專利名稱：多糖蛋白片及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多糖蛋白片及其制備方法，特別涉及一種可使白細(xì)胞明顯上升，肝功能好轉(zhuǎn)，調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能，提高人體免疫能力，用于白細(xì)胞減少癥，傳染性肝炎，神經(jīng)衰弱等癥的輔助治療的多糖蛋白片。
背景技術(shù)：
自從真菌多糖抑制瘤活性被發(fā)現(xiàn)以后，真菌多糖引起越來(lái)越多的關(guān)注，成為一個(gè)非常活躍的研究領(lǐng)域。人們發(fā)現(xiàn)，真菌多糖具有復(fù)雜的生物活性和功能，其中，最主要的活性就是免疫調(diào)節(jié)活性，作為一種免疫調(diào)節(jié)劑真菌多糖已廣泛應(yīng)用于免疫性、缺陷性疾病，自身免疫病和腫瘤等疾病的臨床治療。菇類多糖蛋白是從菇類子實(shí)體中分離出一種抗腫瘤多糖，它的主鏈?zhǔn)?β - (1 — 3)-D-葡聚糖，主鏈上約有23%的葡萄糖殘基，通過(guò)C6分支點(diǎn)連有側(cè)鏈。后來(lái)研究證實(shí)，多糖蛋白是一種免疫激活劑，能激活巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，提高巨噬細(xì)胞的趨化性和淋巴細(xì)胞對(duì)Yac-I細(xì)胞和Ρ-815細(xì)胞的毒性反應(yīng)水平，拮抗BBN對(duì)小鼠的致癌作用。其次它是誘生α -干擾作用較明顯，表現(xiàn)在能活化⑶4+淋巴細(xì)胞，促使⑶4+的增殖和IL-2R的表達(dá)。多糖蛋白復(fù)合物的特殊生物學(xué)活性有文獻(xiàn)報(bào)道，糖蛋白等多糖蛋白復(fù)合物具有抗氧化和清除機(jī)體有害自由基的生物學(xué)活性，并且其在細(xì)胞識(shí)別、信號(hào)傳導(dǎo)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞轉(zhuǎn)化等許多生物學(xué)過(guò)程中也起著非常重要的作用。另外，考慮其活性可經(jīng)免疫系統(tǒng)傳遞，特別是通過(guò)對(duì)免疫系統(tǒng)的特異性或非特異性功能的激發(fā)實(shí)現(xiàn)，因此，該多糖蛋白復(fù)合物將具有毒副作用低等特點(diǎn)。這對(duì)于研制出一種療效高、基本無(wú)毒副作用的治療或預(yù)防肝損傷疾病的特效藥物，具有重要意義。蜈蚣提取物藥理作用的研究進(jìn)展祖國(guó)醫(yī)學(xué)中，蜈蚣入藥歷史悠久，素來(lái)有調(diào)達(dá)肝經(jīng)之功效。近年來(lái)，對(duì)蜈蚣及其提取物藥理作用的研究亦日趨深入。已有研究表明，蜈蚣水提取物能顯著降低大鼠血清中過(guò)氧化脂質(zhì)及肝、腦組織中脂褐質(zhì)含量，可使紅細(xì)胞中超氧化物歧化酶和血中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力明顯升高。并且其能使免疫器官胸腺和脾臟重量明顯增加，顯著提升機(jī)體吞噬細(xì)胞吞噬活性，特別對(duì)吞噬細(xì)胞Fc受體有顯著增強(qiáng)作用，從而發(fā)揮改善機(jī)體免疫功能的作用。(王玉芬、韓雙紅、曲樹明等，蜈蚣抗衰老作用的研究，中國(guó)中藥雜志，1994，19(11) 685)但是，經(jīng)檢索，迄今為止未有一種采用菇類多糖蛋白和蜈蚣多糖蛋白的片劑或膠囊劑等口服制劑被公開或使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于白細(xì)胞減少癥，傳染性肝炎，神經(jīng)衰弱等癥的輔助治療的多糖蛋白片的配方及其制備方法。