專利名稱：一種單方中藥制劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥和天然藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種預(yù)防及治療慢性腎衰竭及其他慢性腎病的單方中藥制劑及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
慢性腎功能衰竭(CRF)是慢性腎臟疾病及累及腎臟系統(tǒng)性疾病所引起的慢性腎功能減退，以及由此而產(chǎn)生的各種臨床癥狀及代謝紊亂所組成的綜合癥。CRF是一種嚴(yán)重危害患者身體健康，甚至威脅生命的疑難病癥。大量臨床及實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，不同病因的慢性腎病在腎臟遭受一定程度的破壞之后，盡管其基礎(chǔ)病變已經(jīng)停止，但腎功能仍會持續(xù)減退。因此，如何對CRF進(jìn)行早期防治，并延緩CRF的病情進(jìn)展，降低尿毒癥的發(fā)病率就顯得尤為重要。近年來研究發(fā)現(xiàn)，天然藥用蟲生真菌蟬花具有減少細(xì)胞外基質(zhì)的合成，延緩腎小球硬化，改善腎功能的作用，但天然蟬花面臨著資源稀缺，價格昂貴，生產(chǎn)周期長，產(chǎn)量低的問題。研究人員發(fā)現(xiàn)，蟬花的人工培育物不僅與天然蟬花具有相似的成分和功效，尤其是在治療慢性腎衰竭上，同樣具有降低血清肌酐和尿素氮水平，改善腎功能，抑制系膜細(xì)胞增生和基質(zhì)增多，延緩腎小球的硬化進(jìn)展，同時也可以解決天然蟬花的資源稀缺，產(chǎn)量低，質(zhì)量不穩(wěn)定等問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種單方中藥制劑。該中藥制劑對慢性腎衰竭及其他慢性腎病的發(fā)生與發(fā)展具有明顯的治療和預(yù)防作用，能降低血清黃嘌呤氧化酶活性。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案一種單方中藥制劑，該單方中藥制劑中含有蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物。較佳的，所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物由如下方法制得1)菌種制備包括斜面種制備和一級種制備過程；其中，斜面種制備包括如下步驟將單胞分離后的蟬擬青霉菌株移植到PSA培養(yǎng)基斜面試管中，在22°C 25°C下培養(yǎng)5 7天，挑選長勢好的種保存?zhèn)溆?；一級種制備包括如下步驟將斜面種接入馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)液中，在22°C 25°C， 振蕩頻率為130 150r/min的條件下培養(yǎng)3 7天，至錐形瓶內(nèi)出現(xiàn)大量菌絲球后作為一級種備用；2)接種將步驟1)中制得的一級種接入到固體培養(yǎng)基中；3)發(fā)酵接種后的培養(yǎng)盒移至培養(yǎng)室內(nèi)，在20°C 25°C，相對濕度60% 80%的條件下培養(yǎng)30天 50天；4)孢梗束的采收當(dāng)培養(yǎng)物的孢梗束高度達(dá)9cm左右、表面有少量分生孢子出現(xiàn)時即可采收。
優(yōu)選的，步驟1)中，所述PSA培養(yǎng)基中含有如下組分(每IOOOml培養(yǎng)基中含有)馬鈴薯200g、蔗糖20g、瓊脂20g，其制備方法為將去皮馬鈴薯切丁置于容器內(nèi)加水1000ml，煮沸20min 30min，過濾，加入蔗糖與瓊脂，補(bǔ)足水至1000ml，加熱溶解，然后分裝至試管內(nèi)，裝量為試管長的1/5 1/4，塞上棉塞，置于滅菌鍋內(nèi)0. 15MI^壓力下滅菌 30min，趁熱將試管擺放在斜面板上冷卻。優(yōu)選的，步驟1)中，所述馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)液中含有如下組分(每IOOOml培養(yǎng)液中含有)馬鈴薯200g、蔗糖20g ；其制備方法為將去皮馬鈴薯切丁置于容器內(nèi)加水1000ml， 煮沸15min 30min，過濾，加入蔗糖，補(bǔ)足水至IOOOml，加熱溶解，然后分裝至錐形瓶內(nèi)，裝量為錐形瓶容量的20 % 30 %，塞上棉塞，再用牛皮紙包裹，置于滅菌鍋內(nèi)0. 