專利名稱：吡咯并氮雜卓酮類化合物及其在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類治療腫瘤的藥物，具體涉及一類吡咯并氮雜卓酮類化合物及其在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
癌癥是當(dāng)前危害人類健康和正常生活的最主要的疾病之一。由于癌癥發(fā)生機(jī)制的復(fù)雜性和特殊性，因此，尋找高效低毒的抗癌藥物是目前的一個研究熱點。
Alisin(6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮)類化合物是一類含吡咯環(huán)的生物堿，同時也是多種海洋生物活性物質(zhì)的代謝中間體。對Aldisin的最早報道是在1985年，Schmitz，F(xiàn).J.等人從關(guān)島海綿Hymeniacidon aldis de Laubenfels中分離得到化合物1a和1b，并分別命名為Aldisin和2-bromoaldisin(Schmita，F(xiàn).J.，et al.J.Nat.Prod，1985，48，47-53)。之后，多種Aldisin類化合物又相繼從多種海綿中分離得到。
為了研究Aldisin類化合物的生物活性，海洋天然產(chǎn)物研究人員對其進(jìn)行了細(xì)胞毒性，抗腫瘤等多種生物活性實驗。Inaba，K.等人(Inaba，K.，et al.；J.Nat.Prod.1998，61，693-695)發(fā)現(xiàn)化合物3c和3d對兩種激酶c-erbB-2和cyclin-dependent kinase 4(CDK4)有一定的抑制作用。Eder，C.等人(Eder，C.，et al.J.Nat.Prod.1999，62，184-187)也對10余種Aldisin類化合物進(jìn)行了細(xì)胞毒性實驗，其中2a和2b對MONOMAC-6細(xì)胞顯示出極大的毒性，其IC50值分別為2.4和0.2μg/ml。Meijer，L.等人(Meijer，L.，et al.Chem.Bio.2000，7，51-63)對2b的激酶抑制活性做了更深入的研究，活性實驗結(jié)果表明2b對多種CDK都有一定的抑制活性，特別是對CDK1/cyclin B，CDK2/cyclin A，CDK2/cyclin E，CDK5/p25，GSK-3β，CK1等六種激酶顯示出很強(qiáng)的抑制活性，其IC50值分別為22，70，40，28，10，35nM，同時hymenialdisine的兩種立體構(gòu)型2b和3b對細(xì)胞質(zhì)致活酶Ref/MEK1/MAPK也有強(qiáng)烈的抑制活性，IC50值分別為6和3nM(Tasdemir，D.，et al.J.Med Chem.2002，45，529-532)。
由于該類化合物都是從海綿中提取的，量少，穩(wěn)定性較差并且細(xì)胞毒性較大，而對于1-取代Aldisin衍生物作為抗癌藥物未見有報道，因此，開發(fā)這類化合物作為抗腫瘤藥物具有重要的應(yīng)用前景。
本發(fā)明是在國家863基金資助下，為設(shè)計合成一類新型的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的抗腫瘤藥物所進(jìn)行的研究。

1aR＝H，Aldisin 2aR1＝R2＝H，( Z)-debromohymenialdisine 1bR＝Br，2-bromoaldisin2bR1＝Br，R2＝H，(Z)-hymenialdisine 2cR1＝R2＝Br，(Z)-3-bromohymenialdisine

3aR1＝R2＝H，(E)-debromohymenialdisine 3bR1＝Br，R2＝H，(E)-hymenialdisine 4aR＝H，(Z)-debromoaxinohydantoin 3cR1＝R2＝Br，(E)-3-bromohymenialdisine4bR＝Br，(Z)-axinohydantoin 3dR1＝H，R2＝Br，Spongiacidin B

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供了一類對腫瘤細(xì)胞具有抑制作用的，具有式(I)結(jié)構(gòu)的吡咯并氮雜卓酮類化合物及其藥用鹽。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為 如式(I)表示的吡咯并氮雜卓酮類化合物或其藥用鹽，
(I) 其中 n代表0或1；R1代表H，C1-C6烷基，或芐基；R2代表OH或O，當(dāng)R2代表OH時候，O與相應(yīng)的C單鍵連接，當(dāng)R2代表O時候，其與相應(yīng)的C雙鍵連接；R3代表H，三氟甲基，C1-C6烷基，或OR4，R4代表H，C1-C6烷基。
