專利名稱：治療減數(shù)分裂驅動蛋白相關疾病的方法
治療減數(shù)分裂驅動蛋白相關疾病的方法
背景技術：
中心體通過在有絲分裂過程中促進雙極紡錘體裝配在染色體均等分離(equal segregation)中發(fā)揮重要作用(Doxsey，S. (2001)Nat Rev Mol Cell Biol 2 :688-698) 對中心體復制的緊密控制以將其限制為每細胞周期一次確保了正常細胞以兩個中心體或微管組織中心(MTOC)進入有絲分裂。不能正確控制中心體的數(shù)目和功能可導致多極紡錘體、非整倍性、細胞極性的破壞和不對稱細胞分裂的故障(Heneen，W. K. (1970)Chromosoma 29 :88-117 ；Nigg,Ε.A. (2002)Nat Rev Cancer 2 :815-825)。中心體數(shù)目的增加，常常稱之為中心體擴增，是實體和血液癌癥的常見特征。 中心體擴增與腫瘤細胞系、小鼠腫瘤模型和人類腫瘤中的非整倍性和惡性行為相關 (D' Assoro, A. B.等人，(2002)Breast Cancer Res Treat 75 :25-34 ；Giehl, S.等人， (2005)Leukemia 19 :1192-1197. ；Levine,D. S.等人，(1991)Proc Natl Acad Sci USA 88 6427-6431 ；Lingle, W. L.等人，(1998)Proc Natl Acad Sci USA 95 :2950-2955 ；Pihan, G. Α.等人，(2003)Cancer Res 63 1398-1404) 0多種腫瘤抑制基因或致癌基因的突變或失調與中心體擴增相關(Fukasawa，K. (2007)Nat Rev Cancer Z :911-9 )。原則上，中心體擴增可能源于幾種類型的細胞分裂錯誤中心體過度復制、中心體從頭合成、細胞融合或胞質分裂故障(Boveri，T. (1929)The Origin of Malignant Tumors (Baltimore :ffilliams and ffilkins) ；Ganem, NJ.等人，(2007) Curr Opin Genet Dev 17 :157-162 ；Nigg, Ε. Α. (2002) Nat Rev Cancer 2 :815-825)。超數(shù)中心體(supernumerary centrosomes)在腫瘤生物學中的作用很可能是多方面的。盡管多中心體可能通過促進非整倍性和/或破壞細胞極性而促使腫瘤發(fā)生，但由于對于多極有絲分裂的潛能，它們也可以對成熟癌的生長造成適合度代價(fitness cost)。 為避免這一問題，許多癌細胞看起來具有抑制多極有絲分裂的機制，研究最多的是超數(shù)中心體群集成兩組而使得雙極有絲分裂成為可能(Brinkley，B. R. (2001)Trends Cell Biol 11 :18-21 ；Nigg, Ε. A, (2002)Nat Rev Cancer 2 :815-825 ；Ring, D.等人，(1982) J Cell Biol 94 :549-556)。尚未完全理解腫瘤細胞中的中心體群集，然而，預計其很大程度上依賴于組織紡錘體極的微管相關蛋白(MAP)和馬達(Karsenti，Ε.和 Vernos，I. (2001) Science 294 543-547 ；Nigg, Ε. A. (2002) Nat Rev Cancer 2 :815-825) 例如，最近的工作發(fā)現(xiàn)中心體群集中需要胞質動力蛋白(一種朝向負端的微管(MT)馬達)和NuMA(—種紡錘體相關MAP) (Quintyne, NJ.等人，(2005) Science 307 127~129)0抑制多極有絲分裂的機制的存在使得新的癌癥治療策略成為可能干擾中心體群集機制的藥物可能對含有多個中心體的腫瘤細胞是致命的，但可能不傷害正常細胞。盡管幾種藥物，包括紫杉醇，能夠促進多極有絲分裂，但沒有一種是對帶有多中心體的細胞特異性的(Chen，J.G.和Horwitz，S. B. (2002) Cancer Res 62 :1935-1938 ；Rebacz, B.等人，(2007) Cancer Res 位6342-6350)。因此，仍然需要鑒定涉及腫瘤細胞中的中心體群集機制的成分。

發(fā)明內容
本發(fā)明鑒定了腫瘤細胞中中心體群集機制中涉及的關鍵成分，并通過抑制這一組分證明了中心體去群集(declustering)能夠在帶有超數(shù)中心體的細胞中選擇性誘導細胞死亡。這一關鍵成分，即減數(shù)分裂驅動蛋白HSET(驅動蛋白-14家族成員)，在正常細胞中對于有絲分裂并不是必需的，但在本文中證明其對帶有額外中心體的腫瘤細胞的存活是必需的。因此，本發(fā)明提供了選擇性殺死含有額外中心體的細胞(如癌細胞)而避免殺死正常細胞的靶標。因而，一方面，本發(fā)明涉及治療減數(shù)分裂驅動蛋白相關疾病或病癥的方法，所述方法包括向需要該治療的受試者給予抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑從而獲得對所述疾病或病癥的治療。在一個實施方案中，所述疾病或病癥是常染色體疾病或病癥。在優(yōu)選實施方案中，所述疾病或病癥是中心體疾病或病癥(例如，以存在超數(shù)中心體為特征)。在另一個優(yōu)選實施方案中，所述疾病或病癥是細胞增殖性疾病，如癌癥或惡性疾病。優(yōu)選地，所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族的成員，最優(yōu)選地是HSET。抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的適當試劑的例子包括RNAi試劑和小分子。在一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。在另一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的微管結合活性。 該試劑可通過例如經(jīng)口或胃腸外給予。另一方面，本發(fā)明涉及抑制腫瘤細胞生長的方法，其中細胞增殖與減數(shù)分裂驅動蛋白有關，所述方法包括將腫瘤細胞與抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑接觸，從而抑制所述腫瘤細胞的生長。在優(yōu)選實施方案中，所述腫瘤細胞包含超數(shù)中心體。優(yōu)選地，所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族的成員，最優(yōu)選地是HSET。抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的適當試劑的例子包括RNAi試劑和小分子。在一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。在另一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的微管結合活性。