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應(yīng)用生物反應(yīng)器制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法

文檔序號(hào):1181352閱讀:328來(lái)源:國(guó)知局
專(zhuān)利名稱(chēng):應(yīng)用生物反應(yīng)器制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域
常規(guī)的用旋轉(zhuǎn)瓶單層培養(yǎng)細(xì)胞制備疫苗的方法,有占用潔凈空間大,所用操作人 員多,易污染微生物等缺點(diǎn),而常規(guī)方法制備的乙型腦炎疫苗純度不夠,殘余宿主蛋白和宿 主DNA等不容易達(dá)到較低水平;而本發(fā)明涉及的應(yīng)用生物反應(yīng)器制備乙型腦炎純化疫苗的 方法,達(dá)到了較高純度。
背景技術(shù)
由于傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)瓶單細(xì)胞層培養(yǎng)有著占用空間大,勞動(dòng)量大,所需瓶數(shù)量多,容易污 染微生物,耗能大,產(chǎn)生污物多等缺點(diǎn),而常規(guī)方法制備的乙型腦炎疫苗純度不夠,殘余宿 主蛋白和宿主DNA等不容易達(dá)到較低水平;而本發(fā)明涉及的應(yīng)用生物反應(yīng)器制備乙型腦炎 純化疫苗的方法,達(dá)到了較高純度。

發(fā)明內(nèi)容
一種應(yīng)用生物反應(yīng)器培養(yǎng)細(xì)胞,培養(yǎng)乙型腦炎病毒,經(jīng)濃縮,滅活,純化后制備高 純度乙型腦炎純化疫苗的方法。應(yīng)用微載體生物反應(yīng)器培養(yǎng)細(xì)胞制備病毒,可用濃度為10 25g/L球狀微載體, 也可應(yīng)用濃度為10 60g/L片狀微載體。病毒收獲期可達(dá)到5 15天,所收獲的病毒液 為病毒收獲液。病毒收獲液先經(jīng)過(guò)30 100倍超濾濃縮后制備成病毒濃縮液,再加入滅 活劑滅活后制備后制備成滅活病毒濃縮液。滅活病毒濃縮液,經(jīng)加入終濃度最高可為大于 2. Omg/ml至小于等于4. Omg/ml的硫酸魚(yú)精蛋白處理后lOOOOg離心5 lOmin收集病毒上 清液。病毒上清液,應(yīng)用區(qū)帶轉(zhuǎn)頭,蔗糖密度梯度,28001 35000rpm區(qū)帶離心4 8h,經(jīng) 紫外檢測(cè)儀檢測(cè)280nm紫外吸收值,收集抗原蛋白峰??乖鞍追逦挥?0% 46%的蔗糖 濃度范圍,且和雜蛋白峰分開(kāi)良好。所收集的抗原蛋白峰的蔗糖溶液經(jīng)超濾除糖后,配制成 高純度的乙型腦炎純化疫苗。根據(jù)本制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,制備的高純度的乙型腦炎純化疫 苗,其宿主DNA殘留量達(dá)到不高于10pg/劑,總蛋白含量可達(dá)到0. 5 3 y g/劑,宿主蛋白 含量可達(dá)到20 50ng/劑。并且在整個(gè)制備工藝中不添加任何的防腐劑,抗生素,佐劑。