優(yōu)選為所述吡咯并氮雜卓酮類化合物或其藥用鹽選自以下化合物 1-(聯(lián)苯-4-取代甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-(聯(lián)苯-4-取代甲基)-4-羥基-4，5，6，7-四氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-8(1H)-酮 1-(聯(lián)苯-4-取代)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-((4’-甲基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-((4’-羥基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-((4’-(三氟甲基)聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-((4’-甲氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-((4’-乙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-((4’-丙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-((4’-異丙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 1-((4’-甲氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-7-甲基-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 7-芐基-1-((4’-羥基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮。
本發(fā)明的另一目的在于提供該類化合物或者其藥用鹽在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物能夠以可藥用鹽的形式使用，尤其是酸的加成鹽，采用可藥用的游離酸來制備，如氫氯酸，硫酸，檸檬酸，酒石酸等。
一種治療腫瘤的藥物組合物，其含有有效量的作為活性成份的上述的吡咯并氮雜卓酮類化合物或者其藥用鹽和可藥用的載體。
本發(fā)明的化合物的制備可通過以下基本方法和原則制備，其所用的原料都可從市場上購買，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明制備到本發(fā)明所述的任一種化合物。
步驟一根據(jù)化學(xué)方程式
以乙腈做溶劑，三乙胺做堿，三氯乙酰吡咯與β-氨基丙酸乙酯鹽酸鹽在室溫下發(fā)生偶合反應(yīng)，生產(chǎn)化合物2；然后化合物2在2N NaOH溶液中室溫水解得到化合物3；在加熱條件下，化合物3在PPA和P2O5作用下關(guān)環(huán)得到化合物4. 步驟二根據(jù)化學(xué)方程式
以乙腈做溶劑，碳酸鉀做堿，在回流的條件下，化合物4與4-溴甲基聯(lián)苯偶合得到化合物5；化合物5在硼氫化鈉還原下得到化合物6；而以二氯甲烷做溶劑，醋酸銅做催化劑，化合物4與聯(lián)苯硼酸在室溫條件可以偶聯(lián)得到化合物7。
步驟三根據(jù)化學(xué)方程式
化合物8和9在Pd(OAc)2催化下偶聯(lián)得到化合物10；隨后，NBS溴代得到化合物11；在回流條件下，化合物11和4偶聯(lián)得到化合物12。
步驟四根據(jù)化學(xué)方程式
化合物4和4-溴芐溴反應(yīng)得到化合物13；化合物13在氫化鈉做堿的條件下與溴代烷或碘代烷反應(yīng)得到化合物14；化合物14在Pd(PPh3)4催化下與苯硼酸偶聯(lián)得到化合物15。
本發(fā)明所提供的制備方法具有簡單，易操作，成本低等優(yōu)點。
本發(fā)明所述的吡咯并氮雜卓酮類化合物及其藥用鹽對多種腫瘤細(xì)胞具有一定的抑制作用，可用于制備治療腫瘤的藥物。為臨床治療腫瘤提供了更多的藥物選擇。

具體實施例方式 下列實施例進(jìn)一步解釋了本發(fā)明的化合物及其中間體的合成方法，但并不限制本發(fā)明的范圍。
一、儀器與藥品 NMR由美國VARIAN公司生產(chǎn)的Mercury-Plus 300M儀器測定，溶劑峰做內(nèi)標(biāo)；質(zhì)譜由DSQ臺式質(zhì)譜儀(EI源)和日本島津公司生產(chǎn)的LCMS-2010A(ESI源)測定；化學(xué)試劑購自廣州東征，粵申化學(xué)品公司，Alfar-Aser公司，百靈威化學(xué)，阿拉丁化學(xué)試劑公司；柱層析用硅膠購自青島海洋化工廠。
