專利名稱：^99mTc標(biāo)記肼基煙酰胺基-二氧辛酰-葉酸配合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及99mTc標(biāo)記的放射性藥物化學(xué)和臨床核醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體說是涉及到 一種"mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物及制備方法。
背景技術(shù)：
葉酸受體是一種通過聚糖磷酯酰肌醇連接在細(xì)胞膜上的糖蛋白，主要包括a，3 和三種亞型。葉酸受體，特別是a-葉酸受體在許多源于上皮組織的惡性腫瘤， 如卵巢癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、鼻咽癌等腫瘤細(xì)胞中卻有高度表，而在正常組織中 表達(dá)高度保守。葉酸受體對葉酸、甲氨蝶呤、5-甲基四氫葉酸等葉酸類似物具有很高的親 和性和特異性，可介導(dǎo)這些物質(zhì)內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。利用這一頗具特點(diǎn)的轉(zhuǎn)運(yùn)過程，可以將放 射性核素或其它治療藥物與葉酸或葉酸類似物偶聯(lián)，通過葉酸受體介導(dǎo)進(jìn)入靶細(xì)胞。因 而，葉酸受體可以作為放射性藥物的“靶目標(biāo)”，實(shí)現(xiàn)對葉酸受體高度表達(dá)的腫瘤的放射性 核素顯像和治療。在臨床上，卵巢癌是一種發(fā)病率和死亡率都較高的婦科癌癥，但是目前 臨床的常規(guī)顯像手段，如MRI，CT和超聲等對卵巢癌的診斷和定位都具有一定的局限性， 因而利用放射性分子探針，實(shí)現(xiàn)對腫瘤靈敏、特異的無創(chuàng)顯像成為卵巢癌的臨床診斷分 期、治療及術(shù)前定位的迫切需要。由于目前上市的基于放射免疫顯像的抗體類放射性藥 物對卵巢癌的顯像缺乏特異性，而超過90%的卵巢癌都呈現(xiàn)出對葉酸受體的特異性高表 達(dá)，所以針對這類上皮癌的葉酸受體為靶向的放射性葉酸腫瘤顯像劑的研制成為當(dāng)前放射 性藥物領(lǐng)域的一個(gè)研究熱點(diǎn)。目前已報(bào)道的葉酸受體介導(dǎo)的放射性藥物所用的核素有 6"68Ga，mIn，99mTC，64CU，及 18F 等。其中 mIn-DTPA-f0late(Y)是第一個(gè)進(jìn)入并完成 II 期 臨床的葉酸受體靶向腫瘤顯像劑，這種顯像劑能很好的區(qū)分良性和惡性腫瘤(Siegel BA， Dehdashti F,MutchDG. et al. Evaluation of 111 In-DTPA-folate as a receptor-targeted diagnostic agent forovarian cancer :initial clinical results. J Nucl Med 2003 ； 44 700-707)，但是由于mIn核素來源不方便，并且價(jià)格昂貴，阻礙了其在臨床上的進(jìn)一步 應(yīng)用。"mTc理想的核性質(zhì)使其成為核醫(yī)學(xué)中應(yīng)用最廣泛的核素，其中99mTc-EC20已經(jīng)成功 用于卵巢癌、宮頸癌、腎癌臨床I期診斷試驗(yàn)，II期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行(Reddy JA，Xu L C， Parker N, Vetzel M, Leamon C P.Preclinical evaluation of 99mTc_EC20 forimaging folate receptor-postive tumors. J Nucl Med 2004;45:857-866 ；Muller C,Reddy J A, Leamon C P, Schibli R. Effects of the antifolates pemetrexed and CB3717on the tissue distribution of "mTc-EC20in Xenografted and syneneic tumor-bearingmice. Molecular Pharmaceutics 2010,7(2) :597_604)。