專利名稱：一種竹紅菌藥材及其制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種竹紅菌藥材，以及含有竹紅菌藥材的藥物制劑的質(zhì)量控制方法， 屬于中藥質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
竹紅菌是肉座菌科真菌竹生小肉座菌Hypocrella Bambusae (B. et Br. ) Sacc.的 干燥子座，分布于云南、四川、西藏等地，藥材主產(chǎn)于滇西北的大理州、麗江市、迪慶州。本品 為云南特色民族藥物，在滇西北納西族、白族、彝族等民族醫(yī)藥中應(yīng)用廣泛。(《云南中藥志》 第一卷，云南科技出版社1990年第一版，第268 269頁(yè)；《中華本草》第一卷，上?？萍汲?版社1999年第一版，第501 502頁(yè))云南省微生物研究所在二十世紀(jì)八十年代初首先發(fā)現(xiàn)竹紅菌中含有茈醌類光敏 活性物質(zhì)(萬(wàn)象義等一種新的光化學(xué)療法藥物-竹紅菌甲素，科學(xué)通報(bào)，1980年第24期， 第1148 1149頁(yè)；竹紅菌中乙素的分離與鑒定，云南大學(xué)學(xué)報(bào)，1985年第4期，第461 463頁(yè))，在此基礎(chǔ)上，云南省人民醫(yī)院、昆明振華制藥廠等開發(fā)了治療外陰白斑病變的中 藥制劑“竹紅菌軟膏”，收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二十冊(cè) (WS3-B-3824-98)。后來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)竹紅菌還含有竹紅菌丙素等成分(鄭立雄等，云南民族 藥物竹紅菌的化學(xué)成分研究，云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010年第8期，第25 29頁(yè))。《云南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》2005年版收載竹紅菌藥材(云YCBZOO18-2005)，但其主要鑒 別方法是藥材性狀，以及粉末顯微等。理化鑒別只有顯色反應(yīng)和乙醇提取液最大吸收波長(zhǎng) 檢測(cè)。顯色反應(yīng)是在紫外光燈下觀察竹紅菌橫切面的熒光，缺乏專屬性。檢測(cè)乙醇提取液 的最大吸收波長(zhǎng)，針對(duì)的是茈醌類大類成分的吸收，對(duì)于竹紅菌藥材，以及含竹紅菌的藥物 制劑、日化產(chǎn)品等均缺乏專屬性。鑒于目前竹紅菌藥材標(biāo)準(zhǔn)，以及含竹紅菌的藥物制劑、日化產(chǎn)品等，均沒(méi)有針對(duì)其 有效成分竹紅菌甲素、乙素、丙素為指標(biāo)的薄層色譜鑒別方法，發(fā)明一種能快速準(zhǔn)確地進(jìn)行 竹紅菌藥材，以及含竹紅菌的藥物制劑、日化產(chǎn)品鑒別的方法，具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種竹紅菌藥材，以及含有竹紅菌藥材的藥物制劑的質(zhì)量 控制方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)竹紅菌藥材，以及組方中含有竹紅菌藥材的藥物制劑、日化產(chǎn)品的準(zhǔn)確鑒 別，有效控制竹紅菌藥材及其制劑產(chǎn)品的質(zhì)量。本發(fā)明是以竹紅菌甲素、乙素、丙素為對(duì)照品的薄層色譜鑒別方法來(lái)實(shí)現(xiàn)竹紅菌 藥材及其制劑的質(zhì)量控制。薄層色譜鑒別方法，由以下的步驟組成(1)對(duì)照品溶液制備取竹紅菌甲素、乙素、丙素對(duì)照品，分別以丙酮溶解制成濃 度為lmg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。(2)供試品溶液制備取竹紅菌藥材粉末0. 5g，加丙酮10ml，超聲處理30分鐘，濾 過(guò)，濾液作為供試品溶液?；蛉≈窦t菌軟膏l(xiāng)g，加乙醇10ml，回流1小時(shí)，趁熱濾過(guò)，濾液于0°C冷藏過(guò)夜，吸取上清液作為供試品溶液；或取竹紅菌消毒液50ml置分液漏斗中，加25ml 氯仿萃取，氯仿萃取液減壓蒸干，殘?jiān)?ml丙酮溶解，作為供試品溶液；或取竹紅菌疤痕 靈霜100g，加無(wú)水乙醇150ml，回流1小時(shí)，趁熱濾過(guò)，濾液于0°C冷藏過(guò)夜，吸取上清液，減 壓回收溶劑，殘?jiān)?ml丙酮溶解，作為供試品溶液。