所述腫瘤細胞可通過例如與該試劑一起培養(yǎng)該腫瘤細胞或通過直接注射該試劑至含有所述腫瘤細胞的腫瘤中或通過向攜帶含有所述腫瘤細胞的腫瘤的受試者給予該試劑而與該試劑接觸。另一方面，本發(fā)明涉及抑制細胞增殖的方法，其中細胞增殖與減數(shù)分裂驅動蛋白有關，所述方法包括將所述細胞與抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑接觸，從而獲得細胞增殖的抑制。在優(yōu)選實施方案中，所述細胞含有超數(shù)中心體。優(yōu)選地，所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族的成員，最優(yōu)選地是HSET。抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的適當試劑的例子包括RNAi試劑和小分子。在一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。在另一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的微管結合活性。還有一方面，本發(fā)明涉及用于鑒定抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的化合物的方法，該方法包括 提供包含減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的指示組合物；將所述指示組合物與測試化合物接觸；以及確定所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET在該測試化合物存在下的活性，其中，根據(jù)與不存在該測試化合物時該減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性相比，存在該測試化合物時減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的降低，將該測試化合物鑒定為抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的化合物。
在優(yōu)選實施方案中，所述指示組合物與測試化合物文庫中的各個成員接觸并選擇所述文庫內一種或多種抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的測試化合物。在一個實施方案中，所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性通過測量該驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性而確定。在另一個實施方案中，所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性通過測量該驅動蛋白的微管結合活性而確定。還有一個實施方案中，所述減數(shù)分裂驅動蛋白 HSET的活性通過測量HSETmRNA或蛋白質的表達而確定。本發(fā)明也涉及分離的化合物，該化合物通過本發(fā)明的篩選方法鑒定。還有一方面，本發(fā)明涉及選擇患有用抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑進行治療的腫瘤的受試者的方法，該方法包括(i)從受試者獲得腫瘤細胞樣品，以及(ii)確定所述腫瘤細胞樣品中的中心體數(shù)目，其中該腫瘤細胞樣品中存在超數(shù)中心體則選擇該受試者以用抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑進行治療。優(yōu)選地，所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族的成員，最優(yōu)選地是HSET。優(yōu)選地，樣品中至少50%的腫瘤細胞含有超數(shù)中心體，更優(yōu)選地，樣品中至少75%的腫瘤細胞含有超數(shù)中心體，甚至更優(yōu)選地樣品中至少90%的腫瘤細胞含有超數(shù)中心體。


圖1顯示的方案是果蠅S2細胞中基因組范圍RNAi篩選以鑒定其敲除導致多極紡錘體(中心體去群集)的基因。圖2的柱狀圖是經(jīng)單獨的EGFP或Mad2 RNAi敲除或者EGFP或Mad2的RNAi敲除再加上MG132處理時帶有異常紡錘體的S2細胞的百分數(shù)。圖3的柱狀圖是經(jīng)拉春庫林(Latrunculin，LatA)、細胞松弛素D或伴刀豆球蛋白-A(Con-A)處理時帶有異常紡錘體的S2細胞的百分數(shù)。 圖 4 的柱狀圖是經(jīng) DMSO、LatA 或 DCB 處理時在 MCF-7、MDA-231、MMECS 4N 或 N1E-115細胞中帶有多極紡錘體的細胞的百分數(shù)。圖5的蛋白質印跡顯示在MDA-231和MCF-7細胞中siRNA三天后HSET的耗損。圖6的蛋白質印跡顯示在MDA-231和MCF-7細胞中siRNA三天后MyolO的耗損。圖7的柱狀圖顯示經(jīng)HSET或MyolO的siRNA處理在MCF-7或MDA-231細胞中帶有多極紡錘體的細胞的百分數(shù)。圖8的柱狀圖顯示經(jīng)HSET或MyolO的siRNA處理(都具有⑴或不具有(-)LatA) 時帶有多極紡錘體的有絲分裂細胞的百分數(shù)。圖9的柱狀圖顯示HSET siRNA處理6天后N1E-115細胞的細胞存活力損失和集落形成的抑制。圖10的柱狀圖顯示在各種癌細胞系中與帶有額外中心體的細胞的份數(shù)成比例的 HSET RNAi誘導的細胞死亡。
具體實施例方式本發(fā)明鑒定了涉及腫瘤細胞中的中心體群集機制的關鍵成分。本發(fā)明還證明了中心體去群集能夠在帶有超數(shù)中心體的細胞中選擇性地誘導細胞死亡。在至少一個實施方案中，本發(fā)明至少部分地基于下述發(fā)現(xiàn)減數(shù)分裂驅動蛋白HSET(—種通常是非必需的驅動