以及在制備治療或預(yù)防腫瘤的藥物中的應(yīng)用， 在制備治療或預(yù)防白血球減少癥的藥物中的應(yīng)用，在制備治療或預(yù)防輕中型黃疸型肝炎藥物中的應(yīng)用，以及在制備治療或預(yù)防神經(jīng)衰弱的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是所述的一種多糖蛋白片，其特征是該片劑由下述原料按重量百分比制成；白蘑菇浸膏10 15 ；靈芝多糖蛋白5 10;香菇多糖蛋白5 10;蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物5 10 ；硫酸鈣50 60;明膠 3 10;硬脂酸鎂2 6;1)該片劑白蘑菇浸膏采用其每毫升的白蘑菇浸膏的多糖量以葡萄糖計(jì)是 3-15mg,含總氨基酸量是8-40mg，其中谷氨酸占3_20mg，天門冬氨酸占0. 8_5mg。所述的多糖蛋白片，含多糖量以葡萄糖計(jì)優(yōu)選范圍是3-10mg，含總氨基酸優(yōu)選范圍是8-40mg，含谷氨酸優(yōu)選范圍是3-20mg，含天門冬氨酸優(yōu)選范圍是0.8-5mg。所述的白蘑菇浸膏是從白蘑菇中提取出的含有多糖、總氨基酸，其中有谷氨酸、天門冬氨酸等有效成分的提取物，可以采用市售產(chǎn)品，如本實(shí)施例中采用澄海市金嘉生化有限公司出品的蘑菇浸膏，也可用其他的現(xiàn)有技術(shù)提取的白蘑菇浸膏，但每毫升白蘑菇浸膏的多糖量以葡萄糖計(jì)是3-15mg，含總氨基酸量是8-40mg，谷氨酸占3-20mg，天門冬氨酸占0. 8_5mg。白蘑菇浸膏制備方法取水洗過(guò)的蘑菇1公斤，0.4%檸檬酸，0.05%界面活性劑(蔗糖脂肪酸酯和失水山梨醇三油酸酯span85和失水山梨醇單月桂酸酯span20)以 2:1: 1的比例是混合，以80%的乙醇溶液浸漬，在室溫下減壓，使溶液容易浸透，15分鐘后取出，置于均質(zhì)器中。加入含有0. 植酸、01%維生素C、0. 3%偏磷酸鈉的熱溶液，一邊添加一邊均質(zhì)，全部(5升)加完后，以溫度不低于95°C加熱10分鐘，用4000轉(zhuǎn)/分離心機(jī)進(jìn)心分離，得抽出液5. 2升。沉淀物中加入5升含有0. 碳酸鈉的0. 3%食鹽水，在 30°C下抽提20分鐘，分離后得抽出液4. 7升。經(jīng)二次抽提后的殘?jiān)狗稚⒂?升pH4. 0 的檸檬酸緩沖液中，加入果膠酶(Macerozyme)〗克、蛋白分解酶YPSS5克，在40°C振蕩(70 轉(zhuǎn)/分)50分鐘，充分反應(yīng)后，離心分離，所得抽提液并入以上二次的抽提液，以高溫瞬時(shí)濃縮器濃縮至2升，用活性碳和尼龍66 (100目)進(jìn)行脫色后，再次濃縮，得浸膏200毫升。2)所述的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物可以是市售產(chǎn)品，也可以采用下述工藝制成所述的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物是從節(jié)肢動(dòng)物蜈蚣全蟲中提取、分離、純化得到，其制備步驟為① 以少棘蜈蚣作為原料母體，清洗4次，烘干3小時(shí)，烘干溫度控制在70°C ；②研磨第1步驟中干燥后的原料母體并過(guò)100目篩得蜈蚣粉；③將第2步驟中的蜈蚣粉用3倍體積蒸餾水抽提2小時(shí)，溫度控制在82°C，紗布過(guò)濾得一份提取液，取殘?jiān)儆?