(3)薄層色譜展開分別吸取上述各對(duì)照品溶液、供試品溶液各2 4 μ 1，點(diǎn)于同 一塊硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮為展開劑(四種組成溶劑的體 積比為40 5 10 0.5 1.5 0. 5 1. 5)，上行展開，取出，晾干。
(4)薄層色譜檢視色譜置于日光及紫外光燈下檢視，再于氨水熏蒸后置于日光 及紫外光燈下檢視，最后噴以10% (質(zhì)量/體積)硫酸乙醇溶液，在105°c加熱至斑點(diǎn)清晰。
(5)鑒別結(jié)果判斷供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的 斑點(diǎn)，表明供試品是竹紅菌藥材，或是含有竹紅菌的制劑；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上， 沒(méi)有相同顏色的斑點(diǎn)，或缺失對(duì)照品色譜中的任何一個(gè)斑點(diǎn)，則表明供試品不是竹紅菌藥 材，或制劑不含有竹紅菌。
本發(fā)明的薄層色譜鑒別方法，進(jìn)行了以下的研究
(1)供試品溶液的制備考察了提取溶劑和方法，分別采用乙醇、甲醇、丙酮、氯 仿、乙酸乙酯為溶劑，分別以回流、超聲處理的方法提取進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明甲醇、乙醇超聲 處理提取不完全，丙酮、氯仿、乙酸乙酯超聲處理提取較好；回流提取時(shí)各種溶劑無(wú)明顯區(qū) 別。故選擇常用而無(wú)毒的丙酮為溶劑，采用常見而簡(jiǎn)便的超聲處理提取方法制備供試品溶 液。
(2)對(duì)照品竹紅菌甲素、乙素、丙素從竹紅菌藥材中提取分離，化學(xué)結(jié)構(gòu)經(jīng)光譜 分析確定(鄭立雄等，云南民族藥物竹紅菌的化學(xué)成分研究，云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010年第 8期，第25 四頁(yè))，純度大于95%。
(3)薄層色譜板比較了國(guó)內(nèi)青島海洋化工集團(tuán)、煙臺(tái)信德科技公司、青島美高科 技公司，國(guó)外默克公司等廠家的硅膠G板，以及自制硅膠G板。結(jié)果表明，各種硅膠G板均 可較好的分離竹紅菌藥材成分。
(4)展開劑和展開方式考察了以下溶劑系統(tǒng)及組合環(huán)己烷-乙酸乙酯O 1及 1 1)、環(huán)己烷-丙酮(3 1及2 1)；氯仿-乙酸乙酯QO 1及10 1)、氯仿-丙酮 (50 1及30 1)、氯仿-甲醇(90 1) ；二氯甲烷-乙酸乙酯(30 1及15 1)、二氯 甲烷-丙酮GO 1及30 1) ；二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯QO 5 1及15 5 1)、 二氯甲烷-甲苯-丙酮OO 1 1及10 5 1) ；二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮 (40 5 0. 5 0. 5,40 5 1 1 及 40 10 1. 5 1. 5)等。結(jié)果表明，以二氯 甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮四種溶劑的混合溶液為展開劑(組成體積比在40 5 10 0. 5 1. 5 0. 5 1. 5之間)上行展開具有較好的分離效果。
(5)溫度和濕度的影響考察了不同溫度、濕度對(duì)色譜的影響。結(jié)果表明，在溫度 10 30°C、相對(duì)濕度35% 80%的條件下，均有較好色譜分離效果。
(6)飽和時(shí)間的影響考察了展開劑不飽和、飽和10分鐘、20分鐘對(duì)色譜的影響。 結(jié)果表明，飽和時(shí)間對(duì)色譜無(wú)明顯影響，展開劑不需預(yù)飽和。
(7)顯色方法竹紅菌甲素、乙素、丙素屬茈醌類成分，在可見光下顯明顯的紅色 斑點(diǎn)，用堿處理(如氨水熏蒸)則變成綠色；在紫外光燈下是紅色熒光斑點(diǎn)，用堿處理(如氨水熏蒸)則變成暗褐色；噴以10% (質(zhì)量/體積)硫酸乙醇溶液，在105°C加熱后顯紫紅 色斑點(diǎn)。上述的顯色方法均可用于竹紅菌藥材以及制劑產(chǎn)品的薄層色譜的檢視與比較。