圖1應(yīng)用生物反應(yīng)器制備高純度乙型腦炎純化疫苗的工藝圖 具體實(shí)施方案本發(fā)明為一種應(yīng)用生物反應(yīng)器培養(yǎng)細(xì)胞,培養(yǎng)乙型腦炎病毒,經(jīng)濃縮,滅活,純化 后制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法。應(yīng)用微載體生物反應(yīng)器培養(yǎng)細(xì)胞制備病毒,可用濃度為10 25g/L球狀微載體, 也可應(yīng)用濃度為10 60g/L片狀微載體。病毒收獲期可達(dá)到5 15天,所收獲的病毒液為病毒收獲液。病毒收獲液先經(jīng)過(guò)30 100倍超濾濃縮后制備成病毒濃縮液,再加入滅 活劑滅活后制備后制備成滅活病毒濃縮液。滅活病毒濃縮液,經(jīng)加入終濃度最高可為大于 2. Omg/ml至小于等于4. Omg/ml的硫酸魚(yú)精蛋白處理后lOOOOg離心5 lOmin收集病毒上 清液。病毒上清液,應(yīng)用區(qū)帶轉(zhuǎn)頭,蔗糖密度梯度,28001 35000rpm區(qū)帶離心4 8h,經(jīng) 紫外檢測(cè)儀檢測(cè)280nm紫外吸收值,收集抗原蛋白峰??乖鞍追逦挥?0% 46%的蔗糖 濃度范圍,且和雜蛋白峰分開(kāi)良好。所收集的抗原蛋白峰的蔗糖溶液經(jīng)超濾除糖后,配制成 高純度的乙型腦炎純化疫苗。
根據(jù)本制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,制備的高純度的乙型腦炎純化疫 苗,其宿主DNA殘留量達(dá)到不高于10pg/劑,總蛋白含量可達(dá)到0. 5 3 y g/劑,宿主蛋白 含量可達(dá)到20 50ng/劑。并且在整個(gè)制備工藝中不添加任何的防腐劑,抗生素,佐劑。
權(quán)利要求
一種應(yīng)用生物反應(yīng)器培養(yǎng)細(xì)胞,培養(yǎng)乙型腦炎病毒,經(jīng)濃縮,滅活,純化方法高度純化乙型腦炎純化疫苗的方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,其所用的微載體可為 濃度為10 30g/L球狀微載體,也可為濃度為10 60g/L片狀微載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,其病毒收獲期可達(dá)到 5 15天,所收獲的病毒液為病毒收獲液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,其病毒收獲液先經(jīng)過(guò) 30 100倍超濾濃縮后制備成病毒濃縮液,再加入滅活劑滅活后制備成滅活病毒濃縮液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,其滅活病毒濃縮液, 經(jīng)加入終濃度可為大于2. Omg/ml至小于等于4. Omg/ml的硫酸魚(yú)精蛋白處理后lOOOOg離 心5min收集病毒上清液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5述的制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,其病毒上清液,應(yīng)用區(qū) 帶轉(zhuǎn)頭,鋪設(shè)30% 36%和50% 60%兩個(gè)蔗糖密度梯度,28001 35000rpm區(qū)帶離心 4 8h,經(jīng)紫外檢測(cè)儀檢測(cè)280nm紫外吸收值,收集抗原蛋白峰??乖鞍追逦挥?0% 46 %的蔗糖濃度范圍,且和雜蛋白峰分開(kāi)良好。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,所收集的抗原蛋白峰 的蔗糖溶液經(jīng)超濾除糖后,配制成高純度的乙型腦炎純化疫苗。
8.根據(jù)權(quán)利要求1 7中任意一項(xiàng)所述的制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,制備 的高純度的乙型腦炎純化疫苗,其宿主DNA殘留量達(dá)到不高于10pg/劑,總蛋白含量可達(dá)到 0. 5 3 ii g/劑,宿主蛋白含量可達(dá)到20 50ng/劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求1 7中任意一項(xiàng)所述的制備高純度乙型腦炎純化疫苗的方法,在整 個(gè)制備工藝中不添加任何的防腐劑,抗生素和佐劑。
全文摘要
應(yīng)用生物反應(yīng)器制備高純度乙型腦炎疫苗。應(yīng)用微載體生物反應(yīng)器培養(yǎng)細(xì)胞制備病毒,連續(xù)收獲5~15天,病毒收獲液先經(jīng)過(guò)30~100倍超濾濃縮,滅活,加入硫酸魚(yú)精蛋白處理后10000g離心5min,上清液再用兩個(gè)蔗糖密度梯度,28001~35000rpm超速區(qū)帶離心4~8h,收集抗原蛋白峰,經(jīng)超濾除糖后,配制成高純度的乙型腦炎純化疫苗。本方法制備的高純度的乙型腦炎純化疫苗,其宿主DNA殘留量達(dá)到≤10pg/劑,總蛋白含量可達(dá)到0.5~3μg/劑,宿主蛋白含量可達(dá)到20~50ng/劑。并且在整個(gè)制備工藝中不添加任何的防腐劑,抗生素和佐劑。
文檔編號(hào)A61K39/12GK101804201SQ20101010258
公開(kāi)日2010年8月18日 申請(qǐng)日期2010年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月29日
發(fā)明者楊國(guó)松 申請(qǐng)人:福爾生物制藥股份有限公司
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