專利名稱：用于治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病和用于形成調(diào)節(jié)t細胞的試劑的制作方法
用干治療和/或？那方自身免.痔性疾病和用干形Jti周節(jié)T細
朐的試劑本發(fā)明涉及一種用于治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的試劑、用于在生物體中形 成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的試劑以及其中使用本發(fā)明的試劑的不同方法。自身免疫性疾病的特征在于免疫系統(tǒng)對抗內(nèi)源組織的過度反應(yīng)。免疫系統(tǒng)錯誤地 將內(nèi)源組織識別為有待對抗的外來體。這導致了嚴重的炎性反應(yīng)，該炎性反應(yīng)導致了被它 們侵襲的器官的損害。在區(qū)別內(nèi)源結(jié)構(gòu)與外源結(jié)構(gòu)中具有重要作用的是T淋巴細胞或T細胞，它們在胸 腺中“受訓”為僅?？康絻?nèi)源細胞表面分子(所謂的MHC分子)上，并且因此容許了內(nèi)源結(jié) 構(gòu)。這些過程被稱為“克隆缺失”和“克隆選擇”。在胸腺中的初始選擇過程中，只有那些能 夠識別內(nèi)源細胞膜上的MHC分子的T細胞存活，然而該結(jié)合不是那么堅固以使它能夠?qū)е?T細胞的活化。絲毫不能結(jié)合或識別內(nèi)源MHC分子的T細胞被消除。同樣在胸腺中進行的 克隆缺失中，那些能夠“無錯誤地”識別并且以這樣一種方式堅固地結(jié)合內(nèi)源MHC分子從而 使得它們被活化(這最后將導致內(nèi)源細胞的破壞)的T細胞被消除。這個過程是免疫系統(tǒng) 所采取的為了能夠保護“自身”并且與“外源”戰(zhàn)斗的的那些措施之一。在自身免疫性疾病中，一組T細胞表現(xiàn)反常。除了仍然起作用于防御外源分子和 生物體外，它們此刻還攻擊內(nèi)源結(jié)構(gòu)。器官或組織被認為是外源的?？赡艽嬖诙喾N后果如 果侵襲了致命的結(jié)構(gòu)，自身免疫性疾病將以致命性進程進行。該免疫系統(tǒng)將其防御功能指 向?qū)惯@些結(jié)構(gòu)，細胞以及還有體液的防御反應(yīng)被啟動，并且形成了自身抗體，其結(jié)果是在 此期間內(nèi)被侵襲的器官停止起作用。最常見地，該免疫系統(tǒng)被弱化并且身體變得易感染各 種各樣的疾病。在一些情況下，外源物的識別也被中斷，并且因此不再能夠被有效地預(yù)防退 化的癌細胞的擴散，并且被侵襲的那些器官更易感染傳染性疾病。在這種疾病的進程中，免 疫系統(tǒng)的細胞破壞內(nèi)源結(jié)構(gòu)，而身體的修復機制盡可能地努力再生被破壞的器官部分。通 常，在無治療下，這種錯誤地攻擊防御系統(tǒng)延續(xù)了整個生命過程或延續(xù)直到完全破壞目標 結(jié)構(gòu)為止。雖然進行了密集的研究，自身免疫性疾病的準確原因仍然是不清楚的。公認的假 說基于這種假設(shè)，即自身免疫性疾病是通過遺傳誘因(例如由于存在某些MHC分子類型) 與外部影響的組合而獲得的。如果這些遺傳上確定的因素存在于被侵襲的人的體內(nèi)，并且 此外還出現(xiàn)了不利的環(huán)境因素如嚴重應(yīng)激、感染、妊娠等，則這能夠?qū)е伦陨砻庖咝约膊〉?發(fā)作。免疫系統(tǒng)由能夠與已經(jīng)侵入體內(nèi)的傳染原戰(zhàn)斗的不同細胞組成。免疫應(yīng)答的機制 包括活化專門的細胞并且獲取效應(yīng)子功能，如某些T細胞的細胞毒性，這些T細胞表達所 謂的⑶8跨膜糖蛋白并且因此被描述為⑶8+T細胞。調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)(以前還被描述為抑制T細胞)是一個專門T細胞亞群。它們 具有抑制免疫系統(tǒng)的活化的功能并且由此調(diào)節(jié)了免疫系統(tǒng)的自身耐受。其結(jié)果是，在健康 的生物體中，它們防止自身免疫性疾病的發(fā)作。已經(jīng)描述了不同的Tlteg群體，包括表達CD4、 ⑶25和R)xp3蛋白的那些并且因此被描述為⑶4+⑶25+FOXp3+T細胞。此外，已經(jīng)描述了表達⑶4和R)xp3但是不表達⑶25的TKeg，即所謂的⑶4+CD25-Foxp3+T細胞。Lan等人Q005)，調(diào)節(jié)T細胞在自身免疫中的發(fā)展、功能和作用(Regulatory T cells :development, function and role in autoimmunity),自身免疫綜述(Autoimmun. Rev. )4(6), 351-363頁描述了鼠類模型，其中⑶4+⑶25+調(diào)節(jié)T細胞的耗盡導致了自身免疫 性疾病的自發(fā)的發(fā)展。Chatila T. A. Q005)，調(diào)節(jié) T 細胞在人類疾病中作用(Role of regulatoryT cells in human diseases)，116 (5)，949-959頁報道了由于編碼Foxp3蛋白的基因中的突 變引起的CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細胞的先天性缺陷促進自身免疫性疾病的發(fā)展。在2005年3月出版的雜志“自然免疫學”中存在關(guān)于調(diào)節(jié)T細胞的綜述。自身免疫性疾病是根據(jù)被侵襲的器官來治療的。這樣，原因性療法的基本原理是 通過施用免疫抑制劑(可的松(cortisone))來抑制免疫系統(tǒng)的活性。這些物質(zhì)的特征在 于多種全身性副作用以及相互作用，因此已經(jīng)試圖發(fā)展特異性影響參與疾病事件的機制的 新藥物。這種藥物的例子是那他珠單抗(natalizumab)和英利昔單抗(infliximab)。那 他珠單抗是IgG4(—種位于白細胞表面上的粘著分子)的單克隆抗體和選擇性抑制劑。那 他珠單抗抑制白細胞遷移到炎癥病灶處并且用于治療斑性進展型多發(fā)性硬化癥(plaque progressive multiple sclerosis)的特別攻擊性形式。英利昔單抗是對抗腫瘤壞死因子 α (TNFa)(它在自身免疫性炎性反應(yīng)中起關(guān)鍵作用)的嵌合單克隆抗體。英利昔單抗被用 于類風濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis)、克羅恩病(Crohn’ s disease)、Bechterew 病 以及銀屑病(psoriasis)。Hirenstein等人(2004)，在類風濕性關(guān)節(jié)炎中的調(diào)節(jié)T細胞的受損害的功能 以及通過抗 TNFa 療法進行逆轉(zhuǎn)(Compromised function of regulatoryT cells in rheumatoid arthritis and reversal by anti-TNF α therapy),(J. Exp. Med.)