胼基煙酰胺基(HYNIC)作為一種雙功 能連接劑，其用于"mTe標(biāo)記時(shí)，可與共配體一起形成具有很高的穩(wěn)定性和標(biāo)記率的配合物， 因而廣泛應(yīng)用于抗體、多肽等生物活性分子的標(biāo)記。文獻(xiàn)報(bào)道99mTc-HYNIC-f0late有好的 腫瘤/血、腫瘤/肉等靶與非靶比值，但是在荷KB腫瘤小鼠模型中的腫瘤絕對攝取值較 低，并且肝臟、脾等的本底較高(W. Guo，G. H. Hinkle，R. J. Lee,"mTc-HYNIC-folate :a novelreceptor-based targetedradiopharmaceutical for tumor imaging. J Nucl Med 1999 ； 40 :1563-1569 ；劉麗琴，王世真等.葉酸受體腫瘤顯像劑99mTc_胼基煙酰胺基酰胼-葉酸的 合成與動物顯像.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào).2006;28:786-789中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào))。因此， 研制出新型的"mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_葉酸配合物用于腫瘤顯像劑，具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有放射化學(xué)純度高、穩(wěn)定性好、顯像清晰的"mTc標(biāo) 記胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物，同時(shí)也提供其制備方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案，一種"mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_ 二 氧辛酰_葉酸配合物，其特征在于配合物通式為99mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (L)，其
結(jié)構(gòu)式為 結(jié)構(gòu)式中L為三苯基膦磺酸鈉(TPPMS)或三苯基膦三磺酸鈉(TPPTS)；其中1， 8_ 二氨基-3，6_ 二氧辛烷作為連接鏈，其兩端的氨基分別與葉酸分子(folate)和胼基 煙酸(HYOTC)通過酰胺鍵生成胼基煙酰胺基-3，6-二氧辛酰-葉酸偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物分 子中胼基的氮原子、共配體Tricine和L分子中的氧原子與磷原子與99mTc進(jìn)行配位得到 "mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (L)配合物。其制備步驟如下a.首先制備表達(dá)式為Folate-N00N-H YNIC的胼基煙酰胺基_3，6_ 二氧辛酰-葉 酸偶聯(lián)物。將化合物葉酸-二氧辛胺(Folate-NOON)和琥珀酰亞胺_6_叔丁基氧羰基胼基 吡啶-3-甲酸(NHS-HYNIC-Boc)溶解在10_50mL的二甲基亞砜中，加入5_25mL吡啶，室溫 反應(yīng)10-24h ；將反應(yīng)后的溶液緩慢滴入乙醚中，離心收集生成橙紅色沉淀物，分別用乙醚 和二氯甲烷洗滌，真空干燥得橙紅色固體；將橙紅色固體加入l-10mL的三氟乙酸中，在氮 氣保護(hù)下，冰水浴反應(yīng)2h后，旋蒸除去三氟乙酸，將剩余油狀液體用0. l-2mL N, N-二甲基 甲酰胺(DMF)溶解后滴入100-500mL吡啶中，離心收集產(chǎn)生的沉淀并用乙醚洗滌，真空干燥 得到棕黃色粉末的胼基煙酰胺基_3，6- 二氧辛酰-葉酸偶聯(lián)物；具體合成路線如下
,1 Boc-HYNIC-NOON-Folate(R=Boc) 三氟乙酸(
v 2 HYNIC-NOON-Folate (R=H) 上述胼基煙酰胺基-3，6- 二氧辛酰-葉酸偶聯(lián)物與共配體一起進(jìn)行標(biāo)記制備。
