(zhì)乳化，再冷卻至37 50°C，加入含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的溶液以 及不需加熱的組分，攪拌均勻，真空脫氣。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用，其特征是所述的人干 細(xì)胞生長(zhǎng)因子為是用基因工程方法制備的重組人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子或是應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)液天 然分離的人源人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用，其特征是所述的化妝 品包括護(hù)膚類及抗皺產(chǎn)品、清潔類化妝品、功能性化妝品和美容化妝品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用，其特征是所述的護(hù)膚 類及抗皺產(chǎn)品包括潤(rùn)膚霜、冷霜、雪花膏、乳液、眼霜、護(hù)手霜、日霜、晚霜、防裂膏、花露水、 收縮水和化妝水；所述的清潔類化妝品包括清潔霜、洗面乳、沐浴液和剃須用品； 所述的功能性化妝品包括美白護(hù)膚品、抗皺護(hù)膚品、保濕護(hù)膚品、祛痘護(hù)膚品和抗汗護(hù) 膚品；所述的美容化妝品包括粉底霜、香粉、面膜、唇膏和胭脂。
6.一種抗皺的化妝品，其特征在于含有相當(dāng)于化妝品質(zhì)量0. 1 20. Oppm的人干細(xì)胞 生長(zhǎng)因子。
7.一種含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的護(hù)手霜，其特征是通過(guò)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用得到， 主要含有如下按質(zhì)量百分比計(jì)的成分鯨蠟醇4.0-9.0%精制蜂蠟5.0-8.0%葵花籽油30-45%貂油4.0-9.0%尼泊金甲酯0.01-0.5%人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 0. 000001 0. 0002%。
8.一種含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的眼霜，一其特征是通過(guò)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用得到， 主要含有如下按質(zhì)量百分比計(jì)的成分乳化劑PEA 1.,0--3.,.5%棕櫚酸異丙酯IPP 3.,5--5.,5%合成角鯊?fù)?C16-18 醇0.5-3.5%丙烯酸聚合物AVC 0.,3--2.,0%緊膚劑Polylift 0.,5--2.,5% 去敏齊Ll Fermiskin 0.,5--2.,3% 極美0.5-2.5%人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子0. 000001 0. 0002%。
9. 一種含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的潤(rùn)膚霜，其特征是通過(guò)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用得到， 主要含有如下按質(zhì)量百分比計(jì)的成分乳化劑ZY-92 乳化劑ZY-921 C16-18 醇 白油乳化劑DC-200硬脂酸 抗氧化劑BTH 甘油 漢生膠乙二胺四乙酸二鈉三乙醇胺 極美人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子1.5-3. 5%2.0-4. 5% 2. 0-4. 5% 5. 0-17. 0% 0. 1-1. 0% 1. 0-3. 0%0.1-0. 35%1.5-4. 5%0. 01-0. 15% 0. 01-0. 15% 0. 1-0. 35% 0. 1-1. 0% ；0. 000001 0. 0002%。
10. 一種含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的洗手液，其特征是通過(guò)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用得到， 主要含有如下按質(zhì)量百分比計(jì)的成分乳化劑AC-208椰油酰胺丙基甜菜堿6501脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉AES-70氧化胺氯二甲苯酚PX 三氯生IG-300 檸檬酸 防腐劑DMDMH 人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子.20. 0-45. 0% 2. 0-10. 0% 3. 0-7. 0% 5. 0-10. 0% 0. 1-1. 0% 0. 1-1. 0% ； 0. 1-1. 0% ； 0. 1-0. 5% 0. 000001 0. 0002%
全文摘要
本發(fā)明提供了人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子在化妝品中的應(yīng)用，應(yīng)用方法為通過(guò)均質(zhì)工藝將人細(xì)胞生長(zhǎng)因子添加在化妝品中，其中，每克化妝品的人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量為0.1～20.0ng，純度為85～99％。更具體的應(yīng)用方法包括如下步驟將化妝品的原料中需要加熱的成分分為油性組分和水性組分，分別加熱后混合，接著均質(zhì)乳化，再冷卻至37～50℃，加入含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的溶液以及不需加熱的組分，攪拌均勻，真空脫氣即可。本發(fā)明首次將人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子應(yīng)用于化妝品中，在化妝品基質(zhì)材料中人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子仍可以保持良好的活性，得到的含有人干細(xì)胞生長(zhǎng)因子的化妝品抗皺性能儲(chǔ)存一個(gè)月后仍然保持良好。
文檔編號(hào)A61K8/86GK102068391SQ20101061469
公開(kāi)日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2010年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月30日
發(fā)明者任哲, 彭鑫磊, 李久香, 楊柯, 王一飛, 舒輝萍, 錢垂文, 陳海佳 申請(qǐng)人:廣州賽萊拉化妝品科技有限公司