，第200卷，第3號，277-285頁中，報道了，作為一種針對TNF α的單克隆抗體，英利昔 單抗可以改善類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療。Nadkarni等人(2007)，抗TNF α療法在患有類風濕性關(guān)節(jié)炎的患者中通過TGF-β 誘導了一個不同的調(diào)節(jié) T 細胞群體(Anti-TNFatherapy inducesa distinct regulatory T cell population in patients with rheumatoid arthritis viaTGF-β ), JEM 第 204 卷，33-39頁作出了類似的建議。Bresson等人Q006)建議了通過抗⑶3 ε特異性抗體和前胰島素肽的組合施藥來 治療I型糖尿病。Vandenbark等人Q008)，在患有多發(fā)性硬化癥的患者中治療性接種三價T細胞 受體(TCR)肽疫苗恢復了有缺陷的R)xP3表達以及TCR識別(Therapeutic vaccination with a trivalent T-cell receptor(TCR)peptidevaccine restores deficient FoxP3 expression and TCR recognition in subjectswith multiple sclerosis)，免疫學 (Immimology)，第123卷，66-78頁描述了在對患者接種某些TCR肽疫苗后控制多發(fā)性硬化 癥中自體反應(yīng)性應(yīng)答的進步。雖然這些新近出現(xiàn)的物質(zhì)非常特異地起作用，可以出現(xiàn)嚴重的副作用，例如進行 性多灶性白質(zhì)腦病(progressive multifocalleukoencephalopathy)的發(fā)作。出于此原因， 在那他珠單抗在美國第一次注冊僅三個月后，它再次被從市場撤回。這些新的活性物質(zhì)的成本是非常高的。目前，300mg那他珠單抗花費超過2，000. OOEuros。200mg英利昔單抗花 費大約 1，700. OOEuros。對照該背景情況，本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療和/或預(yù)防自身免疫性疾 病的新的藥物組合物，使用該藥物組合物，由于現(xiàn)有技術(shù)發(fā)展水平所引起的缺點被盡可能 地避免了。具體地講，應(yīng)該提供一種特征為良好耐受性和低毒性的藥物組合物。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種用于在生物體中形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的試 劑。通過提供人白細胞介素2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其區(qū)段或片段解決了 這些問題，該突變蛋白是根據(jù)該hIL-2野生型來編號的并且在位置20、88或126中至少一 處具有氨基酸替換。本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，這樣的hIL-2突變蛋白或其片段具有 高的治療潛力，可以用于治療和預(yù)防自身免疫性疾病。因此例如它們能夠在不同的實驗制 品中證明，hIL-2突變蛋白選擇性地誘導調(diào)節(jié)T細胞如⑶4+CD25+Foxp3+和⑶4+⑶25_Foxp3+ 在生物體中的形成。出人意料地，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白展示出對調(diào)節(jié)T細胞比對hIL-2野生 型顯著更高的活性。這在高濃度下是特別明顯的。對于該hIL-2突變蛋白，根據(jù)本發(fā)明，在WO 99/601 中披露了，它比結(jié)合雙鏈 IL-2受體(IL_2Ri3 γ)更堅固地結(jié)合到三鏈IL_2受體(IL_2Ra β y)上。由于本發(fā)明的 諸位發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)能夠首次展示出，與hIL-2野生型相比，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白 誘導，但是也出人意料地強化，那些缺少IL-2受體(⑶2 (⑶4+⑶25Τοχρ3+)的α亞基的 調(diào)節(jié)T細胞的形成。此外該亞群促進抑制免疫系統(tǒng)的活化并且由此促進調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的自 身耐受。其結(jié)果是，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白比hIL-2野生型展示出作為一種用于治 療自身免疫性疾病的活性物質(zhì)的相當更高的潛力。本發(fā)明的諸位發(fā)明人還能夠證明，hIL-2突變蛋白誘導了⑶8陽性調(diào)節(jié)T細胞如 CD3+CD4_CD25+Foxp3+和CD3+CD4_CD25_Foxp3+的形成(沒有顯示數(shù)據(jù))，它在抑制自身免疫 性疾病中起到了一種決定性作用。此外，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白與hIL-2野生型相比具有另外的優(yōu)點，即它選 擇性地活化T細胞而非自然殺傷細胞(NK細胞)并且結(jié)果展示出顯著減小的毒性特征以及 增加的治療指數(shù)。其結(jié)果是，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白比hIL-2野生型受到相當?shù)馗?好耐受；參見W099/60U8。此外，基于細胞毒性⑶3+⑶8+⑶45R0+T細胞，可以首次展示出，與hIL_2野生型 相反，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白出人意料地對CD8-陽性細胞毒性T細胞的增殖不具 有或僅具有輕微的影響，所述CD8-陽性細胞毒性T細胞也被描述為“幼稚、中樞記憶性 (central memory)、早期分化”和“晚期分化”⑶8T細胞。這在這樣的范圍內(nèi)是有利的，即 保持CD8+-細胞毒性T細胞負責自身免疫性疾病中的持久、慢性炎性過程；參照Liu等人 (2007)，多發(fā)性硬化癥(Multiple Sclerosis)，叢，149 頁、以及 Haegele 等人(2007)，神經(jīng) 免疫學(Neur0immun0l)，lM，168頁。因此，與hIL_2野生型相比，根據(jù)本發(fā)明的hIL_2突 變蛋白防止由CD8+T細胞引起的該炎性反應(yīng)的進一步強化，這代表了進一步耐受的優(yōu)點。由于本發(fā)明的諸位發(fā)明人能夠展示出，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白還刺激免疫細胞的抗原特異性活性。這具有的優(yōu)點是，通過hIL-2突變蛋白，疾病特異性免疫細胞被選 擇地刺激并且由此免疫治療的全身性影響被限制了。其結(jié)果是，也防止由于施用hIL-2突 變蛋白引起的其他疾病的誘導。此外，基于I型糖尿病(diabetes mellitus)的鼠類模型，本發(fā)明的諸位發(fā)明人能 夠展示出，自身免疫性疾病的發(fā)作可以通過用根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白進行治療而避
