專利名稱：一種8,9單環(huán)氧短葉蘇木酚plga微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥品的制備方法，具體涉及一種8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球 的制備方法。
背景技術(shù)：
大戟科葉下珠屬(Phyllanthus)植物在全世界有600余種，自1982年印度學(xué)者 Thyagar jan等發(fā)現(xiàn)珠子草(Phyllanthus niruri L.)在體外具有殺滅乙肝病毒活性。葉下 珠屬植物在我國(guó)有33種，陜西省葉下珠屬植物有兩種，即葉下珠(Phyllanthus urinaria L)和黃珠子草(P. simplex Retz.)，主要分布于陜南，黃珠子草又稱珍珠草、地珍珠等，最早 收載于《生草藥性備要》中，具有平肝、清熱、利水、解毒之功效，用于治療腸炎、肝炎、尿路感 染、無名腫痛等。目前人們已經(jīng)從黃珠子草中分離出十幾個(gè)化合物，對(duì)這些化合物進(jìn)行了結(jié) 構(gòu)鑒定及抗病毒作用的篩選，結(jié)果顯示，其所含的8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚有很好的抗病毒 效果。聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)常用作緩控釋體系中的降解材料，是一種可降解 的功能高分子材料，具有良好的成囊性、熱塑性、生物相容性以及良好的降解性能，其降解 速率隨著兩種化合物組成比例的不同而變化，可以根據(jù)藥物的性質(zhì)和用途選擇不同比例組 成的聚乳酸_羥基乙酸制備成具有特定功效的微球制劑，因此，PLGA作為一種最常用的聚 合物材料被廣泛應(yīng)用于微球的制備與生產(chǎn)。所制得的PLGA微球，其粒徑從幾微米到幾百微 米不等，可用于注射和口服。這些制成的微球制劑有著普通劑型所不能及的優(yōu)點(diǎn)可以掩蓋 不良?xì)馕?，減少患者用藥過程中的不順應(yīng)性；減少給藥量的同時(shí)提高藥物的利用度；可以 調(diào)節(jié)粒徑的大小，在緩慢釋藥的同時(shí)實(shí)現(xiàn)靶向給藥；藥物在體內(nèi)穩(wěn)定持續(xù)地釋放，有效避免 藥物濃度在體內(nèi)大幅波動(dòng)所造成的“峰谷”現(xiàn)象。PLGA微球具有疏水作用易通過吞噬細(xì)胞的吞噬作用而聚集于肝臟，因此，將肝炎 治療藥物制成PLGA微球，既起到了緩釋作用，又達(dá)到了被動(dòng)肝靶的效果，在減少用藥量的 同時(shí)增加了療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球的制備方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是首先取PLGA加入到二氯甲烷 (CH2C12)中，制得濃度為25 35mg -mr1的PLGA溶液，將8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚溶于PBS 溶液，制得10 lSmg^L—1的藥物溶液；然后按照1 5 10的比例精密量取一定量的藥 物溶液加入到適量的PLGA溶液中，超聲乳化，制得初乳；再將該初乳加入到8 12倍量的 1 3% PVA水溶液中，磁力攪拌器1500r攪拌2 4小時(shí)后，500r mirT1低速攪拌1. 5 2. 5小時(shí)，將二氯甲烷(CH2C12)揮干，使微球固化，即得。按照本發(fā)明的制備方法得到的8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球不僅能增加8，9 單環(huán)氧短葉蘇木酚的溶解性、穩(wěn)定性，而且更重要的是具有靶向性，從而減少用藥劑量，降低毒副作用，提高生物利用度。


圖1是PLGA種類對(duì)微球包封率和載藥量的影響；圖2是PVA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響；圖3是不同初乳比例對(duì)微球包封率和載藥量的影響；圖4是PLGA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響；圖5是微球粒徑分布圖
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1，首先，取PLGA加入到二氯甲烷中，制得濃度為28mg mL—1的PLGA溶液，然 后將8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚溶于PBS溶液，制得Umg^L—1的藥物溶液；其次，按照1 7 的體積比將藥物溶液加入到PLGA溶液中，超聲乳化，制得初乳；最后，將該初乳與質(zhì)量濃度 為2%的PVA水溶液按1:11的體積比將初乳加入到PVA水溶液中，以1500r/min磁力攪 拌2 4小時(shí)后，再以500r/min攪拌1. 5 2. 5小時(shí)，將二氯甲烷揮干，使微球固化8，9單 環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球。