實施例一6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮的合成(化合物4) 在含有8.5g(40mmol)化合物1的100mL無水乙腈溶液中，加入7.38gβ-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(48mmol)和7.2mL(52mmol)三乙胺。混合溶液在室溫下攪拌12小時左右，至原料轉(zhuǎn)化完全，停止攪拌，減壓轉(zhuǎn)旋蒸發(fā)除掉溶劑，再用乙酸乙酯溶解，用水，1N HCl溶液，飽和食鹽水分別洗滌，有機(jī)相用無水Na2SO4干燥，抽濾除去Na2SO4，減壓旋蒸除去溶劑，得化合物2(7.70g，產(chǎn)率92％)。
往化合物2(7.7g，36.7mmol)中加入37mL 2N的NaOH溶液(約73.4mmol)，混合液在室溫下攪拌15小時，至反應(yīng)物轉(zhuǎn)化完全，冰浴下用6N的HCl溶液(約8mL)將混合液調(diào)至pH＝3，析出大量灰白色固體，抽濾，洗滌，濾餅真空40℃下烘干，稱量，得化合物3(6.28g，產(chǎn)率94％)。
9.80g P2O5與103.2g PPA在120℃條件下攪拌50分鐘左右，至溶液澄清。將溫度降至105℃，加入化合物3(6.28g，34.6mmol)，攪拌1個小時左右，把混合液傾倒進(jìn)碎冰中(約200mL)，攪拌1個小時，抽濾，固體烘干，得2.319g褐色固體。濾液用用乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌兩次，用無水Na2SO4干燥，抽濾除去Na2SO4，減壓旋蒸除去乙酸乙酯，得淡黃色固體1.243g。合并固體得化合物4(3.56g，產(chǎn)率65％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.14(br s，1H)，8.31(m，1H)，6.96(m，1H)，6.52(m，1H)，3.34(m，2H)，2.68(m，2H)；EI-MSm/z＝164[M]+. 實施例二1-(聯(lián)苯-4-取代甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮(化合物5) 將化合物4(1mmol，164mg)溶于20ml無水乙腈中，在向其中加入4-溴甲基聯(lián)苯(1.5mmol，369mg)和無水碳酸鉀(2mmol，276mg)?；亓鞣磻?yīng)12h至原料點消失。減壓蒸發(fā)溶劑，加入乙酸乙酯和水，分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯抽提2次，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌。干燥，濃縮，粗產(chǎn)品柱層析(二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得化合物5(317mg，產(chǎn)率96％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.53-7.57(m，4H)，7.34-7.45(m，3H)，7.22(d，J＝8.1Hz，2H)，6.96(t，J＝5.4Hz，1H)，6.90(d，J＝3.0Hz，1H)，6.79(d，J＝2.7Hz，1H)，5.67(s，2H)，3.50(q，J＝5.7Hz，2H)，2.83(t，J＝5.4Hz，2H). EI-MSm/z＝330[M]+. 實施例三1-(聯(lián)苯-4-取代甲基)-4-羥基-4，5，6，7-四氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-8(1H)-酮(化合物6) 將化合物5(165mg，0.5mmol)溶于5ml甲醇，向其中加入NaBH4(38mg，1.0mmol)。反應(yīng)液室溫攪拌至原料點消失。減壓蒸發(fā)溶劑，加入二氯甲烷和水，分出有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌。干燥，濃縮，粗產(chǎn)品柱層析(氯仿∶甲醇＝30∶1)，得化合物6(110mg，產(chǎn)率66％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.50-7.56(m，4H)，7.39-7.44(m，2H)，7.30-7.35(m，1H)，7.18(d，J＝8.4Hz，2H)，6.90(d，J＝2.7Hz，1H)，6.32(d，J＝2.7Hz，1H)，6.01-6.04(m，1H)，5.64(q，J＝15.3Hz，2H)，5.02(t，J＝5.1Hz，1H)，3.38-3.49(m，1H)，3.16-3.22(m，1H)，2.12-2.22(m，2H).EI-MSm/z＝332[M]+. 實施例四1-(聯(lián)苯-4-取代)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮(化合物7) 在帶有CaCl2干燥管的100mL圓底燒瓶中依次加入化合物4(1mmol)、聯(lián)苯硼酸(2.0mmol)、一水乙酸銅(1.5mmol)，50mL無水二氯甲烷和吡啶(2mmol)，在室溫下攪拌5小時。