專利名稱：：免疫調(diào)節(jié)肽的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)肽。在吞噬細胞如嗜中性白細胞以及單核細胞中表達的甲?；氖荏w家族(甲?；氖荏w(FPR)和類甲?；氖荏w1(FPRL1))，在宿主防御病原體感染中起重要作用(1，2)。已知該受體與百日咳毒素-敏感Gi蛋白偶聯(lián)(1，2)。FPR的激活誘導GPY亞基從Gai亞基上解離，并且13Y—亞基調(diào)節(jié)磷脂酶CI3或肌醇磷脂3-激酶的激活(1，2)。這些效應分子的激活誘導復雜的下游信號傳導，導致多種細胞響應，如趨化遷移、脫粒以及超氧化物的產(chǎn)生。相關技術描述大多數(shù)完全激動劑誘導許多復雜的細胞信號，引起最終的復雜的免疫反應。在這些免疫反應中，許多反應是宿主細胞清除入侵的病原體的適當功能所基本必需的，但是一些反應是免疫反應中不必要的副作用。在藥物發(fā)展領域，減少或消除候選藥物的副作用已經(jīng)成為研究的熱點。為實現(xiàn)這一目標，許多研究組試圖通過幾種方法開發(fā)出特定受體的選擇性免疫反應調(diào)節(jié)劑或選擇性拮抗劑(3，4)。從內(nèi)源或人工合成途徑，已經(jīng)識別出多種FPR激動劑(1，2)。包括細菌肽類(N-甲?；鵢甲硫氨?；鵢亮氨?；鵢苯丙氨酸(預LF))，HIV-包膜結構域(T20和T21)，以及宿主源性的激動劑(A皿exinl和AP42)(5-7)。此前，本發(fā)明的發(fā)明者報道了一種合成肽配體，Trp-Lys-Tyr-Met-Val-D-Met-NH2(在下文中，以〃WKYMVm〃表示)，可以剌激白細胞，如單核細胞和嗜中性白細胞(8-11)。Le等證實WKYMVm可以與甲酰基肽受體(FPR)和類甲?；氖荏w1(FPRL1)結合(12)。由于WKYMVm是一種對廣譜受體有高度親和力的短肽，因此它可以作為研究FPR-或FPRLl-介導的信號傳導的有用物質(zhì)。但是，對針對特定受體進形的選擇性免疫調(diào)節(jié)劑或選擇性拮抗劑，以及分子多樣性的篩選的研究，僅由小分子化合物組成，因此非常有限，所以還需要繼續(xù)識別新化合物。發(fā)明概述本發(fā)明的第一個目標是提供新穎免疫調(diào)節(jié)肽，其氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24;或衍生自肽的物質(zhì)，所述肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24。第二個目標是提供一種藥物組合物，包括氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽；或衍生自肽的物質(zhì)，所述肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24。第三個目標是提供一種來治療由白細胞數(shù)或活化狀態(tài)改變伴隨或引起的疾病(condition)的方法，所述方法包括給予所需治療的宿主施用治療有效量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDN0:24肽的物質(zhì)。第四個目標是提供一種增加宿主白細胞數(shù)量或增強白細胞的活化狀態(tài)的方法，這種方法包括給予需要更大量白細胞或更強的白細胞活化狀態(tài)的宿主以治療有效量的肽，該肽氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。第五個目標是為需要這樣治療的病人提供一種誘導白細胞中細胞外鈣增加的方法，這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。第六個目標是為需要這種治療的病人提供一種誘導人單核細胞或嗜中性白細胞中超氧化物產(chǎn)生的方法，這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。第七個目標是為需要這種治療的病人提供一種誘導人外周血單核細胞趨化遷移的方法，這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。第八個目標是為需要這種治療的病人提供一種誘導甲?；氖荏w表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中脫粒反應的方法，這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDN0:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。第九個目標是為需要這種治療的病人提供一種分別與WKYMVm競爭結合甲酰基肽受體表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞上甲?；氖荏w或類甲酰基肽受體1的肽的方法，這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。第十個目標是為需要這種治療的病人提供一種剌激甲?；氖荏w表達細胞或類甲酰基肽受體l表達細胞中細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶或甲?；?p印tiin)的方法，這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDN0:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。第十一個目標是為需要這樣治療的病人提供一種剌激甲酰基肽受體表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中Akt的方法，這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDN0:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。第十二個目標是提供一種分離的核苷酸，所述核苷酸編碼氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽。第十三個目標是提供一種包含分離核苷酸的載體，所述核苷酸編碼氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽。本發(fā)明其它的特點及優(yōu)點，結合下文描述以及附圖將可以明顯地看出，其中在附圖中類似的參考字符表示相同的或相似的部分。具體地，本發(fā)明公開了如下的具體實施方案1)—種包含氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽。