專利名稱：具有無細胞百日咳的聯(lián)合疫苗的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及包含用于針對疾病例如白喉、破傷風、百日咳和由流感嗜血桿菌 (Haemophilus influenzae)和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護作用的抗原混合物的聯(lián)合疫苗。本發(fā)明還涉及包含抗原，用于針對由肝炎病毒和其他病原體引起的感染提供保護作用，以便疫苗的給藥能夠同時免疫對象以對抗一種以上病原體。具體來說，本發(fā)明涉及包含上面指出的抗原的全液體穩(wěn)定聯(lián)合疫苗及其制造方法。
背景技術：
疫苗的抗原白喉和破傷風抗原白喉和破傷風是分別由白喉棒狀桿菌(Cornyebacterium diphtheriae)和破傷風梭菌(Clostridium tetani)引起的急性感染。這些細菌的毒素是相應疾病的主要病因。 針對這些細菌提供保護作用的疫苗包含被弱毒化的失去其侵染性的類毒素。毒素使用化學物質例如甲醛或戊二醛進行處理以制造類毒素[白喉類毒素(DT)和破傷風類毒素(TT)]。 一種突變的白喉毒素CRM 197，也用于某些疫苗中。百日咳抗原百日咳病或百日咳由百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)引起。這是使人虛弱的嚴重疾病，甚至可能導致死亡。對抗該疾病的最初疫苗是基于用化學物質例如甲醛處理以殺死細胞并使有毒物質失活后的完整細胞。雖然高度有效，這樣的稱作“全細胞疫苗”的疫苗與包括發(fā)熱和局部反應的副作用相關。認識到了對更明確定義的疫苗的需要，并且研究者將焦點改變?yōu)殚_發(fā)含有較少數量的高度純化的抗原的疫苗，稱作“組分疫苗”。很多與毒力相關的因子，諸如百日咳毒素(PT)，絲狀血細胞凝集素(FHA)，百日咳桿菌粘附素 (PRN或P69)，菌毛蛋白(FIM1，2和幻，腺苷酸環(huán)化酶，脂多糖以及其他外膜蛋白已經被建議包含在“無細胞疫苗”中，所述“無細胞疫苗”與組分疫苗相比更不明確定義。很多工作已經集中于基于PT的疫苗，其僅僅具有部分的保護性。PT/FHA的聯(lián)合更有效，但是比基于wP的疫苗免疫原性更低。另一種潛在的候選物，PRN或P69被發(fā)現使得百日咳疫苗與PT和FHA 聯(lián)合更有效。某些百日咳疫苗也具有FIM作為第四種成分賦予針對百日咳的免疫原性。脊髓灰質炎抗原有兩種不同類型的疫苗可用 活的減毒(弱化)口服脊髓灰質炎疫苗(OPV)，其由Dr. Albert Sabin在1961 年開發(fā)。包含Sabin毒株的OPV通過口服給藥。 失活的(殺死的)脊髓灰質炎疫苗(IPV)，其由Dr. Jonas Mlk在1955年開發(fā)。 包含Mlk毒株的IPV作為注射劑給藥?；畹臏p毒(OPV)和失活的(IPV)脊髓灰質炎疫苗兩者在控制世界范圍內的脊髓灰質炎疾病中都發(fā)揮了效力。脊髓灰質炎疫苗可以包含&ilk或Sabin毒株。Mahoney 1型、 MEF 2型和Saukett 3型是已經在對抗脊髓灰質炎疾病的疫苗中使用的Mlk毒株。Sabin 毒株包括Sabin 1和Sabin 2株。
流感嗜血桿菌(Hib)抗原流感嗜血桿菌是一種革蘭氏陰性球桿菌，其是上呼吸道菌群的正常組成部分。B型流感嗜血桿菌(Hib b)在幼兒中是侵入性血液傳播感染的主要病因，并且在生命的前兩年中是腦膜炎的主要病因。針對流感嗜血桿菌的免疫接種始于1987年在加拿大使用的多糖疫苗[聚核糖基核糖醇磷酸鹽(PRP) ]。Hib的聚核糖基核糖醇磷酸鹽(PRP)莢膜是生物體的主要毒力因子。針對PRP的抗體是血清殺菌活性的首要促成者，并且抗體水平的增加與侵入性疾病的風險降低相關。PRP是不依賴于T-細胞的抗原，因此其具有下列特征a)在小于18個月的嬰兒和兒童中誘導不良的抗體應答，b)與使用T-細胞依賴性抗原相比具有可變和較小量的抗體應答，c)產生較高比例的免疫球蛋白M(IgM)，以及d)不能誘導加強應答。最初的只基于PRP組分的疫苗被證明在嬰兒中無效。進一步的嘗試針對 PRP結合疫苗，其中將PRP與被稱為載體蛋白的蛋白質例如腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides)的外膜蛋白、白喉類毒素、破傷風類毒素和CRM 197相結合。肝炎Ofep)抗原存在各種不同的肝炎病毒毒株。乙型肝炎是由感染人科動物包括人類的肝臟并引起被稱為肝炎的炎癥的乙肝病毒(HBV)所引起的疾病。其嚴重性范圍從持續(xù)數周(急性) 的輕度疾病到嚴重的能夠導致肝臟疾病或肝癌的長期(慢性)疾病。針對該疾病的疫苗包含病毒包膜蛋白，乙肝表面抗原(HBsAg)。FDA批準的含有H印B的疫苗是由Merck生產的 Recombivax HB 禾口 Comvax ，由 GlaxoSmithKline Biologicals 生產的 Engerix—B 禾口 Pediarix 。其他抗原人類所關心的其他抗原包括流感嗜血桿菌(a、C、d、e、f血清型和無包膜的菌株)、 肝炎(A、C、D、E、F和G毒株)、腦膜炎A、B或C、流感、肺炎球菌、鏈球菌、炭疽、登革熱、瘧疾、麻疹、流行性腮腺炎、風疹、BCG、日本腦炎、輪狀病毒、天花、黃熱病、傷寒、Singles、水痘寸。聯(lián)合疫苗盡管在疫苗領域進行了幾十年的長期研究，但傳染病仍然威脅人類。針對各種疾病進行保護的聯(lián)合疫苗是非常合乎需要的，因為它減少了進行注射次數、降低了給藥和生產成本，并且也提高了患者的順從性。這樣的聯(lián)合疫苗一般更容易被接受。然而，大量記載的抗原競爭現象使多價疫苗的開發(fā)變得復雜并受到阻礙。這種現象是指下述觀察，即將多種抗原一起給藥導致對某些抗原的應答與單獨給藥時針對這些抗原的免疫應答相比降低。較早的研究聚焦于開發(fā)具有針對不同疾病和感染的多價的疫苗。這種熟知的疫苗組合之一是提供針對白喉、破傷風和無細胞百日咳的保護。無細胞百日咳(aP)成分通常含有2種或者所有的3種去毒性的PT (百日咳毒素)，FHA (絲狀血細胞凝集素)，PRN或P69 (百日咳桿菌粘附素)。