專利名稱：愛樂新用于治療由厭氧性腸道螺旋體或鼻腔鳥桿菌引起的疾病的制作方法
愛樂新用于治療由厭氧性腸道螺旋體或鼻腔鳥桿菌引起的
疾病本申請為分案申請，其原申請的申請日為2004年7月5日，申請?zhí)枮?200480018398. 6 (國際申請?zhí)朠CT/GB2004/002887)，名稱為“愛樂新用于治療由厭氧性腸 道螺旋體或鼻腔鳥桿菌引起的疾病”。本發(fā)明涉及抗生素作為藥物的用途，該藥物用于治療或預(yù)防控制疾病和感染，特 別是豬和家禽的疾病和感染。豬和家禽，特別是密集飼養(yǎng)或大規(guī)模飼養(yǎng)的豬和家禽，很容易患上或感染多種 疾病和感染，比如由豬厭氧性腸道螺旋體(Brachyspirapilosicoli)和家禽鼻腔鳥桿菌 (Ornithobacterium rhinotracheale)弓丨起的疾病。厭氧性腸道螺旋體引發(fā)一種稱為螺旋體痢疾的疾病，表現(xiàn)為腹瀉和生長緩慢。這 種感染極少導(dǎo)致死亡，但可為致命性的，特別是同時感染了其他生物，如另一種腸道寄生蟲 時。由于日增重和飼料轉(zhuǎn)化率減少，感染可對養(yǎng)豬利潤產(chǎn)生巨大經(jīng)濟影響。與一些其他的 豬腸道感染不同，由厭氧性腸道螺旋體引起的疾病不僅僅只與豬有關(guān)。已知它還可感染人、 狗和其他動物。鼻腔鳥桿菌是一種呼吸道疾病，表現(xiàn)為輕度呼吸道癥狀、死亡率增加、增重慢、飼 料轉(zhuǎn)化率低、腦損傷以及產(chǎn)蛋量減少。由于治療花費高、生長緩慢以及加工過程中報廢率 高，它可導(dǎo)致經(jīng)濟損失。鼻腔鳥桿菌已經(jīng)從許多物種中分離，包括雞、鴨、山鶉、鵝、鴿子和火 雞等等。這說明存在普遍性的潛在貯存宿主。盡管有一些已知的治療厭氧性腸道螺旋體和鼻腔鳥桿菌的方法，但由于對常用抗 生素普遍存在抗藥性，治療效果常常不佳。本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，已知過去以高劑量用于治療和控制家禽支原體疾病的抗生 素愛樂新(aivlosin，又稱為3-0-乙?；?4" _0_異戊?；?泰樂菌素)，對于預(yù)防和控制 厭氧性腸道螺旋體，特別是豬厭氧性腸道螺旋體和鼻腔鳥桿菌，特別是家禽鼻腔鳥桿菌同 樣有效。在英國專利說明書1，539，907中，公開了在3位和4"位具有酰基的泰樂菌素衍生 物及其酸加成鹽，特別是酒石酸、乙酸、丙酸、檸檬酸、琥珀酸、鹽酸、硫酸和磷酸加成鹽。在 這些泰樂菌素衍生物中，具體公開了 3-0-乙?；?4" -0-異戊?；?泰樂菌素，現(xiàn)常稱為
愛樂新。該化合物具有通式 其中Rl為乙?；?，R2為異戊?；?。該說明書還公開了生產(chǎn)愛樂新的方法， 即使泰樂菌素或經(jīng)適當?shù)夭糠瞩；奶肪匕l(fā)生生化酰化作用，該方法是通過鏈 霉菌屬(Str印tomyces)的適當?；⑸铮貏e是選自耐熱鏈霉菌(Str印tomyces thermotolerans, ATCC 11416)、貞胃禾中(Streptomyces fungicidus subsp. espinomyceticus, ATCC 21574)、生米卡鏈霉菌(Streptomycesmycarofaciens, ATCC 21454)和吸水鏈霉菌(Str印tomyceshygroscopicus，ATCC 21582)之一的微生物，并且酰 化過程中需要存在有適當?shù)孽；w，特別是乙酰CoA、異戊酰CoA、乙酸、異戊酸，這些酸 的鉀、鈉或銨鹽，這些酸的甲酯和乙酯，這些酸和α -氧代戊酸的酰胺。英國專利說明書1，539，907提到泰樂菌素衍生物可施用于人或動物，并說明它們 具有抗多種革蘭氏陽性細菌的活性，所述細菌包括一些抗藥性細菌，但說明書中沒有特別 指明將這些衍生物用于治療或控制動物具體的疾病或感染，雖然它確實說到這些衍生物可 以與已知的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素藥物相似的方式施用于人、家畜、家養(yǎng)寵物、實驗動物和家 禽，并用以腸胃內(nèi)、腸胃外或局部控制感染性疾病。