停止反應(yīng)，減壓蒸出二氯甲烷，剩余物中加入水和乙酸乙酯，過濾除去不溶物，水相用乙酸乙酯萃取2次，合并有機(jī)相。用飽和食鹽水洗滌有機(jī)相2～3次，無水Na2SO4干燥，抽濾，濃縮，粗產(chǎn)品柱層析(二氯甲烷∶乙酸乙酯＝3∶1)，得到白色固體化合物7(268mg，產(chǎn)率85％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.66～7.36(m，9H)，7.01(d，J＝2.7Hz，1H)，6.87(d，J＝2.7Hz，1H)，6.76(d，J＝5.4Hz，1H)，3.60(q，J＝5.7Hz，2H)，2.84(t，J＝5.1Hz，2H)；EI-MSm/z＝316[M]+. 實施例五1-((4’-甲基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 在10ml微波反應(yīng)管中加入化合物14(0.4mmol)，4-甲基苯硼酸(0.3mmol)，2N Na2CO3(0.4ml)，甲苯(2ml)，和乙醇(0.5ml)，然后在氮氣保護(hù)下加入Pd(PPh3)4(5％mol)。加入攪拌磁子后蓋上密封蓋，置于單模微波反應(yīng)器內(nèi)。130℃下反應(yīng)30分鐘，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，倒入水中，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用食鹽水洗，干燥，濃縮，粗產(chǎn)品柱層析分離(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得白色固體70mg，產(chǎn)率51％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.43-7.56(m，5H)，7.19-7.25(m，3H)，6.91(d，J＝2.7Hz，1H)，6.79(d，J＝2.7Hz，1H)，6.60(m，1H)，5.56(s，2H)，3.52-3.53(m，2H)，2.83-2.86(m，2H)，2.40(s，3H)；EI-MSm/z＝344[M]+. 實施例六1-((4’-羥基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 合成方法與實施例五相同，不同之處在于用4-羥基苯硼酸代替4-甲基苯硼酸。提純后得58mg白色固體，產(chǎn)率42％。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.35(t，J＝6.0Hz，1H)，7.41-7.50(m，4H)，7.22(d，J＝2.7Hz，1H)，7.15(d，J＝8.4Hz，2H)，6.79(d，J＝8.7Hz，2H)，6.54(d，J＝2.7Hz，1H)，5.62(s，2H)，3.28(q，J＝5.7Hz，2H)，2.64-2.67(m，2H)；EI-MSm/z＝346[M]+. 實施例七1-((4’-(三氟甲基)聯(lián)苯基-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 將4-溴甲苯(1mmol)，4-三氟甲基苯硼酸(1.5mmol)溶于水和丙酮的混合液6.5ml(3.5/3，v/v)，然后向其中加入碳酸鈉(2mmol)和Pd(OAc)2(0.5mol％)。溶液室溫攪拌4h，加水和乙酸乙酯，抽濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌，合并有機(jī)相，鹽水洗，干燥，濃縮，柱層析(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶10)，得4-甲基-4’-(三氟甲基)聯(lián)苯168mg，產(chǎn)率71％。
在10ml微波反應(yīng)管中加入4-甲基-4’-(三氟甲基)聯(lián)苯(0.6mmol)，NBS(0.63mmol)，BPO(0.06mmol)和CCl4(2ml)，加入攪拌磁子后蓋上密封蓋，置于單模微波反應(yīng)器內(nèi)。80℃下反應(yīng)20分鐘，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，反應(yīng)液抽濾，濾液濃縮，得4-(溴甲基)-4’-(三氟甲基)聯(lián)苯，不需純化，直接投入下步反應(yīng)。