免ο作為本發(fā)明基礎(chǔ)的問題因此完全得到了解決。根據(jù)本發(fā)明，人白細胞介素2的“野生型”(hIL-2野生型)被理解為是指具有存在 于天然的人IL-2 (在沒有信號肽下，它由另外的20個N端氨基酸組成)中的133個氨基酸 的氨基酸序列的多肽或蛋白。hIL-2野生型可以天然地并且還可以重組地表達。hIL-2野 生型的氨基酸序列描述于Fujita等(1983)，PNAS USA 80，第7437-7441頁中，具有和不具 有額外的N端甲硫氨酸，其在當該蛋白表達于大腸桿菌(E. coli)中作為一種胞內(nèi)部分時是 必須存在的。hIL-2野生型的氨基酸序列在所附的序列方案中以SEQ ID No. 1被披露。編 碼hIL-2的cDNA的核苷酸序列在所附的序列方案中以SEQ ID No. 2披露。根據(jù)本發(fā)明，人白細胞介素2的“突變蛋白”(hIL-2突變蛋白)被理解為是指與 hIL-2野生型相比其中已經(jīng)進行了特異性替換的多肽或蛋白。進行了替換的位置的鑒定是 基于hIL-2野生型中的氨基酸位置，hIL-2野生型可以例如來自SEQ ID No. 1。因此，丙氨 酸(A)位于位置1、脯氨酸(P)位于位置2、蘇氨酸(T)位于位置133等。位置20處的天冬 氨酸殘基(D) ( “D20”)可以例如被異亮氨酸殘基(I)或組氨酸(H)所替代，從而形成了分 別描述為hIL-2-D20I和hIL-2-D20H的IL-2突變蛋白。不言而喻，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白可以在所說明的位置20、88或126中的 若干處被替換，從而形成特別適合用于治療自身免疫性疾病或用于誘導調(diào)節(jié)T細胞的組合 突變體。根據(jù)本發(fā)明，hIL-2突變蛋白還包括修飾的多肽，例如糖基化的hIL-2突變蛋白。 糖基化的hIL-2突變蛋白例如被披露于美國專利申請09/310，026和10/051，657中，將其 通過引用結(jié)合在此。根據(jù)本發(fā)明，hIL-2突變蛋白的“區(qū)段”或“片段”被理解為是指這樣的多肽，其中 與該hIL-2突變蛋白相比，在N端和/或C端處缺失一個或多個氨基酸，但是雖然如此仍然 展示出根據(jù)本發(fā)明用于治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的hIL-2突變蛋白的足夠的生物活 性。如果該區(qū)段或片段展示出hIL-2突變蛋白用于誘導調(diào)節(jié)T細胞的活性的至少50%、優(yōu) 選至少60%、更優(yōu)選至少70%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%、并且最優(yōu)選至少95%， 則這種活性被認為是足夠的。hIL-2突變蛋白的活性可以通過本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知 的方法來容易地測量。這樣的方法例如披露于W099/60U8，實例3至5。通過引用，將該公 布結(jié)合在本公開內(nèi)容中。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的是，如果在所說明的位置處的替換不是保守性替換即由此一 個氨基酸被交換成另一種具有類似的生物特性的氨基酸。在這方面，優(yōu)選的是，如果在位置20處的替換不是這樣一種替換，其中天冬氨酸 (D)被換成谷氨酸(E)。優(yōu)選在位置88處的替換不是這樣一種替換，其中天冬酰胺(N)被 換成丙氨酸(A)、脯氨酸(P)、甘氨酸(G)、谷氨酰胺⑴)、絲氨酸⑶或蘇氨酸(T)。此外，在位置1 處的替換優(yōu)選不是這樣一種替換，其中谷氨酰胺(Q)被換成丙氨酸(A)、脯氨酸 (P)、甘氨酸(G)、天冬酰胺(N)、絲氨酸( 或蘇氨酸(T)。這些替換將不會或僅僅不顯著地 改變hIL-2野生型的生物活性。此外，優(yōu)選的是，在所說明的位置處沒有產(chǎn)生引入關(guān)于分子間交聯(lián)或不正確二硫 橋鍵的位點的替換。因此，根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白在位置20處的替換優(yōu)選不是這 樣一種替換，其中天冬氨酸(D)被換成精氨酸(R)、天冬酰胺(N)、天冬氨酸(D)、半胱氨酸 (C)、谷氨酸(E)、甘氨酸(G)、亮氨酸(L)、賴氨酸(K)、苯丙氨酸(F)、脯氨酸(P)、蘇氨酸(T) 或色氨酸(W)。在位置88處的替換優(yōu)選不是這樣一種替換，其中天冬酰胺(N)被換成天冬 氨酸(D)、半胱氨酸(C)、谷氨酰胺(Q)、色氨酸(W)或脯氨酸(P)。在位置1 處的替換優(yōu) 選不是這樣一種替換，其中谷氨酰胺(Q)被換成丙氨酸(A)、組氨酸(H)、色氨酸(W)、半胱氨 酸(C)、谷氨酰胺(Q)、谷氨酸(E)或賴氨酸(K)。根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白可以通過現(xiàn)有技術(shù)水平中已知的任何適當?shù)姆椒?來制備。這些方法包括構(gòu)建編碼根據(jù)本發(fā)明的IL突變蛋白并且例如包括核苷酸序列SEQ ID No. 2的DNA序列，和在合適的宿主中表達此序列。這種方法導致了處于重組形式的根據(jù) 本發(fā)明的突變蛋白。然而，根據(jù)本發(fā)明的突變蛋白還可以通過化學合成或化學合成與重組 DNA技術(shù)的組合來制備。在WO 99/60128，實施方案1和2中詳細描述了根據(jù)本發(fā)明的突變 蛋白的制備，將其通過引用結(jié)合在本公開內(nèi)容中。根據(jù)本發(fā)明的特別優(yōu)選的hIL-2突變蛋白，其中在位置88處，天冬酰胺(N)被換 成精氨酸(R) (hIL-2-N88R)，是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以獲得的，名稱為BAY50-4798，參 見a^nafelt等人Q000)，T細胞選擇的白細胞介素2突變蛋白展示出有效力的抗腫瘤 活性并且在體內(nèi)是良好耐受的(A T-cell-selective interleukin 2 mutein exhibits potent antitumor activityand is well tolerated in vivo),自然生物技術(shù)(Nat. Biotechnol.) 18卷，1197-1202頁。hIL_2_N88R的氨基酸序列在所附的序列方案中以SEQ ID No. 3 披露。