b.制備99mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物在青霉素小瓶中依次加入10-100mg三羥甲基-甲基甘氨酸(Tricine)，20-100 ii g 氯化亞錫(SnCl2 '2H20)，20-200 u g Folate-NOON-HYNIC 和 0. l_lmL、pH = 3. 6 的醋酸鹽緩 沖溶液(NaAc-HAc，0. 2mol/L)，搖勻后向其中注入 Tc_99m 淋洗液 0. 1-0. 5mL (37_370MBq)， 沸水浴加熱15min，冷卻至室溫；在上述溶液中加入l_5mg共配體L(L為三苯基膦磺酸鈉溶 液(TPPMS)或者三苯基膦三磺酸鈉溶液(TPPTS))，搖勻后沸水浴加熱5-30min，得到"mTc標(biāo) 記胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物。上述步驟中L為TPPMS時(shí)，得到的99mTc標(biāo)記的胼基煙酰胺基-二氧辛酰_葉酸配 合物，其分子式為"mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPMS)；當(dāng)L為TPPTS時(shí)得到的是分子 式為"mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPTS)的"mTc標(biāo)記的胼基煙酰胺基-二氧辛酰-葉 酸配合物。配合物"mTc(HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)標(biāo)記率大于 90%，用 HPLC(高效 液相色譜)分離未標(biāo)記的穩(wěn)定配體后配合物的放射化學(xué)純度仍大于90%。分離后的配合物 室溫下在生理鹽水以及37°C在小鼠血清中穩(wěn)定性很好。正常小鼠體內(nèi)生物分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯 示配合物在葉酸受體高表達(dá)的腎臟中有很高的攝取，并且滯留較好，在荷瘤裸鼠體內(nèi)生物 分布研究顯示，配合物在腫瘤中有很高的攝取，并且在非靶組織中攝取很低。"mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L) (L 為 TPPTS) 、99mTc_EC20 禾口 "mTc-HYNIC-Folate在小鼠體內(nèi)生物分布數(shù)據(jù)對比如下
P
O-N
c=o
I
o
IH
I
6 以上結(jié)果表明，與目前唯一一個(gè)進(jìn)入臨床研究的"mTc標(biāo)記的葉酸受體腫瘤顯像劑 99mTc-EC20 相比較，"mTc(HYNIC-N00N-Folate) (Tricine) (TPPTS)在腫瘤中的攝取相當(dāng)，但 其在肝、肺、腸等非靶器官的攝取明顯低于99mTc_EC20，這樣就能減少其他器官對顯像效果 的干擾與影響；特別是肝的攝取明顯降低，從而降低了肝膽代謝引起的腹部過高攝取，更有 利于臨床顯像。與"mTc-HYNIC-Folate 相比較，配合物 99mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (TPPTS)通過在葉酸和雙功能連接劑HYNIC之間的引入二氧辛酰連接鏈，一方面降低了標(biāo) 記基團(tuán)對分子受體親和性的影響，使其具有更高的腫瘤攝?。涣硪环矫嫫鸬秸{(diào)節(jié)配合物脂 溶性的作用，改善了藥代動力學(xué)性質(zhì)，靶/非靶值明顯高于99mTc-HYNIC-F0late，所以其作 為新型99mTc標(biāo)記的葉酸受體腫瘤顯像劑具有更優(yōu)良的生物分布性能，適宜推廣應(yīng)用。與目前文獻(xiàn)報(bào)道過的"mTc標(biāo)記的葉酸受體腫瘤顯像劑相比， "mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)有更低的本底，能夠更清晰的顯示腫瘤的位置。所 以其作為新型"mTc標(biāo)記的葉酸受體腫瘤顯像劑具有更優(yōu)良的性能，適宜推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例詳述本發(fā)明一種99mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物，其特征在于配合物通式 為"mTc (HYNIC-NOON-FA) (Tricine) (L)，其結(jié)構(gòu)式為 其制備方法如下a.首先制備表達(dá)式為Folate-N00N-H YNIC的胼基煙酰胺基_3，6_ 二氧辛酰-葉 酸偶聯(lián)物，將310mg Folate-NOON和380mg NHS-HYNIC-Boc溶解在25mL二甲基亞砜中，加入 10mL吡啶，室溫反應(yīng)16h。