事實上，基于在日本的最初市場注冊(No 4 chika AC 1771)，至今所上市和批準 上市的愛樂新只以飼料中200到500ppm的高劑量用于治療和控制豬和家禽的支原體疾病。 沒有理由假定它適于治療、預(yù)防和控制其他感染和疾病，特別是豬和家禽的感染和疾病。對 支原體疾病有效的其他大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，如紅霉素，對豬和家禽的其他感染如由厭氧性 腸道螺旋體和鼻腔鳥桿菌引發(fā)的疾病沒有任何效果或任何顯著效果。當然，所有主要國家 所采用的許可方案的特征就是為特定目的批準上市的獸醫(yī)藥物，在未經(jīng)相關(guān)部門另外授權(quán) 或批準的情況下，不可以為任何其他目的上市銷售或推薦使用。因此，這對即使是已知的抗 生素的新獸醫(yī)用途的研究是極大的阻礙。PCT申請WO 02/32233記載了愛樂新治療豬赤痢螺旋體(Brachyspira hyodysenteriae)的用途。赤痢螺旋體是一種大腸感染。它引起豬痢疾，由于脫水導(dǎo)致出血 性腹瀉和死亡。愛樂新對由厭氧性腸道螺旋體引起的疾病的活性，不能夠從治療赤痢螺旋 體用途中預(yù)測得到，因為任何抗菌劑的作用效果不可能未經(jīng)活體實驗而準確地確定。WO 02/32233還公開了愛樂新治療豬細胞內(nèi)勞索尼亞菌 (Lawsoniaintracellularis)的用途。細胞內(nèi)勞索尼亞菌是一種小腸疾病，可引起腹瀉和消 瘦。細胞內(nèi)勞索尼亞菌分類上屬于革蘭氏陰性生物體，但它不是常規(guī)的革蘭氏陰性細菌。愛樂新的特征是屬于大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，對革蘭氏陰性細菌和支原體有效。此類抗生素預(yù)期不會對革蘭氏陰性細菌有效(Antimicrobial Therapy in Veterinary Medicine,第三版(2000)，Prescott JF, Baggot JD 禾口 Walker RD.編輯，Iowa State UniversityPress)，正如大環(huán)內(nèi)酯類用于溶血巴斯德氏菌(Pasteurellahaemolytica)的 現(xiàn)有數(shù)據(jù)所證實的一樣。大環(huán)內(nèi)酯類活性不能夠從細菌壁結(jié)構(gòu)預(yù)測。大環(huán)內(nèi)酯類已證實對 分枝桿菌(Mycobacteriumspp.)——其細胞壁含有復(fù)雜的脂質(zhì)綴合物，以及沒有細胞壁的 支原體(Mycoplasma spp.)均有效。任何大環(huán)內(nèi)酯的活性不可能未經(jīng)具體試驗而預(yù)測。出 乎意料的是，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)它對革蘭氏陰性細菌鼻腔鳥桿菌同樣有效。經(jīng)過大量的體外和體內(nèi)(動物)試驗工作，本發(fā)明人已經(jīng)確信適當劑量率 (doserate)的愛樂新及其可用的衍生物可有效預(yù)防、控制和治療由豬厭氧性腸道螺旋體和 家禽鼻腔鳥桿菌引起的疾病。本發(fā)明提供愛樂新本身或其可藥用(無毒)的衍生物，如酸加成鹽在制備治療或 預(yù)防由動物厭氧性腸道螺旋體和鼻腔鳥桿菌引起的疾病的藥物中的應(yīng)用。該藥物優(yōu)選用于 治療由哺乳動物厭氧性腸道螺旋體，更優(yōu)選由豬厭氧性腸道螺旋體引起的疾病。在另一個 實施方案中，該藥物還用于治療鳥類，更優(yōu)選家禽的鼻腔鳥桿菌。還提供了一種治療或控制 由動物厭氧性腸道螺旋體和鼻腔鳥桿菌引起的疾病的方法，包括給動物施用有效量的愛樂 新或其可藥用的衍生物。術(shù)語“預(yù)防”是指疾病的預(yù)防或控制。它既包括阻止疾病的發(fā)生，也包括使疾病保 持在可控水平。術(shù)語“由......引起的疾病”是指因為厭氧性腸道螺旋體感染而導(dǎo)致動物生理狀