倍體積蒸餾水重復(fù)提取三次得三份提取液，合并以上四份提取液，2500r/min離心25分鐘，獲取上清；④將第 3步驟中的上清減壓濃縮至0. IMPa，溫度控制在在60°C，加入5倍體積95%乙醇，于4°C 靜置過(guò)夜，傾去上清，取沉淀，2500r/min離心10分鐘，收集沉淀；⑤將第4步驟中的沉淀用500ml蒸餾水溶解，計(jì)量40%飽和度所需要的固體硫酸銨量，于4°C緩慢加入，攪拌4h、 10000r/min離心20分鐘后，收集上清并計(jì)量體積，重復(fù)此步驟的操作1次，收集60%飽和度的沉淀物；⑥將第5步驟中的沉淀物用30ml蒸餾水溶解后，上DEAE-50離子交換層析柱
5(2. 6 X 40cm)純化，以蒸餾水平衡，用0. 05 0. 25mol/L NaCl溶液洗脫，收集洗脫液，用透析袋在雙蒸水中透析48小時(shí)脫鹽，再用聚乙二醇20000濃縮；⑦將第6步驟中的濃縮液上 Sephadex G-200 層析柱(2. 6 X 60cm)純化，用 0. 02mol/L、pH 為 7. 2 的 Tris-HCl 溶液洗脫后，經(jīng)真空冷凍干燥，預(yù)凍溫度控制在_20°C，加熱溫度控制在30°C，干燥9小時(shí)后得蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物純品。3)靈芝多糖蛋白為一種結(jié)合蛋白多糖，簡(jiǎn)稱GL-PP。可以采用現(xiàn)有的產(chǎn)品或以下方法制作的產(chǎn)品。靈芝多糖蛋白GL-PP的制備方法1、挑選草栽靈芝，將靈芝干品子實(shí)體清潔后，烘干，用粗顆粒粉碎機(jī)破碎成20目的煙絲狀物質(zhì)。2、稱取300克的已經(jīng)粉碎的煙絲狀靈芝，用95%的乙醇3000 4000毫升回流3 小時(shí)，回收乙醇，干燥靈芝絲狀物。采用靈芝絲狀物熱水=1 15的比例對(duì)靈芝絲狀物進(jìn)行熱水回流提取3次，時(shí)間分別為2. 5小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)，并合并過(guò)濾后的水提取液。3、在90°C的溫度下濃縮水提取液至原體積的十分之一，再用速度為3000r/min， 時(shí)間為15min的離心機(jī)進(jìn)行離心分離，將上清液濃縮至相當(dāng)于每毫升含靈芝生藥量1克為標(biāo)準(zhǔn)。4、用三倍量的95%乙醇處理濃縮液，攪拌，恒溫5°C靜置得第一沉淀物。將第一沉淀物再離心得第二沉淀物，將第二沉淀物溶于適量的蒸餾水，將此溶液用2 3倍量的95 % 乙醇沉淀，攪拌，5°C左右靜置M小時(shí)得第三沉淀物，將第三沉淀物再離心得第一多糖蛋白沉淀。5、將第一多糖蛋白沉淀用95%乙醇，丙酮和乙醚各洗滌3次，用速度為3000r/ min，時(shí)間為15min的離心機(jī)進(jìn)行離心分離，去上清液，取沉淀物于低溫5°C干燥得第一多糖蛋白。6、將第一多糖蛋白溶于蒸餾水，放置于透析袋內(nèi)，逆流透析48小時(shí)得透析液，將透析液在90°C下濃縮而得濃縮液。7、用三倍量于濃縮液的95%乙醇處理濃縮液，得第二多糖蛋白沉淀，將第二多糖蛋白沉淀用95%乙醇，丙酮和乙醚各洗滌3次，用速度為3000r/min，時(shí)間為15min的離心機(jī)進(jìn)行離心分離，去上清液，取沉淀物于低溫5°C干燥即得靈芝多糖蛋白，該靈芝多糖蛋白的重均分子量Mw在45萬(wàn) M萬(wàn)之間，多糖蛋白呈黃褐色至褐色粉末狀，其多糖組成為鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖，且各糖摩爾比為0. M9 3.614 3.167 0.556 6.89。4)香菇多糖蛋白1.原料的處理取已烘干的香菇體1000克，研磨粉碎至30目以上的香菇粉。2、復(fù)合酶的配制取果膠酶59克，纖維素酶2. 0克、淀粉酶1. 5克，半纖維素酶3. 5克，蛋白酶4. 0 克，糖化酶2. 0克混合均勻成70克重的復(fù)合酶液待用。3.熱水浸提將1000克的香菇粉加入7000毫升的水，加熱至90°C，攪拌均勻后保持90°C、時(shí)間 60分鐘進(jìn)行熱水浸提。