6蛋白馬達)對于含有額外中心體的細胞的存活力是必需的。腫瘤細胞中的多個中心體產(chǎn)生了多極分裂的可能，這可以導致非整倍性和細胞死亡。然而，許多腫瘤細胞由于抑制多極有絲分裂的機制而成功地分裂。果蠅S2細胞中基因組范圍的RNAi篩選和癌細胞中的進一步分析明確了抑制多極有絲分裂的機制。特別地，現(xiàn)已證明減數(shù)分裂驅動蛋白HSET對于某些含有額外中心體的腫瘤細胞的存活力是必需的，抑制HSET導致細胞存活力的抑制(參見特別是本文的實施例6和8)。因而，本文描述的發(fā)現(xiàn)，即朝向負端的馬達HSET對群集額外中心體是必需的，提供了新的治療策略阻斷中心體群集并促進多極有絲分裂以在帶有高比例的含有多個中心體細胞的腫瘤中選擇性地誘導死亡。本發(fā)明提供鑒定調節(jié)減數(shù)分裂驅動蛋白(如HSET)活性的試劑的方法，也提供治療與減數(shù)分裂驅動蛋白活性相關的疾病或病癥的方法，以及提供選擇用減數(shù)分裂驅動蛋白抑制劑進行治療的受試者的方法。為了更容易理解本發(fā)明，首先對一些術語進行定義。術語“驅動蛋白(kinesin) ”是指在真核細胞中發(fā)現(xiàn)的一類馬達蛋白，其能夠通過水解ATP得到動力而沿微管運動。術語“減數(shù)分裂驅動蛋白”是指涉及減數(shù)分裂的細胞功能并且是減數(shù)分裂的細胞功能必需的驅動蛋白。術語“驅動蛋白-14家族成員”是指為驅動蛋白-14家族成員的驅動蛋白，該家族共有與其它驅動蛋白不同的共同的C末端馬達結構域。驅動蛋白-14家族在本領域中也稱為C末端驅動蛋白。驅動蛋白-14家族成員的非限制性例子包括人類蛋白HSET、CH02、 KIFC2和KIFC3，小鼠蛋白HSET和KIFC2，果蠅蛋白Ncd和釀酒酵母蛋白Kar3。術語“HSET”是指在本領域中也稱為KIFCl(驅動蛋白家族成員Cl)的驅動蛋白-14家族成員。人類HSET的mRNA和蛋白序列可分別通過Genbank登錄號NM_002263和 NP_002254獲得。小鼠HSET的mRNA和蛋白序列可分別通過Genbank登錄號NM_053173和 NP_444403獲得。人類HSET序列可例如通過具有保守突變或在非保守區(qū)的突變與Genbank 登錄號NP_0022M的人類HSET不同，并且該HSET具有與Genbank登錄號NP_0022M的人類 HSET基本相同的生物功能。特定人類HSET序列一般與人類HSET氨基酸序列(如Genbank 登錄號NP_002254)至少90%—致，并含有當與其它物種(如小鼠)HSET氨基酸序列比較時確認氨基酸序列為人類的氨基酸殘基。在一些情況下，人類HSET在氨基酸序列上可以與如 Genbank登錄號NP_0022M的人類HSET是至少95 %，或甚至至少96 %、97 %、98 %或99 % — 致。在一些實施方案中，人類HSET序列將顯示與如Genbank登錄號NP_0022M的人類HSET 的不超過10個氨基酸的差異。在一些實施方案中，人類HSET可以顯示與如Genbank登錄號NP_002254的人類HSET序列不超過5個，或甚至不超過4、3、2或1個的氨基酸差異。術語“減數(shù)分裂驅動蛋白相關疾病或病癥”意指其發(fā)病機理需要已知在減數(shù)分裂中發(fā)揮功能的驅動蛋白活性的疾病或病癥。術語“常染色體疾病或病癥”意指其發(fā)病機理與非性染色體相關的疾病或病癥。術語“中心體疾病或病癥”意指其發(fā)病機理與中心體數(shù)目或活性改變相關的疾病或病癥。術語“超數(shù)中心體”意指多于細胞中通?；蛞?guī)定數(shù)目的中心體，一般多于細胞中通常兩個中心體的數(shù)目。術語“細胞增殖性疾病或病癥”意指其發(fā)病機理與改變的或異常的細胞增殖相關的疾病或病癥。
用于本文中時，“抑制減數(shù)分裂驅動蛋白(如HSET)的活性”的試劑或化合物意指減少，或降低，或減輕減數(shù)分裂驅動蛋白活性的試劑或化合物，該抑制可以是部分的或完全的，并且其中這種“活性”可以是，例如，細胞中編碼所述驅動蛋白的mRNA的表達、細胞中所述驅動蛋白的蛋白表達水平或所述驅動蛋白的酶活性或其它生物活性的表達，所述酶活性和其它生物活性的例子包括但不限于三磷酸腺苷酶活性和微管結合活性。術語“試劑”包括任何物質、分子、元素、化合物、實體或其組合。其包括但不限于， 例如，蛋白質、寡肽、小的有機分子、多糖、多核苷酸等等。其可以是自然產(chǎn)物、合成化合物、 或化學化合物、或兩種或更多種物質的組合。除非另有說明，術語“試劑”、“物質”和“化合物”可相互替換地使用。用于本文中時，“反義”核酸包含與編碼蛋白質的“正義”核酸互補的核苷酸序列， 例如，與雙鏈cDNA分子的編碼鏈互補，與mRNA序列互補或與基因的編碼鏈互補。因此，反義核酸可氫鍵連接至正義核酸。用于本文中時，“RNAi試劑”是指介導RNA干擾的試劑，如核酸分子。RNA干擾 (RNAi)是轉錄后的靶向基因沉默技術，其使用雙鏈RNA(dsRNA)降解含有與該dsRNA相同序列的信使 RNA(mRNA)(參見例如，Sharp, P. Α.和 Zamore，P. D. (2000) Science 287 2431-2432 ；Zamore, P. D.等人，(2000)Cell 101 :25-33 Tuschl, T.等人，(1999)Genes Dev. 13 :3191-3197 ；Cottrell T. R.和Doering T. L. (2003)Trends Microbiol. 11:37-43 ； Bushman F. (2003)Mol Therapy 7 9-10 ；McManus Μ. Τ.禾口 Sharp P. Α. (2002)Nat Rev Genet. 3 :737-47)。此過程在內源核酸酶將較長dsRNA切割成較短(例如21或22核苷酸長度的RNA，稱為小干擾RNA或siRNA)時發(fā)生。然后較小的RNA片段介導靶標mRNA的降解。用于合成siRNA的試劑盒是可商業(yè)獲得的，例如從New England Biolabs、Dharmacon 或Ambion。因而，在一個實施方案中，“RNAi試劑”是作為siRNA分子的核酸分子?？捎糜诮?jīng)RNA干擾來使基因表達沉默的核酸分子的其它例子包括小發(fā)夾RNA(shRNA)和微 RNA (miRNA)。因此，術語“RNAi試劑”也意圖包括能夠用來通過RNA干擾使基因表達沉默的分子,如shRNA、miRNA等等。用于本文中時，術語“受試者”包括任何人類或非人類動物。術語“非人類動物” 包括所有脊椎動物，例如，哺乳動物和非哺乳動物，如非人類靈長類、綿羊、狗、貓、馬、奶牛、 雞、兩棲動物、爬行動物等等。治療疾病或病癥的方法—方面，本發(fā)明涉及治療疾病或病癥的方法。特別地，本發(fā)明提供治療減數(shù)分裂驅動蛋白相關疾病或病癥的方法。該方法包括向需要該治療的受試者給予抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑從而獲得疾病或病癥的治療。優(yōu)選地，所述疾病或病癥是常染色體疾病或病癥。更優(yōu)選地，所述疾病或病癥是中心體疾病或病癥。甚至更優(yōu)選地，所述疾病或病癥是細胞增殖性疾病或病癥。最優(yōu)選地，所述疾病或病癥是癌癥、腫瘤或其它惡性疾病。優(yōu)選地，所述癌癥、腫瘤或其它惡性疾病是其中癌癥、腫瘤或惡性疾病細胞包含超數(shù)中心體的一種癌癥、腫瘤或其它惡性疾病。更優(yōu)選地，至少50%的癌癥、腫瘤或惡性細胞包含超數(shù)中心體，甚至更優(yōu)選地至少75%的癌癥、腫瘤或惡性細胞包含超數(shù)中心體，甚至更優(yōu)選地至少90%的癌癥、腫瘤或惡性細胞包含超數(shù)中心體?？筛鶕?jù)本發(fā)明的方法治療的癌癥的非限制性例子包括乳腺癌、結腸癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰癌、腦癌、胃癌、腎癌、肝癌、骨癌、皮膚癌、白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤和黑色素瘤。