將反應(yīng)后的溶液緩慢滴入500mL乙醚中，離心收集生成的橙紅色 沉淀，分別用乙醚(3X5mL)和二氯甲烷(3X5mL)洗滌，真空干燥得180mg橙紅色固體，將 85mg橙紅色固體加入lmL的三氟乙酸中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，避光冰水浴反應(yīng)2h后，旋蒸除去三 氟乙酸，將剩余油狀液體用0. 5mL N, N- 二甲基甲酰胺(DMF)溶解后滴入200mL吡啶中，離 心收集產(chǎn)生的沉淀并用乙醚洗滌(3 X 5mL)，真空干燥得到28mg胼基煙酰胺基_3，6- 二氧辛 酰-葉酸偶聯(lián)物。其核磁氫譜CHNMR，DMS0-d6)為S :8. 89 (s，1H)，8. 63 (s，1H)，8. 53 (m，1H)， 8. 10 (m, 2H), 7. 85 (m, 2H), 6. 91 (m, 1H), 6. 62 (d, J = 5. 4Hz，2H)，4. 47 (s，2H)，4. 34 (m，2H)， 3. 48-1. 63 (m, 16H)，1. 40 (s,9H)。其核磁碳譜(13CNMR,DMS0-d6)為8 :174. 1，171. 8，166. 2，156. 2，155. 8，150. 7， 148. 5，147. 8，136. 5，130. 3，128. 9，127. 9，121. 4，120. 4，111. 1,79. 1,69. 5,52. 6,45. 9， 38. 5,27. 0,26. 4,24. 2.。其質(zhì)譜數(shù)據(jù)ESI-MS :m/z (MH+)為計(jì)算值807. 4，實(shí)測值807. 0。b.制備99mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物配合物采用兩步法進(jìn)行標(biāo)記，在青霉素小瓶中依次加入0.5mL Tricine溶 液(80mg/mL)，0. 02mL SnCl2 溶液(2mg/mL)，0. 15mLFolate-N00N_HYNIC 溶液(lmg/ mL)和 0. 5mL NaAc-HAc 緩沖溶液(0. 2mol/L, pH = 3. 6)，搖勻后向其中注入 Tc_99m 淋洗液0. 2mL (約lmCi)，沸水浴加熱15min。冷卻至室溫后，在標(biāo)記好的溶液中加 入L(L可以為TPPMS和TPPTS)溶液(5mg/mL)，搖勻后沸水浴加熱15min，即可得 "mTc(HYNIC-N00N-Folate) (Tricine) (L)。上述步驟中L為TPPMS時(shí)得到的是分子式為 "mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPMS)的"mTc標(biāo)記的胼基煙酰胺基-二氧辛酰_葉酸配 合物；當(dāng) L 為 TPPTS 時(shí)得到的是分子式為 99mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPTS)的 99mTc 標(biāo)記的胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物。采用高效液相色譜法(HPLC)對99mTc(HYNIC-N00N-FOlate) (Tricine) (L)進(jìn)行鑒 定及純化，ALLTECH高效液相色譜儀，Kromasi C-18反相柱(5 u m, 250mmX4. 6mm)。HPLC 條件為A 90 % NH4HC03(0. 05mol/L pH = 7. 0)/10 % CH30H, B 100 % CH30H ；0 30min， 20 50% B ；流速lmL/min。各組分保留時(shí)間為:99mTcO; 2. 8min,"mTc-Tricine 3. 5min ；