本發(fā)明的諸位發(fā)明人的發(fā)現(xiàn)是尤其出人意料的，因為在現(xiàn)有技術(shù)水平中沒有發(fā)現(xiàn) IL-2突變蛋白的任何此類活性。因此，在WO 99/601 中，對于突變體hIL-2_N88R，披露了其可以選擇性地活化T 細胞而非天然殺傷細胞并且能夠降低肺中的轉(zhuǎn)移形成。在WO 02/00243中，描述了關(guān)于突變蛋白hIL-2-N88R的穩(wěn)定的、含組氨酸的、無清 蛋白制劑。在US 2002/0164300中，描述了突變蛋白hIL_2_N88R的糖基化變體。根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白用于靶向治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病或用于在 生物體中選擇性活化調(diào)節(jié)T細胞的用途在現(xiàn)有技術(shù)水平中，既沒有描述也沒有變得清楚。甚至對于人野生型IL-2，也沒有相應(yīng)的發(fā)現(xiàn)。Van der Vliet等人Q007)，在患有晚期黑素瘤和腎細胞癌的患者中施用高 劑量白細胞介素-2對免疫調(diào)節(jié)細胞子群的影響(Effects of theadministration of high-dose interleukin-2 on immunoregulatory cell subsets inpatients with advanced melanoma and renal cell cancer),丨臨床癌癥石if究(Clin. Cancer Res. ) 13 卷， 2100-2108頁報道了，在施用高劑量的IL-2時，減小它用于治療腫瘤的治療功效。
Ahmadzadeh 和 Rosenberg (2006)，IL-2 施用增加了癌癥患者體內(nèi)的 CD4+CD25hiFoxp3+調(diào)節(jié) T 細胞(IL-2 administration increasesCD4+CD25hiFoxp3+regulat ory T cells in cancer patients)，血液(Blood)，107 卷，2409-2414 頁提議了在腫瘤患 者中通過消除患者的調(diào)節(jié)T細胞來改進人野生型IL-2的治療功效。然而，該方法結(jié)果被證 明是沒有前景的；參見Powell等人(2007)，在淋巴細胞刪除性化療之后，轉(zhuǎn)移自體同源的 ⑶25-刪除的PBMC和白細胞介素-2之后，不能介導持久地減少調(diào)節(jié)T細胞anability to mediate prolonged reduction of regulatory T cells after transferof autologous CD25-depleted PBMC and interleukin-2 after lymphodepletingchemotherapy)，免疫療 法雜志(J. Immunother.) 30 卷，438-447 頁。Antony和Restifo Q005)，CD4+CD25+T調(diào)節(jié)性細胞、癌癥免疫療法、以及白細胞介 素(CD4+CD25+T regulatory cells,immunotherapy of cancer,and interleukin-2), 疫療法雜志(J. Immunother. ) 卷，120-1 頁，在一定程度上低估了 IL-2作為一種免疫治 療劑并且甚至報道IL-2的施用可以誘導自身免疫。Knoechel等人^00 ，白細胞介素2依賴性效應(yīng)子和調(diào)節(jié)T細胞響應(yīng)內(nèi)源系 統(tǒng)抗原的相繼發(fā)育(Sequential development of interleukin2_dependent effector and regulatory T cells in response to endogenous systemicantigen)， JEM 202 卷， 1375-1386頁，傾向于相同的觀點并且甚至提議IL-2對抗，即抑制IL-2機制，從而治療早期 的自身免疫性疾病。因此在現(xiàn)有技術(shù)水平中不存在致使根據(jù)本發(fā)明的解決方案變得清楚的線索。由此，本發(fā)明的諸位發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了，取決于指征(indication)和所使用的濃 度，hIL-2突變蛋白的治療效果可以是不同的。高濃度的hIL-2對自身免疫性疾病的治療 可以是有利的，但是在腫瘤疾病的治療中禁忌。在根據(jù)本發(fā)明的用途中，優(yōu)選的是，如果通過在位置88處的替換，天冬酰胺被換 成精氨酸(hIL-2-N88R)、或換成甘氨酸(hIL_2_N88G)、或換成異亮氨酸(hIL_2_N88I)， 和/或通過在位置20處的替換，天冬氨酸被換成組氨酸(hIL-2-D20H)、或換成異亮氨酸 (hIL-2-D20I)、或換成酪氨酸(hIL-2-D20Y)，或通過在位置1 處的替換，谷氨酰胺被換成 亮氨酸(hIL-2-QU6L)。該方法具有的優(yōu)點是，使用根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白，該hIL-2突變蛋白具有 的不同之處在于它特別地選擇性地活化T細胞而非天然殺傷細胞并且因此展示高的治療 潛力以及低毒性。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的hIL-2突變蛋白的這些特性描述于WO 99/60128，將 其通過引用結(jié)合在本公開內(nèi)容中。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的是，如果hIL-2突變蛋白或其片段在除了位置20、88或1 處 之外的任何位置處具有至少一個另外的氨基酸替換，從而使由此被另外替換的hIL-2突變 蛋白或其由此被另外替換的區(qū)段或片段具有與這樣的hIL-2突變蛋白或其區(qū)段或片段的 氨基酸序列具有至少80 %，優(yōu)選85 %，更優(yōu)選90 %，更優(yōu)選95 %，最優(yōu)選99 %同一性的氨基 酸序列，所述這樣的hIL-2突變蛋白或其區(qū)段或片段與hIL-2野生型相比，除了在位置20、 88或1 處中的至少一個之外，不被另外替換。這種辦法具有的優(yōu)點是提供了可備選的初級結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)在某些情況下比hIL-2 突變蛋白更容易合成，其除了在位置20、88或1 處中的至少一個之外與hIL-2野生型相一致。為了獲得具有hIL-2突變蛋白或其區(qū)段的生物活性的多肽以及因此用于治療和/ 或預(yù)防自身免疫性疾病的藥物，不是絕對有必要提供具有與根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白 或其區(qū)段的氨基酸序列100%同一的氨基酸序列的多肽。相反，如果存在足夠高的同一性 則是足夠的，雖然如果有必要，適度的活性損失是可忍受的，但是優(yōu)選保留至少50%、60%、 70%、80%、90%、95%或99%的活性。所述同一性基于具有> 10個氨基酸的根據(jù)本發(fā)明 的hIL-2突變蛋白的區(qū)段。同源性的程度可以通過本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所知的方法，例 如BLAST分析，或使用來自DNAMar Inc.的Lasergene程序的MegAlign模塊來容易地確 定。根據(jù)本發(fā)明，進一步優(yōu)選的是，如果在除了位置20、88或1 之外的任何位置處的