2)項1的肽，其中所述肽激活白細胞，并且是分離的和基本上是純的形式。3)—種衍生自肽的物質(zhì)，所述肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24。4)項1的肽，其中所述肽具有至少一項下列性質(zhì)(a)由人單核細胞或嗜中性白細胞誘導超氧化物的產(chǎn)生；(b)由人外周血單核細胞或嗜中性白細胞誘導細胞內(nèi)鈣增加；(c)與甲?；氖荏w或類甲?；氖荏w1結合；(d)體外誘導人單核細胞或嗜中性白細胞的趨化遷移；(e)誘導甲?；氖荏w表達的細胞或類甲?；氖荏w1表達的細胞中的脫粒作用；(f)通過激活甲酰基肽受體或類甲?；氖荏w1剌激細胞外信號_調(diào)節(jié)蛋白激酶磷酸化；以及(g)通過激活甲?；氖荏w或類甲酰基肽受體1剌激Akt磷酸化。5)—種藥物組合物，包括氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽；或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。6)—種治療由改變白細胞數(shù)量或激活狀態(tài)伴隨或引起的疾病的方法，所述方法包括對需要這種治療的宿主施用治療有效量的肽，所述肽的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。7)項14所述的方法，其中疾病為細菌、支原體、酵母、真菌或病毒感染。8)項14所述的方法，其中疾病為炎癥。9)—種增加宿主中白細胞數(shù)或提升白細胞激活狀態(tài)的方法，包括向需要增加更大量白細胞數(shù)或更高白細胞激活狀態(tài)宿主施用治療有效量的肽，所述肽的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。10)—種誘導需要這種治療的病人的白細胞細胞外鈣增加方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。11)—種在需要這種治療的病人中由人單核細胞或嗜中性白細胞誘導超氧化物產(chǎn)生的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。12)—種在需要這種治療的病人中由人外周血單核細胞誘導趨化遷移的方法，所述這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDN0:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。13)—種為需要這種治療的病人提供誘導甲?；氖荏w表達細胞或類甲酰基肽受體1表達細胞中脫粒作用的方法，所述這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。14)—種為需要這種治療的病人提供與WKYMVm競爭結合甲酰基肽受體表達細胞中甲?；氖荏w的肽的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。15)—種為需要這種治療的病人提供與WKYMVm競爭結合類甲酰基肽受體1表達細胞中類甲?；氖荏w1的肽的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDN0:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。16)—種為需要這種治療的病人提供剌激甲酰基肽受體表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDN0:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。17)—種為需要這樣治療的病人提供剌激甲?；氖荏w表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中Akt的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。18)項所述6的方法，其中所述宿主受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。19)項9所述的方法，其中所述宿主受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。20)項10所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。21)項11所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球性腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。22)項12所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。23)項13所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。24)項14所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。25)項15所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。26)項16所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。27)項17所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。28)—種分離的核苷酸，包括的堿基序列編碼氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24序列的肽。29)包含項25核苷酸的載體。附圖簡述附圖，引入到并構成說明書的一部分，舉例說明了本發(fā)明的實施方案，并與說明書一起，共同解釋本發(fā)明的原理。