4.酶解、滅活將浸提混合液從90°C下降至90°C，加入預(yù)先配制好的復(fù)合酶液70克，攪拌均勻后保持43°C、進(jìn)行60分鐘時(shí)間酶解。然后迅速升溫至95°C進(jìn)行快速滅活，滅活1分鐘后自然冷卻降溫。5.離心、濃縮利用框式離心機(jī)，以3000r. p. η轉(zhuǎn)速甩濾，去渣濾液以真空薄膜濃縮7_8小時(shí)。6.干燥濃縮液中加入適量淀粉后在70°C條件下進(jìn)行噴霧干燥，得到多糖蛋白干品。5)硫酸鈣、明膠、硬脂酸鎂均為食用級(jí)產(chǎn)品或藥用級(jí)產(chǎn)品，如明膠采用藥用明膠。本發(fā)明所述的多糖蛋白片的制造方法，包括如下步驟(1)將白蘑菇浸膏倒入蒸發(fā)皿，加熱并不斷攪拌，使成稠膏；(2)加入適量硫酸鈣、明膠混勻，繼續(xù)加熱攪拌，使混合物成稠膏；(3)將步驟⑵中的稠膏攤于不銹鋼盤中，置烘箱中干燥，得干膏；(4)將步驟(3)中的干膏粉碎成細(xì)粉；(5)稱取上述配方量的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物磨成細(xì)粉；(6)稱取上述配方量的香菇多糖蛋白、靈芝多糖蛋白磨成細(xì)粉；(7)將步驟(4)、(5)和(6)的細(xì)粉混合均勻，加入適量硫酸鈣混合均勻，制成顆粒， 干燥處理后，加入適量的潤(rùn)滑劑，用壓片機(jī)進(jìn)行壓片，將沖壓后的素片置于糖衣鍋中包成糖衣片。上述步驟(1)的加熱溫度為60_80°C，攪拌時(shí)間為1. 5-2. 5小時(shí)。步驟⑵的加熱溫度為60-80°C，攪拌時(shí)間為0. 5-1小時(shí)。上述步驟(3)中干燥溫度為80-90°C，干燥時(shí)間為16-24小時(shí)。本發(fā)明的多糖蛋白片的有效成分多糖、總氨基酸、谷氨酸、天門冬氨酸等，在以上所述的含量范圍內(nèi)具有很好的藥理作用，它能作為治療或預(yù)防腫瘤的藥物，治療或預(yù)防白血球減少癥的藥物，治療或預(yù)防輕中型黃疸型肝炎藥物，以及治療或預(yù)防神經(jīng)衰弱的藥物， 具體藥理作用詳見(jiàn)如下所述。本發(fā)明的多糖蛋白片藥理作用1、抗腫瘤作用對(duì)同種異基因和原來(lái)發(fā)生腫瘤具有顯著的抑制作用，可防止化學(xué)因素或病毒引起的致癌作用，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。2、增強(qiáng)人體免疫功能低下作用是一種宿主防衛(wèi)增強(qiáng)劑。它能恢復(fù)或加強(qiáng)宿主對(duì)淋巴細(xì)胞、激素及其他生物活性因子的反應(yīng)，通過(guò)刺激免疫活性細(xì)胞的成熟、分化和繁殖。3、免疫調(diào)節(jié)作用可激活補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑或變更途徑，增強(qiáng)中性白細(xì)胞對(duì)腫瘤結(jié)的浸潤(rùn)，促使宿主盡快恢復(fù)因癌癥及感染而引起的體內(nèi)平衡失調(diào)狀況。4、抗HIV和抗肝炎病毒作用，增強(qiáng)免疫，促進(jìn)肝損傷修復(fù)作用，有助于肝功能恢復(fù)。