15MPa壓力下滅菌30min，取出冷卻至20°C以下。較佳的，步驟2)中，所述接種的步驟為當(dāng)培養(yǎng)盒中的固體培養(yǎng)基的溫度冷卻至 20°C以下后，在無菌條件下接種，按照3 5%的接種量將一級種接入培養(yǎng)盒中。較佳的，步驟2、中，所述固體培養(yǎng)基的原料組分包括基質(zhì) 42 46重量份；甘蔗渣 2 10重量份；貝殼粉 0. 1 0. 5重量份；蠶蛹粉 2 5重量份；硝酸鉀 0. 1 0. 5重量份；水44 56重量份；其中，所述基質(zhì)選自如下組合中的一種玉米粉、麩皮和蔗糖的混合物；小麥 ’大麥；粟和蔗糖的混合物；大米和蔗糖的混合物；高粱和蔗糖的混合物。優(yōu)選的，所述玉米粉、麩皮和蔗糖的混合物中，以所述玉米粉、麩皮和蔗糖的混合物的總重量計，玉米粉、麩皮和蔗糖的重量百分比分別為玉米粉43% 55%、麩皮44% 55%、蔗糖 2%。優(yōu)選的，所述粟和蔗糖的混合物中，以所述粟和蔗糖的混合物的總重量計，粟和蔗糖的重量百分比分別為粟98% 99%、蔗糖1% 2%。優(yōu)選的，所述大米和蔗糖的混合物中，以所述大米和蔗糖的混合物的總重量計，大米和蔗糖的重量百分比分別為大米98% 99%、蔗糖1% 2%。優(yōu)選的，所述高粱和蔗糖的混合物中，以所述高粱和蔗糖的混合物的總重量計，高粱和蔗糖的重量百分比分別為高粱98% 99%、蔗糖1% 2%。優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基的制備方法為先將玉米粉、麩皮或小麥、大麥、粟、大米、 高粱煮熟，將蔗糖、硝酸鉀在水中溶解，再與甘蔗渣、貝殼粉，蠶蛹粉按照比例混合均勻。優(yōu)選的，所述固體培養(yǎng)基中還含有蛋白胨(魚粉)，且所述蛋白胨(魚粉)的重量份為0. 5重量份。優(yōu)選的，步驟2)中，所述固體培養(yǎng)基的碳氮比為80 98。優(yōu)選的，步驟幻中，在固體發(fā)酵后期孢梗束生長階段要求采光，溫度較菌絲體生長溫度略低2°C，培養(yǎng)過程中需保持空氣流通。優(yōu)選的，步驟4)中，所述采收的具體步驟為去掉透氣封口膜，用工具將培養(yǎng)物取出分離孢梗束，烘干分級，干燥后用薄膜袋真空包裝，菌質(zhì)置于-20°C貯存。
本發(fā)明中所述的蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物由孢梗束、分生孢子、菌絲體與培養(yǎng)基剩余物質(zhì)的混合物。進(jìn)一步優(yōu)選的，所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物是指采用蟬擬青霉菌株CGMCC No. 3453 [Paecilomyces cicadae]經(jīng)上述固體培養(yǎng)后得到的人工培養(yǎng)產(chǎn)物，該菌株已于2009年11 月18日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)注冊保藏，保藏號為 CGMCC No. ；3453。本發(fā)明還提供了所述單方中藥制劑的制備方法，所述制備方法選自如下三種中的一種1)粉碎將蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物干燥后直接粉碎，過120目篩制得；2)溶劑提?。?)將所述蟬花人工培育物加水煎煮(所用水量為蟬花人工培育物重量的3-6 倍)，過濾，濃縮至適量，干燥即得干燥粉。較佳的，所述溶劑提取為采用有機(jī)溶劑提取，或?yàn)樗幔驗(yàn)橛袡C(jī)溶劑和水的混合溶液提取，進(jìn)一步優(yōu)選為水提。優(yōu)選的，所述有機(jī)溶劑選自乙醇、丙酮和石油醚中的一種或多種的混合物；所述有機(jī)溶劑和水的混合溶液為乙醇水溶液的提取物。較佳地，所述蟬花人工培育物加水煎煮的制備方法中，所述煎煮次數(shù)為2 3次， 每次煎煮時間為0.5 1小時。優(yōu)選地，所述蟬花人工培育物加水煎煮的制備方法中，所述煎煮后得到的煎液先過80目篩，抽濾除雜。優(yōu)選地，所述蟬花人工培育物加水煎煮的制備方法中，所述濃縮為減壓薄膜濃縮， 所述干燥為噴霧干燥。