圖1顯示W(wǎng)KYMVm、本發(fā)明的肽(WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE、WKYMVR)或預LF對FPR-表達的RBL-2H3細胞(A)或FPRLl-表達的RBL-2H3細胞(B)中的[Ca2+]i的效果；圖2顯示W(wǎng)KYMVm、本發(fā)明的肽(WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE、WKYMVR)以及預LF對結合到FPR或FPRL1上的1251-標記的WKYMVm置換；圖3顯示W(wǎng)KYMVm、本發(fā)明的肽(WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE、WKYMVR)、預LF以及wkymvm，對FPR-或FPRL1-表達的RBL-2H3細胞中ERK磷酸化的的影響；圖4顯示W(wǎng)KYMVm、本發(fā)明的肽(WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE、WKYMVR)、預LF以及wkymvm，對FPR-或FPRL1-表達的RBL-2H3細胞中Akt磷酸化的的影響；圖5顯示W(wǎng)KYMVm通過細胞內(nèi)鈣增加剌激FPR-或FPRL1-表達的RBL-2H3細胞的細胞外分泌；圖6顯示W(wǎng)KYMVm、本發(fā)明的肽(WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE、WKYMVR)、預LF以及wkymvm，對N-甲?；?甲硫氨?；?亮氨?；鵢苯基丙氨酸(預LF)的細胞外分泌效果、對肽-誘導的[Ca2+]增加的影響。圖7顯示W(wǎng)K預Vm通過P13K和MEK的活性，剌激FPR-或FPRLl-表達的RBL-2H3細胞的趨化遷移；以及圖8顯示W(wǎng)KYMVm、本發(fā)明的肽(WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE、WKYMVR)、預LF以及wkymvm對趨化性的影響。優(yōu)選實施方案的詳細描述甲酰基肽受體(FPR)和類甲?；氖荏wl(FPRLl)在免疫反應中發(fā)揮重要作用。本發(fā)明提供衍生自WKYMVm的肽類。許多肽可以剌激FPR或FPRLl導致鈣的增加，但是本發(fā)明的肽，如WKGMVm、WKRMVm和6thD_Met替代的肽只使FPRLl-表達的細胞中的f丐增加，而不會使FPR-表達的細胞中的f丐增加。應用125I_WKYMVm的競爭實驗表明許多肽不但使FPR-表達的細胞中的鈣增加，而且WKGMVm、WKRMVm以及6thD_Met替代的肽也可以與^I-WKYMVm競爭結合FPR。與磷脂酶C-調(diào)節(jié)的鈣增加不同，WKGMVm、WKRMVm和6thD_Met替代的肽可以剌激FPR-表達的細胞中的細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)和Akt激活。WKYMVm的功能性結果是，該肽通過Ca2+和ERK通路，可以分別剌激FPR細胞中的脫粒作用和細胞的趨化作用。肽類，如WKGMVm、WKRMVm和6thD_Met替代的肽，只是通過誘導趨化遷移剌激FPR細胞，但是沒有脫粒作用。綜合來看，本發(fā)明第一次證實了，作為重要趨化物化學引誘受體，F(xiàn)PR可以按照配體_特異的方式被不同的肽配體進行差異調(diào)節(jié)。根據(jù)本發(fā)明第一優(yōu)選實施方案，本發(fā)明的肽包括選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的氨基酸序列或衍生自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。SEQIDNO:1SEQIDNO:24如下所述:Trp-丄ys--Gly--Met--Val-D-Met-NH2(WKGMVm;SEQIDNO:1)，Trp-丄ys--Tyr--Met--Gly-D-Met-NH2(WKYMGm;SEQIDNO:2)，Trp-丄ys--Tyr--Met--Val-Gly-NH2(WKYMVG;SEQIDNO:3)，Trp--Arg--Tyr--Met--Val-D-Met-NH2(WRYMVm;SEQIDNO:4)，Trp--Glu--Tyr--Met--Val-D-Met-NH2(WEYMVm;SEQIDNO:5)，Trp--His--Tyr--Met--Val-D-Met-NH2(WHYMVm;SEQIDNO:6)，Trp--Asp--Tyr--Met--Val-D-Met-NH2(WDYMVm;SEQIDNO:7)，Trp-丄ys--His--Met--Val-D-Met-NH2(WKHMVm;SEQIDNO:8)，Trp-丄ys--Glu--Met--Val-D-Met-NH2(WKEMVm;SEQIDNO:9)，Trp-丄ys--Trp--Met--Val-D-Met-NH2(WK麗Vm;SEQIDNO:10)，Trp-丄ys--Arg--Met--Val-D-Met-NH2(WKRMVm;SEQIDNO:11)，Trp-丄ys--Asp--Met--Val-D-Met-NH2(WKDMVm;SEQIDNO:12)，Trp-丄ys--Phe--Met--Val-D-Met-NH2(WKFMVm;SEQIDNO:13)，Trp-丄ys--Tyr--Met--Tyr-D-Met-NH2(WKYMYm;SEQIDNO:14)，Trp-丄ys--Tyr--Met--(Phe/Trp)-D-Met_NH2(WKYM(F/W)m;SEQIDTrp-丄ys--Tyr--Met--Val-Glu-NH2(WKYMVE;SEQIDNO:16)，Trp-丄ys--Tyr--Met--Val-Val-NH2(WKYMW;SEQIDNO:17)，Trp-丄ys--Tyr--Met--Val-Arg-NH2(WKYMVR;SEQIDNO:18)，Trp-丄ys-—Tyr--Met--Val-Trp-NH2(WKYMVW;SEQIDNO:19)，Trp-Lys-Tyr-Met-Val-NH2(WKYMV;SEQIDNO:20)，Lys-Tyr-Met-Val-D-Met-NH2(KBWm;SEQIDNO:21)，Lys-Tyr-Met-Val-NH2(KBW;SEQIDNO:22)，Tyr-Met-Val-D-Met-NH2(YMVm;SEQIDNO:23)，以及Met-Val-D-Met-NH2(MVm;SEQIDNO:24).SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽類以分離和基本上純凈的形式存在。所述肽包括任選在羧基上被_NH2取代的氨基酸殘基。本發(fā)明的肽至少有一種以下特性(a)由人單核細胞或嗜中性白細胞誘導超氧化物的產(chǎn)生；(b)由人外周血單核細胞或嗜中性白細胞誘導的細胞內(nèi)鈣增加；(c)與甲?；氖荏w或類甲?；氖荏w1結合；(d)體外誘導人單核細胞或嗜中性白細胞的趨化遷移；(e)誘導甲?；氖荏w表達的細胞或類甲酰基肽受體1表達的細胞的脫粒作用；(f)通過激活甲酰基肽受體或類甲?；氖荏w1剌激細胞外信號_調(diào)節(jié)蛋白激酶磷酸化；以及(g)通過激活甲?；氖荏w或類甲?；氖荏w1剌激Akt磷酸化。