在有些情況下，其他百日咳抗原，諸如菌毛抗原(Fim 1，2或3)也可以存在。Infanrix (GlaxoSmithKline Biologicals), Tripedia 禾口 Daptacel (Sanof i Pasteur)是FDA批準的DTaP聯(lián)合疫苗。希望向這種聯(lián)合疫苗添加將針對由肝炎病毒Ofep)、流感嗜血桿菌(Hib)和脊髓灰質炎病毒(IPV)引起的疾病提供保護的其他抗原。還希望將針對其他疾病提供保護的抗原添加到上面所述的聯(lián)合疫苗中。最近FDA 批準的 GlaxoSmithKline Biologicals 的疫苗 Kinrix 是具有 IPV 連同 DTaP(Infanrix )抗原的聯(lián)合疫苗。hfanrix-Hib 是由 GlaxoSmithKline Biologicals 提供的另一種聯(lián)合疫苗，其中DTaP抗原以液體形式存在，并且Hib抗原為凍干的，并且提供在分隔的小管中。GlaxoSmithKline Biologicals 的 Pediarix * hfanrix penta 包含單個小管劑量的聯(lián)合疫苗，所述疫苗包含DTaP連H印B和IPV成分。Sanofi Pasteur的 Pentacel 是以液體形式的DTaP-IPV提供的5種疫苗成分和干燥形式的Hib成分的聯(lián)合。 Infanrix hexa 是GlaxoSmithKline Biologicals的6種成分的聯(lián)合疫苗，其針對諸如白喉，破傷風，百日咳，脊髓灰質炎的疾病，以及由H印B病毒和b型流感嗜血桿菌引起的感染提供保護。甚至在這樣的組合中，所有除了 Hib成分外的成分以液體形式存在，Hib成分以凍干形式存在。因此，上述給出的聯(lián)合疫苗不作為全液體制劑銷售，而且也不在單個小管中包含諸如Hib和Hep的抗原連同針對白喉，破傷風，百日咳和脊髓灰質炎提供保護的抗原。美國專利6756040陳述了疫苗成分的簡單混合由于抗原性干擾引起多糖成分抗體滴度的降低。美國專利’040涉及用于預防b型流感嗜血桿菌感染的疫苗制劑，其中需要 Hib b偶聯(lián)物吸附到磷酸鋁上從而抑制抗多糖抗體的降低。另外，Hib b抗原是凍干的，在給藥前不超過一小時與其他液體形式存在的抗原混合。因此，美國專利’040沒有教導以全液體制劑存在并且包含針對白喉，破傷風，百日咳和由流感嗜血桿菌，肝炎和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護的抗原的聯(lián)合疫苗。SmithKline Beecham Biologicals的美國專利6013洸4涉及包含吸附到磷酸鋁上的HBsAg(乙型肝炎抗原)的多價疫苗。其中宣稱當氫氧化鋁吸附的HBsAg用于聯(lián)合疫苗中時，針對HBsAg成分的免疫應答顯著降低引起疫苗接種后不充分的血清型轉化。進一步陳述了需要在多價疫苗中避免使用氫氧化鋁作為佐劑用于吸附HBsAg。說明書陳述了 Hib b成分可以臨時添加在本發(fā)明的疫苗中。因此美國專利’264中沒有教導以全液體制劑存在并且包含針對白喉，破傷風，百日咳和由流感嗜血桿菌，肝炎和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護的抗原的聯(lián)合疫苗。而且，美國專利’ 264的疫苗具體需要H印B抗原吸附到磷酸鋁上而不吸附到氫氧化鋁上。Novartis Vaccines and Diagnostics 的 PCT 申請 W02007054820 涉及疫苗組合物，其中D和T抗原特異性吸附到氫氧化鋁上，而且Hib b和H印B抗原吸附到磷酸鋁上。 然而，該申請沒有教導制備全液體穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗，其中D，T和aP抗原吸附到磷酸鋁上， Hep抗原吸附到氫氧化鋁上。Connaught Lab的PCT申請W01998000167A1提供了多價免疫原性組合物，其在宿主中針對由百日咳博德特氏菌、破傷風梭菌、白喉棒狀桿菌、脊髓灰質炎病毒和/或流感嗜血桿菌感染引起的疾病提供保護作用。根據說明書，疫苗的Hib b組分是凍干組分，在與疫苗的其他組分混合之前必須加水重構。因此，在說明書中沒有涉及包含所有所述抗原的全液體聯(lián)合疫苗的教導。凍干、也稱為冷凍干燥，是高成本的過程，還引起對蛋白質的強烈脅迫。在疫苗的任何組分被凍干的情況下，在疫苗給藥時，需要將凍干物與另一種液體或聯(lián)合疫苗的液體組分混合。這代表了對從業(yè)人員的補充限制，并提供了其不能良好執(zhí)行的風險。此外它提出了具有多個區(qū)室的注射器，其中凍干組分在一個區(qū)室中，疫苗的液體組分在另一個區(qū)室中。然而，這種可以在疫苗給藥時將內含物混合的注射器，在降低生產成本的層面以及由從業(yè)人員執(zhí)行的操作的層面上，表現不令人滿意。因此，希望避免該冷凍干燥步驟，并提供所有組分提供在一起并處于全液體形式的聯(lián)合疫苗。這將便于疫苗的給藥、使患者順從并且也降低生產成本。因此，希望將Hib抗原添加到疫苗的液體組分中并因此獲得全液體多價疫苗。Glaxo SmithKline Biologicals 公司的 PCT 申請 W02004110480 涉及包含 Hib b 多糖的疫苗。該申請陳述道，聯(lián)合疫苗組分的簡單混合由于不是所有抗原都能有效混合在一起這一事實而復雜化。它陳述道，在DTP疫苗的氫氧化鋁與PRP之間存在干擾。W0，480 中的發(fā)明的目的是在即時制備的聯(lián)合疫苗中將這種干擾降到最低，其中將PRP預先吸附在磷酸鋁上。該發(fā)明還提供了包含PRP的免疫原性組合物、疫苗和聯(lián)合疫苗，所述PRP在某種程度上受到保護而免于免疫干擾。發(fā)明人發(fā)現，通過將聚陰離子聚合物賦形劑與包含PRP 的疫苗摻合在一起，可以實現上述目標。然而，在疫苗劑型中使用聚陰離子聚合物可能不是理想的，因為它可能增加配制疫苗的成本。