8"mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (TPPMS) 24. lmin, "mTc(HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (TPPTS) :6. 7min。HPLC測定標(biāo)記率大于90 %，分離純化后放射化學(xué)純度大于 95%。對"mTc(HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)的性能及參數(shù)測定如下1.配合物 99mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)脂水分配系數(shù)測定取0. lmL純化后的標(biāo)記配合物溶液加入磷酸鹽緩沖溶液(PBS)-正辛醇混合液中 (0. 6mL PBS和0. 7mL正辛醇)，充分振蕩3 5min后，再置于離心機(jī)中離心5min。分別 取0. lmL有機(jī)相和水相測量放射性計(jì)數(shù)，計(jì)算脂水分配系數(shù)平均值及其LogP。(P =有機(jī) 相的放射性活度/水相的放射性活度)，測得99mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPTS)和 "mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPMS)的 logP 分別為-3. 62士0. 10,-2. 69 士0. 04 說明配 合物是親水性物質(zhì)。2.配合物 99mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)穩(wěn)定性測定將純化后的標(biāo)記配合物于室溫下分別放置4h，期間采用HPLC法測定標(biāo)記物的放 射化學(xué)純度，觀察標(biāo)記配合物的體外穩(wěn)定性。同時(shí)，將純化后的標(biāo)記配合物0. lmL(40uCi) 加入0. 4mL小鼠血清中，37°C孵育4h，不同時(shí)間取出部分試樣，用甲醇沉淀離心后用HPLC分 析。實(shí)驗(yàn)表明"mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)在室溫下在生理鹽水和37°C在血清 中穩(wěn)定性很好，4h時(shí)放射化學(xué)純度仍然大于90%。3.配合物"mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)電荷性質(zhì)測定利用紙電泳 法測定標(biāo)記配合物的電荷性質(zhì)。采用新華一號層析紙為支持體，電泳液為0.025mol/ L的PBS(pH = 7.4)。將純化后的標(biāo)記配合物點(diǎn)樣于已備好的層析紙正中，調(diào)節(jié)電壓至 150V。電泳進(jìn)行120min后關(guān)閉電源，取出層析紙條，晾干后測量標(biāo)記配合物在層析紙上 的放射性分布。分別計(jì)算移向正極和負(fù)極及滯留原點(diǎn)組份的相對百分比值。結(jié)果表明， "mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPTS)為電負(fù)性物質(zhì)，99mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPMS)為電中性物質(zhì)。4.配合物 99mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)的體外細(xì)胞結(jié)合性測定在孔板中培養(yǎng)葉酸受體高表達(dá)的KB細(xì)胞(人口腔上皮癌細(xì)胞)，調(diào)整細(xì)胞濃度使 每孔細(xì)胞數(shù)為2X 105 4X 105。待12h細(xì)胞貼壁后，將細(xì)胞分為A、B、C三組，分別為總吸 收、內(nèi)化和抑制組，每組三孔。A，B組加入配制好的乏葉酸培養(yǎng)基975 uL,C組加入475 u L 培養(yǎng)基和500 u L葉酸溶液(100 u M)，37°C孵育40min后，A、B、C組分別加入分離純化后的 標(biāo)記配合物25111^(11 9/1^)，371孵育lh。將孔板從培養(yǎng)箱中取出后吸出培養(yǎng)基，A，C組 用冰凍的 PBS (pH = 7. 4)沖洗三次，B 組用 stripping buffer (0. 15M NaCl 和 0. 1M HAc,pH =3)沖洗三次，收集吸出的培養(yǎng)基和沖洗的溶液作為水相。每孔用lmL胰蛋白酶消化細(xì)胞 并用PBS沖洗孔板，收集后轉(zhuǎn)入離心管作為固相，分別測定水相和固相放射性計(jì)數(shù)。結(jié)果表 明，配合物"mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)與葉酸受體有很好的結(jié)合能力，抑制組 加入過量葉酸后，攝取受到顯著抑制，說明葉酸受體對配合物的結(jié)合是特異性結(jié)合。