與超數(shù)中心體累積有關的其它疾病或病癥包括人乳頭瘤病毒(HPV)感染，其包括HPV相關的宮頸瘤變(參見例如，Duensing, S.和Munger，K. (2002)Oncogene 21 6241-6248)。優(yōu)選地，所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族成員。更優(yōu)選地，所述減數(shù)分裂驅動蛋白是HSET。抑制減數(shù)分裂驅動蛋白(例如HSET)活性并且適合用于受試者的任何試劑可在本發(fā)明的治療方法中使用。在優(yōu)選實施方案中，所述試劑是RNAi試劑，如siRNA。如在實施例 6和8中詳細描述的，證明了人類HSET的siRNA抑制劑降低幾種不同癌細胞系的存活力。 可作為人類HSET的siRNA抑制劑發(fā)揮功能的核酸分子的非限制性例子包括SEQ ID NO 1-4 中顯示的寡核苷酸?？捎糜谝种茰p數(shù)分裂驅動蛋白(例如HSET)活性的其它試劑包括但不限于反義分子和小分子抑制劑(例如小的有機分子)。此類試劑可使用例如本文詳細描述的HSET抑制劑的篩選分析來鑒定。在一個實施方案中，所述試劑抑制驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。在另一個實施方案中，所述試劑抑制驅動蛋白的微管結合活性。本發(fā)明的試劑一般以藥物組合物給予受試者。給予通過任何適合完成期望的治療的途徑。例如，在一個實施方案中，所述試劑經(jīng)口給予。在另一個實施方案中，所述試劑經(jīng)胃腸外給予。所述藥物組合物一般包括與藥學上可接受的載體一起配制的試劑。藥物組合物可以以聯(lián)合治療給予，即與其它試劑結合。用于本文中時，“藥學上可接受的載體”包括任何和所有生理學上相容的溶劑、分散介質、涂層、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等等。 優(yōu)選地，所述載體適合經(jīng)口、靜脈內、肌內、皮下、胃腸外、脊椎或經(jīng)皮給予(例如，通過注射或輸注)。根據(jù)給予途徑，活性試劑可包有防止該試劑受酸和其他可能滅活該試劑的天然條件的作用的材料。所述藥物組合物可包括一種或多種藥學上可接受的鹽?！八帉W上可接受的鹽”是指保留了母體化合物的期望生物活性并且不產(chǎn)生任何不希望的毒性效應的鹽(參見例如， Berge, S. M.等人，(1977) J. Wiarm. Sci.巡1_19)。此類鹽的例子包括酸加成鹽和堿加成鹽。酸加成鹽包括衍生自無毒無機酸的那些鹽以及衍生自無毒有機酸的那些鹽，所述無機酸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸等等，所述有機酸如脂肪族單和二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基烷酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸等等。堿加成鹽包括衍生自堿土金屬的那些鹽以及衍生自無毒有機胺的那些鹽，所述堿土金屬如鈉、鉀、鎂、鈣等等，所述有機胺如N，N' -二芐基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因等等。藥物組合物還可包含藥學上可接受的抗氧化劑。藥學上可接受的抗氧化劑的例子包括(1)水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等等；( 油溶性抗氧化劑，如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化的羥基茴香醚(BHA)、丁基化的羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、丙基沒食子酸酯、α-生育酚等等；和C3)金屬螯合劑，如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等等?？捎糜谒鏊幬锝M合物中的適當?shù)乃院头撬暂d體的例子包括水、乙醇、多元醇(如丙三醇、丙二醇、聚乙二醇等等)及其適當?shù)幕旌衔?、植物?如橄欖油)和可注射有機酯(如油酸乙酯)。例如，可通過使用包衣材料如卵磷脂、在分散的情況下通過維持需要的顆粒大小以及通過使用表面活性劑來維持合適的流動性。這些組合物還可含有輔劑，如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑?？赏ㄟ^滅菌程序， 在前，以及通過包含各種抗菌劑和抗真菌劑(例如，對羥基苯甲酸酯(paraben)、氯丁醇、苯酚山梨酸等等)確保防止微生物的存在。也可能希望的是包括等滲劑(如糖、氯化鈉等等) 在組合物中。另外，可通過包含延遲吸收的試劑(如單硬脂酸鋁和明膠)延長可注射藥物形式的吸收。藥學上可接受的載體包括無菌水性溶液或分散液和用于即時制備無菌注射溶液或分散液的無菌粉末。使用此類用于藥學活性物質的介質和試劑是本領域已知的。除非任何常規(guī)介質或試劑與該活性化合物不相容，其在本公開的藥物組合物中的使用可設想的。 也可向所述組合物中弓丨入補充的活性化合物。治療組合物一般在制備和儲存條件下必然是無菌的和穩(wěn)定的。所述組合物可配制為溶液、微乳劑、脂質體或其它適合于高藥物濃度的有序結構。載體可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和液體聚乙二醇等等)及其適當混合物的溶劑或分散介質?？赏ㄟ^使用包衣材料如卵磷脂、在分散的情況下通過維持需要的顆粒大小和通過使用表面活性劑來維持合適的流動性。在許多情況下，優(yōu)選包括等滲劑例如糖、多元醇如甘露醇、山梨醇或氯化鈉于組合物中?？赏ㄟ^在組合物中包含延遲吸收的試劑如單硬脂酸鹽和明膠來延長可注射組合物的吸收?？赏ㄟ^以需要的量添加活性化合物到具有一種上面列舉的成分或其組合(根據(jù)需要)的適當溶劑中，然后進行滅菌微過濾來制備無菌注射溶液。一般而言，分散劑通過添加活性化合物至含有基本分散介質和需要的來自上面列舉的成分的其它成分的無菌載體中制備。在用于制備無菌注射溶液的無菌粉末的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥(凍干法)以由預先過濾的活性成分和任何額外的期望成分產(chǎn)生活性成分加上任何額外期望成分的粉末?？膳c載體材料結合以產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量將根據(jù)受治療的受試者以及特定給藥模式而變化?？膳c載體材料結合以產(chǎn)生單一劑型的活性成分的量一般為產(chǎn)生治療效應的組合物的量。一般而言，在百分之百中，這一量的范圍為大約百分之0.01至大約百分之九十九的活性成分，優(yōu)選地為大約百分之0. 1至大約百分之70，最優(yōu)選地是大約百分之1至大約百分之30的活性成分與藥學上可接受的載體結合。調整給藥方案以提供最優(yōu)的期望反應(例如，治療反應)。例如，可給予單一的丸齊U、可經(jīng)一段時間給予幾次分劑量或者可根據(jù)治療情況的緊迫性所指示的按比例降低或增加劑量。尤其有利地是以單元劑量形式配制胃腸外組合物從而方便給予以及獲得劑量的均一性。本發(fā)明所用的單元劑量形式是指適合作為用于待治療受試者的單一劑量的物理離散的單元；各單元含有與需要的藥學載體結合的經(jīng)計算可產(chǎn)生期望治療效應的預定量的活性化合物。本公開的單元劑量形式的規(guī)格根據(jù)以下因素規(guī)定并直接取決于以下因素(a) 活性化合物的獨特特征和需獲得的特定治療效應，和(b)配合這種活性化合物用于個體靈敏治療的領域中的固有限制?？筛淖兯幬锝M合物中活性成分的實際劑量水平，從而得到對于特定患者、組合物