根據(jù)本發(fā)明第二優(yōu)選實施方案，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，包括氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。包括作為活性成分的肽或物質(zhì)的所述組合物，可以包括超過一種藥用稀釋劑，選自鹽水、緩沖鹽、葡萄糖、水、甘油或乙醇，而且稀釋劑不限于這些。組合物可以按照疾病和劑量，有不同的應用。應該理解活性成分的實際用量應該考慮相關因素來決定，包括治療的疾病、病人癥狀的嚴重程度、與其它藥物組合應用(例如，化療藥物)、年齡、性別、病人的體重、飲食、給藥時間、選擇的給藥途徑以及組合物的比例。即使給藥劑量和途徑根據(jù)疾病的類型和嚴重程度進行調(diào)整，每天組合物仍可以單劑量或分為1-3次劑量給藥。包含本發(fā)明肽或物質(zhì)的組合物可以經(jīng)口服或胃腸外途徑給藥。胃腸外給藥是指經(jīng)除口外的其它途徑給藥，包括經(jīng)直腸、靜脈、腹膜內(nèi)和肌肉、動脈內(nèi)、皮膚、鼻腔、吸入、經(jīng)眼以及皮下導入給藥。包含肽或物質(zhì)的藥物制劑可以制成任何形式，如口服劑型、注射溶液或局部給藥劑型。藥物劑型優(yōu)選制成口服和可注射給藥的形式(真溶液、混懸劑或乳劑)以及最優(yōu)選的口服形式，如片劑、膠囊、軟膠囊、水劑、藥丸、顆粒等。在劑型制備中，肽可以直接加入軟膠囊而沒有任何賦型劑，或與載體混合或稀釋之后制成適當?shù)膭┬汀：线m的載體的實例有淀粉、水、鹽水、林格氏溶液、葡萄糖等。根據(jù)本發(fā)明第三優(yōu)選實施方案，提供了治療白細胞數(shù)量或活化狀態(tài)改變伴隨或?qū)е碌募膊〉姆椒āＫ龇椒ò▽π枰朔N治療的宿主，施用治療有效量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24序肽的物質(zhì)。疾病狀況可以是細菌、支原體、酵母、真菌、病毒感染或炎癥反應。根據(jù)本發(fā)明第四優(yōu)選實施方案，提供了一種增加白細胞數(shù)量或提高白細胞活性狀態(tài)的方法。所述方法包括對需要更大量或更強活性白細胞的宿主給藥，施用治療有效量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24序肽的物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明第五優(yōu)選實施方案，為需要這樣治療的病人提供一種誘導白細胞中細胞外鈣增加的方法。這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。根據(jù)本發(fā)明第六優(yōu)選實施方案，為需要這種治療的病人提供一種誘導人單核細胞或嗜中性白細胞中超氧化物產(chǎn)生的方法。這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。根據(jù)本發(fā)明第七優(yōu)選實施方案，為需要這種治療的病人提供一種誘導人外周血單核細胞趨化遷移的方法。這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDN0:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。根據(jù)本發(fā)明第八優(yōu)選實施方案，為需要這種治療的病人提供一種誘導甲酰基肽受體表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中脫粒反應的方法。這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。根據(jù)本發(fā)明第九優(yōu)選實施方案，為需要這種治療的病人提供一種分別與WKYMVm競爭結合甲?；氖荏w表達細胞或類甲酰基肽受體1表達細胞上甲?；氖荏w或類甲?；氖荏wl的肽的方法。這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。根據(jù)本發(fā)明第十優(yōu)選實施方案，為需要這種治療的病人提供一種剌激甲酰基肽受體表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶的方法。這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。根據(jù)本發(fā)明第十一優(yōu)選實施方案，為需要這樣治療的病人提供一種剌激甲?；氖荏w表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中Akt的方法，這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對誘導或脫敏作用的治療或預防有效。在上述第三到十一優(yōu)選實施方案中，被治療的宿主或病人可能受到由于感染所致疾病的侵擾，特別是巨細胞病毒感染、類風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療(adoptiveimmunetherapy)、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。本發(fā)明提供了分離的核苷酸，所述核苷酸編碼具有包括SEQIDN0:1SEQIDNO:24氨基酸序列的肽。本發(fā)明提供了包含分離的核苷酸的載體，所述核苷酸編碼包括SEQIDN0:1SEQIDN0:24氨基酸序列的肽。本發(fā)明提供了包含選自SEQIDNO:1SEQIDNO:24氨基酸序列的多肽。本發(fā)明將參考下列實施例進行更詳細的解釋。但是，這些例子在任何意義上都不能被解釋為本發(fā)明范圍的限制。實施例中所用的材料Fmoc(保護的)氨基酸來自Millipore(Bedford,MA)。R即idamide樹脂購自Dupont(Boston,MA)。外周血單核細胞(PBMC)分離培養(yǎng)基(Histopaque-1077)、細胞色素c和皿F購自Sigma(St.Louis,M0)。Fura-2五乙酰氧基甲酯(fura-2/AM)購自MolecularProbes(Eugene,OR)。RPMI1640來自LifeTechnologies(GrandIsland,NY)。已透析的月臺牛血清和補充的牛血清購自HycloneLaboratoriesInc.(Logen，UT)。PTX、GF109203X和PD98059購自Calbiochem(SanDiego，CA)。LY294002購自BI0M0Lresearchlaboratories,Inc.(PolymouthMeeting,PA)。用上面描述的固相方法合成肽(8，9)。簡而言之，肽在r即idamide支撐樹脂上合成，并在酸敏感連接基上按照標準的Fmoc/叔丁基方法進行合成。