態(tài)的破壞。生理狀態(tài)的破壞包括與厭氧性腸道螺旋體感染有關(guān)的特定癥狀或跡象，以及僅 僅是健康狀況的整體下降，例如可導(dǎo)致動物對其他病原體引起的感染或疾病更加敏感。更 具體地說，由厭氧性腸道螺旋體引起的疾病包括螺旋體痢疾。術(shù)語“豬”涵蓋豬科的所有成員，例如，豬科(Suidae)成員。術(shù)語“家禽”涵蓋所 有種類的馴養(yǎng)鳥類，包括但不限于雞、火雞、鴨、鵝、平胸類鳥和獵禽。優(yōu)選地，治療、預(yù)防或控制由豬厭氧性腸道螺旋體引起的疾病的藥物以10到 200ppm，更優(yōu)選10到lOOppm，更加優(yōu)選20到50ppm的水平加入飼料中。優(yōu)選地，治療、預(yù)防或控制家禽鼻腔鳥桿菌的藥物以10到200ppm，更優(yōu)選10到 IOOppm,更加優(yōu)選20到50ppm的水平加入飼料中。治療或預(yù)防控制家禽鼻腔鳥桿菌的藥物 還可以水溶性形式加入水中，劑量為10 100mg/lkg體重，更優(yōu)選20 40mg/lkg。上述兩種藥物均優(yōu)選適于加入飼料或飲水中。另外，藥物可適于通過注射施用。本發(fā)明還提供愛樂新防止或減少厭氧性腸道螺旋體或鼻腔鳥桿菌體外生長的用 途。防止或減少這些細菌的生長可用于體外制備腸組織，或用于抗生素的抗細菌活性的比 較?？捎玫淖杂尚问降膼蹣沸聻榘咨Y(jié)晶顆粒，熔點180°C 184°C，易溶于低級醇如 乙醇、酮如丙酮、醚如二乙醚、酯如乙酸乙酯以及芳香烴如甲苯中，但幾乎不溶于正己烷和 石油醚中。它極易溶于PH值在7左右或以下的水溶液中，但在pH值更高的水溶液中的溶 解性較差。由于它是堿性化合物，它可形成酸加成鹽，這些可藥用的鹽的用途也包括在本發(fā) 明之中。用以形成可用的酸加成鹽的酸包括無機酸如鹽酸、硫酸或磷酸，以及有機酸如酒 石酸、乙酸、丙酸、檸檬酸和琥珀酸?？捎玫难苌锏木唧w實例有鹽酸愛樂新(熔點129 133°C )和酒石酸愛樂新(熔點119 122°C )。這些衍生物常比愛樂新本身水溶性更好， 因此使用時具有制劑優(yōu)勢。愛樂新衍生物優(yōu)選包括任何可藥用的功能性衍生物。功能性衍生物可通過修飾一 個或多個愛樂新的取代基產(chǎn)生。衍生物優(yōu)選鹽；更優(yōu)選酸鹽。愛樂新及適當?shù)难苌锟筛鶕?jù)本發(fā)明使用已知的方法針對所需的給藥途徑，通過 將其與適當?shù)墓腆w或液體載體和賦形劑混合制成藥物，以提供例如用于口服、腸內(nèi)或腸胃 外用藥的組合物。常規(guī)配料可用作載體和賦形劑，例如，水和鹽溶液用于液態(tài)制劑，含硅材 料——娃石和硅酸鹽(如水合硅酸鎂)、谷類產(chǎn)品(如大豆粉和面粉)以及其他可藥用的固 體用于口服固態(tài)制劑。制劑還可以常規(guī)方式進一步包括助劑和添加劑，如礦物質(zhì)、潤滑劑、 防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、緩沖劑和著色或調(diào)味材料。在預(yù)防或控制所提及的疾病 時，對于動物而言，將愛樂新或衍生物作為添加劑包含于動物飼料或飲水中十分方便，但治 療疾病時，如果需要，可將其包含于可注射溶液、藥片、膠囊或糖漿中。愛樂新(本身或以適當衍生物的形式，例如，諸如酒石酸鹽等的酸加成鹽)可以制 成各種效能為1 10重量％的預(yù)混合料。用于制備該預(yù)混合料的特別適當?shù)慕M合物包括 愛樂新鹽、填充劑如大豆粉和添加劑如羥丙基纖維素，該組合物的效能為180 220mg/g。對于顆粒飼料或擠壓飼料(extruded feed)而言，有可能進行高溫處理，為確保該 動物飼料中愛樂新的穩(wěn)定性，需要提供一種包被有聚乙烯吡咯烷酮的顆粒形式的包衣愛樂 新(本身或以適當衍生物的形式，例如，諸如酒石酸鹽等的酸加成鹽)。