此外，因為疫苗最終打算用于人類，因此理想情況下它應該具有盡可能最少的組分。使用附加的成分意味著向制劑添加身體可能與之反應并產生抗體的物質。由于與免疫制劑的這些組分接觸而產生的這種身體應答，可能是不想要的。Pasteur Merieux Serums的美國專利6333036涉及包含與破傷風變性毒素偶聯(lián)的 b型流感嗜血桿菌的莢膜多糖或高分子量聚核糖基核糖醇磷酸鹽(PRP)以及基于鋁的佐劑的疫苗組合物。在該發(fā)明中使用的基于鋁的佐劑具有低于約7. 2的零電荷點。但是，該專利沒有具體教導聯(lián)合疫苗的制備，所述聯(lián)合疫苗包含全液體形式的針對白喉，破傷風，百日咳和由流感嗜血桿菌和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護的抗原的聯(lián)合疫苗，其中Hib抗原可以基本上不吸附在任何佐劑上。該專利也沒有教導制備全液體的穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗，所述疫苗包含針對和由流感嗜血桿菌，肝炎和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護的抗原， 其中白喉，破傷風和百日咳抗原吸附到磷酸鋁上，肝炎抗原吸附到氫氧化鋁上。Sanofi Pasteur MSD的歐洲專利1028750涉及針對由百日咳博德特氏菌、白喉棒狀桿菌、破傷風梭菌、脊髓灰質炎病毒乙型肝炎病毒和流感嗜血桿菌感染引起的疾病提供保護作用的多價疫苗。然而，該專利沒有具體教導聯(lián)合疫苗的制備，所述聯(lián)合疫苗包含全液體形式的針對白喉，破傷風，百日咳和由流感嗜血桿菌，肝炎和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護的抗原的聯(lián)合疫苗，其中D，T和aP抗原吸附到磷酸鋁上，Hep抗原未吸附到氫氧化鋁上。Aventis Pasteur MSD的Hexavac 是全液體疫苗，被批準用于保護由所述生物體引起的疾病。然而，該疫苗被中止全世界范圍的使用，因為鑒于生產過程中疫苗的乙肝病毒成分能夠導致針對乙肝病毒的長期保護下降的市場銷售以后的問題。盡管對于制造包含各種抗原、能夠針對大量疾病提供保護作用的多價疫苗的研究一直在進行，但是它們不致力于提供包含全液體形式的針對白喉，破傷風，百日咳和由流感嗜血桿菌和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護的抗原的穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗的需求，其中 Hib抗原可以基本上不吸附在任何佐劑上。而且，也沒有公開穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗的制備，所述聯(lián)合疫苗包含全液體形式的針對白喉，破傷風，百日咳和由流感嗜血桿菌，肝炎病毒和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護的抗原，其中D，T和aP抗原吸附到磷酸鋁上，Hep抗原吸附到氫氧化鋁上。關于在用分離的和共給藥的聯(lián)合疫苗和PRP疫苗進行免疫的兒童中針對特定抗原的抗體應答，存在著可用的相反的報告。這種結果可能存在各種原因，包括疫苗在其抗原含量上不一致、制造類毒素的方法、添加佐劑的方法或使用的防腐劑。目前已知并可用的聯(lián)合疫苗，可能不包含采用適合的免疫原性形式的適合抗原的適合制劑，其在一次注射中就能在易感人群中獲得對大量疾病的所需水平的效能和免疫原性。對于針對各種感染提供保護作用并采取液體形式以便提供給藥的便捷性和適合的成本效益比的多組分疫苗，存在著需求。提供針對由白喉棒狀桿菌、破傷風梭菌、百日咳博德特氏菌、脊髓灰質炎病毒、肝炎病毒和流感嗜血桿菌以及其他引起的感染所導致的疾病的穩(wěn)定和有效的多價疫苗，將是合乎需要的。為了使疫苗有效，對于疫苗的每種抗原來說需要滿足血清保護作用的標準。為此，需要克服由抗原競爭和干擾所提出的障礙和挑戰(zhàn)。本發(fā)明通過提供針對多種疾病提供保護的多價疫苗制劑，克服了現有技術的限制并解決了相關問題。發(fā)明概述本發(fā)明涉及包含針對諸如白喉、破傷風、百日咳的疾病和由流感嗜血桿菌和脊髓灰質炎病毒引起的感染提供保護的抗原混合物。本發(fā)明還涉及包含抗原用于針對由肝炎病毒和其他病原體引起的感染提供保護作用，以便疫苗的給藥能夠同時免疫對象以對抗一種以上病原體。具體來說，本發(fā)明涉及包含上面指出的抗原的全液體穩(wěn)定聯(lián)合疫苗及其制造方法。本發(fā)明還涉及五價疫苗，其中Hib抗原基本上未吸附在任何佐劑上。本發(fā)明還涉及全液體穩(wěn)定的六價疫苗，其中包含對多種疾病提供保護作用的抗原，其中白喉，破傷風和無細胞百日咳抗原吸附在磷酸鋁上，肝炎抗原吸附在氫氧化鋁上。本發(fā)明還涉及聯(lián)合疫苗，其包含適合于預防、改善和治療多種疾病狀態(tài)的多種疫苗組分，其滿足每種所述疫苗組分的血清保護作用標準。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及全液體的穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗，其包含適合于預防、改善和治療多種疾病狀態(tài)的多種疫苗組分，其滿足每種所述疫苗組分的血清保護作用標準。本發(fā)明的優(yōu)點包括能夠以安全有效的方式提供針對廣范圍疾病和感染的保護作用的多價疫苗。本發(fā)明的疫苗提供針對各種疾病和感染的免疫原性，并且對疫苗中存在的任何抗原沒有任何干擾。因此，單次注射即可提供針對各種疾病和感染的免疫原性，使疫苗的患者順從性更高。由于單次注射即可提供針對多種感染和疾病的免疫，因此疫苗接種的成本將會降低。本發(fā)明的疫苗，在其減少為多種不同疾病和感染而前往預防接種中心的次數以及進行注射的次數的意義上說，將是有益的。本發(fā)明的這種特點使其特別是對于需要預防接種以提供針對大量感染和疾病的免疫的較年輕群體來說，更加有用和有利。因此，本發(fā)明提供了更易被接受的疫苗。定義當在本文中用于描述本發(fā)明的疫苗時，術語“全液體”是指這樣的疫苗狀態(tài)，即其中疫苗的所有組分都處于液體狀態(tài)，并且疫苗的任何組分都不提供成在將疫苗給藥于對象之前必須與疫苗的其他組分混合的凍干或任何其他形式。
