專利名稱：一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法
一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，確切地說它是抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法。尖尾芋(Alocasia eucullatta (Dour) Schott)為天南星科植物假海芋的根莖，生于山澗陰濕處，或樹旁溝邊、河邊。分布于廣東、廣西、四川等地。該植物能清熱、解毒、活血、 消腫，治疔瘡、癰腫、丹毒，跌打損傷，慢性氣管炎、鉤端螺旋體病等疾病。迄今為止，對尖尾芋的研究很少，多見于一般藥效學報道。有關尖尾芋的抗癌藥理活性很少報道，僅見侯學文從中分離得到一個凝集素，其對肺腺癌細胞株P18僅有很少殺傷能力。癌癥是當今社會發(fā)病率高、死亡率高的一種頑痰，目前尚無治愈率較高的藥物的報道。本發(fā)明人在尋找中草藥抗癌活性成分過程中，發(fā)現(xiàn)尖尾芋提取物具有很好的抗腫瘤活性，并且從中獲得多個具有抗癌活性的二苯乙烯、二苯乙烯苷、腦苷類化合物等多種骨架類型的化合物。本發(fā)明的目的在于提供一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其工藝簡單實用，為尖尾芋的應用提供了廣泛的途徑。本發(fā)明的目的是通過如下方案實現(xiàn)的以尖尾芋(Alocasia eucullatta (Dour) Schott)為原料，采用溶劑提取法.溶劑萃取法.樹脂吸附法，正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結舍濃縮干燥、冷凍干燥，噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋總提取物，將制成的尖尾芋總提取物作為抗癌活性成分用于治療多種癌癥。本發(fā)明的優(yōu)點是尖尾芋提取物工藝簡單實用，抗癌療效好，并且無毒副作用。為尖尾芋應用提供了廣泛的途徑。下面結合實施例對本發(fā)明做進一步詳細地描述。 實施例1.溶劑提取法/溶劑萃取法全用提取制備尖尾芋提取物1. 2kg用50%乙醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130g乙醇提取物。將乙醇提取物混懸于水中，用乙酸乙酯萃取，經(jīng)濃縮干燥即可得到尖尾芋提取物，收率為1.2%。2.溶劑提取法/樹脂吸附法合用提取制備尖尾芋提取物尖尾芋1.0kg用80%乙醇在90°C下回流，合并提取液，濃縮得到130g乙醇提取物。乙醇提取物上D-IOl型吸附樹脂柱，先用水、5%乙醇/水洗脫以除去色素和雜質，而后用60%乙醇/水洗脫。其中60%乙醇/水洗脫部分減壓濃縮除乙醇，再經(jīng)冷凍干燥可得到尖尾芋提取物，收率為1.0%。3.尖尾芋提取物的體外抑瘤實驗3.1細胞株、試劑及儀器人宮頸癌Hela細胞株購自中科院細胞庫；DMEM培養(yǎng)液，Gibco產(chǎn)品；胎牛血清， Gibco產(chǎn)品；胰蛋白酶，Gibco產(chǎn)品；DMSO溶液，sigma公司；96孔板，Corning公司；Revco 3000 培養(yǎng)箱，Thermo 公司；Multishkan MK3 酶標儀，Thermo 公司。3. 2腫瘤細胞培養(yǎng)方法人宮頸癌Hela細胞株用含10 %胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37°C， 5% CO2濃度及飽和濕度。當細胞生長至對數(shù)生長期時，用25%胰酶消化細胞，洗滌吹散細胞稀釋至106/ml，每孔100 μ L接種于96孔板，以備MTT實驗。3. 3細胞增殖實驗(MTT法)尖尾芋提取物溶于DMSO溶液，取含1%。DMS0的尖尾芋提取物溶液，用含10%胎牛血清的DMEM溶液配成濃度分別為100、50、20、2 μ g/mL的尖尾芋提取物溶液，每孔100 μ L 接種于96孔板，混勻，使尖尾芋提取物每孔終濃度分別達到50、25、10、1 μ g/mL，放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)16、32、48h。每孔加入5mg/mLMTT溶液5 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)5h，測定各孔吸光度。以不加任何處理的培養(yǎng)細胞為空白對照，以單用培養(yǎng)細胞作為陰性對照。每個濃度梯度均設置12個平行組，分別計算細胞抑制率。按照以下公式計算抑制率抑制率=1-(實驗組吸光度平均值/對照組吸光度平均值)X 100%結果見表1表1尖尾芋提取物對Hela細胞體外增殖的抑制作用