5.配合物"mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)在正常小鼠體內(nèi)的生物分布 測定選18 20g雌性正常昆明小鼠12只，隨機(jī)分成4組，每組3只小鼠。用乏葉酸的 食物喂養(yǎng)小鼠一周后，從小鼠尾靜脈分別注射0. lmL純化后的標(biāo)記配合物溶液(約185kBq，放射化學(xué)純度大于95 % )，于注射后不同時(shí)間將小鼠斷頸處死，取其血，心，肝，脾，肺等器 官，擦凈后稱重，并置于阱型、探頭中測量其放射性計(jì)數(shù)，計(jì)算每克組織的放射性計(jì)數(shù)占 總注射劑量的百分?jǐn)?shù)(％ ID/g)。抑制組同時(shí)注入0. lmL葉酸溶液(lmg/mL)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見 下表。
mTc(HYNIC-NOON-FA) (Tricine) (TPPTS)在正常小鼠體內(nèi)生物分布 結(jié)果顯示該標(biāo)記配合物"mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)在腎臟中有較高 的攝取和很好的滯留，在其他組織和器官中的攝取都較低，這是因?yàn)樵谡＝M織中，腎小管 的葉酸受體表達(dá)較高，而其他組織和器官的葉酸受體表達(dá)相對保守。當(dāng)注入過量葉酸時(shí)，標(biāo) 記配合物在腎臟中的攝取被明顯抑制，表明該標(biāo)記配合物對葉酸受體具有較高的親和性和 選擇性。6.配合物"mTc (HYNIC-NOON-Folate) (Tricine) (L)在荷瘤小鼠體內(nèi)的生物分布 測定取體質(zhì)量約18 20g的裸鼠，于左上肢皮下接種KB腫瘤細(xì)胞株0. lmL(6X106)，接 種后用乏葉酸的食物喂養(yǎng)10 14天，待瘤徑長到0.8 1.0cm時(shí)可用于實(shí)驗(yàn)。取荷KB腫 瘤小鼠10只，分為2組，尾靜脈注射0. lmL (約185KBq，放射化學(xué)純度大于95% )的標(biāo)記物 溶液，在注射后2h將小鼠斷頭處死，取出心、肝、脾、肺、腎、腦、骨、腫瘤、肌肉及血等組織， 稱重并在锝分析儀內(nèi)測其放射性計(jì)數(shù)，計(jì)算每克組織的放射性計(jì)數(shù)占總注射劑量的百分?jǐn)?shù)
(% ID/g)，抑制組同時(shí)注入0. lmL葉酸溶液(lmg/mL)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示 結(jié)果表明該標(biāo)記配合物能被腫瘤特異性攝取，并具有較高的靶與非靶比值。通 過以上實(shí)施例的檢測數(shù)據(jù)說明，胼基煙酰胺基-3，6-二氧辛酰-葉酸偶聯(lián)物可以成功用 于"mTc的標(biāo)記，當(dāng)選用Tricine和L(L = TPPMS或TPPTS)作為共配體時(shí)形成的配合物 "mTc(HYNIC-N00N-Folate) (Tricine) (L)可以作為一種新"mTc標(biāo)記葉酸受體用于腫瘤顯像 劑的制備。
權(quán)利要求
一種99mTc標(biāo)記肼基煙酰胺基-二氧辛酰-葉酸配合物，其特征在于配合物通式為99mTc(HYNIC-NOON-FA)(Tricine)(L)，其結(jié)構(gòu)式為結(jié)構(gòu)式中L為三苯基膦磺酸鈉或三苯基膦三磺酸鈉；其中1，8-二氨基-3，6-二氧辛烷作為連接鏈，其兩端的氨基分別與葉酸分子和肼基煙酸通過酰胺鍵生成肼基煙酰胺基-3，6-二氧辛酰-葉酸偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物分子中肼基的氮原子、共配體Tricine和L分子中的氧原子與磷原子與99mTc進(jìn)行配位得到99mTc(HYNIC-NOON-FA)(Tricine)(L)配合物。FSA00000129004400011.tif