通過前述(8)氨基酸分析確定肽的組成。按照上述方法(13)，用補加20%FBS和200g/ml的G418的DMEM來進行RBL-2H3、FPR-表達的RBL-2H3和FPRL1-表達的RBL-2H3細胞的培養(yǎng)。實施例1:嗜中性白細胞分離濃縮外周血白細胞由UlsanRedCrossBloodCenter(Ulsan，Korea)贈送。根據(jù)上述(9)的葡聚糖沉淀、紅細胞低滲性裂解以及淋巴細胞梯度介質(zhì)分離的標準方法分離出人嗜中性白細胞。分離的人嗜中性白細胞立即應用。實例2:肽對人嗜中性白細胞中超氧化物產(chǎn)生的影響測定了肽WKYMVm、SEQIDN0s:124的肽以及wkymvm對人嗜中性白細胞中超氧化物產(chǎn)生的活性。通過利用微量滴定96-孔板ELISA讀板器(Bio-Tekinstruments，EL312e，Winooski，VT)測定細胞色素c的減少，從而量化超氧化物陰離子的產(chǎn)生，方法如(14)中描述。人嗜中性白細胞(96-孔板每孔中含lxl0e細胞/100ii1的RPMI1640培養(yǎng)基)與50yM細胞色素c在37t:預溫育1分鐘，然后與指定濃度的肽一起溫育。通過測定550nm處光吸收的變化進行超氧化物產(chǎn)生的測量，1分鐘間隔測定一次，測定5分鐘。每一位置上至少進行四個獨立實驗選擇有活性的氨基酸肽類。這些結果顯示在表I中。用不同濃度的肽剌激嗜中性白細胞，發(fā)現(xiàn)WKYMVm以濃度依賴方式引起超氧化物的產(chǎn)生，用100nM的肽時活性最大(數(shù)據(jù)沒有顯示)。當一些肽，如WR預Vm、WEYMVm、WKFMVm以及KYMVm剌激細胞內(nèi)超氧化物產(chǎn)生時，許多肽在用100nM的濃度時產(chǎn)生超氧化物的活性活性較弱。表I.肽對人嗜中性白細胞中超氧化物產(chǎn)生的影響a<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>a通過監(jiān)測細胞色素c的減少測量超氧化物產(chǎn)生。b處理肽的濃度為lOOnM。也測量了濃度為lOiiM的肽對超氧化物產(chǎn)生的影響。結果顯示在表II中。除wkymvm夕卜，所有的肽在10yM濃度時剌激超氧化物產(chǎn)生的活性與WKYMVm—樣強。其中WK麗Vm、WKFMV以及WK預VW顯示出比WK預Vm更強的活性。表II.肽對人嗜中性白細胞中超氧化物產(chǎn)生的影響a<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>a通過監(jiān)測細胞色素c的減少測量超氧化物產(chǎn)生。b處理肽的濃度為10iiM。實施例3:肽對FPR-或FPRL1-表達的RBL-2H3細胞中[Ca2+]i增加的影響測量了FPR-表達的RBL-2H3細胞中肽WKYMVm、序列為SEQIDNOs:124的肽以及wkymvm對[Ca2+]i增加的活性。用10yM的每種肽剌激FPR-表達的RBL-2H3細胞，然后測量[Ca2+]i。[Ca2+]i的水平利用Grynkiewicz的熒光方法用fura-2/AM測量(15)。簡而言之，制備的細胞用3iiMfura-2/AM在新鮮無血清的RPMI1640培養(yǎng)基中37。C溫育50分鐘，持續(xù)搖動。每一個分析中，將2又106細胞等分到無032+的Locke's溶液(154mMNaCl，5.6mMKCl，1.2mMMgCl2，5mMHEPES，pH7.3，10mM葡萄糖，以及0.2mMEGTA)中。測量在雙激發(fā)波長340nm和380nm以及500nm發(fā)射波長處的熒光變化，并將校正后的熒光比轉化為[Ca2+]i。監(jiān)測增加的[Ca"]i的峰水平。結果顯示在表III和圖1A中。數(shù)據(jù)為三個獨立實驗的代表。表III.肽對FPR-表達的RBL-2H3細胞中細胞內(nèi)鈣增加的影響a<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>a從負載了fura-2的細胞上監(jiān)測細胞內(nèi)鈣的增加。在FPR-表達的RBL-2H3細胞中，WKYMVm肽以濃度依賴的方式誘導[Ca2+]i的增力口，最大活性濃度約為300nM(數(shù)據(jù)未顯示)。WKYMVm對FPR細胞中[Ca2+]t的增加活性的EC50為47nM(表III)。在本發(fā)明的肽中，盡管WHYMVm、WK麗Vm以及WKFMVm與肽WK預Vm相比，顯示出對FPR更高的親和力，其它肽顯示出的活性不如WKYMVm(表III)。尤其是，WKGMVm、WKYMGm以及6thD_Met置換的肽沒有產(chǎn)生[Ca2+]t的增加，直到用20yM的濃度處理FPRLl-表達RBL-2H3細胞(表III和圖1A)。N-端和C_端截短的肽對FPR中的[Ca2+]i增加也無活性(表III)。這些結果表明Tyr3和D-Met6對[Ca2+]i增加中的FPR激活至關重要。在FPRLl-表達的RBL-2H3細胞中，檢測了肽WKYMVm、序列為SEQIDN0s:124的肽以及wkymvm對[Ca2+]i增加的影響。FPRLl-表達的RBL-2H3細胞用10yM的各肽剌激，并測定了[Ca2+]i。[Ca2+]i的水平用上述同樣的方法進行測定。檢測[Ca2+]i的峰水平。結果顯示在表IV和圖1B中。數(shù)據(jù)為三個獨立實驗的代表。在FPRL1-表達RBL-2H3細胞中，10iiM濃度的WKYMVm顯示出了最大活性(數(shù)據(jù)未顯示)。WKYMVm對FPRL1細胞中[Ca2+]4增加活性的EC50為0.6nM(表IV)。與FPR細胞中不一樣的是，所有的肽對FPRLl細胞中[Ca2+]i的增加都是有活性的(表IV)。一些肽，如WRYMVm、WK麗Vm、WKFMVm、WKYMYm以及WK預(F/W)M對FPRLl顯示出高親和力(表IV)。在FPR細胞中不影響[Ca2+]i增加的WKGMVm、WKYMGm以及6thD_Met置換的肽，在FPRL1細胞中也顯示出[C^+]i增加的活性，具有對FPRLl較低的親和力(表IV和圖1B)。N-端和C-端截短的肽也剌激FPRL1中的[Ca"]i增加(表IV)。這些結果表明，相對于FPR的激活而言，Tyr3和D-Met6對[Ca2+]i增加中的FPRL1激活的重要性要差一些。表IV.肽對FPRL1-表達的RBL-2H3細胞中中細胞內(nèi)f丐增加的影響a<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>a從負載了fura-2的細胞上監(jiān)測細胞內(nèi)鈣的增加。實施例4:肽對[125I]WKYMVm與FPR或FPRL1結合的影響基于一些肽(WKGMVm、WKRMVm、D_Met6置換肽)不能誘導胞質(zhì)鈣增加的發(fā)現(xiàn)，需要進一步判斷肽是否能與FPR結合。