進一步的氨基酸替換是保守性氨基酸替換。這種辦法具有的優(yōu)點是，提供了根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白的其他變體，所述 其他變體展示出用于治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病或用于在生物體內(nèi)誘導調(diào)節(jié)T細胞的 足夠高的活性。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的是，保守性替換對該突變蛋白的二級結(jié)構(gòu)和 三級結(jié)構(gòu)不具有或僅具有極小的作用。此類保守性替換包括由Dayhoff在，“蛋白序列和 結(jié)構(gòu)的圖集.5卷"(“The Atlas of Protein Sequence and Structure. Vol. 5")，國家 生物醫(yī)學研究(Natl. Biomedical Research)中描述的那些。例如，屬于以下組中一組的氨 基酸可以相互交換，即構(gòu)成保守性交換-丙氨酸(A)、脯氨酸⑵、甘氨酸(G)、天冬酰胺(N)、絲氨酸⑶、蘇氨酸⑴；-半胱氨酸(C)，絲氨酸⑶，酪氨酸⑴，蘇氨酸⑴；-纈氨酸(V)，異亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，丙氨酸(A)，苯丙氨酸(F)；-賴氨酸(K)，精氨酸(R)，組氨酸(H)；-苯丙氨酸(F)，酪氨酸⑴，色氨酸(W)，組氨酸(H)；以及-天冬氨酸⑶，谷氨酸(E)。根據(jù)本發(fā)明用于在生物體中誘導形成調(diào)節(jié)T細胞的試劑優(yōu)選是含有藥用載體的 藥物組合物。該辦法具有的優(yōu)點是，已經(jīng)以能夠直接施用于生物體，優(yōu)選人的形式提供該試劑。藥用載體綜合地描述于現(xiàn)有技術(shù)水平中；參見Row等人O006)，藥物賦形劑手 冊(Handbook of Pharmaceutical Excipients)，第五版，藥物出版社和美國藥劑師協(xié)會 (Pharmaceutical Press and American Pharmacists' Association) ；Bauer ^A (1999), Lehrbuch der pharmazeutischenTechnologie,Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft mbH Stuttgart. 一種特別優(yōu)選的制劑披露于WO 02/00M3，它通過引用是本公開內(nèi)容的 一個組成部分。這種制劑不含清蛋白并且hIL-2突變蛋白或其區(qū)段的穩(wěn)定性受到組氨 酸的影響。優(yōu)選地，成品藥具有處于以下濃度的以下組分hIL-2突變蛋白或其區(qū)段= 0. l-5mg/ml ；組氨酸=0. 08-1. 6wt. % ；NaCl = 0-0. 9wt. % ；蔗糖=I-IOwt. % ；甘氨酸= 0-0. 3wt. %，并且具有大約5到6. 5的pH值。根據(jù)一個具體的實施方案，該藥物組合物還含有免疫抑制劑。由于根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白的特殊潛力，該藥物組合物已經(jīng)可以用作用于 治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的單制劑(monopreparation)。這樣的單制劑含有根據(jù)本 發(fā)明的hIL-2突變蛋白作為僅有的活性物質(zhì)。在該上下文中，藥用載體、溶劑(緩沖劑、水等)、添加劑等不是活性物質(zhì)。該辦法具有的優(yōu)點是，通過包括標準免疫抑制劑進一步增加根據(jù)本發(fā)明的藥物的 治療指數(shù)。優(yōu)選地，免疫抑制劑選自由以下各項組成的組糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid)，包 括去氧皮質(zhì)麗(decortin)、prednisol 5^ (azathioprine) ；#3 A (cyclosporin Α)；嗎替麥考酚酯(mycophenolatemofetil)；他克莫司(tacrolimus)；抗T淋巴細胞球蛋 白，抗⑶3抗體，包括莫羅單抗(muromonab)；抗⑶25抗體，包括巴利昔單抗(basiliximab) 和達克珠單抗(daclizumab)；抗TNF-α抗體，包括英利昔單抗(infliximab)和阿達木單 抗(adalimumab)；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤(methotrexate)；環(huán)孢素(cyclosporin)；西羅莫司 (sirolimus)；依維莫司(everolimus)；芬戈莫德(fingolimod)；驍悉(CellCept)；麥考酚 酸鈉腸溶劑(myfortic)；以及環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)。該方法具有的優(yōu)點是，使用這樣的免疫抑制劑，所述免疫抑制劑具有可確證的自 身免疫性疾病治療活性并且在現(xiàn)有技術(shù)水平中可充分利用。此外，優(yōu)選的是，如果自身免疫性疾病是選自由以下各種組成的組1型糖尿病 (type I diabetes mellitus)、類風濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis)、多發(fā)性硬化癥 (multiple sclerosis)、慢性胃炎(chronic gastritis)、克羅恩病(Crohn，s disease)、 巴塞多病(Basedow disease)、另Ij 赫捷列夫病(Bechterew disease)、銀屑病(psoriasis)、 SSElil^iJ (myasthenia gravis) >(autoimmune hepatitis) > APECED>^ 應(yīng)性肉芽腫血管炎(Chrug-Mrauss syndrome)、潰蕩性結(jié)腸炎(ulcerative colitis)、 腎小球腎炎(glomerulon印hritis)、吉蘭-巴雷綜合征(Guillain_Barr6syndrome)、橋 本甲狀腺炎(Hashimoto thyroiditis)、硬化萎縮性苔蘚(lichen sclerosus)、系統(tǒng)性紅 斑狼疫(systemic lupus erythematodes)、PANDAS、風濕熱(rheumatic fever)、結(jié)節(jié)病 (sarcoidosis)、舍格倫綜合征(SjSrgren syndrome)、僵人綜合癥(Stiff-Man syndrome)、 硬皮病(scleroderma)、韋格納肉芽月中病(Wegener's granulomatosis)、白斑(vitiligo) > 自身;^iSt生(autoimmune enteropathy)、月市出in腎(Goodpasturesyndrome)、 皮肌炎(dermatomyositis)、多發(fā)性肌炎(polymyositis)、自身免疫性過敏癥(autoimmune allergy)、哮喘(asthma)以及器官移植之后的自身免疫反應(yīng)。