實(shí)施例2，首先，取PLGA加入到二氯甲烷中，制得濃度為SOmgiL—1的PLGA溶液， 然后將8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚溶于PBS溶液，制得11. 5mg mL—1的藥物溶液；其次，按照 1 8的體積比將藥物溶液加入到PLGA溶液中，超聲乳化，制得初乳；最后，將該初乳與質(zhì) 量濃度為1. 5 %的PVA水溶液按1 9的體積比將初乳加入到PVA水溶液中，以1500r/min 磁力攪拌2 4小時(shí)后，再以500r/min攪拌1. 5 2. 5小時(shí)，將二氯甲烷揮干，使微球固化 8,9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球。實(shí)施例3，首先，取PLGA加入到二氯甲烷中，制得濃度為ZSmgmL—1的PLGA溶液，然 后將8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚溶于PBS溶液，制得15mg mL_i的藥物溶液；其次，按照i 10 的體積比將藥物溶液加入到PLGA溶液中，超聲乳化，制得初乳；最后，將該初乳與質(zhì)量濃度 為1 %的PVA水溶液按1 8的體積比將初乳加入到PVA水溶液中，以1500r/min磁力攪拌 2 4小時(shí)后，再以500r/min攪拌1. 5 2. 5小時(shí)，將二氯甲烷揮干，使微球固化8，9單環(huán) 氧短葉蘇木酚PLGA微球。實(shí)施例4，首先，取PLGA加入到二氯甲烷中，制得濃度為32mg mL—1的PLGA溶液，然 后將8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚溶于PBS溶液，制得lOmg^L—1的藥物溶液；其次，按照1 5 的體積比將藥物溶液加入到PLGA溶液中，超聲乳化，制得初乳；最后，將該初乳與質(zhì)量濃度 為3%的PVA水溶液按1 10的體積比將初乳加入到PVA水溶液中，以1500r/min磁力攪 拌2 4小時(shí)后，再以500r/min攪拌1. 5 2. 5小時(shí)，將二氯甲烷揮干，使微球固化8，9單 環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球。實(shí)施例5，首先，取PLGA加入到二氯甲烷中，制得濃度為SSmgiL—1的PLGA溶液， 然后將8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚溶于PBS溶液，制得12. 5mg mL—1的藥物溶液；其次，按照 1 6的體積比將藥物溶液加入到PLGA溶液中，超聲乳化，制得初乳；最后，將該初乳與質(zhì) 量濃度為2%的PVA水溶液按1 12的體積比將初乳加入到PVA水溶液中，以1500r/min磁力攪拌2 4小時(shí)后，再以500r/min攪拌1. 5 2. 5小時(shí)，將二氯甲烷揮干，使微球固化 8,9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球。一、微球制備工藝的研究微球的制備受到多種因素的影響，這些因素共同制約著所制得的微球的質(zhì)量，因 此，通過選擇非常具有代表性的考察指標(biāo)_包封率和載藥量，作為微球質(zhì)量評(píng)價(jià)的參考指 標(biāo)，對(duì)所制得的PLGA微球進(jìn)行影響因素的考察，具有非常重要的意義。 1. PLGA種類對(duì)微球包封率和載藥量的影響選取PLGA濃度、PVA濃度、藥物與PLGA溶液的比例、初乳與PVA比例以及制備初 乳的條件作為固定因素，考察三種不同組成比例的PLGA對(duì)微球包封率與載藥量的影響。各 因素及水平見表1。表4-1考察PLGA種類的各因素及水平 PLGA種類對(duì)微球質(zhì)量影響的考察結(jié)果見表2，圖1。表2 PLGA種類對(duì)微球包封率和載藥量的影響 聚乳酸-羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid), PLGA)是一種可 降解的功能高分子材料，因具有良好的生物相容性，無毒，被廣泛應(yīng)用于制備微球制劑。它 是由兩種單體-乳酸和羥基乙酸隨機(jī)聚合而成，不同的單體比例可以制備出不同類型的 PLGA，其物理狀態(tài)，化學(xué)性質(zhì)以及降解程度皆隨著組成單體比例的不同而不同。本文選用IA GA = 75 25, IA GA = 85 15 以及 IA GA = 65 35 三種不同組 成比例的PDGA作為研究材料，通過對(duì)其所制得微球的包封率和載藥量進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)PDGA的組成 比例對(duì)微球的質(zhì)量有著很大的影響，隨著比例的不同，微球的外觀、載藥量和包封率均呈現(xiàn)出比較 大的差異。通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)IA GA = 75 25時(shí)，PDGA所制得的微球具有較高的包封率和載 藥量，因此，本實(shí)驗(yàn)選用PDGA組成比例為IA GA = 75 25的結(jié)晶作為包裹微球的基質(zhì)材料。