在一50ml的圓底燒瓶中加入化合物4(0.5mmol)，K2CO3(1.0mmol)，上步粗產(chǎn)物和10ml無水乙腈，加熱回流10h，停止反應(yīng)，濃縮。向剩余物中加入水和乙酸乙酯，水相用乙酸乙酯萃取兩次，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥，干燥完后蒸去溶劑，粗產(chǎn)品柱層析分離(二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得白色固體(103mg，產(chǎn)率52％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.63-7.70(m，4H)，7.52-7.56(m，2H)，7.25(d，J＝8.1Hz，2H)，6.91(d，J＝3.0Hz，1H)，6.80(d，J＝3.0Hz，1H)，6.45(t，J＝5.7Hz，1H)，5.68(s，2H)，3.53(q，J＝5.7Hz，2H)，2.83-2.87(m，2H)；EI-MSm/z＝398[M]+. 實施例八1-((4’-甲氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 合成方法與實施例七相同，不同之處在于用4-甲氧基溴苯代替四溴甲苯，4-甲基苯硼酸代替4-三氟甲基苯硼酸。提純后得104mg白色固體，產(chǎn)率58％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.48-7.50(m，4H)，7.20(d，J＝8.1Hz，2H)，6.96(d，J＝8.7Hz，2H)，6.89(d，J＝3.0Hz，1H)，6.78(d，J＝2.7Hz，1H)，6.50-6.54(m，1H)，5.65(s，2H)，3.85(s，3H)，3.53(q，J＝6.0Hz，2H)，2.82-2.86(m，2H)；EI-MSm/z＝360[M]+. 實施例九1-((4’-乙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 合成方法與實施例七相同，不同之處在于用4-乙氧基溴苯代替四溴甲苯，4-甲基苯硼酸代替4-三氟甲基苯硼酸。提純后得112mg白色固體，產(chǎn)率60％。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ(ppm).7.46-7.51(m，4H)，7.20(d，J＝8.4Hz，2H)，6.94(d，J＝8.4Hz，2H)，6.90(d，J＝2.8Hz，1H)，6.78(d，J＝2.8Hz，1H)，6.19(brs，1H)，5.65(s，2H)，4.07(q，J＝7.2Hz，2H)，3.50-3.54(m，2H)，2.82-2.85(m，2H)，1.43(t，J＝7.2Hz，3H)；MS-EIm/z＝374[M]+. 實施例十1-((4’-丙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 合成方法與實施例七相同，不同之處在于用4-丙氧基溴苯代替四溴甲苯，4-甲基苯硼酸代替4-三氟甲基苯硼酸。提純后得103mg白色固體，產(chǎn)率53％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.46-7.51(m，4H)，7.17(d，J＝8.1Hz，2H)，6.95(d，J＝9.0Hz，2H)，6.89(d，J＝3.0Hz，1H)，6.78(d，J＝3.0Hz，1H)，6.47(t，J＝6.0Hz，1H)，5.65(s，2H)，3.96(t，J＝6.6Hz，2H)，3.52(q，J＝6.0Hz，2H)，2.82-2.86(m，2H)，1.78-1.90(m，2H)，1.07(t，J＝7.5Hz，3H)；EI-MSm/z＝388[M]+. 實施例十一1-((4’-異丙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 合成方法與實施例七相同，不同之處在于用4-異丙氧基溴苯代替四溴甲苯，4-甲基苯硼酸代替4-三氟甲基苯硼酸。提純后得109mg白色固體，產(chǎn)率56％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.45-7.51(m，4H)，7.19(d，J＝8.1Hz，2H)，6.94(d，J＝8.7Hz，2H)，6.89(d，J＝3.0Hz，1H)，6.77(d，J＝3.0Hz，1H)，6.48(t，J＝6.0Hz，1H)，5.65(s，2H)，4.55-4.63(m，1H)，3.52(q，J＝5.7Hz，2H)，2.82-2.86(m，2H)，1.37(d，J＝6.0Hz，6H)；EI-MSm/z＝388[M]+. 實施例十二1-((4’-甲氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-7-甲基-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 將1-((4’-甲氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮(0.2mmol)溶于1ml干燥的DMF中，冷卻下加入NaH(0.22mol)，在此溫度下攪拌30min，然后加入碘甲烷(0.3mmol)，升到室溫攪拌過夜。