該方法具有的優(yōu)點是，提供了一種可以用于治療和/或預(yù)防最重要的自身免疫性 疾病的藥物。本發(fā)明的另一個主題涉及一種用于治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的藥物組合 物，該藥物組合物含有根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白或其片段。關(guān)于根據(jù)本發(fā)明的用途所述的特性和優(yōu)點和定義同樣地應(yīng)用于根據(jù)本發(fā)明的藥 物組合物。本發(fā)明的另一個主題涉及用于在生物體中形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的試劑，該試劑 含有根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白或其片段。根據(jù)本發(fā)明的用途的優(yōu)點和特性和定義同樣地應(yīng)用于根據(jù)本發(fā)明的試劑。本發(fā)明的另外的主題是用于在生物體中治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病和在生 物體中形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的方法，所述方法分別包括以下步驟(a)提供人白細胞介 素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其片段，(b)將該hIL-2突變蛋白或其區(qū)段施用于生物體，并且(c)如果有必要的話，重復步驟(a)和(b)，其中該hIL-2突變蛋白或其區(qū)段是 根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白或其區(qū)段。該生物體優(yōu)選是哺乳動物，更優(yōu)選人生物體。關(guān)于根據(jù)本發(fā)明的用途所述的特性和優(yōu)點和定義同樣地應(yīng)用于根據(jù)本發(fā)明的用 于在生物體中治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病和在生物體中形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的上述 方法。本發(fā)明的另一個主題涉及用于在體外形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的方法，該方法包括 以下步驟(a)提供人白細胞介素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其片段，(b)將該 hIL-2突變蛋白或其片段與外周單核血細胞(PBMCs)接觸，并且(c)如果有必要的話，重復 步驟(a)和(b)，其中該hIL-2突變蛋白或其片段是根據(jù)本發(fā)明的hIL-2突變蛋白或其片 段。hIL-2或其片段與PBMCs的接觸可以發(fā)生于任何合適的用于培養(yǎng)PBMCs的培養(yǎng)基中。關(guān)于根據(jù)本發(fā)明的用途所述的特性和優(yōu)點和定義同樣地應(yīng)用于根據(jù)本發(fā)明的用 于在體外形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的上述方法。本發(fā)明的另一個主題涉及用于在生物體中治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的方 法，該方法包括以下步驟(a)提供人白細胞介素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其片 段，(b)將該hIL-2突變蛋白或其片段與來自第一生物體的外周單核血細胞(PBMCs)接觸， (c)將該hIL-2突變蛋白或其片段與PBMCs —起溫育以獲得細胞群，該細胞群包括調(diào)節(jié)T細 胞(TKeg)，并且(d)將該細胞群引入第二生物體中，其中該hIL-2突變蛋白或其片段是根據(jù) 本發(fā)明的hIL-2突變蛋白或其片段。該第一生物體和該第二生物體優(yōu)選具有相同的血型，特別優(yōu)選的是如果該第一生 物體和第二生物體是相同的生物體或個體。在此有利的是，在引入或再灌輸該細胞群中，沒有出現(xiàn)所不希望的對抗細胞的免 疫反應(yīng)并且該方法因此具有特別低的副反應(yīng)。關(guān)于根據(jù)本發(fā)明的用途所述的特性和優(yōu)點和定義同樣地應(yīng)用于根據(jù)本發(fā)明的用 于在生物體中治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的上述方法。不言而喻，在不偏離本發(fā)明的范圍下，上述的以及以下仍然有待解釋的那些特征 不僅可用在所述的特定組合，而且還可用于其它組合或單獨地使用。以下，基于實例更詳細地對本發(fā)明進行了說明，這些實例完全具有示范的性質(zhì)而 不限制本發(fā)明的范圍。在這些中，提及了附圖，代表以下

圖1顯示了在健康受試者中與阿地白介素(proleukin)相比處于相等的或更低的 劑量的hIL-2-N88R誘導了調(diào)節(jié)性⑶4+⑶25+FOXp3+T細胞的更大的增加；圖2顯示了在健康受試者中與阿地白介素相比處于相等的或更低的劑量的 hIL-2-N88R誘導了調(diào)節(jié)性⑶4+CD25_Foxp3+T細胞的更大的增加；圖3顯示了在黑素瘤(melanoma)患者中與阿地白介素相比處于相等的或更低的 劑量的hIL-2-N88R誘導了調(diào)節(jié)性⑶4+⑶25+FOXp3+T細胞的更大的增加；圖4顯示了在黑素瘤患者中與阿地白介素相比處于相等的或更低的劑量的 hIL-2-N88R誘導了調(diào)節(jié)性⑶4+CD25_Foxp3+T細胞的更大的增加；