當在本文中使用時，術語“載體蛋白”用于描述與疫苗中使用的莢膜多糖(Hib)偶聯(lián)、以便將T-細胞不依賴性多糖轉變成T-細胞依賴性抗原的蛋白質組分。當在本文中使用時，術語“佐劑”用于描述疫苗的非抗原性組分，其通過促進抗原與免疫系統(tǒng)之間的接觸，通過影響針對抗原而產生的免疫應答的類型和質量，來增強疫苗抗原的免疫應答。佐劑引起針對抗原的延長的免疫應答，并且也可用于降低某些抗原的毒性或為某些抗原提供溶解性。當在本文中用于描述本發(fā)明的疫苗時，術語“穩(wěn)定的”是指將疫苗在5士3°C下溫育至少1、優(yōu)選12、最優(yōu)選對個月后，疫苗組合物的每種抗原具有超過設定為正常驗收限度的效價/免疫原性。當在本文中用于描述Hib在佐劑上吸附或結合的量時，在表述“Hib基本上不吸附到任何佐劑上”中，術語“基本上”是指Hib在任何佐劑上的吸附小于15%、優(yōu)選小于10%。 沒有對Hib抗原執(zhí)行任何故意將其吸附到任何佐劑上的步驟；可能發(fā)生的吸附的量可能是由于抗原與佐劑之間的接觸，而不是有意為之的。當在本文中用于描述本發(fā)明的疫苗中存在的每種組分的量時，術語“約”是指存在的所述疫苗組分的量，在量上為該特定組分的宣稱量的優(yōu)選士20%、更優(yōu)選士 10%、最優(yōu)選士5%的范圍內。當在本文中用于描述本發(fā)明疫苗的制備方法過程中混合物的組分攪拌時間時，術語“約”是指在宣稱值的優(yōu)選士20%、更優(yōu)選士 10%、最優(yōu)選士5%的范圍內。當在本文中用于指稱本發(fā)明的聯(lián)合疫苗時，術語“免疫活性”是指疫苗在給藥于對象時能夠引發(fā)針對所述組合的每種抗原的抗體，從而保護接種者抵抗相應的疾病或感染。當在本文中用于指稱本發(fā)明的聯(lián)合疫苗的抗原時，術語“結合或吸附”是指抗原與佐劑之間的任何形式的物理結合。本發(fā)明的疫苗本發(fā)明提供了穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗組合物，其中疫苗的所有成分都一起以液體形式存在于單個小管中。本發(fā)明的一個方面提供了全液體的穩(wěn)定的五價疫苗，其包含白喉(D)，破傷風 (T)，無細胞百日咳(aP)，流感嗜血桿菌(Hib)和脊髓灰質炎病毒(IPV)抗原，其中Hib基本上未吸附在任何佐劑上。本發(fā)明另一個方面涉及全液體的穩(wěn)定的六價疫苗，其包含白喉(D)，破傷風(T)， 無細胞百日咳(aP)，流感嗜血桿菌(Hib)，肝炎Ofep)和脊髓灰質炎病毒(IPV)抗原，其中 D，T和aP抗原吸附在磷酸鋁上而Ifep抗原吸附在氫氧化鋁上。本發(fā)明還提供了僅僅吸附在磷酸鋁上而不吸附在氫氧化鋁上的白喉(D)，破傷風 (T)和無細胞百日咳(aP)抗原。 根據本發(fā)明的一方面，Hib抗原與載體蛋白偶聯(lián)，所述載體蛋白選自破傷風類毒素 (TT)、白喉類毒素(DT)、CRM 197和腦膜炎奈瑟菌的外膜蛋白或其任何等價物，或任何其他已知載體。根據本發(fā)明的另一方面，Hib抗原基本上不吸附到任何佐劑上。根據本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明疫苗中的Hib抗原源自于Hib b株的莢膜多糖。一方面，本發(fā)明提供了吸附到氫氧化鋁上而不吸附在磷酸鋁上的Hep抗原。
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另一方面，本發(fā)明涉及源自于乙肝病毒表面抗原(HBsAg)JPifep B毒株的表面抗原的Ifep抗原。根據本發(fā)明的另一方面，IPV毒株是一種或多種可以選自Mahoney 1型、MEF 2型和Saukett 3型的Salk毒株，或一種或多種選自Sabin 1型和2型的Sabin毒株。另一方面，本發(fā)明提供了在制劑中包含2-苯氧乙醇作為防腐劑的本發(fā)明的疫苗。此外，本發(fā)明的另一方面涉及制造本發(fā)明的聯(lián)合疫苗的方法。本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明的聯(lián)合疫苗的組成，使得疫苗中存在的每種抗原的量弓I發(fā)針對所述抗原的保護性免疫應答。本發(fā)明的疫苗的抗原白喉由白喉棒狀桿菌、一種革蘭氏陽性、不產芽胞的好氧細菌引起。該生物體表達原噬菌體編碼的ADP-核糖基化外毒素(“白喉毒素”)，可以對其進行處理(例如使用甲醛)以產生類毒素。該類毒素不再具有毒性，但是仍保留抗原性，并能夠在注射后刺激特異性抗毒素抗體的產生。在本發(fā)明的疫苗中使用的白喉抗原制備物優(yōu)選包含白喉類毒素。破傷風由破傷風梭菌、一種革蘭氏陽性、形成芽胞的桿菌引起。該生物體表達內肽酶(“破傷風毒素”)，可以對其進行處理以產生不再具有毒性的類毒素。但是它仍保留抗原性，并能夠在注射后刺激特異性抗毒素抗體的產生。在本發(fā)明的疫苗中使用的破傷風抗原制備物優(yōu)選包含破傷風類毒素。百日咳病或百日咳由百日咳博德特氏菌引起。無細胞百日咳(aP)抗原可以從任何已知的百日咳博德特氏菌菌株制備。為了本發(fā)明的目的，aP抗原可以優(yōu)選獲自百日咳博德特氏菌Tohama菌株。任何合適的介質可用于分離，培養(yǎng)，擴增和發(fā)酵培養(yǎng)物。為了本發(fā)明的目的，可以使用修飾的Mainer-kholte。本發(fā)明的疫苗中使用的無細胞百日咳(aP) 抗原包含至少一種或者多種選自百日咳類毒素(PT)，絲狀血細胞凝集素(FHA)，百日咳桿菌粘附素(P69或PRN)，FIM(菌毛抗原FIM1，2或3)的抗原。