檢測了肽對結合到FPR或FPRL1的125I_標記WKYMVm的置換情況。FPR-表達RBL-2H3細胞與[125I]WKYMVm，在無或有遞增量的未標記WKYMVm或SEQIDNOs:124肽存在下一起溫育。配體結合分析按照前述報導的改良方法進行(16)。放射碘標記的WKYMVm(^I-標記)購自NENLifesciences(Boston,MA)。簡言之，F(xiàn)PR-或FPRL1-表達RBL_2H3細胞按照每孔lXl()S細胞分配到24-孔板中，并培養(yǎng)過夜。用阻斷緩沖液(33mMHEPES，pH7.5，0.1%BSA的RPMI)對細胞阻斷2小時后，在有或無50iiM未標記肽存在下，將單濃度的125I_標記的WKYMVm與結合緩沖液(含0.1%BSA的PBS)—起加到細胞中，并在持續(xù)振蕩狀況下4t:溫育3小時。然后將樣品用冰冷的結合緩沖液洗滌5次，并向每孔中加入2001的裂解緩沖液(20mMTris，pH7.5，1%TritonX-100)。室溫裂解20分鐘后，收集裂解液。用Y-線記數(shù)器測量結合的125I_標記WKYMVm的放射活性。配體結合分析結果顯示在圖2中。如圖2中所示，不僅未標記的WKYMVm而且WKGMVm、WKRMVm以及D_Met6置換肽的WKYMVm以濃度依賴的方式，抑制[125I]WKYMVm的結合。這些結果表明，盡管WKGMVm、WKRMVm、或WKYMVm的D_Met6_置換肽能結合到FPR，所有的肽不能誘導FPR-表達RBL細胞中的胞質(zhì)鈣增加。實施例5:肽對FPR或RPRL1表達RBL-2H3細胞中ERK磷酸化的影響i)用肽剌激細胞培養(yǎng)的RBL-2H3細胞等分成2X106細胞，并用標明濃度的WKYMVm和本發(fā)明的肽剌激指定長的時間。FPR-或FPRL1-表達RBL-2H3細胞用1yM的WKYMVm剌激不同的時間(圖3A)。在用1iiM的WKYMVm處理之前，兩種細胞用下列溶液進行預溫育，用溶媒(vehicle)或100ng/ml的PTX(24小時)、50iiM的LY294002(15分鐘)、5iiM的GFX(15分鐘)、10iiMBAPTA/AM(60分鐘)或50iiMPD98059(60分鐘)(圖3B)。FPR-或FPRL1-表達的RBL2H3細胞分別用10M的本發(fā)明肽剌激2分鐘或5分鐘(圖3C)。剌激后，用無血清的RPMI洗滌細胞，并用裂解緩沖液(20mMH印es，pH7.2，10%甘油、150mMNaCl，1%TritonX-100，50mMNaF，lmMNa3V04，10iig/ml亮抑酶肽，10iig/ml抑蛋白酶肽，以及l(fā)mM苯甲基磺酰氟)進行裂解。離心沉淀去垢劑不溶物(12，000Xg，15分鐘，4t:)，并且將溶解的上清級分移出，并在-8(TC儲存或立即使用。裂解液中的蛋白質(zhì)濃度用Bradford蛋白質(zhì)分析試劑進行測定。ii)電泳及免疫印跡分析將每個樣本(含30g蛋白質(zhì))進行10%SDS-PAGE分離，并且磷酸化ERK用抗-磷酸-ERK抗體通過免疫印跡分析進行測定。通過利用濃縮樣本緩沖液，進行電泳，制備蛋白質(zhì)樣品。樣品中的部分然后用Laemmli描述的緩沖系統(tǒng)，通過10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠進行分離(17)。電泳后，用抗-ERK2抗體進行蛋白印跡分析以確證在實驗中所用的樣品量相同。然后將蛋白質(zhì)印跡到硝酸纖維素膜上。然后通過用含5X脫脂奶粉TBS(Tris-緩沖鹽溶液，0.05%Tween-20)溫育，封閉硝化纖維膜。隨后，膜的抗_磷酸-ERK抗體、抗-磷酸-Akt抗體或抗-Akt抗體進行溫育，用TBS洗滌。進行PKC轉位(translocation)分析的時候，用PKC同工酶特異的抗體進行溫育?？乖?抗體復合物通過下列方式顯色，將膜與1:5000稀釋的偶聯(lián)到辣根過氧化酶的山羊抗-兔IgG或山羊抗-小鼠IgG抗體進行溫育，并用增強的化學發(fā)光檢測體系進行。iii)結果評價了肽對FPR-或FPRL1-表達的RBL-2H3細胞中，通過FPR或RPRL1的細胞轉導的影響，結果在圖3中顯示。圖3的結果是3個獨立實驗的代表。既然，盡管一些肽能與FPR結合，它們不能剌激PLC-介導的鈣增加，考察了它們對一些GPCRs下游的其它信號傳導(ERKs和Akt)的影響，所述的其它信號傳導獨立于PLC。用1iiMWKYMVm剌激FPR-或FPRL1-表達RBL-2H3細胞，誘導瞬時的ERKs激活，表明用肽處理后，分別在2分鐘或5分鐘出現(xiàn)最大活性(圖3A)。當在用WKYMVm剌激之前，用數(shù)種抑制劑對FPR-或FPRL1-表達RBL-2H3細胞進行預處理，WKYMVm-誘導ERKs激活對PTX和PD98059敏感，表明該事件是PTX-敏感的G-蛋白質(zhì)并且是MEK-依賴性的(圖3B)。P13K抑制劑(LY294002)、PKC抑制劑(GF109203X或Ro-31-8220)或f丐螯和劑(BAPTA/AM)的預處理不能產(chǎn)生WKYMVm-誘導的ERK激活(圖3B)。這表明該事件獨立于P13K、Ca2+和PKC激活。因此看來WKYMVm通過獨立信號傳導途徑誘導[C^+]i增加和ERK激活。用抗-磷酸-ERKs抗體通過蛋白印跡分析考察了本發(fā)明的肽對ERK激活的影響。與胞質(zhì)鈣增加活性不一樣的是，肽(WKGMVm、WKRMVm、WK預VR和WKYMVE)剌激FPR-表達RBL-2H3細胞中的ERKs磷酸化(圖3C)。應該注意地是這些肽不能影響PLC-介導的[Ca2+]i增加活性，這是一個非常有趣的結果。當FPRL1-表達RBL-2H3細胞用WKYMVm和本發(fā)明的肽進行剌激的時候，大多數(shù)所述肽也引起FPRL1細胞中的ERKs磷酸化(圖3C)。該結果與前述結果相關，所有的肽能剌激FPRL1-表達細胞中的胞質(zhì)鈣增加(圖1B)。實施例6:肽對FPR-或RPRL1-表達RBL-2H3細胞中Akt磷酸化的影響眾所周知，激活的趨化物受體經(jīng)P13K誘導Akt的激活(19)。用肽剌激細胞，按照實施例5中同樣的方法進行電泳和免疫印跡分析。FPR-或FPRL1-表達RBL-2H3細胞用1yMWKYMVm剌激不同的時間(圖4A)。在用1iiM的WKYMVm處理之前，兩種細胞用溶媒或100ng/ml的PTX(24hr)、50yM的LY294002(15分鐘)、5iiM的GFX(15分鐘)、10iiM的BAPTA/AM(60分鐘)或50iiMPD98059(60分鐘)進行預溫育(圖4B)。FPR-和FPRL1-表達RBL2H3細胞用10yM的WKYMVm和本發(fā)明的肽分別剌激2分鐘或5分鐘(圖4C)。