10和給藥模式有效獲得期望的治療反應而對該患者是無毒的活性成分的量。選定的劑量水平將取決于多種藥代動力學因素，包括所使用的本文公開的特定組合物或其酯、鹽、酰胺的活性，給藥途徑，給藥時間，所用特定化合物的排泄速率，治療的持續(xù)時間，與所用特定組合物聯(lián)合使用的其它藥物、化合物和/或材料，受治療患者的年齡、性別、體重、狀態(tài)、一般健康和以前醫(yī)療史及醫(yī)學領域熟知的類似因素。藥物組合物可使用本領域已知的多種方式中的一種或多種，通過一種或更多種給藥途徑給予。本領域技術人員應當理解，給藥途徑和/或模式將根據(jù)期望的結果而變化。優(yōu)選的給藥途徑包括經(jīng)口、靜脈內、肌內、皮內、腹膜內、皮下、脊椎或其它胃腸外給藥途徑，例如通過注射或輸注。本文使用的短語“胃腸外給予”意思為除腸內和局部給予以外的其它給藥模式，通常通過注射，且包括但不限于靜脈內、肌內、動脈內、鞘內，囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關節(jié)內、包膜下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內、硬膜外和胸骨內注射和輸注。活性化合物可利用阻止化合物快速釋放的載體制備，如控釋制劑，包括植入物、透皮貼片和微囊遞送系統(tǒng)。可使用生物可降解的、生物相容的聚合物，如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。制備此類制劑的許多方法是獲得專利的或一般為本領域技術人員所知的。參見例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson 編輯，Marcel Dekker, Inc. , New York, 1978。治療組合物可通過本領域已知的醫(yī)療裝置給予。例如，治療組合物可通過無針皮下注射裝置給予，所述裝置如美國專利號5，399，163 ；5, 383,851 ；5，312，335 ； 5，064，413 ；4, 941,880 ；4，790，824或4，596，556中公開的裝置。本發(fā)明中有用的公知的植入物和模塊的例子包括美國專利號4，487，603，其公開了用于以受控速率分配藥物的可植入微輸注泵；美國專利號4，486，194，其公開了用于通過皮膚給予藥物的治療裝置；美國專利號4，447，233，其公開了用于以精確輸注速率遞送藥物的藥物輸注泵；美國專利號4，447，224，其公開了用于連續(xù)藥物遞送的可變流的可植入輸注裝置；美國專利號 4，439，196，其公開了具有多室隔間的滲透藥物遞送系統(tǒng)；和美國專利號4，475，196，其公開了滲透藥物遞送系統(tǒng)。這些專利通過引用并入本文。許多其它此類植入物、遞送系統(tǒng)和模塊是本領域技術人員已知的。在一些實施方案中，可配制藥物組合物以確保合適的體內分布。例如，血腦屏障 (BBB)排除許多高度親水性的化合物。為保證治療劑穿過BBB (如果需要)，其可配制于例如脂質體中。制造脂質體的方法參見例如美國專利4，522，811 ；5, 374，548和5，399，331。 該脂質體可包含一個或多個選擇性運輸至特定細胞或器官中的部分，從而增強靶向藥物遞送(參見例如，V. V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29 685) 示例性的靶向部分包括葉酸或生物素(參見例如，授予Low等人的美國專利5，416，016)；甘露糖苷⑴mezawa等人，(1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153 :1038)；抗體(P. G. Bloeman 等人，(1995) FEBS Lett. 357 140 ；M. Owais ^A, (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39 180) ；^ 面活性劑蛋白 A 受體(Briscoe 等人，(1995) Am. J. Physiol. 1233 :134) ；pl20 (Schreier 等人，(1994) J. Biol. Chem. 269 :9090)；也參見 K. Keinanen ；M. L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346 123 J. J. Killion ；I. J. Fidler (1994) Immunomethods 壟273。細胞生長或繁殖的抑制
另一方面，本發(fā)明涉及抑制細胞生長的方法。例如，本發(fā)明提供抑制其中細胞增殖與減數(shù)分裂驅動蛋白有關的腫瘤細胞生長的方法，其包括將腫瘤細胞與抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑接觸，從而抑制腫瘤細胞的生長。優(yōu)選地，該腫瘤細胞包含超數(shù)中心體。優(yōu)選地， 所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族的成員，最優(yōu)選地是HSET。所述試劑可以是，例如RNAi試劑、反義分子或小分子，如上面更詳細描述的。在一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。在另一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的微管結合活性。所述腫瘤細胞可通過例如與試劑一起培養(yǎng)腫瘤細胞而與所述試劑接觸。附加地或替代地，所述腫瘤細胞可通過直接注射所述試劑至含有腫瘤細胞的腫瘤中而與試劑接觸。 附加地或替代地，所述腫瘤細胞可通過給予所述試劑至攜帶含有所述腫瘤細胞的腫瘤的受試者而與試劑接觸。另一方面，本發(fā)明提供抑制細胞增殖的方法，其中細胞增殖與減數(shù)分裂驅動蛋白有關，所述方法包括將細胞與抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑接觸，從而獲得細胞增殖的抑制。優(yōu)選地，所述細胞含有超數(shù)中心體。