然而，根據本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，本發(fā)明的疫苗中使用的aP抗原制備物包含PT，FHA和PRN(P69)抗原。流感嗜血桿菌是革蘭氏陰性球桿菌，其引起侵入性血液傳播的感染和腦膜炎。根據本發(fā)明的一個實施方案，源自于莢膜多糖的Hib抗原可以偶聯(lián)或結合到載體蛋白上。用于偶聯(lián)Hib抗原的載體蛋白可以選自破傷風類毒素(TT)、白喉類毒素(DT)、CRM 197和腦膜炎奈瑟菌的外膜蛋白或其任何等價物。其他適合的載體蛋白包括但不限于合成的肽、熱休克蛋白、百日咳蛋白、細胞因子、淋巴因子、激素、生長因子、包含來自于各種病原體衍生的抗原例如N19的多種人類CD4+T細胞表位的人造蛋白、來自流感嗜血桿菌的蛋白D、肺炎球菌表面蛋白PspA、肺炎球菌溶血素、攝鐵蛋白、來自艱難梭菌(C. difficile)和無乳鏈球菌(S. agalactiae)蛋白的毒素A或B。在本發(fā)明的疫苗中使用的Hib抗原制備物包含優(yōu)選與破傷風類毒素偶聯(lián)或連接的Hib抗原。多糖偶聯(lián)物可以通過任何已知的連接技術來制備。例如，多糖可以通過硫醚鍵連接。這種偶聯(lián)方法依靠使用1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸(CDAP)活化多糖以形成氰酸酯。因此活化的多糖可以直接或經連接基團與載體蛋白上的氨基連接。偶聯(lián)物也可以通過直接還原胺化方法來制備。另一種方法包括將溴化氰(CNBr)活化的多糖經己二酸酰胼 (ADH)衍生后通過碳二亞胺縮合與蛋白載體相連?？梢允褂萌魏纹渌阎椒▉碇苽浔景l(fā)明的疫苗中使用的多糖偶聯(lián)物。
根據本發(fā)明的實施方案，Hib抗原基本上不吸附在任何佐劑上；優(yōu)選情況下，Hib 抗原與佐劑的吸附程度不超過15% ；更優(yōu)選情況下，Hib抗原與佐劑的吸附程度不超過 10%。根據另一個實施方案，本發(fā)明涉及沒有進行在任何佐劑上的故意或有意吸附的 Hib抗原。根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，Hib抗原制備物包含源自于Hib b菌株的莢膜多糖的抗原。肝炎由各種肝炎毒株例如A、B、C、D、E、F或G引起。乙肝病毒(HBV)是引起病毒性肝炎的主要因子。HBV病毒粒子包含由外部蛋白質外殼或衣殼包圍的內部核心。衣殼的主要組分是被稱為HBV表面抗原或更通常稱為“HBsAg”的蛋白質。當該抗原給藥于接種者時，它刺激抗HBsAg抗體的產生，其針對HBV感染提供保護。根據本發(fā)明的一個優(yōu)選方面， 在本發(fā)明的疫苗中使用的肝炎病毒OfeP)抗原制備物包含源自于乙型肝炎毒株表面抗原 (HBsAg)的H印抗原。對于疫苗制造來說，HBsAg的制備可以通過以顆粒形式從慢性乙肝病毒攜帶者的血漿中純化，因為在HBV感染期間大量HBsiVg在肝臟中合成并釋放到血流中，或者通過使用重組DNA方法表達蛋白。在本發(fā)明的疫苗中使用的HBsAg可以任一種方式制備。脊髓灰質炎由脊髓灰質炎病毒引起。本發(fā)明的疫苗可以包含脊髓灰質炎病毒的 Sabin (Sabin 1和/或Sabin 2)或Mlk株。根據本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，本發(fā)明的疫苗包含&ilk毒株。存在三種類型的能夠引起脊髓灰質炎的&ilk毒株。這三種類型相似并引起一致的癥狀，但是它們的抗原性非常不同，并且由一種類型引起的感染不能提供保護以對抗其他類型引起的感染。Mlk脊髓灰質炎病毒包括3種毒株——1型(例如Mahoney 株)、2型脊髓灰質炎病毒(例如MEF-I株)和3型脊髓灰質炎病毒(例如Saukett株)。 根據本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，本發(fā)明的疫苗可以包含一種或多種所述&ilk毒株。脊髓灰質炎病毒可以在細胞培養(yǎng)物中生長。Vero細胞系，一種源自于猴腎的連續(xù)細胞系，可用于生長脊髓灰質炎病毒。生長后，可以使用已知技術純化病毒粒子?？梢赃M行病毒的失活。脊髓灰質炎病毒的量典型地用“DU”單位(“D-抗原單位”)表示。在制造本發(fā)明的疫苗中使用的IPV抗原制備物，優(yōu)選被制備成包含在疫苗制造中使用的一種或多種毒株。然后將該批量制備物用于配制本發(fā)明的疫苗。疫苗的非抗原性組分除了抗原性組分之外，疫苗可以包含大量非抗原性組分，它們是可藥用賦形劑。它們包括但不限于PH調節(jié)劑、緩沖劑、佐劑、防腐劑、載體和滲漲度調節(jié)劑。佐劑最終制劑的抗原可以吸附或可以不吸附到佐劑上。佐劑的功能是刺激針對疫苗成分的免疫的產生，使疫苗更加有效。佐劑可用于 使抗原與免疫系統(tǒng)接觸并影響所產生的免疫的類型以及免疫應答的質量(幅度或持續(xù)時間)； 降低某些抗原的毒性；以及 為某些疫苗組分提供溶解性。
研究顯示，許多含鋁疫苗與不含佐劑的對比疫苗相比，引起更高和更長時間的抗體應答。通常在初始免疫系列而不是使用加強劑的過程中觀察到佐劑的益處?；阡X的佐劑是最常用的佐劑。這些佐劑已被FDA批準用于疫苗。存在三種通用類型的含鋁佐劑 氫氧化鋁 磷酸鋁 硫酸鉀鋁(通常稱為“明礬”)本發(fā)明的一個實施方案涉及將疫苗的某些抗原吸附到磷酸鋁上，并將疫苗的某些抗原吸附到氫氧化鋁上。某些抗原可能僅僅吸附在磷酸鋁上而不吸附在氫氧化鋁上，反之亦然。本發(fā)明的某些抗原可能根本不吸附或基本上不吸附到任何佐劑上。佐劑對所述抗原吸附的優(yōu)選性提供了本發(fā)明的疫苗的特征。吸附的優(yōu)選性在下面的“本發(fā)明疫苗的制造方法” 一節(jié)中更詳細描述。防腐劑疫苗易于被細菌污染。因此，為了避免可能在意外污染事件中摻入而引入疫苗中的有害微生物的潛在的威脅生命的污染，在配制疫苗時可以將防腐劑包含在疫苗的組成中。已經使用的防腐劑包括苯索氯銨(Wiemerol)、乙基汞硫代水楊酸鈉、苯酚和2-苯氧乙醇(2-P0E)。