本發(fā)明的第三個方面，提供了一種中藥組合物，該中藥組合物含有安全有效量的上述單方中藥及藥學(xué)上可接受的載體，所述單方中藥的重量百分含量為50% -99%，優(yōu)選為 62% -80%。藥學(xué)上可接受的載體為各種藥學(xué)上常用的輔料和/或賦形劑，包括(但不限于) 糖類(如乳糖、葡萄糖和蔗糖)，淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉)，纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和甲基纖維素)，黃蓍膠粉末，麥芽，明膠，滑石，固體潤滑劑(如硬脂酸和硬脂酸鎂)，硫酸鈣，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和可可油， 多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇)，海藻酸，乳化劑(如Tween)， 潤濕劑(如月桂基硫酸鈉)，著色劑，調(diào)味劑，壓片劑、穩(wěn)定劑，抗氧化劑，防腐劑，無熱原水， 等滲鹽溶液和磷酸鹽緩沖液等；這些物質(zhì)根據(jù)需要用于幫助配方的穩(wěn)定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情況下產(chǎn)生可接受的口感或氣味。本發(fā)明的單方中藥制劑可以按照藥劑學(xué)上的通用方法制成任何常規(guī)的制劑形式， 包括口服制劑。優(yōu)選的是片劑、粉劑劑、顆粒劑、丸劑、粉劑、糖漿劑，最優(yōu)選為粉劑。本發(fā)明的單方中藥制劑粉劑，較佳的服用劑量為2_15g/天，最優(yōu)的劑量為5-10g/ 天。本發(fā)明的第四個方面，提供了上述單方中藥制劑的用途，即該單方中藥用于制備治療及預(yù)防慢性腎衰竭及其他慢性腎病的藥物。所述其他慢性腎病是指以腎小管-間質(zhì)損害為主的腎病，包括尿酸性腎病、慢性腎盂腎炎、藥物性腎損害等。本發(fā)明的第五個方面，提供了上述單方中藥制劑的用途，即該單方中藥用于制備治療及預(yù)防能降低血清肌酐和尿素氮的藥物。術(shù)語說明本發(fā)明中所述的蟬花人工培育物即蟬擬青霉，拉丁名為 PaeciIomycescicadae ο動物實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的單方中藥能夠改善腎功能、提高血紅蛋白、減少ECM 的沉積、減少系膜細(xì)胞增生、減輕腎組織損傷、延緩腎間質(zhì)纖維化；其藥效活性與天然蟬花作用相比相似或更好，安全無明顯毒副作用。本發(fā)明中，所述的單方中藥制劑由所述原料制成，是指由所述原料直接粉碎或提取制成
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1單方中藥制劑的人工培育挑取蟬擬青霉菌種接入PSA培養(yǎng)液中，220C -25°C，140rpm的條件下培養(yǎng)3_5天后備用；將種子按照3-5%比例接入固體培養(yǎng)基中，20°C -25°C，空氣相對濕度60% -80%下培養(yǎng)30d-50d即可，后期孢梗束生長階段要求采光，溫度較菌絲體生長階段略低2°C，每天需適時開窗通氣，保持培養(yǎng)室內(nèi)空氣新鮮。本實(shí)施方式采用的PSA培養(yǎng)基配比為每IOOOml培養(yǎng)基馬鈴薯200g、蔗糖20g、瓊脂 20g。本實(shí)施方式所述的固體培養(yǎng)基配比為基質(zhì)46重量份，甘蔗渣5重量份，貝殼粉0.4 重量份，蠶蛹粉2. 5重量份，硝酸鉀0. 1重量份，水為44重量份；其中基質(zhì)為小麥。其制備方法為先將小麥煮熟，將蔗糖、硝酸鉀在水中溶解，再與甘蔗渣、貝殼粉，蠶蛹粉按照比例混合均勻。實(shí)施例2單方中藥制劑的制備方法之一將采收的新鮮蟬花人工培育物，70°C干燥10h，通過粉碎機(jī)粉碎，過120目篩網(wǎng)，即