優(yōu)選地，所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族的成員，最優(yōu)選地是HSET。所述試劑可以是，例如RNAi試劑、反義分子或小分子，如上面更詳細描述的。在一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。在另一個實施方案中，所述試劑抑制所述驅動蛋白的微管結合活性。所述細胞可通過例如與所述試劑一起培養(yǎng)細胞而與試劑接觸。附加地或替代地， 所述細胞可通過直接注射該試劑至含有細胞的腫瘤中而與試劑接觸。附加地或替代地，所述細胞可通過給予所述試劑至攜帶該細胞的受試者而與試劑接觸。篩選方法另一方面，本發(fā)明涉及鑒定抑制減數(shù)分裂驅動蛋白(如HSET)活性的化合物的方法。例如，本發(fā)明提供鑒定抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的化合物的方法，該方法包括提供包含減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的指示組合物；將所述指示組合物與測試化合物接觸；以及確定所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET在該測試化合物存在下的活性，其中，與不存在該測試化合物時所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性相比，存在該測試化合物時該減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的降低將該測試化合物鑒定為抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的化合物。指示組合物可以是，例如，含有(即表達)HSET的細胞或含有HSET的無細胞組合物。如果指示組合物是含有(即表達)HSET的細胞，其可以是天然地表達HSET或已被工程化(例如通過標準重組DNA技術)以表達或過表達HSET的細胞。天然表達HSET的細胞包括但不限于癌細胞系MDA-231、MMEDX 4N和mE_115，以及實施例中描述的其它細胞系。 為工程化細胞系以表達人類HSET，人類HSET cDNA (具有Genbank登錄號NM_002263所示的序列)可通過標準方法(如PCR擴增)獲得、使用標準重組DNA技術插入到表達載體中和轉染至宿主細胞中。為獲得無細胞組合物中的HSET，HSET可使用本領域已知的方法純化。 例如，DeLuca，J. G.等人，(2001).1. Biol. Chem. 276 :28014-28021 描述了從 HeLa 細胞純化人類HSET。本領域已經(jīng)描述了可用于通過標準的免疫親和技術純化HSET的抗HSET抗體。該方法的“接觸”步驟可包括，例如，與含有(即表達)HSET的細胞一起孵育測試化合物或與含有HSET的無細胞組合物一起孵育測試化合物。可使用多種可能的“讀出器”中的一種或多種實施“確定減數(shù)分裂驅動蛋白HSET 的活性”的步驟。例如，在一個實施方案中，HSET的活性通過測量表達HSET的細胞中HSET mRNA的水平而確定，其中如果與在不存在該測試化合物時的水平相比降低了 HSET mRNA的表達水平，則該測試化合物是HSET活性的抑制劑。測量HSET mRNA水平的方法是本領域已經(jīng)確立的，包括但不限于RNA印跡分析和PCR擴增方法。在另一個實施方案中，HSET的活性通過測量表達HSET的細胞中HSET蛋白的水平而確定，其中如果與在不存在該測試化合物時的水平相比降低了 HSET蛋白的表達水平，則該測試化合物是HSET活性的抑制劑。測量 HSET蛋白水平的方法是本領域已經(jīng)確立的，包括但不限于蛋白質印跡分析和免疫沉淀法。在其它實施方案中，HSET的活性通過測量HSET的一種或多種酶活性或生物活性而確定。例如，已經(jīng)證明當紫杉醇穩(wěn)定的微管與純化的HSET接觸時，純化的HSET已證明產(chǎn)生微管滑動(microtubule gliding)(參見 DeLuca，J. G.等人，(2001) Τ. Biol. Chem. 276 28014-28021)。因而，在一個實施方案中，可與測試化合物不存在時HSET介導的微管滑動相比，體外確定測試化合物對HSET介導的微管滑動的效應，從而確定該測試化合物對HSET 活性的效應。附加地或替代地，可確定測試化合物對HSET三磷酸腺苷酶活性的效應。例如， DeBonis, S.等人，(2004)Mol. Cancer Ther.1079-1090描述了用于鑒定有絲分裂驅動蛋白Eg5的抑制劑的微管激活的三磷酸腺苷酶分析法。相似地，這種微管激活的三磷酸腺苷酶分析法可用于純化的HSET以確定測試化合物對HSET的三磷酸腺苷酶活性的效應。因而，在一個實施方案中，減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性通過測量驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性而確定?？稍诖_定測試化合物對HSET活性的效應中用作“讀出器”的HSET的其它生物活性包括但不限于微管結合活性和中心體群集活性。因而，在其它實施方案中，減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性通過測量驅動蛋白的微管結合活性或中心體群集活性而確定。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在細胞中過表達HSET基因導致生長停滯和細胞死亡。因此，本發(fā)明還提供基于細胞的分析以確定測試化合物對HSET誘導的生長停滯和細胞死亡的效應，由此鑒定HSET的調節(jié)劑(例如抑制劑)。一般而言，這些分析包括下述步驟(a)提供包含重組表達載體的指示細胞，該重組表達載體包含可操作地與啟動子連接的HSET基因，處于所述HSET基因在所述指示細胞中表達的條件下；(b)將所述指示細胞與測試化合物接觸；和 (c)確定所述測試化合物對HSET誘導的生長停滯和細胞死亡的效應，其中與該測試化合物不存在時HSET誘導的生長停滯和細胞死亡相比，所述測試化合物存在時HSET誘導的生長停滯和細胞死亡的減弱將該測試化合物鑒定為抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性的化合物。在一個實施方案中，所述啟動子是誘導型啟動子?？煽紤]任何本領域公認的誘導型啟動子系統(tǒng)，包括但不限于蛻皮激素誘導系統(tǒng)(參見例如，Wakita等人，2001，BiOteChniqueS 31 :414)。測量細胞增殖和細胞存活力的方法是本領域熟知的(參見例如，Wilson, Α. P.， Cytotoxicity and Viability Assays in Animal Cell Culture :A Practical Approach, 第三版(編輯 Masters，J. R. W.) Oxford University Press :oXford 2000, Vol. 1.