(8)鑒別結(jié)果判斷根據(jù)薄層色譜的比較情況來(lái)判斷鑒別結(jié)果。供試品色譜中，若 在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，表明供試品是竹紅菌藥材，或者是含有 竹紅菌藥材的藥物制劑、日化產(chǎn)品。如在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上沒(méi)有相同顏色的斑點(diǎn)， 或者缺失其中的任何一個(gè)斑點(diǎn)，則表明供試品不是竹紅菌藥材，或該藥物制劑、日化產(chǎn)品不 含竹紅菌藥材。
(9)含竹紅菌藥材的藥物制劑和日化產(chǎn)品鑒別采用上述薄層色譜鑒別方法，分 析了以竹紅菌藥材為原料生產(chǎn)的竹紅菌軟膏、竹紅菌漱口液、竹紅菌疤痕靈霜、竹紅菌消毒 液，均能明確鑒別是否含有竹紅菌藥材組分。
與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于
(1)和現(xiàn)在應(yīng)用的性狀觀察，顯色反應(yīng)、最大吸收波長(zhǎng)檢測(cè)等鑒別方法比較，本發(fā) 明建立的薄層色譜鑒別方法是針對(duì)其特征性有效成分的客觀分析方法，具有判斷指標(biāo)直觀 明確，鑒別結(jié)果客觀可靠的優(yōu)點(diǎn)。
(2)用竹紅菌藥材所含的三個(gè)特征性有效成分竹紅菌甲素、乙素、丙素作對(duì)照品， 具有對(duì)照全面、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)。不但可用于竹紅菌藥材的鑒別，也可用于以竹 紅菌藥材為原料制備的藥物制劑、日化產(chǎn)品的鑒別。
(3)使用的展開劑對(duì)竹紅菌甲素、乙素、丙素分離效果好，鑒別試驗(yàn)的重現(xiàn)性好，操 作簡(jiǎn)便，所需時(shí)間短，適用于實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用。


圖1是a竹紅菌甲素、b竹紅菌乙素、c竹紅菌丙素的化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
圖2是竹紅菌藥材的薄層色譜圖(斑點(diǎn)從左到右分別為竹紅菌藥材，竹紅菌甲素、乙素、丙素)ο
圖3竹紅菌軟膏的薄層色譜圖(斑點(diǎn)從左到右分別為竹紅菌軟膏，竹紅菌甲素、乙 素、丙素)。
具體實(shí)施方式
以下的具體實(shí)施例可進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明及其應(yīng)用，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求 所保護(hù)范圍的限制。
實(shí)施例1 竹紅菌藥材的鑒別
竹紅菌商品藥材粉碎，取粉末0. 5g，加丙酮10ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，作為供 試品溶液。另取竹紅菌甲素、乙素、丙素對(duì)照品，分別以丙酮溶解制成濃度為lmg/ml的溶 液，作為對(duì)照品溶液。吸取各對(duì)照品溶液、供試品溶液各4 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板 上，以二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮GO :5:1: 1)為展開劑，上行展開，取出，晾 干。色譜置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的紅色斑 點(diǎn)，置紫外光燈下檢視顯相同顏色的紅色熒光斑點(diǎn)；色譜用氨水熏蒸后置日光下檢視顯相 同顏色的綠色斑點(diǎn)，置紫外光燈下檢視顯相同顏色的暗褐色熒光斑點(diǎn)。色譜噴以10% (質(zhì) 量百分濃度，以下同)硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，顯相同顏色的紫紅色斑點(diǎn)。5根據(jù)薄層色譜鑒別結(jié)果可明確判定該商品藥材為竹紅菌藥材。