反應(yīng)液倒入水中，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相干燥，濃縮，粗產(chǎn)品柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得白色固體45mg，產(chǎn)率60％。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.50(dd，J＝6.6Hz，2.1Hz，4H)，7.20(d，J＝8.1Hz，2H)，6.96(dd，J＝6.6Hz，2.1Hz，2H)，6.84(d，J＝3.0Hz，1H)，6.68(d，J＝3.0Hz，1H)，5.61(s，2H)，3.86(s，3H)，3.69-3.73(m，2H)，3.20(s，3H)，2.80-2.84(m，2H)；MS-EIm/z＝374[M]+. 實施例十三7-芐基-1-((4’-羥基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮 將1-(4-溴芐基-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮(0.5mmol)溶于4ml干燥的DMF中，冷卻下加入NaH(0.6mol)，在此溫度下攪拌30min，然后加入溴芐(0.75mmol)，升到室溫攪拌過夜。反應(yīng)液倒入水中，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相干燥，濃縮，粗產(chǎn)品柱層析(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得白色固體102mg，產(chǎn)率54％。
在10ml微波反應(yīng)管中加入上步產(chǎn)品(0.2mmol)，4-羥基苯硼酸(0.3mmol)，2N Na2CO3(0.2ml)，甲苯(2ml)，和乙醇(0.5ml)，然后在氮氣保護(hù)下加入Pd(PPh3)4(5％mol)。加入攪拌磁子后蓋上密封蓋，置于單模微波反應(yīng)器內(nèi)。130℃下反應(yīng)30分鐘，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，倒入水中，乙酸乙酯萃取，有機(jī)相用食鹽水洗，干燥，濃縮，粗產(chǎn)品柱層析分離(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1)得白色固體39mg，產(chǎn)率45％。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.44-7.50(m，4H)，7.18-7.22(m，5H)，7.08-7.10(m，3H)，6.89-6.93(m，3H)，6.70(d，J＝2.8Hz，1H)，5.66(s，2H)，4.76(s，2H)，3.56(t，J＝4.8Hz，2H)，2.66-2.69(m，2H)；MS-EIm/z＝436[M]+. 實施例十四對人體結(jié)腸癌細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞和人胚胎成纖維細(xì)胞的抑制活性實驗 實驗方法72h MTT法(現(xiàn)有技術(shù)中檢測細(xì)胞存活和生長的常用方法，屬于已知技術(shù)) 測定了本發(fā)明的部分式(I)結(jié)構(gòu)中的吡咯并氮雜卓酮類化合物對人體結(jié)腸癌細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞和人胚胎成纖維細(xì)胞的抑制活性。IC50值為抑制率達(dá)到50％時的抑制劑濃度。結(jié)果如下表

其中HCT-116表示人體結(jié)腸癌細(xì)胞，MCF-7表示人體乳腺癌細(xì)胞，MRC-5表示人胚胎成纖維細(xì)胞，N表示沒有測試。
實施例十五對部分細(xì)胞系的抑制活性實驗 方法72h MTT法 抑制劑抑制劑與實施例十四表格中抑制劑編號對應(yīng)的結(jié)構(gòu)相同
其中MDA-MB-435代表人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞，CNE-1代表人鼻咽癌細(xì)胞(高分化)，CNE-2代表人鼻咽癌細(xì)胞(低分化)，Hep3B代表人肝癌細(xì)胞，HepG2代表人肝癌細(xì)胞，BT549代表人乳腺管癌細(xì)胞，HeLa代表人宮頸癌細(xì)胞，LN19和LN444都代表神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞。
實施例十六對小鼠肝癌H22移植瘤的生長抑制作用 動物KM中小鼠 藥物實施例十四的表格中編號2和7兩化合物。吐溫80助溶，蒸餾水配制成所需濃度2.5mg/ml，5mg/m，10mg/ml，每20g小鼠分別灌胃0.4ml。陽性對照藥環(huán)磷酰胺(CTX)，臨用前用生理鹽水配制成10mg/ml，每20g小鼠腹腔注射0.2ml。