得干燥粉。實(shí)施例3單方中藥制劑的制備方法之二將所述蟬花人工培育物加水共煎煮2次，每次0. 5小時，煎液采用真空抽濾，除去雜質(zhì)，得濾液，減壓薄膜濃縮至適量，噴霧干燥即得干燥粉。實(shí)施例4實(shí)施例2的單方中藥制劑對5/6腎切除大鼠模型的腎功能影響本實(shí)施例數(shù)據(jù)引自朱戎、陳以平、鄧躍毅、王琳.固體培養(yǎng)蟬花菌絲延緩腎小球硬化作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2005,6(2) :70-74受試物實(shí)施例2的單方中藥制劑。陽性對照藥科素亞，杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)；天然蟬花，產(chǎn)地為浙江。實(shí)驗(yàn)動物SPF級雄性SD大鼠70只，2月齡，體重200士 10g，由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。分組與造模SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成2組空白組(假手術(shù)組)8只和實(shí)驗(yàn)組(手術(shù)組)62只。采用5/6腎大部分切除方法建立實(shí)驗(yàn)大鼠模型第1次手術(shù)，手術(shù)組大鼠左腎總切除腎皮質(zhì)重量占左腎重量的2/3 ；7d后進(jìn)行第2次手術(shù)，右腎全切。兩次手術(shù)供切除兩腎總重量的5/6。假手術(shù)組SD大鼠采用同樣步驟暴露腎臟，分離腎包膜，但不予腎切除。手術(shù)組動物存活M只，假手術(shù)組全部存活8只。于第2次手術(shù)后2周，所有動物行目內(nèi)眥動靜脈叢采血，進(jìn)行血肌酐(kr)檢測。并將M只手術(shù)組大鼠，根據(jù)Scr分層隨機(jī)分成5組模型對照組(模型組)12只，科素亞組10只，天然蟬花組11只，人工蟬花大劑量組(A組)10 只，人工蟬花小劑量組(B組)11只?？扑貋喗M，天然蟬花組，人工蟬花大劑量組(A組)，人工蟬花小劑量組(B組)大鼠在第2次手術(shù)后4周開始喂藥，治療時間為42d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時大鼠存活44只，假手術(shù)組、人工蟬花大劑量組(A組)各8只，模型組、科素亞組、天然蟬花組、人工蟬花小劑量組(B組)各7只。給藥劑量天然蟬花組、人工蟬花大劑量組(A組)大鼠按4g · kg"1 · Cf1用量，人工蟬花小劑量組(B組)按2g · kg—1 · Cf1用量，加入飼料中給藥，并每日用生理鹽水灌胃1次；科素亞組大鼠采用灌胃法，按30mg · kg"1 · Cf1用量，溶于生理鹽水中，每日灌胃1次。所有大鼠分組分籠飼養(yǎng)，每籠4-5只大鼠，實(shí)驗(yàn)期間全部大鼠自由飲水，進(jìn)食市售塊狀顆粒普通飼料。測試儀器及方法實(shí)驗(yàn)結(jié)束時檢測所有大鼠的kr、尿素氮(BUN)、白蛋白(Alb)；收集24h尿液，測定尿蛋白定量。以上指標(biāo)采用日立7170型自動生化分析儀測定。以HE染色和PAS染色腎組織病理片檢查腎小球硬化，其中，腎小球硬化定義為毛細(xì)血管腔塌陷和/或玻璃樣變。采用Rajj等的半定量方法只評估腎小球硬化程度。在光鏡(X200)視野下，每張切片至少觀察40個腎小球，根據(jù)腎小球硬化灶所占腎小球比例分為0-++++，0表示腎小球無硬化，+表示1個腎小球的25%受損，++表示-50%受損， +++表示51% -75%受損，++++表示76% -100%受損。然后計算腎小球硬化指數(shù)(GSI)。采用SPSS Version 11. 0 for Windows進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(^土s) 表示，組間比較采用One-Way ANOVA分析，統(tǒng)計顯著性水平為P < 0. 05。試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大鼠的kr、BUN值，各治療組較模型組顯著降低(P < 0. 05)，人工蟬花各組(大劑量組、小劑量組)與天然蟬花相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P >0.05)，大鼠的血白蛋白值，假手術(shù)組、科素亞組、天然蟬花組、人工蟬花大劑量組(A組)顯著升高(P <0.05)，而人工蟬花大劑量組(A組)與天然蟬花組及假手術(shù)組相比無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.(^)；大鼠的24h尿蛋白量，各組與假手術(shù)組相比，均明顯增加(P < 0. 05)，但科素亞組、天然蟬花組、 人工蟬花大劑量組(A組)與模型組相比較，則有明顯減少(P<0.05)。見表1。表1模型大鼠血液學(xué)及尿液檢測結(jié)果比較(無±50