特別是蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物在防治肝損傷疾病中具有以下特點(diǎn)①不僅能治療多種化學(xué)性肝損傷，如酒精性肝損傷、四氯化碳肝損傷、大劑量地塞米松肝損傷，而且對(duì)免疫性肝損傷也具有顯著療效；②上述抗肝損傷活性直接與其清除自由基、提高抗氧化物酶的活性、 降低脂質(zhì)過(guò)氧化物水平以及免疫調(diào)節(jié)等一系列保肝降酶作用有關(guān)；③急性毒性試驗(yàn)表明其毒副作用低。5、降低高血脂作用6、抗衰老作用本發(fā)明的多糖蛋白片藥效學(xué)試驗(yàn)表1多糖蛋白對(duì)小鼠(荷H22)體重的影響
權(quán)利要求
1.一種多糖蛋白片，該片劑由下述原料按重量百分比制成；白蘑菇浸膏10 15 ；靈芝多糖蛋白5 10;香菇多糖蛋白5 10 ；蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物5 10;硫酸鈣50 60 ；明膠3 10 ；硬脂酸鎂2 6 ；該片劑所用的白蘑菇浸膏，其每毫升的白蘑菇浸膏中多糖的量以葡萄糖計(jì)是3-15mg;所述的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物由下述工藝制成，步驟為①以少棘蜈蚣作為原料母體， 清洗4次，烘干3小時(shí)，烘干溫度控制在70°C ；②研磨第1步驟中干燥后的原料母體并過(guò) 100目篩得蜈蚣粉；③將第2步驟中的蜈蚣粉用3倍體積蒸餾水抽提2小時(shí)，溫度控制在 82°C，紗布過(guò)濾得一份提取液，取殘?jiān)儆?倍體積蒸餾水重復(fù)提取三次得三份提取液， 合并以上四份提取液，2500r/min離心25分鐘，獲取上清；④將第3步驟中的上清減壓濃縮至0. IMPa，溫度控制在在60°C，加入5倍體積95%乙醇，于4°C靜置過(guò)夜，傾去上清，取沉淀，2500r/min離心10分鐘，收集沉淀；⑤將第4步驟中的沉淀用500ml蒸餾水溶解，計(jì)量40%飽和度所需要的固體硫酸銨量，于4°C緩慢加入，攪拌4h、10000r/min離心20分鐘后，收集上清并計(jì)量體積，重復(fù)此步驟的操作1次，收集60%飽和度的沉淀物；⑥將第5步驟中的沉淀物用30ml蒸餾水溶解后，上DEAE-50離子交換層析柱O. 6 X 40cm)純化，以蒸餾水平衡，用0. 05 0. 25mol/L NaCl溶液洗脫，收集洗脫液，用透析袋在雙蒸水中透析48 小時(shí)脫鹽，再用聚乙二醇20000濃縮；⑦將第6步驟中的濃縮液上kphadex G-200層析柱 (2. 6X60cm)純化，用0. 02mol/L、pH為7. 2的Tris-HCl溶液洗脫后，經(jīng)真空冷凍干燥，預(yù)凍溫度控制在-20°C，加熱溫度控制在30°C，干燥9小時(shí)后得蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多糖蛋白片，其特征在于每毫升的白蘑菇浸膏中含有氨基酸的總量是8-40mg，其中谷氨酸占3-20mg，天門冬氨酸占0. 8_5mg ；所述的靈芝多糖蛋白的重均分子量在45萬(wàn) M萬(wàn)之間，其多糖組成為鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖和葡萄糖，且各糖摩爾比為 0. M9 3.614 3.167 0.556 6.89。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多糖蛋白片，其特征在于白蘑菇浸膏由下述工藝制成 取水洗過(guò)的蘑菇加入0. 4%檸檬酸和0. 