專利名稱：胸腺肽注射液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種胸腺肽注射液的制備方法。
背景技術(shù)：
胸腺肽注射液，曾用名胸腺素注射液、胸腺因子注射液、胸腺因子D注射液，系由 健康豬或小牛胸腺組織中提取的分子量小于10000道爾頓的多肽水溶液。本品具有調(diào)節(jié)和 增強(qiáng)人體免疫功能的作用，能促使T-淋巴細(xì)胞成熟。用于治療各種原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞 缺陷病、某些自身免疫性疾病、各種細(xì)胞免疫功能低下的疾病及腫瘤的輔助治療。目前，已公開了一些有關(guān)胸腺肽的制備工藝，是經(jīng)凍融破細(xì)胞、離心分離、超濾、濃 縮等過(guò)程。通常包括以下方法(1)用絞肉機(jī)或勻漿器將新鮮的的胸腺勻漿，凍融，以破碎 細(xì)胞；⑵用水在酸性或中性環(huán)境中提取破碎細(xì)胞；⑶將提取液加熱到80°C左右維持10 分鐘，離心除蛋白沉淀；(4)離心液經(jīng)10000分子量左右的超濾膜超濾得胸腺肽(5)根據(jù) 胸腺肽含量加注射用水配制各種濃度注射液制劑。上述的工藝方法僅經(jīng)過(guò)熱變性去除雜蛋白，不能充分有效的去除各類雜蛋白，雜 蛋白未有效去除易引起過(guò)敏反應(yīng)；其次熱變性時(shí)間短，不能有效去除各類動(dòng)物源性病毒，使 制劑存在病毒污染風(fēng)險(xiǎn)；再者注射液中氨基酸、小肽類物質(zhì)易發(fā)生聚合為大分子物質(zhì)而析 出致使制劑不穩(wěn)定，也易引起過(guò)敏反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種胸腺肽注射液的制備方法，以克服上述技術(shù)的缺陷。本發(fā)明的胸腺肽注射液的制備方法的技術(shù)方案為它是將小?；蜇i的胸腺組織去 除脂肪，洗凈后，與0.9克/毫升的氯化鈉水溶液按1 1的重量比例混合后利用膠體磨研 磨得到絞磨液，將絞磨液用體積濃度為20%的冰醋酸調(diào)節(jié)pH值3. 5-4. 5，在-15 _22°C溫 度下冷凍冷；將冷凍后的絞磨液化凍升溫至33-37°C勻漿得勻漿液，然后加溫到80°C，保溫 30分鐘，再離心分離得第一上清液；將第一上清液按1 1的體積比加入無(wú)水乙醇，0-5°C 靜置1 2小時(shí)以上，再離心分離得第二上清液；濃縮第二上清液至原勻漿液體積的1/4 1/6得濃縮液；濃縮液調(diào)節(jié)pH值7. 5-8. 5，然后加溫至80°C，保溫30分鐘，再降溫至10°C 0°C以下后，離心分離得第三上清液；第三上清液先后用50KD、10KD超濾膜逐級(jí)超濾澄清后 再利用5KD至8KD的超濾膜超濾得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水調(diào)節(jié)至每毫 升溶液中含胸腺肽2. 5mg或5mg或IOmg ；加入穩(wěn)定劑，滅菌后即得胸腺肽注射液。本發(fā)明先后通過(guò)50KD、10KD，5KD超濾膜多級(jí)超濾，既能保證雜蛋白的徹底去除， 又能有效地去除高分子量物質(zhì)；采用乙醇和酸堿沉淀去除雜蛋白，以及多級(jí)超濾，制得產(chǎn)品 高分子物質(zhì)少于0. 5%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的少于5. 0%，能更有效地保證產(chǎn)品質(zhì)量， 制劑配料過(guò)程中加入吐溫-80作穩(wěn)定劑，能有效得避免制劑在儲(chǔ)存過(guò)程中氨基酸、小肽類 物質(zhì)等聚合為大分子物質(zhì)析出，影響制劑的澄明度，保證產(chǎn)品長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存過(guò)程的穩(wěn)定，同時(shí) 降低過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率。
具體實(shí)施例方式取新鮮的小牛(或豬)胸腺組織，剝離其附著的脂肪，用飲用水和純化水先后分別