實驗步驟用生理鹽水按1∶2稀釋H22腹水，每只小鼠腋下接種0.2ml腹水懸液。第二天稱重，隨機(jī)分組后給藥，實驗共設(shè)8組，除陰性對照組9只動物外，其余各組每組均為8只。實驗設(shè)陰性對照組，陽性對照組(CTX 100mg/kg)，腹腔注射一次)，化合物250mg/kg，100mg/kg，200mg/kg劑量組，化合物750mg/kg，100mg/kg，200mg/kg劑量組，均為灌胃給藥，共給藥9天。實驗11天稱重后處死動物，并剝?nèi)∧[瘤，拍照，稱瘤重。
試驗結(jié)果化合物2在100mg/kg劑量組對小鼠移植瘤H22生長有一定的抑制作用，化合物7抑制作用不明顯，具體數(shù)據(jù)見下表。

上述活性數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明的化合物對多種腫瘤細(xì)胞都具有一定的抑制作用，因此，該類化合物具有制備治療腫瘤藥物的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.下述式(I)表示的吡咯并氮雜卓酮類化合物或者其藥用鹽
其中n代表0或1；R1代表H，C1-C6烷基，或芐基；R2代表OH或O；R3代表H，三氟甲基，C1-C6烷基，或OR4，R4代表H，C1-C6烷基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的吡咯并氮雜卓酮類化合物或者其藥用鹽，其特征在于所述的吡咯并氮雜卓酮類化合物或者其藥用鹽選自以下化合物
1-(聯(lián)苯-4-取代甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-(聯(lián)苯-4-取代甲基)-4-羥基-4，5，6，7-四氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-8(1H)-酮、
1-(聯(lián)苯-4-取代)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-((4’-甲基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-((4’-羥基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-((4’-(三氟甲基)聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-((4’-甲氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-((4’-乙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-((4’-丙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-((4’-異丙氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
1-((4’-甲氧基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-7-甲基-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮、
7-芐基-1-((4’-羥基聯(lián)苯-4-取代)甲基)-6，7-二氫吡咯[2，3-c]氮雜卓-4，8(1H，5H)-二酮。
3.權(quán)利要求1所述的吡咯并氮雜卓酮類化合物或者其藥用鹽在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
4.一種治療腫瘤的藥物組合物，其含有有效量的作為活性成份的權(quán)利要求1所述的吡咯并氮雜卓酮類化合物或者其藥用鹽和藥用載體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種吡咯并氮雜卓酮類化合物及其在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用，旨在提供一類對腫瘤細(xì)胞具有抑制作用的，具有式(I)結(jié)構(gòu)的吡咯并氮雜卓酮類化合物及其藥用鹽。它具有式(I)表示的化合物其中n代表0或1；R1代表H，C1-C6烷基，或芐基；R2代表OH或O；R3代表H，三氟甲基，C1-C6烷基，或OR4，R4代表H，C1-C6烷基。
文檔編號A61P35/00GK101759699SQ200910261419
公開日2010年6月30日 申請日期2009年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月2日
發(fā)明者萬一千, 謝建偉, 朱新海, 王淑東, 袁潔, 陳曉光, 蘇麗, 孟飛, 汪晨霞, 黃漫娜 申請人:中山大學(xué)