權(quán)利要求
1.一種單方中藥制劑，該單方中藥制劑中含有蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物。
2.如權(quán)利要求1中所述的單方中藥制劑，其特征在于，所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物由如下方法制得1)菌種制備包括斜面種制備和一級種制備過程；2)接種將步驟1)中制得的一級種接入到固體培養(yǎng)基中；3)發(fā)酵接種后的培養(yǎng)盒移至培養(yǎng)室內(nèi)，在20°C 25°C，相對濕度60% 80%的條件下培養(yǎng)30天 50天；4)采收。
3.如權(quán)利要求2中所述的單方中藥制劑，其特征在于，步驟2)中，所述固體培養(yǎng)基的原料組分包括基質(zhì) 42 46重量份；甘蔗渣 2 10重量份；貝殼粉 0.1 0.5重量份；蠶蛹粉 2 5重量份；硝酸鉀 0. 1 0. 5重量份；水44 56重量份；其中，所述基質(zhì)選自如下組合中的一種玉米粉、麩皮和蔗糖的混合物；小麥；大麥；粟和蔗糖的混合物；大米和蔗糖的混合物；高粱和蔗糖的混合物。
4.如權(quán)利要求3中所述的單方中藥制劑，其特征在于，所述玉米粉、麩皮和蔗糖的混合物中，以所述玉米粉、麩皮和蔗糖的混合物的總重量計，玉米粉、麩皮和蔗糖的重量百分比分別為玉米粉43% 55%、麩皮44% 55%、蔗糖 2%。
5.如權(quán)利要求3中所述的單方中藥制劑，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基中還含有蛋白胨，且所述蛋白胨的重量份為0. 5重量份。
6.如權(quán)利要求1-5中任一權(quán)利要求中所述的單方中藥制劑，其特征在于，所述蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物是指采用蟬擬青霉菌株CGMCC No. 3453經(jīng)上述固體培養(yǎng)后得到的人工培養(yǎng)產(chǎn)物。
7.權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述單方中藥制劑的制備方法，所述制備方法選自如下三種中的一種1)粉碎將蟬花人工培養(yǎng)產(chǎn)物干燥后直接粉碎，過120目篩制得；2)溶劑提取；3)將所述蟬花人工培育物加水煎煮，過濾，濃縮至適量，干燥即得干燥粉。
8.—種中藥組合物，所述中藥組合物含有安全有效量的權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述的單方中藥及藥學(xué)上可接受的載體，其中，所述單方中藥的重量百分含量為 50% -99%。
9.權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述單方中藥制劑在制備治療及預(yù)防慢性腎衰竭及其他慢性腎病的藥物方面的用途。
10.權(quán)利要求1-6中任一權(quán)利要求所述單方中藥制劑在制備治療及預(yù)防降低血清肌酐和尿素氮的藥物方面的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種單方中藥制劑及其制備方法和應(yīng)用，其特征在于，該中藥單方以人工培育的蟬花有效成分為主要原料制備而成。本發(fā)明提供的中藥單方對慢性腎功能衰竭的發(fā)生及發(fā)展具有明顯的治療和預(yù)防作用。動物實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提供的中藥單方能夠改善腎功能、降低血清肌酐和尿素氮水平、提高血紅蛋白、減少ECM的沉積、減輕腎小管-間質(zhì)損傷、延緩腎間質(zhì)纖維化；該單方安全有效、無明顯毒副作用。
文檔編號A61P13/12GK102240301SQ201010175790
公開日2011年11月16日 申請日期2010年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月14日
發(fā)明者孫長勝, 朱戎, 李成, 柏乃慶, 蓋悅, 趙偉, 陳以平, 陳祝安 申請人:浙江泛亞生物醫(yī)藥股份有限公司