圖5顯示了在多發(fā)性硬化癥患者中與阿地白介素相比處于相等的或更低的劑量 的hIL-2-N88R誘導了調(diào)節(jié)性⑶4+⑶25+FOXp3+T細胞的更大的增加；圖6顯示了在多發(fā)性硬化癥患者中與阿地白介素相比處于相等的或更低的劑量 的hIL-2-N88R誘導了調(diào)節(jié)性⑶4+⑶25_Foxp3+T細胞的更大的增加；圖7顯示了在多發(fā)性硬化癥患者中與阿地白介素相比處于相等的或更高的劑量 的hIL-2-N88R誘導了細胞毒素CFSElow/tD3+ra8+ra45R0+T細胞的更小的增加；圖8顯示了在健康受試者中與阿地白介素相比處于相等的或更高的劑量的 hIL-2-N88R誘導了細胞毒素CFSElow/CD3+CD8+CD45R0+T細胞的更小的增加；圖9顯示了在小鼠I型糖尿病(type I diabetes)模型中hIL_2_N88R與hIL_2野 生型相比導致了⑶4+細胞中的R)xP3+細胞的更高百分比的增加(A)。此外，這些⑶4+FoxP3+ 細胞展示出CD25的更高的表達(B)。圖10顯示了在小鼠I型糖尿病模型中，與hIL-2野生型相比，hIL_2_N88R防止糖 尿病的發(fā)展。實施方案1.材料和方法1. 1從全血中分離PBMCs用于體外來自健康受試者、黑素瘤患者或MS患者的外周單核血細胞(PBMCs)是通過淋巴 細胞分離培養(yǎng)基(Histopaque，Sigma Aldrich)從血液中分離的。為此，將來自相同受試 者或患者的兩管血液(7或IOml)轉(zhuǎn)移到無菌的50ml管中并且用RPMI 1640 (InVitrogen， #14190-69)補到30ml。然后，將30ml稀釋的血分層到15ml密度梯度溶液(密度=1.077 ； Histopaque, Sigma Aldrich, #10771)上。以400g在20°C無制動離心40分鐘后，收獲兩個“白細胞環(huán)”并且將其轉(zhuǎn)移到無 菌的50ml管中并且用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS ；InVitrogen#14190-169)洗滌兩次。在污染了 紅細胞的情形中，進行RBC ( “紅細胞”)溶解；將2ml的RBC溶解溶液加入到細胞沉淀上并 且在室溫伴隨著溫和混合溫育2分鐘，隨后是使用大量完全培養(yǎng)基(具有10%胎牛血清的 RPMI1640)的洗滌過程。活的白細胞的數(shù)目是通過使用臺盼藍(InVitrogen # 15250-061)和血細胞計數(shù) 器(FisherBioblock A2759B)進行排斥染色(exclusion staining)來確定的。1. 2 CFSE 標記計數(shù)之后，將細胞在PBS中洗滌兩次并且以IxlO6細胞/ml的濃度再懸浮在PBS 中。以0. 5μ M的最終濃度加入CFSE(InVitrogen#Cl 157)。在37°C在黑暗中溫育10分鐘 后，在4°C將CFSE標記的細胞用新鮮的完全培養(yǎng)基洗滌三次并且以IxlO6細胞/ml的濃度 再懸浮在完全培養(yǎng)基中用于涂布。1. 3 體外刺激 PBMCs將PBMCs保持未刺激或用hIL-2野生型(阿地白介素)或hIL_2_N88R (BAY 50-4798 ；批次#PR312C008)在存在或不存在合成肽庫下進行刺激，這些合成肽來自黑素瘤 特異性蛋白gplOO、TRP-2、MART-I和酪氨酸酶或來自對于多發(fā)性硬化癥(MS)特異的蛋白 M0G,每個肽以最終濃度2. 5 μ M(黑素瘤肽)或30 μ g/ml (MS肽)被加入。將刺激劑和肽在以下23種條件下加入
權(quán)利要求
1.人白細胞介素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其片段用于制備用于治療和/或 預(yù)防自身免疫性疾病的藥物的用途，所述突變蛋白或其片段是根據(jù)該hIL-2野生型來編號 的并且在位置20、88或126中至少一個位置處具有氨基酸替換。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于通過在位置88處的替換，天冬酰胺被換成 精氨酸(hIL-2-N88R)、或換成甘氨酸(hIL_2_N88G)、或換成異亮氨酸(hIL_2_N88I)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于通過在位置20處的替換，天冬氨酸被 換成組氨酸(hIL-2-D20H)、或換成異亮氨酸(hIL-2_D20H)、或換成酪氨酸(hIL_2_D20Y)。
4.根據(jù)以上權(quán)利要求中任一項所述的用途，其特征在于通過在位置1 處的替換，谷 氨酰胺被換成亮氨酸(hIL-2-QU6L)。
5.根據(jù)以上權(quán)利要求之一所述的用途，其特征在于，所述hIL-2突變蛋白或其片段在 除了位置20、88或1 處之外的任何位置處具有至少一個另外的氨基酸替換，從而使由此 被另外替換的hIL-2突變蛋白或其由此被另外替換的區(qū)段具有與這樣的hIL-2突變蛋白或 其區(qū)段的氨基酸序列具有至少80 %、優(yōu)選85 %、更優(yōu)選90 %，更優(yōu)選95 %，最優(yōu)選99 %同 一性的氨基酸序列，所述這樣的hIL-2突變蛋白或其區(qū)段與hIL-2野生型相比，除了在位置 20,88或126中的至少一處之外，沒有被另外替換。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，在除了位置20、88或1 之外的至少任何 一個位置處的另外的替換是保守性氨基酸替換。
7.根據(jù)以上權(quán)利要求中任一項所述的用途，其特征在于，所述試劑此外還含有免疫抑 制劑。
8.根據(jù)以上權(quán)利要求中任一項所述的用途，其特征在于，所述免疫抑制劑選自由下列 各項組成的組糖皮質(zhì)激素，包括去氧皮質(zhì)酮、prednisol ；硫唑嘌呤；環(huán)孢素A ；嗎替麥考酚 酯；他克莫司；抗T淋巴細胞球蛋白，抗⑶3抗體，包括莫羅單抗；抗⑶25抗體，包括巴利昔 單抗和達克珠單抗；抗TNF-α抗體，包括英利昔單抗和阿達木單抗；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤； 環(huán)孢素；西羅莫司；依維莫司；芬戈莫德；驍悉；麥考酚酸鈉腸溶劑；以及環(huán)磷酰胺。
9.根據(jù)以上權(quán)利要求中任一項所述的用途，其特征在于，所述自身免疫性疾病選自由 下列各項組成的組1型糖尿病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、慢性胃炎、克羅恩病、巴 塞多病、別赫捷列夫病、銀屑病、重癥肌無力、自身免疫肝炎、APECED、變應(yīng)性肉芽腫血管炎、 潰瘍性結(jié)腸炎、腎小球腎炎、吉蘭-巴雷綜合征、橋本甲狀腺炎、硬化萎縮性苔蘚、系統(tǒng)性紅 斑狼瘡、PANDAS、風濕熱、結(jié)節(jié)病、舍格倫綜合征、僵人綜合癥、硬皮病、韋格納肉芽腫病、白 斑、自身免疫性腸病、肺出血腎炎綜合征、皮肌炎、多發(fā)性肌炎(polymyositis)、自身免疫性 過敏癥、哮喘以及器官移植之后的自身免疫反應(yīng)。