乙基汞硫代水楊酸鈉是含汞的有機化合物(有機汞化合物)，其已經在許多疫苗中用作防腐劑。有報道述及針對乙基汞硫代水楊酸鈉的某些過敏反應，其主要采取遲發(fā)型局部超敏反應的形式，包括注射位點處的發(fā)紅和腫脹。關于孤獨癥與汞的關聯(lián)，也存在沖突的報道。2-苯氧乙醇O-P0E)也稱為“1-羥基-2-苯氧基乙烷”、“2-羥基乙基苯基醚”、“乙二醇苯基醚”等。2-苯氧乙醇的安全性概況好于汞化合物防腐劑(例如乙基汞硫代水楊酸鈉)。因此，在疫苗中需要避免乙基汞硫代水楊酸鈉并使用2-苯氧乙醇。因此，本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案涉及在疫苗組合物中使用2-苯氧乙醇作為防腐劑。根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，2-苯氧乙醇的濃度為5mg/ml疫苗。滲漲度調節(jié)劑為了控制疫苗組合物的滲漲度，優(yōu)選在疫苗配方中包含滲漲度調節(jié)劑。這些調節(jié)劑包括但不限于鹽類(例如NaCl, MgCl2, KC1、CaC12)、糖類(例如葡萄糖、甘露糖醇、乳糖)、氨基酸(例如精氨酸、甘氨酸、組氨酸)和多元醇(例如蔗糖、甘油、山梨糖醇)。在更優(yōu)選實施方案中，在疫苗配方中使用生理鹽例如鈉鹽。最優(yōu)選情況下將氯化鈉(NaCl)包含在本發(fā)明的疫苗組合物中。pH調節(jié)劑和/或緩沖劑如果需要，本技術領域的專業(yè)人員已知的各種pH調節(jié)劑可用于調節(jié)疫苗組合物的pH，例如氫氧化鈉或鹽酸。各種緩沖劑例如磷酸鈉、磷酸鉀和檸檬酸鹽緩沖液，可用于疫苗配方中。本發(fā)明疫苗的組成本發(fā)明疫苗的組合物，使得利用包含在疫苗中的每種抗原的量賦予本發(fā)明疫苗以免疫原性。本發(fā)明疫苗中每種抗原的量，優(yōu)選使聯(lián)合疫苗在給藥于對象時，在對象中引發(fā)針對組合物的所述抗原的免疫應答。根據本發(fā)明的一個實施方案，全液體五價疫苗包含0、1\沖( 1\ 撤沖1^)!1讓b和 IPV(Mahoney 1型、MEF 2型和Saukett 3型)，其中D的存在量約為l_40Lf，T的存在量約為l-25Lf，PT的存在量為每0. 5ml約l_40ug，FHA的存在量為每0. 5ml約l_40ug，PRN的存在量為每0. 5ml約l-15ug, Hib b的存在量為每0. 5ml約l_20ug，并且Mahoney 1型、MEF 2型和Saukett 3型毒株的存在量分別為每0. 5ml約1-50DU、1-15DU和1-50DU，以形成穩(wěn)定的、免疫原性的聯(lián)合疫苗。根據本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，本發(fā)明的全液體五價疫苗包含D、T、aP(PT，FHA， PRN)、Hib b和IPV，其中D的存在量約為25Lf，T的存在量約為IOLf，PT的存在量為每0. 5ml 約25ug，FHA的存在量為每0. 5ml約25ug，PRN的存在量為每0. 5ml約8ug，Hib b的存在量為每0. 5ml約10ug，并且Mahoney 1型、MEF 2型和Saukett 3型毒株的存在量分別為每 0. 5ml約40DU、8DU和32DU，使得所述疫苗給藥于對象時是穩(wěn)定的組合物并且有免疫原性。根據本發(fā)明的另一個實施方案，提供了全液體六價疫苗，其包含D、T、aP(PT，FHA， PRN)、Hib b、H印B和IPV (Mahoney 1型、MEF 2型和Saukett 3型)，其中D的存在量約為 l-40Lf，T的存在量約為l_25Lf，PT的存在量為每0. 5ml約l_40ug，FHA的存在量為每0. 5ml 約l-40ug, PRN的存在量為每0. 5ml約l_15ug，Hib b的存在量為每0. 5ml約l_20ug，Hep B的存在量為每0. 5ml約l-25ug，并且Mahoney 1型、MEF 2型和Saukett 3型毒株的存在量分別為每0. 5ml約1-50DU、1-15DU和1-50DU，使得所述聯(lián)合疫苗給藥于對象時是穩(wěn)定的并且有免疫原性的。根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方案，提供了全液體六價疫苗，其包含D、T、aP(PT, FHA, PRN)、Hib b，Hep B和IPV，其中D的存在量約為25Lf，T的存在量約為IOLf，PT的存在量為每0. 5ml約25ug，FHA的存在量為每0. 5ml約25ug，PRN的存在量為每0. 5ml約8ug， Hib b的存在量為每0. 5ml約10ug，H印B的存在量為每0. 5ml約IOug并且Mahoney 1型、 MEF 2型和Saukett 3型毒株的存在量分別為每0. 5ml約40DU、8DU和32DU。這樣的疫苗將是在給藥于對象時能夠引發(fā)針對組合物的所有抗原的保護性免疫應答的穩(wěn)定的疫苗。本發(fā)明還涉及誘導針對選自D、T、P、Hib、Hep或IPV的任何抗原的免疫應答的方法，所述方法包含給藥免疫活性量的本發(fā)明的疫苗。根據本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的疫苗中的鋁含量(Al+3)優(yōu)選不超過每0.5ml ang、更優(yōu)選不超過每0. 5ml lmg、最優(yōu)選不超過每0. 5ml 0. 6mg。根據本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的聯(lián)合疫苗中2-苯氧乙醇的優(yōu)選量可以為5mg/ ml ο本發(fā)明疫苗的制造方法本發(fā)明的一個方面涉及本發(fā)明疫苗的制造方法。免疫原性組合物中抗原的免疫原性、穩(wěn)定性和正確形式的維持，可能取決于配制組合物的方式。這可以包括添加抗原的順序、用于某些抗原的特定佐劑的使用、各種參數包括攪拌、溫度和PH的使用。本發(fā)明的實施方案之一涉及全液體穩(wěn)定的五價疫苗的制造方法，所述五價疫苗包含白喉(D)、破傷風(T)、無細胞百日咳(aP)、流感嗜血桿菌(Hib)和IPV抗原，所述制造方法包含下列步驟a)制備組分I，其包含i)白喉(D)、ii)破傷風(T)和iii)無細胞百日咳(aP)抗