活性組分聚乙烯 吡咯烷酮的適當重量比為50 1到1 1。在該組合物中還可存在惰性的填充劑和其他配 料，聚乙烯吡咯烷酮的總濃度優(yōu)選0. 1 10重量％。不管作為飼料添加劑使用，還是作為直接施用的制品使用，藥物制劑可包含任何 適當比例的愛樂新，例如1重量％或更少至90重量％或更多。液態(tài)制劑通常含有50 90 重量％，而固態(tài)制劑通常含有1 25重量％。為了治療、預(yù)防或控制由厭氧性腸道螺旋體引起的豬疾病，愛樂新可通過例如飼 料給藥，重量比為10 200ppm(10 200g/1000kg飼料)，給藥時間足夠長以成功控制或治 愈疾病，如7 14天。為了治療、預(yù)防或控制家禽的鼻腔鳥桿菌感染，愛樂新可通過例如飼料給藥，重量 比為20 50ppm(20 50g/1000kg飼料)，給藥時間足夠長以成功控制或治愈疾病，如7 14天。或者，愛樂新也可通過飲水給藥，重量比在100 250ppm之間(100 250g/1000L 水)，優(yōu)選在100 150ppm之間。以下實施例(其中的份數(shù)以重量為基準)說明愛樂新在制備根據(jù)本發(fā)明治療或預(yù) 防動物感染的獸醫(yī)用藥物或制品中的應(yīng)用。實施例1于水中制成溶液的20份愛樂新API (活性藥物組分)與80份大豆粉混合，混合物 經(jīng)噴霧干燥，生成每IOOOkg含200kg愛樂新活性的飼料固態(tài)添加劑。該制劑可加入豬和家 禽飼料中，愛樂新在飼料中的濃度為25 200g愛樂新/IOOOkg最終飼料。實施例225份20%的愛樂新與50份水合硅酸鎂(惰性硅石)、24份小麥飼料粉和1份液 體石蠟EP混合為干混粉料，生成每IOOOkg含50kg愛樂新活性的飼料固態(tài)添加劑。該制劑可如實施例1所述用于豬和家禽飼料。實施例35份實施例2中使用的20%的愛樂新與40份水合硅酸鎂、54份小麥飼料粉和1份 液體石蠟EP混合為干混粉料，生成每IOOOkg含IOkg愛樂新活性的飼料固態(tài)添加劑。該制 劑可如實施例1所述用于豬和家禽飼料。實施例4將愛樂新溶于水中生成含80 90%愛樂新活性的水溶液，以用于豬或家禽的飲 水中。可將該制劑加入飲水中，飲水中的愛樂新濃度在25 100g/200升飲水的范圍內(nèi)。實施例5含超過80 / %酒石酸愛樂新的愛樂新API混入850kg批料中，該批料包括愛樂新API163 169kg羥丙基纖維素，歐洲藥典 8. 2 8. 5kg水，歐洲藥典800 1200升脫脂大豆粉720kg將該批料進行加工，并在加工過程中除去水分。愛樂新API投入量根據(jù)由HPLC測 定的原料中游離堿的含量值進行調(diào)整，使最終產(chǎn)品生物檢測效能達到180 220mg/g。該產(chǎn) 品(AIVLOSIN FG 200)也可以其他批料大小生產(chǎn)，適于制造各種效能為到10%的愛樂 新預(yù)混合料。實施例6高溫加工顆粒飼料或擠壓飼料后，在該動物飼料中仍具有穩(wěn)定性的包衣愛樂新制 劑可由以下配料IOOOkg的批料(但也可使用其他批料大小)生產(chǎn)AIVLOS IN FG 200 (見實施例 5) 250. Okg輕液體石蠟，歐洲藥典10.0kg小麥飼料粉240. Okg聚乙烯吡咯烷酮10. Okg 100. Okg海泡石至 1000. Okg實施例7測定愛樂新對厭氧性腸道螺旋體的最小抑制濃度(MIC)從英國不同地區(qū)的不同豬種群分離了 5個厭氧性腸道螺旋體野生株，采用抗生素 稀釋法測定乙酰異戊酰泰樂菌素對這5個野生株的MIC。每個分離株取4份，每份0. 2ml，引 入由濃度為0. 78 200μ g/ml的抗生素預(yù)處理的瓊脂板上。菌株厭氧性腸道螺旋體(P18A) 用作對照，其乙酰異戊酰泰樂菌素的MIC為已知。測定的MIC列入下表中。 結(jié)論為乙酰異戊酰泰樂菌素的MIC基本相似，落在6. 25 25. 0 μ g/ml的范圍內(nèi)， 只有一個分離株(P0204-10-97(4))例外，乙酰異戊酰泰樂菌素對它的活性遠遠高于其他 分離株。