； 禾口 Mosmann, Τ. , Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival Application to Proliferation and Cytotoxicity Assays. J. Immunol. Meth. 1983,65,55-63.)。在優(yōu)選實施方案中，在本發(fā)明的篩選分析中篩選化合物的文庫以鑒定文庫內表現(xiàn)出抑制HSET活性的能力的化合物。因而，在優(yōu)選實施方案中，上述指示組合物與測試化合物文庫的各成員接觸并選擇文庫內抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的一個或多個測試化合物。還有一方面，本發(fā)明涉及通過本發(fā)明的篩選方法鑒定的分離的化合物。詵擇警試者的方法另一方面，本發(fā)明涉及選擇用抑制減數(shù)分裂驅動蛋白(如HSET)的試劑進行治療的受試者的方法。如本文所證明的，HSET活性的抑制選擇性地降低含有額外中心體的細胞 (如癌細胞)的存活力。因此，攜帶包含具有額外中心體的細胞的腫瘤的受試者特別有利于用抑制減數(shù)分裂驅動蛋白(如HSET)的試劑治療。因而，另一方面，本發(fā)明提供選擇患有用抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑進行治療的腫瘤的受試者的方法，該方法包括(i)從受試者獲得腫瘤細胞樣品，以及(ii)確定所述腫瘤細胞樣品中的中心體數(shù)目，其中所述腫瘤細胞樣品中存在超數(shù)中心體則選擇該受試者以用抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑進行治療。確定細胞中中心體數(shù)目的方法是本領域熟知的，且可應用于這一受試者選擇方法。例如，中心體可使用抗Y微管蛋白抗體和熒光標記的二抗進行熒光染色，然后進行免疫熒光成像來定量每細胞的中心體數(shù)目(在實施例中進一步描述)。優(yōu)選地，所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族的成員，更優(yōu)選地是HSET。優(yōu)選地，所述腫瘤細胞樣品中至少50%的腫瘤細胞含有超數(shù)中心體。更優(yōu)選地，所述腫瘤細胞樣品中至少75%的腫瘤細胞含有超數(shù)中心體。甚至更優(yōu)選地，所述腫瘤細胞樣品中至少 90%的腫瘤細胞含有超數(shù)中心體。本發(fā)明通過下述實施例進一步示例性說明，這些實施例不應解釋為進一步的限制。本申請全文中引用的所有參考文獻、Genbank條目、專利和公開的專利申請的內容通過引用全文明確地并入本文中。實施例1 鑒定用于治療減數(shù)分裂驅動蛋白相關疾病或病癥的治療靶標在這一例子中，使用RNAi篩選以全面闡明群集超數(shù)中心體需要的分子途徑。在表征的8個果蠅細胞系中，近-四倍體S2細胞最適合篩選，因為> 50%的細胞含有在有絲分裂過程中有效地群集至兩極的額外中心體。圖1圖示了基因組范圍篩選的方案，其提供了初級和次級篩選過程的細節(jié)。篩選了靶向 99%的果蠅基因組( 14，000個基因)的23，172個dsRNA，以鑒定其敲除導致S2細胞中的多極紡錘體(中心體去群集)的基因。S2細胞暴露于dsRNA 4 天，并在RNAi處理最后9小時的過程中通過蛋白質組抑制劑MG 132處理富集有絲分裂象。 細胞進行DNA、微管(MT)和中心體染色，然后使用高通量自動顯微鏡用20X物鏡獲得圖像。更具體地，S2細胞以IxlO4細胞/孔的密度接種于384孔板的無血清khneider 培養(yǎng)基中，該 384 孔板預先鋪有 0. 25 μ g dsRNA (dsRNAs 可從 Drosophila RNAi Screening Center, DRSC，http //flyrnai. org獲得)。細胞與dsRNA —起在室溫下(RT)于無血清培養(yǎng)基中孵育40分鐘，然后加入含血清培養(yǎng)基并孵育3. 5天以耗盡蛋白質。為阻斷中期-后期轉變，25 μ M MG 132 ( 一種蛋白質組抑制劑)在RNAi處理結束時(3. 5天RNAi處理的細胞)加入并孵育另外9小時(總計大約4天RNAi孵育)。為協(xié)助有絲分裂細胞的粘附，RNAi處理的細胞進行重懸浮，轉移至預先涂覆有伴刀豆球蛋白A (Con-A，0. 25mg/ml)的新384孔板，然后該板以1，OOOrpm旋轉1分鐘。細胞在于PBS(pH 7.2)中的4%多聚甲醛(PFA)中固定，用PBS-Triton 0.01% (PBST)滲透，與PBST中的0. 5% SDS —起孵育，并于4°C保持于PBST中直至進行免疫染色。對于初級篩選，固定的細胞分別用FITC-抗-α微管蛋白(DM1A，1 300，Sigma) 和小鼠抗-Y微管蛋白(GTU88，1 500)抗體進行MT和中心體染色。Alexa Fluor 568或 594 驢抗小鼠 IgG 用作二抗(1 1000)。細胞用于 PBST 中的 Hoechst 33342(1 5000， Invitrogen)進行DNA染色并于4°C儲存于同樣的溶液中。對于初級篩選，細胞使用20X空氣物鏡用自動顯微鏡成像，自動顯微鏡為 ImageXpress Micro (Molecular Devices, ICCB,倒置全自動落射熒光顯微鏡，激光自動對焦，配有Photometries CooISNAP ES數(shù)字CCD像機，MetaXpress用于分析)或 Discovery-KMol ecular Devices, DRSC，自動濾波器和分色輪以及六物鏡轉動架，高速激光自動對焦，且在多孔板中每次測定可測量多達八個熒光團)。在FITC上(MT)進行自動對焦，并對于三通道(Hoechst、Cy3和FITC)從單個焦平面獲得圖像。次級篩選在96孔板(對于切104細胞/孔使用1 μ g dsRNA/孔)中進行，并遵循幾乎與初級篩選相同的方法。RNAi結束時，細胞轉移至96孔玻璃底平板(Whatman)中進行高分辨率成像。另外用抗兔磷酸-組蛋白H3和Alexa Fluor 660驢抗兔IgG進行細胞染色以鑒定有絲分裂細胞。為保證對所有中心體的成像，通過kiss Axiovert顯微鏡和 Slidebrook 軟件(Intelligent Imaging Inovations, Denver, CO)使用 40X 空氣 ELWD 物鏡(Zeiss) Wlym步長獲得3D圖像。對所有701個RHAi狀態(tài)手動調節(jié)Z堆棧(stacks) 的高度(起點和終點)。通過目視檢查 96，000張圖像，對各種RNAi狀態(tài)的多極紡錘體百分數(shù)進行評分。 篩選結果總結于下表1中。表1 :S2細胞中RNAi篩選結果的總結
權利要求
1.治療減數(shù)分裂驅動蛋白相關疾病或病癥的方法，其包括向需要該治療的受試者給予抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑，從而獲得對疾病或病癥的治療。