14原，b)將組分I添加到流感嗜血桿菌(Hib)抗原制備物中以獲得混合物，c)向脊髓灰質炎(IPV)抗原添加上述混合物前提是Hib基本上未吸附在任何佐劑上。根據本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，D，T和aP抗原吸附到磷酸鋁上。本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案涉及組分I的制備，所述制備包含下述步驟a)將白喉和破傷風抗原制備物連同磷酸鋁凝膠，鹽水溶液和2-苯氧乙醇Q-P0E) 轉移到容器中，b)將PT，FHA和PRN抗原制備物在攪拌下轉移到所述容器中獲得混合物，c)將鹽水和2-P0E添加到所述容器中，檢查上述混合物的pH并將其調整到 6. 0-7. 0的范圍內。本方法還涉及將Hib和IPV抗原與本發(fā)明的疫苗的組分I混合，所述混合包括將上述包含D，T和aP抗原的混合物轉移到Hib抗原制備物獲得另一種混合物，然后將該混合物與IPV抗原制備物混合，檢查pH，并將其調整到6. 0-7.0的范圍內的步驟。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的另一個優(yōu)選的實施方案，其提供了全液體穩(wěn)定的六價疫苗的制造方法，所述六價疫苗包含白喉(D)、破傷風(T)、無細胞百日咳(aP)、流感嗜血桿菌 (Hib)，肝炎病毒和IPV，所述制造方法包含下列步驟a)制備組分I，其包含i)白喉(D)、ii)破傷風(T)和iii)無細胞百日咳(aP)抗原，b)制備包含肝炎病毒Ofep)抗原的組分II，c)將組分I與II組合以形成混合物，d)向Hib和IPV抗原添加上述混合物，前提是D，T和aP抗原已經吸附在磷酸鋁上，并且Ifep抗原吸附在氫氧化鋁上。根據本發(fā)明的另一個優(yōu)選方面，組分I的制備包含下述步驟a)將白喉和破傷風抗原制備物連同磷酸鋁凝膠，鹽水溶液和2-苯氧乙醇Q-P0E) 轉移到容器中，b)將PT，FHA和PRN抗原制備物在攪拌下轉移到所述容器中，c)將鹽水和2-P0E添加到所述容器中，檢查pH并將其調整到6. 0-7. 0的范圍內。方法還包含本發(fā)明的疫苗的組分II的制備，所述制備包含下列步驟a)將磷酸鋁凝膠轉移到容器中，b)將Hep抗原制備物轉移到上述容器中，c)在攪拌下添加鹽水和2-P0E，檢查pH并將其調整到6. 0-7. 0的范圍內。方法還包括將本發(fā)明的疫苗的組分I與組分II混合，其包含將組分II的內含物轉移到組分I以獲得混合物的步驟。方法還包含將Hib和IPV抗原與上述獲得的混合物混合，其包含將上述混合物與 Hib抗原制備物混合以獲得另一種混合物，以及將該混合物與IPV抗原制備物混合，檢查pH 并將其調整到6. 0-7.0的范圍內。根據本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，在上述任何步驟中提到的攪拌在25士2°C下以 150rpm進行約30分鐘至2小時。
下面的實施例用于進一步說明本發(fā)明及其優(yōu)點。提供下面的具體實施例時應該理解，它們打算用于說明而不是用于限制本發(fā)明的范圍。實施例I本實施例給出了根據本發(fā)明的一種情況的五價疫苗的組成和制造方法A、本發(fā)明的五價疫苗的組成如下每0. 5ml疫苗包含下列組分表1:
權利要求
1.全液體穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗，其包含白喉(D)，破傷風(T)，無細胞百日咳(aP)，流感嗜血桿菌(Hib)和脊髓灰質炎病毒(IPV)抗原，其中Hib基本上不吸附到任何佐劑上。
2.權利要求1的疫苗，其中Hib結合到選自如下的載體蛋白上破傷風類毒素，白喉類毒素，CRM 197和腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides)的外膜蛋白或其任何等價物， 或任何其他已知載體。
3.權利要求1的疫苗，其中Hib抗原來源于Hibb毒株的莢膜多糖。
4.權利要求1的疫苗，其中IPV抗原是選自Mahoney1型、MEF 2型和Saukett 3型的 Salk毒株，或選自Sabin 1型或2型的Sabin毒株。
5.權利要求1的疫苗，其中D，T和aP抗原吸附在磷酸鋁上。
6.權利要求1的疫苗，其中aP包含至少一種或者多種來自百日咳類毒素(PT)，絲狀血細胞凝集素(FHA)，百日咳桿菌粘附素(P69或PRN)以及菌毛蛋白(FIM 1，2和3)的抗原。
7.權利要求1 的疫苗，其包含 D, T, aP (PT, FHA, PRN)，Hib b 和 IPV (Mahoney 1 型，MEF 2型和Saukett 3型)，其中D的存在量為約l_40Lf，T的存在量為約l_25Lf，PT的存在量為約l-40ug，FHA的存在量為約l_40ug以及PRN的存在量為每0. 5ml約l_15ug，Hib b的存在量為每0. 5ml約l-20ug，以及Mahoneyl型，MEF2型和Saukett3型毒株的存在量分別為每 0. 5ml 約 1-50DU, 1-15DU 和 1-50DU。
8.權利要求7的疫苗，其包含D，T，aP(PT，FHA, PRN)，Hib b和IPV，其中D的存在量為約25Lf，T的存在量為約IOLf，PT的存在量為約25ug，FHA的存在量為約25ug以及PRN的存在量為每0. 5ml約8ug，Hib b的存在量為每0. 5ml約10ug，以及Mahoneyl型，MEF2型以及Saukett 3型毒株的存在量分別為每0. 5ml約40DU，8DU和32DU。