2. PVA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響選取PLGA種類、PLGA濃度、藥物與PLGA溶液的比例、初乳與PVA水溶液的比例以 及制備初乳的條件為固定因素，考察三種不同濃度的PVA對(duì)微球包封率和載藥量的影響。 各因素及水平見表3。表3考察PVA濃度的各因素及水平
PVA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響測(cè)定結(jié)果見表4，圖2。表4 PVA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響 聚乙烯醇(polyvinyl alcohol, PVA)是一種白色或黃白色粉末狀顆粒，是由聚乙酸 乙烯酯經(jīng)醇解而成的結(jié)晶性高分子材料，根據(jù)其聚合度和醇解度不同，有不同的性質(zhì)和規(guī)格。 國(guó)內(nèi)采用的PVA有05-88和17-88等規(guī)格，兩種成膜材料均能溶于水。由于聚乙烯醇無活性， 不分解，性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)口服后在消化道內(nèi)幾乎不被吸收，80%的聚乙烯醇在48小時(shí)內(nèi)隨大便 排出，因此，在復(fù)乳法制備微球的過程中，常常被作為一種比較常用的材料應(yīng)用到外水相中。外水相在用復(fù)乳法制備微球的過程中有著重要的影響，它直接關(guān)系到微球的包封 率和載藥量。本實(shí)驗(yàn)通過考察所加聚乙烯醇的濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響來選擇最 合適的連續(xù)相濃度。圖2反映出PVA的濃度對(duì)微球的包封率和載藥量均有著較大的影響。 通過對(duì)選定的以上三種PVA濃度進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PVA濃度為2%時(shí)，PLGA微球的包封率和 載藥量均達(dá)到最高點(diǎn)，因此，選擇2%的PVA水溶液作為制備微球的外水相。3.不同初乳組成比例對(duì)微球包封率和載藥量的影響 選取PLGA種類、PLGA濃度、PVA濃度、初乳與PVA水溶液的比例以及制備初乳的條 件為固定因素，考察不同初乳比例對(duì)微球包封率和載藥量的影響。各因素及水平見表5。表5考察初乳比例的各因素及水平 不同初乳組成比例對(duì)微球包封率和載藥量的影響見表6，圖3。表6不同初乳比例對(duì)微球包封率和載藥量的影響 初乳組成比例的大小直接影響到藥物載體所包含的藥物的量，因而會(huì)直接反映到 所制備微球的包封率和載藥量的大小上來，從圖3可以看到，包封率和載藥量均隨著初乳 組成比例的增大而呈現(xiàn)出先增大后減小的趨勢(shì)，當(dāng)形成初乳的藥物溶液與PLGA溶液的比 例為1 7時(shí)，包封率和載藥量均達(dá)到最大值，分別為92. 95%，5. 81%，因此，選擇1 7作 為形成初乳的比例。4. PLGA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響以PLGA種類、PVA濃度、初乳組成比例、初乳與PVA水溶液的比例以及制備初乳的 條件為固定因素，考察不同PLGA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響。各因素及水平見表7。表7考察PLGA濃度的各因素及水平 PLGA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響見表8，圖4。表8 PLGA濃度對(duì)微球包封率和載藥量的影響 圖4比較直觀地反映出PLGA濃度對(duì)微球的包封率和載藥量都有著顯著的影響，隨 著PLGA濃度的增大，微球的載藥量呈現(xiàn)出下滑趨勢(shì)，而包封率先增大后減小，當(dāng)PLGA濃度 30mg mL—1時(shí)，微球的包封率達(dá)到92. 20%，其載藥量也達(dá)到5. 50 %，綜合考慮其對(duì)包封率 和載藥量的影響，選擇30mg mL^PLGA作為制備該微球的最適濃度。5.初乳制備方法對(duì)微球包封率、載藥量和外觀的影響以PLGA種類、PLGA濃度、PVA濃度、初乳組成比例以及初乳與PVA水溶液的比例作 為固定因素，各因素及水平見表9。表9考察初乳制備方法的因素及水平 通過設(shè)置以上固定因素，考察不同初乳制備方法對(duì)微球包封率、載藥量以及外觀 的影響，初乳制備方法及條件見表10。表10初乳制備方法及條件