2.制備如權(quán)利要求1所述"mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物的制備方 法，其制備步驟如下a.首先制備表達(dá)式為Folate-N00N-H YNIC的胼基煙酰胺基_3，6_ 二氧辛酰-葉酸偶 聯(lián)物。將化合物葉酸_ 二氧辛胺和琥珀酰亞胺-6-叔丁基氧羰基胼基吡啶-3-甲酸溶解在 10-50mL的二甲基亞砜中，加入5-25mL吡啶，室溫反應(yīng)10-24h ；將反應(yīng)后的溶液緩慢滴入乙 醚中，離心收集生成橙紅色沉淀物，分別用乙醚和二氯甲烷洗滌，真空干燥得橙紅色固體； 將橙紅色固體加入l-10mL的三氟乙酸中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰水浴反應(yīng)2h后，旋蒸除去三氟 乙酸，將剩余油狀液體用0. l-2mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解后滴入100_500mL吡啶中， 離心收集產(chǎn)生的沉淀并用乙醚洗滌，真空干燥得到棕黃色粉末的胼基煙酰胺基_3，6- 二氧 辛酰_葉酸偶聯(lián)物；具體合成路線如下 上述胼基煙酰胺基_3，6- 二氧辛酰-葉酸偶聯(lián)物與共配體一起進(jìn)行標(biāo)記制備，其步驟 如下b.制備99mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物在青霉素小瓶中依次加入10-100mg三羥甲基-甲基甘氨酸，20-100 iig氯化亞錫， 20-200 u g Folate-NOON-HYNIC和0. 1-lmL、pH = 3. 6的醋酸鹽緩沖溶液，搖勻后向其中 注入Tc-99m淋洗液0. 1-0. 5mL，沸水浴加熱15min，冷卻至室溫；在上述溶液中加入l_5mg 共配體L，共配體L為三苯基膦磺酸鈉溶液或者三苯基膦三磺酸鈉溶液，搖勻后沸水浴加熱 5-30min，得到99mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基-二氧辛酰_葉酸配合物。
3.如權(quán)利要求2所述99mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_二氧辛酰_葉酸配合物的制備方法， 其特征在于所述共配體L為三苯基膦磺酸鈉溶液時(shí)，得到分子式為"mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPMS)的99mTc標(biāo)記的胼基煙酰胺基-二氧辛酰_葉酸配合物；當(dāng)L為三苯基膦 三磺酸鈉溶液時(shí)，得到的是分子式為"mTc (HYNIC-N00N-FA) (Tricine) (TPPTS)的"mTc標(biāo)記 的胼基煙酰胺基_ 二氧辛酰_葉酸配合物。
4.如權(quán)利要求1所述的"mTc標(biāo)記胼基煙酰胺基_二氧辛酰_葉酸配合物，其特征在 于所述配合物可制備成為作為葉酸受體腫瘤顯像劑而應(yīng)用于在核醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種通式為99mTc(HYNIC-NOON-FA)(Tricine)(L)的99mTc標(biāo)記肼基煙酰胺基-二氧辛酰-葉酸配合物，結(jié)構(gòu)式中L為三苯基膦磺酸鈉或三苯基膦三磺酸鈉；其中1，8-二氨基-3，6-二氧辛烷作為連接鏈分別與葉酸和肼基煙酸通過酰胺鍵生成肼基煙酰胺基-3，6-二氧辛酰-葉酸偶聯(lián)物，與共配體Tricine和L分子中的氧原子與磷原子與99mTc進(jìn)行配位；通過步驟a.配體肼基煙酰胺基-3，6-二氧辛酰-葉酸偶聯(lián)物的合成和b.99mTc-肼基煙酰胺基-二氧辛酰-葉酸配合物標(biāo)記兩個(gè)步驟的制備，得到99mTc(HYNIC-NOON-FA)(Tricine)(L)配合物。本發(fā)明具有放射化學(xué)純度高、穩(wěn)定性好、腫瘤攝取高并且滯留好、非靶器官本底低、腫瘤SPECT顯像清晰的優(yōu)點(diǎn)，可制備成為一種新型的99mTc標(biāo)記葉酸受體腫瘤顯像劑，廣泛應(yīng)用于放射性藥物化學(xué)和核醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
文檔編號A61K51/04GK101863924SQ201010174939
公開日2010年10月20日 申請日期2010年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月17日
發(fā)明者唐志剛, 龐燕, 張俊波, 張現(xiàn)忠, 朱美霖, 王學(xué)斌, 謝芳, 郭紅娟, 陸潔 申請人:北京師范大學(xué);北京師宏藥物研制中心