9.全液體穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗，其包含白喉(D)，破傷風(T)，無細胞百日咳(aP)，流感嗜血桿菌(Hib)和肝炎病毒Ofep)和脊髓灰質炎病毒(IPV)，其中D，T和aP抗原吸附在磷酸鋁上以及H印抗原吸附在氫氧化鋁上。
10.權利要求9的疫苗，其中Hib結合在選自如下的載體蛋白上破傷風類毒素(TT)， 白喉類毒素(DT)，CRM 197以及腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides)的外膜蛋白或其任何等價物，或任何其他已知載體。
11.權利要求9的疫苗，其中Hib抗原基本上不吸附在任何佐劑上。
12.權利要求9的疫苗，其中Hib抗原來源于Hibb毒株的莢膜多糖。
13.權利要求9的疫苗，其中Ifep抗原來源于H印B毒株的表面抗原。
14.權利要求9的疫苗，其中IPV抗原為選自Mahoney1型、MEF 2型和Saukett 3型的&ilk毒株，或選自Sabin 1型或2型的Sabin毒株。
15.權利要求9的疫苗，其中aP包含至少一種選自百日咳類毒素(PT)，絲狀血細胞凝集素(FHA)，百日咳桿菌粘附素(P69或PRN)以及菌毛蛋白(FIM 1，2和3)的抗原。
16.權利要求9 的疫苗，其包含 D, T, aP (PT, FHA, PRN)，Hib b, Hep B 和 IPV (Mahoneyl 型，MEF2型和Saukett3型)，其中D的存在量為約l_40Lf，T的存在量為約l_25Lf，PT的存在量為約l_40ug，FHA的存在量為約l_40ug以及PRN的存在量為每0. 5ml約l_15ug，Hib b的存在量為每0. 5ml約l-20ug，H印B的存在量為每0. 5ml約l_25ug，以及Mahoneyl型， MEF2型和Saukett3型毒株的存在量分別為每0. 5ml約1-50DU，1-15DU和1-50DU。
17.權利要求16的疫苗，其包含0，1\3 ( 1\ 撤，？1^)，!1讓b，H印B和IPV，其中D的存在量為約25Lf，T的存在量為約IOLf，PT的存在量為約25ug，FHA的存在量為約25ug以及PRN的存在量為每0. 5ml約8ug，Hib b的存在量為每0. 5ml約IOug以及H印B的存在量為每0. 5ml約10ug，以及Mahoneyl型，MEF2型以及Saukett 3型毒株的存在量分別為每 0. 5ml 約 40DU，8DU 和 32DU。
18.誘導針對選自D，T，aP，Hib，!fep或IPV的任一抗原的免疫應答的方法，所述方法包括給對象給藥免疫活性量的權利要求1或9的聯(lián)合疫苗。
19.全液體穩(wěn)定聯(lián)合疫苗的制造方法，所述方法包含下列步驟a)制備組分I，其包含i)白喉⑶、ii)破傷風⑴和iii)無細胞百日咳(aP)抗原，b)向流感嗜血桿菌(Hib)抗原制備物添加組分I獲得混合物，c)向脊髓灰質炎病毒(IPV)抗原制備物添加上述混合物，前提是Hib基本上不吸附在任何佐劑上。
20.權利要求19的方法，其中D，T和aP抗原吸附在磷酸鋁上。
21.權利要求19的方法，其中該方法還包含向制劑添加作為防腐劑的2-苯氧乙醇 (2-P0E)的步驟。
22.權利要求19的方法，其中組分I的制備包含下列步驟a)將白喉和破傷風抗原制備物連同磷酸鋁凝膠，鹽水溶液和2-P0E轉移到容器中，b)將PT，FHA和PRN抗原制備物轉移到所述容器中，c)將鹽水和2-P0E添加到所述容器中獲得混合物，檢查pH并將其調整到6.0-7. 0的范圍內。
23.權利要求22的方法，還包含下列步驟a)將上述混合物轉移到Hib抗原制備物中獲得另一種混合物，b)將步驟a)中獲得的混合物混入IPV抗原制備物，檢查pH并將其調整到6.0-7. 0的范圍內。
24.全液體穩(wěn)定的聯(lián)合疫苗的制造方法，其包含下列步驟a)制備組分I，其包含i)白喉⑶、ii)破傷風⑴和iii)無細胞百日咳(aP)抗原，b)制備包含肝炎病毒(Hep)抗原的組分II，c)將組分I和II組合形成混合物，d)向Hib和IPV抗原制備物添加上述混合物，前提是D，T和aP抗原已經吸附在磷酸鋁上，并且H印抗原吸附在氫氧化鋁上。
25.權利要求M的方法，其中所述方法還包括向制劑添加作為防腐劑的2-苯氧乙醇 (2-P0E)的步驟。
26.權利要求M的方法，其中組分I的制備還包括下列步驟a)將白喉和破傷風抗原制備物連同磷酸鋁凝膠，鹽水溶液和2-P0E轉移到容器中，b)將PT，FHA和PRN抗原制備物轉移到所述容器中，c)將鹽水和2-P0E添加到所述容器中，檢查pH并將其調整到6.0-7. 0的范圍內。
27.權利要求M的方法，其中組分II的制備包括下列步驟a)將氫氧化鋁凝膠轉移到容器中，b)將Hep抗原制備物轉移到上述容器中，c)添加鹽水和2-P0E，檢查pH并將其調整到6.0-7. 0的范圍內。
28.權利要求M的方法，其中組分I和II的組合包括將組分II的內含物轉移到組分 I獲得混合物的步驟。
29.權利要求28的方法，還包括下列步驟a)向Hib抗原制備物轉移包含組分I和組分II的混合物獲得另一種混合物，檢查PH 并將其調整到6. 0-7. 0的范圍內，b)向IPV抗原制備物轉移步驟a)中獲得的混合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含用于針對疾病例如白喉、破傷風、無細胞百日咳和由流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)和脊髓灰質炎病毒的感染提供保護作用的抗原混合物的聯(lián)合疫苗。本發(fā)明還涉及包含抗原，用于針對由肝炎病毒和其他病原體引起的感染提供保護作用，以便疫苗的給藥能夠同時免疫對象以對抗一種以上病原體。具體來說，本發(fā)明涉及包含上面指出的抗原的全液體穩(wěn)定聯(lián)合疫苗及其制造方法。
文檔編號A61K39/102GK102196818SQ200980142461
公開日2011年9月21日 申請日期2009年10月23日 優(yōu)先權日2008年10月24日
發(fā)明者拉杰什·賈殷, 拉維特·讓比, 蘇克吉特·辛格 申請人:萬能藥生物有限公司