05%界面活性劑，界面活性劑由蔗糖脂肪酸酯和失水山梨醇三油酸酯span85及失水山梨醇單月桂酸酯span20)以2 1 1的比例混合而成的，以80%的乙醇溶液浸漬，在室溫下減壓，使溶液容易浸透，15分鐘后取出，置于均質(zhì)器中；加入含有0. 植酸、01%維生素C、0. 3%偏磷酸鈉的熱溶液，一邊添加一邊均質(zhì)，全部加完后，以溫度不低于95°C加熱10分鐘，用4000轉(zhuǎn)/分離心機(jī)進(jìn)心分離，得抽出液；沉淀物中加入含有0. 碳酸鈉的0. 3%食鹽水，在30°C下抽提20分鐘，分離后得抽出液；經(jīng)二次抽提后的殘?jiān)?，使分散?升PH4. 0的檸檬酸緩沖液中，加入果膠酶、蛋白分解酶，在40°C 以70轉(zhuǎn)/分振蕩50分鐘，充分反應(yīng)后，離心分離，所得抽提液并入以上二次的抽提液中，以高溫瞬時(shí)濃縮器濃縮得濃縮液，用活性碳和100目尼龍66進(jìn)行脫色后，再次濃縮，得浸膏。
4.權(quán)利要求1 3之任一所述的多糖蛋白片的制造方法，包括如下步驟(1)將配方量的白蘑菇浸膏倒入蒸發(fā)皿，加熱并不斷攪拌，使成稠膏；(2)加入適量硫酸鈣、明膠混勻，繼續(xù)加熱攪拌，使混合物成稠膏；(3)將步驟O)中的稠膏攤于不銹鋼盤中，置烘箱中干燥，得干膏；(4)將步驟(3)中的干膏粉碎成細(xì)粉；(5)稱取配方量的蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物磨成細(xì)粉；(6)稱取配方量的香菇多糖蛋白、靈芝多糖蛋白磨成細(xì)粉；(7)將步驟0)、(5)和(6)的細(xì)粉混合均勻，加入余下的硫酸鈣混合均勻，制成顆粒， 干燥處理后，加入潤(rùn)滑劑壓片，將沖壓后的素片置于糖衣鍋中包成糖衣片。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多糖蛋白片的制造方法，其特征在于步驟(1)的加熱溫度為 60-80°C，攪拌時(shí)間為1. 5-2. 5小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的多糖蛋白片的制造方法，其特征在于步驟O)的加熱溫度為 60-80°C，攪拌時(shí)間為0. 5-1小時(shí)。
7.權(quán)利要求1 3之任一所述的多糖蛋白片，在制備治療或預(yù)防腫瘤的藥物中的應(yīng)用， 在制備治療或預(yù)防白血球減少癥的藥物中的應(yīng)用，在制備治療或預(yù)防輕中型黃疸型肝炎藥物中的應(yīng)用，以及在制備治療或預(yù)防神經(jīng)衰弱的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多糖蛋白片及其制備方法，該片劑由下述原料按重量百分比制成；白蘑菇浸膏10～15；靈芝多糖蛋白5～10；香菇多糖蛋白5～10；蜈蚣多糖蛋白復(fù)合物5～10；硫酸鈣50～60；明膠3～10；硬脂酸鎂2～6；該片劑所用的白蘑菇浸膏，其每毫升白蘑菇浸膏中的多糖量以葡萄糖計(jì)是3-15mg，含總氨基酸量是8-40mg，其中谷氨酸占3-20mg，天門冬氨酸占0.8-5mg；將其細(xì)粉混合均勻，加入適量硫酸鈣混合均勻，制成顆粒，干燥處理后，加入適量的潤(rùn)滑劑，用壓片機(jī)進(jìn)行壓片。它能作為治療或預(yù)防腫瘤的藥物，治療或預(yù)防白血球減少癥的藥物，治療或預(yù)防輕中型黃疸型肝炎藥物，以及治療或預(yù)防神經(jīng)衰弱的藥物。
文檔編號(hào)A61P25/20GK102379904SQ201010272550
公開日2012年3月21日 申請(qǐng)日期2010年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月6日
發(fā)明者柯依坤 申請(qǐng)人:柯依坤