該結(jié)果說明，愛樂新對于防止厭氧性腸道螺旋體的生長特別有效，即使在相對較 低的濃度下。實施例8采用MIC(最小抑制濃度)試驗測定愛樂新和替米考星(磷酸替米考星)對鼻腔 鳥桿菌的作用。測定以下各種抗生素對鼻腔鳥桿菌(OR)四個分離株的作用1)愛樂新2)磷酸替米考星測定抗生素對以下OR分離株的作用1) 568/992) 587/003)33/014) 1322/011)MIC 法^m^Mmmmmmmmm^im.愛樂新活性32 μ g/ml X 2 = 64 μ g/ml64 μ g/ml XL 23 = 78. 72 μ g/ml= 0. 04g/500ml磷酸替米考星25% 活性32 μ 1/ml X 2 = 64 μ 1/ml64 μ 1/ml X 4 = 256 μ 1/ml= 0. 13ml/500ml
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四個鼻腔鳥桿菌凍干細菌分離株恢復(fù)后，接種至IOml血清肉湯(0ΒΡ提供，編號 655)中，37°C下培育48小時。培育后讀取各培養(yǎng)物540nm處的光密度(OD)。為了檢測純 度，培養(yǎng)物涂于血胰蛋白瓊脂板上，于37°C、5% CO2條件下培育48小時，然后檢測板是否有 污染。為各抗生素下的每種分離株準備12個試管，放于試管架上。每個試管中裝入2ml 血清肉湯。各排第一個試管中加入2ml抗生素，進行兩倍稀釋(32yg/ml 0. 0625yg/ml)o 然后在11個試管中加入20 μ 1細菌。第12個試管(即陰性對照)既沒有抗生素也沒有細 菌。第11個試管(即陽性對照)只加入20μ 1細菌。然后所有試管均于37°C培養(yǎng)，48小 時后讀取MIC。2)結(jié)果加入抗生素稀釋液前的光密度讀數(shù)(540nm)1)568/99-1. 0252)587/00-1. 0453)33/01-1. 0584) 1322/01-1. 0811)愛樂新 2)磷酸替米考星 3)結(jié)論濃度0. 5 μ g/ml的愛樂新可抑制受測鼻腔鳥桿菌分離株的生長。
濃度4 μ g/ml的磷酸替米考星可抑制受測鼻腔鳥桿菌分離株中三種分離株的生 長。只有8 μ g/ml的濃度才能實現(xiàn)抑制第四個分離株。該結(jié)果說明，愛樂新對于防止鼻腔鳥桿菌的生長特別有效，即使在相對較低的濃 度下。
權(quán)利要求
愛樂新或其可藥用的衍生物在制備治療、預(yù)防或控制鼻腔鳥桿菌感染的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物用于治療家禽。
3.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述藥物以10 200ppm的用量加入飼料中。
4.權(quán)利要求1 3之一的用途，其中所述藥物為飼料或飲水添加劑。
5.一種治療、預(yù)防或控制動物鼻腔鳥桿菌感染的方法，包括給動物施用有效量的愛樂 新或其可藥用的衍生物。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述動物為家禽鳥類。
7.權(quán)利要求6的方法，其中愛樂新或其可藥用的衍生物通過飼料或飲水施用。
8.愛樂新或其可藥用的衍生物在防止或減少體外鼻腔鳥桿菌的生長中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及愛樂新在治療、預(yù)防或控制鼻腔鳥桿菌引起的疾病中的用途，其中所述藥物以10-200ppm的用量加入到飼料中，并且其中愛樂新或其可藥用的衍生物通過飼料或飲水施用。
文檔編號A61K31/65GK101879177SQ20101018372
公開日2010年11月10日 申請日期2004年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月3日
發(fā)明者M·桑德斯 申請人:?？苿游锝】涤邢薰?br>