2.權利要求1的方法，其中所述疾病或病癥是常染色體疾病或病癥。
3.權利要求1的方法，其中所述疾病或病癥是中心體疾病或病癥。
4.權利要求1的方法，其中所述疾病或病癥是細胞增殖性疾病或病癥。
5.權利要求1的方法，其中所述疾病或病癥是癌癥。
6.權利要求1的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族成員。
7.權利要求6的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白是HSET。
8.權利要求1的方法，其中所述試劑是小分子。
9.權利要求1的方法，其中所述試劑是RNAi試劑。
10.權利要求1的方法，其中所述試劑抑制所述驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。
11.權利要求1的方法，其中所述試劑抑制所述驅動蛋白的微管結合活性。
12.權利要求1的方法，其中所述試劑經(jīng)口給予。
13.權利要求1的方法，其中所述試劑經(jīng)胃腸外給予。
14.抑制腫瘤細胞生長的方法，其中細胞增殖與減數(shù)分裂驅動蛋白有關，所述方法包括將腫瘤細胞與抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑接觸，從而抑制該腫瘤細胞的生長。
15.權利要求14的方法，其中所述腫瘤細胞包含超數(shù)中心體。
16.權利要求14的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族成員。
17.權利要求16的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白是HSET。
18.權利要求14的方法，其中所述試劑是小分子。
19.權利要求14的方法，其中所述試劑是RNAi試劑。
20.權利要求14的方法，其中所述試劑抑制所述驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。
21.權利要求14的方法，其中所述試劑抑制所述驅動蛋白的微管結合活性。
22.權利要求14的方法，其中所述接觸包括直接注射該試劑至腫瘤中。
23.抑制細胞增殖的方法，其中細胞增殖與減數(shù)分裂驅動蛋白有關，所述方法包括將細胞與抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑接觸，從而獲得對細胞增殖的抑制。
24.權利要求23的方法，其中所述細胞包含超數(shù)中心體。
25.權利要求23的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族成員。
26.權利要求25的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白是HSET。
27.權利要求23的方法，其中所述試劑是小分子。
28.權利要求23的方法，其中所述試劑是RNAi試劑。
29.權利要求23的方法，其中所述試劑抑制所述驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性。
30.權利要求23的方法，其中所述試劑抑制所述驅動蛋白的微管結合活性。
31.鑒定抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的化合物的方法，所述方法包括提供包含所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的指示組合物；將所述指示組合物與測試化合物接觸；以及確定所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET在該測試化合物存在下的活性，其中，根據(jù)與不存在該測試化合物時所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性相比，存在該測試化合物時所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的降低，將該測試化合物鑒定為抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的化合物。
32.權利要求31的方法，其中所述指示組合物與測試化合物文庫中的各個成員接觸并且選擇所述文庫內一種或多種抑制減數(shù)分裂驅動蛋白HSET活性的測試化合物。
33.權利要求31的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性通過測量該驅動蛋白的三磷酸腺苷酶活性而確定。
34.權利要求31的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性通過測量該驅動蛋白的微管結合活性而確定。
35.權利要求31的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白HSET的活性通過測量HSETmRNA 或蛋白質的表達而確定。
36.通過權利要求31的方法鑒定的分離的化合物。
37.選擇患有用抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑進行治療的腫瘤的受試者的方法，所述方法包括(i)從該受試者獲得腫瘤細胞樣品，以及(ii)確定所述腫瘤細胞樣品中的中心體數(shù)目，其中所述腫瘤細胞樣品中存在超數(shù)中心體則選擇該受試者以用抑制減數(shù)分裂驅動蛋白的試劑進行治療。
38.權利要求37的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白是驅動蛋白-14家族成員。
39.權利要求38的方法，其中所述減數(shù)分裂驅動蛋白是HSET。
40.權利要求37的方法，其中所述腫瘤細胞樣品中至少50%的腫瘤細胞包含超數(shù)中心體。
41.權利要求37的方法，其中所述腫瘤細胞樣品中至少75%的腫瘤細胞包含超數(shù)中心體。
42.權利要求37的方法，其中所述腫瘤細胞樣品中至少90%的腫瘤細胞包含超數(shù)中心體。
全文摘要
本發(fā)明提供通過給予減數(shù)分裂激酶的抑制劑治療減數(shù)分裂激酶(優(yōu)選減數(shù)分裂激酶HSET)相關疾病的方法。優(yōu)選地，所述疾病與存在超數(shù)中心體相關，例如癌癥。本發(fā)明還提供通過將細胞與減數(shù)分裂激酶(優(yōu)選HSET)的抑制劑接觸而抑制腫瘤細胞生長的方法。本發(fā)明還提供用于鑒定減數(shù)分裂激酶HSET的抑制劑的篩選方法。本發(fā)明還提供選擇用減數(shù)分裂激酶(如HSET)的抑制劑進行治療的受試者的方法。
文檔編號A61K31/7088GK102316877SQ200980129900
公開日2012年1月11日 申請日期2009年5月28日 優(yōu)先權日2008年5月30日
發(fā)明者D·佩爾曼 申請人:達那-法伯癌癥研究所