10.根據(jù)以上權(quán)利要求中任一項所述的用途，其特征在于，所述試劑含有藥用載體。
11.用于治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物 含有根據(jù)權(quán)利要求ι至10之一所述的用途的hIL-2突變蛋白或其片段。
12.人白細胞介素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其區(qū)段用于制備用于在生物體 中形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的試劑的用途，所述突變蛋白或其區(qū)段是根據(jù)該hIL-2野生型來 編號的并且在位置20、88或126中至少一個位置處具有氨基酸替換。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于通過在位置88處的替換，天冬酰胺被換 成精氨酸(hIL-2-N88R)、或換成甘氨酸(hIL_2_N88G)、或換成異亮氨酸(hIL_2_N88I)。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的用途，其特征在于通過在位置20處的替換，天 冬氨酸被換成組氨酸(hIL-2-D20H)、或換成異亮氨酸(hIL-2-D20H)、或換成酪氨酸 (hIL-2-D20Y)。
15.根據(jù)權(quán)利要求12至14之一所述的用途，其特征在于通過在位置1 處的替換，谷 氨酰胺被換成亮氨酸(hIL-2-QU6L)。
16.根據(jù)權(quán)利要求12至15之一所述的用途，其特征在于，所述hIL-2突變蛋白或其片 段在除了位置20、88或1 處之外的任何位置處具有至少一個另外的氨基酸替換，從而使 由此被另外替換的hIL-2突變蛋白或其由此被另外替換的區(qū)段具有與這樣的hIL-2突變蛋 白或其區(qū)段的氨基酸序列具有至少80 %、優(yōu)選85 %、更優(yōu)選90 %，更優(yōu)選95 %，最優(yōu)選99 % 同一性的氨基酸序列，所述這樣的hIL-2突變蛋白或其區(qū)段與hIL-2野生型相比，除了在位 置20、88或1 處中的至少一處之外，沒有被另外替換。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其特征在于，在除了位置20、88或1 之外的至少任 何一個位置處的另外的替換是保守性氨基酸替換。
18.根據(jù)權(quán)利要求12至17之一所述的用途，其特征在于，所述試劑是藥物組合物并且 含有藥用載體。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的用途，其特征在于，所述藥物組合物此外還含有免疫抑制劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的用途，其特征在于，所述免疫抑制劑選自由下列各項組成 的組糖皮質(zhì)激素，包括去氧皮質(zhì)酮、prednisol ；硫唑嘌呤；環(huán)孢素A ；嗎替麥考酚酯；他克 莫司；抗T淋巴細胞球蛋白，抗⑶3抗體，包括莫羅單抗；抗⑶25抗體，包括巴利昔單抗和達 克珠單抗；抗TNF-α抗體，包括英利昔單抗和阿達木單抗；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；環(huán)孢素； 西羅莫司；依維莫司；芬戈莫德；驍悉；麥考酚酸鈉腸溶劑；以及環(huán)磷酰胺。
21.用于在生物體中形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的試劑，其特征在于所述試劑含有根據(jù)權(quán)利 要求12至20之一所述的用途的hIL-2突變蛋白或其片段。
22.用于在生物體中治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的方法，該方法包括以下步驟(a)提供人白細胞介素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其片段，(b)將該hIL-2突變蛋白或其片段施用于生物體，并且(c)如果有必要的話，重復步驟(a)和(b)，其特征在于，所述hIL-2突變蛋白或其片段是根據(jù)權(quán)利要求1至10之一所述的用途的 hIL-2突變蛋白或其區(qū)段。
23.用于在生物體中形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的方法，該方法包括以下步驟(a)提供人白細胞介素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其片段，(b)將該hIL-2突變蛋白或其片段施用于生物體，并且(c)如果有必要的話，重復步驟(a)和(b)，其特征在于，所述hIL-2突變蛋白或其片段是根據(jù)權(quán)利要求12至20之一所述的用途 的hIL-2突變蛋白或其片段。
24.用于在體外形成調(diào)節(jié)T細胞(Tlteg)的方法，該方法包括以下步驟(a)提供人白細胞介素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其片段，(b)將該hIL-2突變蛋白或其片段與外周單核血細胞(PBMCs)接觸，并且(c)如果有必要的話，重復步驟(a)和(b)，其特征在于，所述hIL-2突變蛋白或其片段是根據(jù)權(quán)利要求12至20之一所述的用途 的hIL-2突變蛋白或其區(qū)段。
25.用于在生物體中治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的方法，該方法包括以下步驟(a)提供人白細胞介素-2的突變蛋白(hIL-2突變蛋白)或其片段，(b)將該hIL-2突變蛋白或其片段與來自第一生物體的外周單核血細胞(PBMCs)接觸，(c)將該hIL-2突變蛋白或其片段與PBMCs—起溫育以獲得細胞群，該細胞群包括調(diào)節(jié) T細胞(Tlteg)，并且(d)將該細胞群引入第二生物體中，其特征在于，所述hIL-2突變蛋白或其片段是根據(jù)權(quán)利要求1至10之一所述的用途的 hIL-2突變蛋白或其片段。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于，所述第一生物體和所述第二生物體是 相同的生物體。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防自身免疫性疾病的試劑、用于在生物體中形成調(diào)節(jié)T細胞(TReg)的試劑以及其中使用根據(jù)本發(fā)明所述的試劑的不同方法。
文檔編號A61P37/06GK102088996SQ200980126676
公開日2011年6月8日 申請日期2009年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月8日
發(fā)明者丹尼拉·保爾森, 多羅西·布雷, 尼娜·布呂納 申請人:艾庫里斯有限及兩合公司