將每一種樣品(30iig的蛋白質(zhì))進行10%SDS-PAGE，并抗_磷酸-Akt抗體通過免疫印跡分析對磷酸化Akt進行測定。通過用抗-Akt抗體進行的蛋白印跡分析來確證用于實驗中同樣量的樣品。結果顯示在圖4中。圖4的結果為3個獨立實驗的代表。觀察到在FPR-和FPRL1-表達RBL-2H3細胞中，WKYMVm剌激誘導的Akt磷酸化是時間依賴方式的(圖4A)。WKYMVm-誘導Akt磷酸化對PTX、LY294002敏感，但對GFX和BAPTA/AM不敏感，表明該事件為PTX-敏感性的G-蛋白質(zhì)以及P13K-依賴性(圖4B)。不僅用WKYMVm而且用本發(fā)明肽(WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE和WKYMVR)對FPR-表達RBL-2H3細胞進行剌激，可以引起Akt磷酸化(圖4C)。WKYMVm和本發(fā)明肽也可以剌激FPRL1-表達RBL-2H3細胞中的Akt磷酸化(圖4C)。這些結果與肽在兩種細胞中的ERKs磷酸化相關聯(lián)(圖3C)。由于WKYMVm-誘導的ERKs和Akt激活通過P13K激活而介導，似乎WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE和WK預VR成功地誘導FPR下游的P13K-介導的信號傳導。實施例7:肽對胞吐作用(exocytosis)的影響顆粒分泌是肥大細胞最重要的功能之一(20)。通過按照上述方法(18)檢測P_氨基己糖苷酶分泌，考察WKYMVm對顆粒分泌的影響。簡言之，表達FPR或FPRL1的RBL-2H3細胞(2xl05/we11)在24-孔組織培養(yǎng)板中培養(yǎng)過夜。將細胞用Tyrode's緩沖液(137MmNaCl，12mMNaH03，5.6mM葡萄糖，2.7mMKCl，lMmCaCl2，0.5mMMgCl2，0.4MmNaH2P04，0.lg/100mlBSA以及25mMHEPES，pH7.4)洗滌，并用各種肽進行剌激。用各種濃度的WK預Vm處理FPR-或FPRL1-表達RBL_2H3細胞(圖5A)。在有或無10PMBAPTA/AM存在的條件下，用1PM的WKYMVm剌激兩種細胞系(圖5B)。該反應剌激20分鐘后，通過將其置于冰上進行終止。分泌到培養(yǎng)基中的P氨基己糖苷酶按照下列方法測定，將50iU上清液或細胞裂解液與25iU的5mM對硝基苯基-N-乙?；?對-D-葡糖胺的0.1M檸檬酸鈉緩沖液(pH3.8)在37。C溫育2小時。在溫育結束時，加入50iil的0.4M的Na2C03。測量405nm處的吸光度。結果顯示在圖5中。數(shù)據(jù)為三重實驗的平均值士S.E.。數(shù)值(平均值士S.E.)表示為細胞中總e-氨基己糖苷酶的百分比。多種濃度WKYMVm對FPR-或FPRL1-表達RBL-2H3細胞進行剌激的時候，所引起的P-氨基己糖苷酶釋放是以濃度依賴的方式進行的(圖5A)。在FPR-或FPRL1-表達RBL-2H3細胞中，用100nM或lOnM肽剌激時，分別可以顯示出最大活性(圖5A)。已經(jīng)有報道指出胞質(zhì)鈣增加對肥大細胞如RBL-2H3中顆粒分泌非常關鍵(18,20)。也證實了，用肽剌激之前，通過BAPTA/AM處理的細胞內(nèi)f丐螯合幾乎完全抑制WKYMVm-誘導的顆粒分泌(圖5B)。從這些新發(fā)現(xiàn)可知，WKYMVm和許多WKYMVm的置換肽可誘導胞質(zhì)*丐釋放，但一些卻不能(WKGMVm、WKRMVm、D-Met6置換肽)，考察了RBL細胞中這些肽對顆粒分泌的影響。用10iiM的各肽處理FPR-(圖6A)或FPRL1-表達RBL-2H3細胞(圖6B)。按照上述方法測定肽-誘導e-氨基己糖苷酶的分泌。數(shù)據(jù)為三重實驗的平均值士S.E.。當用肽(WKYMVm、WKGMVm、WKRMVm、WK預VE、WKYMVR)剌激FPR細胞時，可以觀察到一些置換肽的顆粒分泌作用，但WKGMVm-、WKRMVm-以及D-Mets-置換肽除外(圖6A)。WKGMVm-、WKRMVm-以及D_Met6_置換肽不能影響FPR-表達RBL-2H3細胞中的顆粒分泌(圖6A)。這些結果與前述結果完全關聯(lián)，WKGMVm-JKRMVm-以及D_Met6-置換肽不能誘導胞質(zhì)鈣釋放(圖1A)。與FPR-表達RBL-2H3細胞中不一樣的情況是，所有肽(WKYMVm、WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE、WKYMVR)，但不包括預LF或wkymvm，剌激FPRL1-表達RBL-2H3細胞中的顆粒分泌(圖6B)。該結果也與前述結果良好關聯(lián)，肽剌激FPRL1-表達RBL-2H3細胞中的胞質(zhì)鈣增加(圖1B)。實施例8:肽對細胞趨化性的影響用多孔室進行趨化性分析(改進的Boyden室分析)(NeuroprobeInc.，Gaithersburg、MD)(18)。簡言之，聚碳酸酯濾器(8ym孑L徑)用50yg/ml的大鼠I膠原質(zhì)(CollaborativeBiomedicals)的HEPES-緩沖的RPMI1640培養(yǎng)基進行預包被。將干燥包被的濾器放置在含不同濃度肽的96-孔室中。將表達FPR或FPRL1的RBL-2H3細胞懸浮在RPMI中，濃度為lx106細胞/ml的無血清RPMI，并將25y1的懸浮液放置于96-孔趨化性室的上層孔中。37t:溫育4小時后，刮去未遷移的細胞，并將遷移過濾器的細胞進行脫水、固定、并用蘇木精(Sigma，St.Louis，MO)染色。對在所述孔中的5個隨機選擇的高倍數(shù)視野(HPF)(400X)中的染色細胞進行計數(shù)。圖7A顯示了趨化性分析的結果。溶媒、50yMLY294002(15分鐘)、以及50iiMPD98059(60分鐘)預處理的細胞，進行1PMWKYMVm處理時的趨化性分析，結果顯示在圖7B中。遷移細胞數(shù)通過計數(shù)高倍數(shù)視野(400x)中的細胞進行測定。數(shù)據(jù)為三個獨立實驗的平均值士SE，每個實驗重復兩次。已有報道，WKYMVm可以誘導吞噬細胞如單核細胞和嗜中性白細胞的趨化遷移(11)。Le等證實了通過與FPR和FPRL1結合的WKYMVm-誘導細胞趨化性(12)。正如所期望的那樣，在FPR-或FPRL1-表達RBL-2H3細胞中，WKYMVm顯示出的趨化遷移活性具有鐘(bell-)型濃度依賴性(圖7A)。WKYMVm-誘導的細胞趨化性對LY294002和PD98059敏感(圖7B)。該結果暗示W(wǎng)KYMVm-誘導的細胞趨化性為P13K-和MEK-依賴的。WKYMVm經(jīng)P13K和MEK活性，剌激FPR-或FPRL1-表達的RBL-2H3細胞的趨化遷移。測量了本發(fā)明肽對FPR-或FPRL1-表達RBL-2H3細胞的細胞趨化性的影響。