實(shí)施例2 竹紅菌藥材的鑒別對(duì)照品溶液、供試驗(yàn)品溶液制備，點(diǎn)樣、展開、顯色等同實(shí)施例1，區(qū)別僅在于用二 氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮(40 5 0.5 0.5)為展開劑。根據(jù)薄層色譜鑒別結(jié) 果可明確判定該商品藥材為竹紅菌藥材。實(shí)施例3 竹紅菌藥材的鑒別對(duì)照品溶液、供試驗(yàn)品溶液制備，點(diǎn)樣、展開、顯色等同實(shí)施例1，區(qū)別僅在于以二 氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮(40 10 1.5 1.5)為展開劑。根據(jù)薄層色譜鑒別結(jié) 果可明確判定該商品藥材為竹紅菌藥材。實(shí)施例4 竹紅菌軟膏的鑒別取竹紅菌軟膏l(xiāng)g，加乙醇10ml，回流1小時(shí)，趁熱濾過(guò)，濾液于0°C冷藏過(guò)夜，吸取 上清液作為供試品溶液。另取竹紅菌甲素、乙素、丙素對(duì)照品，分別以丙酮溶解制成濃度為 lmg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取各對(duì)照品溶液、供試品溶液各4 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅 膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮(40 5 1 1)為展開劑，上行展 開，取出，晾干。色譜置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏 色的紅色斑點(diǎn)，置紫外光燈下檢視顯相同顏色的紅色熒光斑點(diǎn)；色譜用氨水熏蒸后置日光 下檢視顯相同顏色的綠色斑點(diǎn)，置紫外光燈下檢視顯相同顏色的暗褐色熒光斑點(diǎn)；色譜噴 以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，顯相同顏色的紫紅色斑點(diǎn)。根據(jù)薄層色譜 鑒別結(jié)果可明確判定該竹紅菌軟膏內(nèi)含有竹紅菌藥材組分。實(shí)施例5 竹紅菌消毒液的鑒別取竹紅菌消毒液50ml置分液漏斗中，加25ml氯仿萃取，氯仿萃取液減壓蒸干，殘 渣用2ml丙酮溶解后，作為供試品溶液。另取竹紅菌甲素、乙素、丙素對(duì)照品，分別以丙酮溶 解制成濃度為lmg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取各對(duì)照品溶液、供試品溶液各4 μ 1，分 別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮(40 5 1 1)為展 開劑，上行展開，取出，晾干。色譜置日光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位 置上顯相同顏色的紅色斑點(diǎn)，置紫外光燈下檢視顯相同顏色的紅色熒光斑點(diǎn)；色譜用氨水 熏蒸后置日光下檢視顯相同顏色的綠色斑點(diǎn)，置紫外光燈下檢視顯相同顏色的暗褐色熒光 斑點(diǎn)；色譜噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰，顯相同顏色的紫紅色斑點(diǎn)。 根據(jù)薄層色譜鑒別結(jié)果可明確判定該竹紅菌消毒液內(nèi)含有竹紅菌藥材組分。實(shí)施例6 竹紅菌疤痕靈霜的鑒別取竹紅菌疤痕靈霜100g，加無(wú)水乙醇150ml，回流1小時(shí)，趁熱濾過(guò)，濾液于0°C冷 藏過(guò)夜，吸取上清液，上清液減壓蒸干，殘?jiān)?ml丙酮溶解后，作為供試品溶液。另取竹紅 菌甲素、乙素、丙素對(duì)照品，分別以丙酮溶解制成濃度為lmg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。 吸取各對(duì)照品溶液、供試品溶液各4μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲 苯-乙酸乙酯-丁酮(40 5 1 1)為展開劑，上行展開，取出，晾干。色譜置日光下檢 視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的紅色斑點(diǎn)，置紫外光燈下檢 視顯相同顏色的紅色熒光斑點(diǎn)；色譜用氨水熏蒸后置日光下檢視顯相同顏色的綠色斑點(diǎn)， 置紫外光燈下檢視顯相同顏色的暗褐色熒光斑點(diǎn)；色譜噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C 加熱至斑點(diǎn)清晰，顯相同顏色的紫紅色斑點(diǎn)。根據(jù)薄層色譜鑒別結(jié)果可明確判定該竹紅菌疤痕靈霜內(nèi)含有竹紅菌藥材組分。