清洗三次。將小牛(或豬)胸腺組織與0. 9克/毫升的氯化鈉水溶液即生理鹽水(溫度不高 于30°C)按1 1的重量比例混合后加入膠體磨反復(fù)絞磨兩次，收集絞磨液。將絞磨液用用20%的冰醋酸調(diào)節(jié)PH值3. 5-4. 5，置于冷庫(kù)冷凍7天以上。取出冷凍7天以上的絞磨液化凍后置反應(yīng)罐在33-37°C勻漿4_5小時(shí)，然后加溫到 80°C，保溫30分鐘，再離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘，時(shí)間為30分鐘)，棄沉渣取上清。在不斷攪拌下將上清液按1 1的體積比加入無(wú)水乙醇，0_5°C靜置12小時(shí)以上， 離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘，時(shí)間為30分鐘)，棄沉渣取上清。減壓真空濃縮(溫度35-45°C真空度-0. 03 _0. 08MPa)至原勻漿液體積的1/5。 濃縮的同時(shí)回收乙醇。將上清液用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值7. 5-8. 5，然后將罐內(nèi)溫度加溫至80°C， 保溫30分鐘，用冰水降溫至10°C以下后，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘，時(shí)間為30分鐘)，棄沉渣取上清。上清液用50KD、10KD超濾膜逐級(jí)超濾澄清后得澄清液。澄清液再用5KD-8KD超濾膜超濾得胸腺肽溶液。制劑將胸腺肽按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定多肽含量，加注射用水調(diào)節(jié)至每毫升含胸腺 肽2. 5mg(或5mg、10mg)，同時(shí)加入穩(wěn)定劑吐溫-80至每毫升含量為1_2%。，然后灌裝、滅菌 后即得胸腺肽注射液。產(chǎn)品檢測(cè)對(duì)上述制備的產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果如下表1檢測(cè)結(jié)果表1:
權(quán)利要求
一種胸腺肽注射液的制備方法，它是將小?；蜇i的胸腺組織去除脂肪，洗凈后，與0.9克/毫升的氯化鈉水溶液按1∶1的重量比例混合后利用膠體磨研磨得到絞磨液，將絞磨液用體積濃度為20％的冰醋酸調(diào)節(jié)pH值3.5 4.5，在 15～ 22℃溫度下冷凍冷；將冷凍后的絞磨液化凍升溫至33 37℃勻漿得勻漿液，然后加溫到80℃，保溫30分鐘，再離心分離得第一上清液；將第一上清液按1∶1的體積比加入無(wú)水乙醇，0 5℃靜置12小時(shí)以上，再離心分離得第二上清液；濃縮第二上清液至原勻漿液體積的1/4～1/6得濃縮液；濃縮液調(diào)節(jié)pH值7.5 8.5，然后加溫至80℃，保溫30分鐘，再降溫至10℃～0℃以下后，離心分離得第三上清液；第三上清液先后用50KD、10KD超濾膜逐級(jí)超濾澄清后再利用5KD至8KD的超濾膜超濾得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水調(diào)節(jié)至每毫升溶液中含胸腺肽2.5mg或5mg或10mg；加入穩(wěn)定劑，滅菌后即得胸腺肽注射液。
2.如權(quán)利要求1所述胸腺肽注射液的制備方法，其特征是加入穩(wěn)定劑吐溫-80至每毫 升溶液中的穩(wěn)定劑重量含量為1-2%。。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種胸腺肽注射液的制備方法。它是小?；蜇i的胸腺組織與氯化鈉水溶液混合后研磨后，調(diào)節(jié)pH值3.5-4.5，在-15～-22℃溫度下冷凍冷；將冷凍后的絞磨液化凍升溫至33-37℃勻漿得勻漿液，然后加溫到80℃，保溫30分鐘，分離得上清液與乙醇混合，靜置，再分離，濃縮；調(diào)節(jié)濃縮液pH值7.5-8.5，然后加溫至80℃，保溫30分鐘，再降溫離心分離得第三上清液；超濾膜逐級(jí)超濾澄清后，得胸腺肽溶液；在胸腺肽溶液中加入注射用水調(diào)節(jié)至每毫升溶液中含胸腺肽2.5mg或5mg或10mg；加入穩(wěn)定劑，滅菌后即得胸腺肽注射液。制得產(chǎn)品高分子物質(zhì)少于0.5％，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。
文檔編號(hào)A61P37/04GK101934068SQ20101029172
公開日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2010年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月26日
發(fā)明者呂家燕 申請(qǐng)人:武漢華龍生物制藥有限公司