7 初乳制備方法對(duì)微球包封率、載藥量和外觀的影響見表11。表11初乳制備方法對(duì)微球包封率、載藥量和外觀的影響 不同的制備方法所制得的微球的形態(tài)呈現(xiàn)出較大的差異，超聲法所制備的微 球粒徑較大且大小不均一，肉眼可見較大顆粒，呈現(xiàn)出混懸液狀態(tài)，而通過高速勻質(zhì)機(jī) 10000r mirT1攪拌所制得的微球呈現(xiàn)出比較均勻的透明狀態(tài)。通過比較兩種方法所制得 微球的包封率和載藥量，發(fā)現(xiàn)通過高速攪拌得到的微球，其包封率和載藥量均高于超聲法 所制得的微球的包封率和載藥量。小結(jié)綜合以上對(duì)各因素的分析考察，選擇最優(yōu)的條件作為微球制備的處方 30mg ml^PLGA (LA GA = 75 25)；藥物溶液與 PLGA 溶液比例 1 7 ； 10000r mirT1 高 速攪拌制備初乳；分散與2% PVA的水溶液中，磁力攪拌。二、最佳處方工藝微球的制備及質(zhì)量分析通過單因素分析，選擇最佳的8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚微球制備工藝，制備6批微 球，制備工藝如下精密量取一定量的12.511^*111171的8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚？83溶液，按照1 7 的比例加入到濃度為30mg mL—1的PLGA溶液中，10000r mirT1高速攪拌，制得初乳，將該 初乳加入到10倍量的2% PVA水溶液中，磁力攪拌器攪拌，先用1500r mirT1快速攪拌3小 時(shí)，再將磁力攪拌器調(diào)至500r mirT1，低速攪拌2小時(shí)，待二氯甲烷(CH2C12)揮干，即可得 到固化的微球。同樣的條件下制備6批微球。取按照最佳工藝制得的8，9_單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球上清液過濾液各lmL，加 入到0. 5g葡聚糖凝膠柱的上端，用三蒸水進(jìn)行洗脫，通過觀察凝膠柱中顏色的變化，收集 5 10mL洗脫液，濃縮，進(jìn)樣，用高效液相色譜法測(cè)定未被包裹的8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚， 計(jì)算微球的包封率。8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球包封率的計(jì)算公式如下
包封率(%)=M1-M2x100% Ml載藥量(%) = M1-M2x100% M3
式中戽——加入的單環(huán)氧短葉蘇木酚的質(zhì)量
M2——游離的單環(huán)氧短葉蘇木酚的質(zhì)量 M3——加入的PLGA的質(zhì)量 所制得的6批微球呈現(xiàn)出均一穩(wěn)定的較透明狀態(tài)，其包封率和載藥量見表12。 表12六批8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球的包封率和載藥量
對(duì)所制得的8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球通過激光粒度分析儀測(cè)定其平均粒 徑。粒徑分布見圖5。根據(jù)最佳工藝制得的六批微球均具有較高的載藥量和包封率，微球粒徑小且均 勻，于光學(xué)顯微鏡下觀察呈完整球形，重復(fù)性好，室溫下放置七天，顏色基本無變化，西林瓶 底部出現(xiàn)少許白色粉末。
權(quán)利要求
一種8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球的制備方法，其特征在于1)首先，取PLGA加入到二氯甲烷中，制得濃度為25～35mg·mL-1的PLGA溶液，然后將8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚溶于PBS溶液，制得10～15mg·mL-1的藥物溶液；2)其次，按照1∶5～10的體積比將藥物溶液加入到PLGA溶液中，超聲乳化，制得初乳；3)最后，將該初乳與質(zhì)量濃度為1～3％的PVA水溶液按1∶8～12的體積比將初乳加入到PVA水溶液中，以1500r/min磁力攪拌2～4小時(shí)后，再以500r/min攪拌1.5～2.5小時(shí)，將二氯甲烷揮干，使微球固化8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球。
全文摘要
一種8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球的制備方法，首先取PLGA加入到二氯甲烷(CH2Cl2)中制得PLGA溶液，將8，9-單環(huán)氧短葉蘇木酚溶于磷酸鹽緩沖溶液(PBS)，制得藥物溶液，精密量取一定量的藥物溶液加入到適量的PLGA溶液中，超聲乳化，制得初乳，將該初乳加入到PVA水溶液中，磁力攪拌器攪拌，將二氯甲烷(CH2Cl2)揮干，使微球固化，即得。按照本發(fā)明的制備方法得到的8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚PLGA微球不僅能增加8，9單環(huán)氧短葉蘇木酚的溶解性、穩(wěn)定性，而且更重要的是具有靶向性，從而減少用藥劑量，降低毒副作用，提高生物利用度。
文檔編號(hào)A61K31/366GK101856332SQ201010208729
公開日2010年10月13日 申請(qǐng)日期2010年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月25日
發(fā)明者李維鳳, 牛曉峰, 王旭華 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)