權利要求
1.一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于以植物尖尾芋(Alocasia eucullatta(Dour) Schott)為原料，采用溶劑提取法、溶劑萃取法，樹脂吸附法、正相柱層析法、反相柱層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥常用干燥方法制備成尖尾芋提取物，將制成的尖尾芋提取物作為抗癌活性成分，使之在癌癥治療中進行應用。
2.一種如權利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于植物原料尖尾芋(Alocasia eucul latta (Dour) Schott)可以是根莖，也可以是枝葉、果實等全草的任一部位，原料可以是新鮮采集的，也可以是經(jīng)過炮制的。
3.—種如權利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于作為抗癌活性成分的尖尾芋提取物包括其中所含的各種類型的有機酸、二苯乙烯、二苯乙烯苷、甾體皂甙類化合物以及其它骨架類型的化合物。
4.一種如權利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的溶劑提取法中，可選用水、甲醇、乙醇、正丁醇或者其它低級脂肪醇中的一種溶媒，在室溫下浸潤提取或者用超聲波振蕩儀超聲振蕩提取，或者在加熱狀態(tài)下浸潤提取或回流提取，提取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
5.一種如權利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物制備方法，其特征在于所采用的溶劑萃取法中，可將經(jīng)水或者低級脂肪醇中的一種溶媒或者混合溶媒提取并經(jīng)所獲得的提取物混懸于水中，用正丁醇或含水正丁醇直接進行萃取，或者經(jīng)低極性溶媒(如石油醚、二氯甲烷、三氯甲烷等中的一種或多種)脫脂后，再用正丁醇或含水正丁辭進行萃取，萃取次數(shù)可以是一次，也可以是多次。
6.一種如權利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于所采用的樹脂吸附法中，樹脂可選用D-IOl型吸附樹脂，XAD-2型吸附樹脂或者CHP-20P型吸附樹脂以及其它類型的吸附樹脂，洗脫溶媒用水、甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇、含水乙醇或者含水丙酮中的一種或多種，洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
7.—種如權利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于所采用的正相柱層析法中，可選用常壓或加壓硅膠柱層析或者氧化鋁柱層析，所用柱填料可選柱層析用硅膠或氧化鋁，或者薄層層析用硅膠或氧化鋁，洗脫可選用苯/丙酮、二氯甲烷/丙酮、苯/甲醇、二氯甲烷/甲醇、三氯甲烷/甲醇.乙酸乙酯/甲醇，苯/丙酮/水、二氯甲烷/丙酮/水、三氯甲烷/丙酮/水、二氯甲烷/甲醇/水、三氯甲烷/甲醇/水或者乙酸乙酯/甲醇/水等溶媒中的一種或者多種，洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
8.—種如權利要求1所述的抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，其特征在于所采用的反相柱層析法，可選用常壓或加壓反相柱層析，所用柱填料可選十八烷基鍵合相(ODS) 或八烷基鍵合相，洗脫劑用含水甲醇或含水乙腈，洗脫時可以等濃度洗脫，也可以梯度洗脫。
全文摘要
本發(fā)明是一種抗癌新藥尖尾芋提取物的制備方法，它以植物尖尾芋(Alocasia eucullatta(Dour)Schott)為原料，制成可以治療癌癥的活性提取物。采用溶劑提取法、溶劑萃取法、樹脂吸附法、正相柱層析法、反相柱層析法、凝膠層析法等工藝中的一種或者多種工藝，并結合濃縮干燥、冷凍干燥、噴霧干燥等常用干燥方法制備成尖尾芋提取物，將制成的尖尾芋提取物作為抗癌活性成分在癌癥治療中進行應用。
文檔編號A61K125/00GK102526379SQ201010608330
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月23日 優(yōu)先權日2010年12月23日
發(fā)明者馮怡, 王源, 鄭向煒, 阮克鋒 申請人:上海張江中藥現(xiàn)代制劑技術工程研究中心