權(quán)利要求
1.一種竹紅菌藥材及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征是按以下步驟進(jìn)行(1)對(duì)照品溶液制備取竹紅菌甲素、乙素、丙素對(duì)照品，分別以丙酮溶解制成濃度為 lmg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液；(2)供試品溶液制備取竹紅菌藥材粉末0.5g，加丙酮10ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)， 濾液作為供試品溶液；或取竹紅菌軟膏l(xiāng)g，加乙醇10ml，回流1小時(shí)，趁熱濾過(guò)，濾液于0°C冷藏過(guò)夜，吸取上 清液作為供試品溶液；或取竹紅菌消毒液50ml置分液漏斗中，加25ml氯仿萃取，氯仿萃取液減壓蒸干，殘?jiān)?用2ml丙酮溶解后，作為供試品溶液；或取竹紅菌疤痕靈霜100g，加無(wú)水乙醇150ml，回流1小時(shí)，趁熱濾過(guò)，濾液于0°C冷藏 過(guò)夜，吸取上清液，上清液減壓蒸干，殘?jiān)?ml丙酮溶解后，作為供試品溶液；(3)薄層色譜展開分別吸取上述各對(duì)照品溶液、供試品溶液各2 4μ1，點(diǎn)于同一塊 硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮為展開劑，二氯甲烷甲苯乙酸乙 酯丁酮的體積比為40 5 10 0.5 1.5 0.5 1.5，上行展開，取出，晾干；(4)顯色方法薄層色譜先置于日光及紫外光燈下檢視，再于氨水熏蒸后置于日光及 紫外光燈下檢視，最后噴以質(zhì)量濃度10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)清晰；(5)鑒別結(jié)果判斷供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)， 表明供試品是竹紅菌藥材，或制劑含有竹紅菌；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，沒(méi)有相同顏 色的斑點(diǎn)，或缺失對(duì)照品色譜中的任何一個(gè)斑點(diǎn)，則表明供試品不是竹紅菌藥材，或制劑不 含有竹紅菌；其中步驟(1)與(2)沒(méi)有先后順序的分別。
2.按權(quán)利要求1所述的竹紅菌藥材及其制劑的質(zhì)量控制方法，其特征是展開劑所含四 種溶劑的體積比為二氯甲烷甲苯乙酸乙酯丁酮=40 5 1 1。
全文摘要
本發(fā)明是一種竹紅菌藥材及其制劑的質(zhì)量控制方法。其特征是以竹紅菌甲素、乙素、丙素為對(duì)照品，采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別達(dá)到質(zhì)量控制。薄層色譜用硅膠G為吸附劑，用二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-丁酮(40∶5∶1∶1)為展開劑。本發(fā)明判斷指標(biāo)直觀明確，鑒別結(jié)果客觀可靠，具有對(duì)照全面、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)，可用于竹紅菌藥材的鑒別，也可用于以竹紅菌藥材為原料制備的藥物制劑、日化產(chǎn)品的鑒別。
文檔編號(hào)A61K9/06GK102028717SQ201010575529
公開日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2010年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月7日
發(fā)明者周艷林, 李俊, 潘韜文, 饒高雄 申請(qǐng)人:昆明振華制藥廠有限公司