多種濃度的各種肽用于FPR-或FPRL1-表達的RBL-2H3細胞的趨化性分析。通過在高倍數(shù)視野(400x)對細胞進行計數(shù)，測定遷移細胞數(shù)。數(shù)據(jù)表示為兩個獨立實驗的平均值士SE，每個實驗重復兩次。在FPR-表達RBL-2H3細胞中，不僅WKYMVm而且置換肽(WKGMVm、WKRMVm、WK預VE以及WKYMVR)誘導細胞的趨化性(圖8A)。趨化性所需要的置換肽的濃度高于WKYMVm的濃度(圖8B)。針對涉及置換肽_誘導趨化性信號傳導途徑，檢驗了PI-3激酶和MEK-介導信號傳導的參與情況。當FPR-表達RBL細胞用LY294002或PD98059預處理的時候，WKYMVm和置換肽_誘導的RBL細胞遷移幾乎完全被抑制(圖7B并且數(shù)據(jù)未顯示)。在FPRL1-表達RBL-2H3細胞中，WKYMVm以及肽(WKGMVm、WKRMVm、WKYMVE和WKYMVR)誘導的細胞趨化性，也顯示出濃度依賴性(圖8B)。在本發(fā)明中，第一次證實了FPR可用不同的配體進行調(diào)節(jié)，導致差異的細胞信號傳導和功能結果。為了證實FPR的配體-特異性調(diào)節(jié)，制備了如表I中所列出的多種肽，F(xiàn)PR的強活性配體。其中，WKGMVm-、WKRMVm-以及D_Met6-置換肽能結合到FPR，只誘導PI_3激酶_介導的Akt和MEK-介導的ERK激活，導致細胞的趨化遷移。這些肽不會影響胞質(zhì)鈣增加。由于肽WKYMVm不僅剌激ERKs激活，而且胞質(zhì)鈣增加，導致趨化性以及脫粒作用，因此意味著FPR可用不同的配體進行差異調(diào)節(jié)。最近，數(shù)篇報道證實了一些GPCRs可用不同的配體進行調(diào)節(jié)(21，22)。在GPCR的配體-特異性調(diào)節(jié)中，認為不同的配體誘導受體的不同構象改變，并誘導受體與特定的效應分子或G-蛋白的選擇性偶聯(lián)。在表III和圖1A中，證實了在FPR-表達RBL-2H3細胞中，WKGMVm、WKRMVm以及D_Met6置換肽不能剌激PLC-介導胞質(zhì)f丐增加。但是，這些肽剌激FPR-表達RBL-2H3細胞中的ERKs和Akt磷酸化(圖3C)。在WKYMVm以及本發(fā)明肽_介導細胞信號傳導中，胞質(zhì)鈣增加是被通過PLC-P激活的PI水解所誘導的，但是ERK和Akt磷酸化是分別通過MEK和P13的激酶的激活而介導的?；谶@些結果，似乎肽配體與FPR的結合誘導FPR的構象改變，構象改變導致受體與G-蛋白質(zhì)-介導PLC-13或G-蛋白質(zhì)-介導PI-3激酶偶聯(lián)。由于一些本發(fā)明肽不能誘導胞質(zhì)鈣增加(WKGMVm、WKRMVm以及D_Met6置換肽)，但可以經(jīng)PI-3激酶-獨立的途徑剌激ERKs磷酸化，似乎肽結合到FPR并誘導了構象改變，該構象改變是PI-3激酶激活和MEK-介導的信號傳導所需要的，從而導致RBL-2H3細胞的趨化遷移。已有報道稱甲酰基肽受體家族的兩種不同受體，F(xiàn)PR和FPRL1在先天性免疫反應中發(fā)揮重要作用(1，2)。至今為止，數(shù)種不同的配體來源包括甲?；膌ipoxinA4，已有報道可以與FPR或FPRL1結合(1)。Le等報道WK預Vm可以與FPR以及FPRL1結合(12)。在本發(fā)明中，本發(fā)明者證實了用其它氨基酸置換Tyr3或D_Met6將失去FPR而不會失去FPRL1的PLC-介導胞質(zhì)鈣-增加活性(圖1)。該結果表明Tyr3和D-Met6是通過FPR激活PLC的關鍵，但對FPRL1卻不是這樣。從該結果可以推導出FPR和FPRL1的配體-結合位點不同。GPCRs包括FPR通過結合到異質(zhì)_三聚G_蛋白質(zhì)而誘導細胞內(nèi)信號傳導，許多研究組一直試圖揭示涉及G-蛋白質(zhì)偶聯(lián)中受體的關鍵氨基酸殘基(23,24)。對FPR而言，Miettinen等構建了35種突變FPRs并考察了突變對FPR的G_蛋白質(zhì)偶聯(lián)以及細胞信號傳導的影響。根據(jù)該文章，S63、D71、R123以及C124/C126對G_蛋白質(zhì)與FPR的偶聯(lián)非常重要(24)。在這些突變體中，R123A突變體不能介導鈣的轉移，但能通過預LF誘導ERKs磷酸化(24)。已經(jīng)推測Aspl22和Argl23，其構成了保守的(D/E)RY結構域(FPR中的DRC)，參與了穩(wěn)定受體無活性形式的氫鍵網(wǎng)絡(24)。在該推測中，配體結合到受體引起氫鍵網(wǎng)絡的改變，并且某些氨基酸殘基例如DRY結構域中的精氨酸的暴露，從而能與G-蛋白質(zhì)相互作用(24)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些肽如WKGMVm可以誘導ERKs磷酸化但不能引起鈣轉移。因此判斷WKYMVm或WKGMVm與FPR的結合是否誘導差異的受體構象改變非常重要；即盡管WKYMVm能誘導FPR的構象改變，包括DRY結構域的氫鍵的改變，WKGMVm只引起了顯著的受體構象改變，而沒有影響DRY氫鍵。在FPRLl的情況下，它也包含DRY結構域(FPRLl中的DRC)，但沒有考察其在G-蛋白偶聯(lián)中的作用。在這些結果中，不僅WKYMVm而且WKGMVm誘導FPRLl-表達RBL細胞中的f丐轉移(圖IB)。這些結果表明WK預Vm或WKGMVm不影響FPR或FPRLl中DRY結構域的氫鍵。其它結合口袋也許參與肽結合，未來的工作中，識別涉及WKYMVm或WKGMVm與FPRs的差異結合模式中的殘基非常重要。到目前為止，已經(jīng)報道了一些天然配體可以差異地調(diào)節(jié)FPR。在免疫系統(tǒng)中，脫粒作用或趨化遷移的差異調(diào)節(jié)對更精細的調(diào)節(jié)而言是必須的。從這個角度來講，識別如本發(fā)明中的能夠差異地調(diào)節(jié)FPR配體的工作非常重要。參考文獻1.Le，Y.，Li，B.，Gong，W.，Shen，W.，Hu，J.，D皿lop，N.M.，Oppenheim，J.J.，andWang，J.M.(2000)ImmunolRev.177，185—194.2.Le，Y.，Oppenheim，J.J.，andWang，J.M.(2001)CytokineGrowthFactorRev.12,91—105.3.White,J.R.，Lee，J.M.，Young，P.R.，Hertzberg，R.P.，Jurewicz，A.J.，Chaikin，M.A.，Widdowson，K.，F(xiàn)oley,J.J.，Martin,L.D.，Griswold，D.E.，andSarau，H.M.(1998)J.Biol.Chem.273，10095-10098.4.Zagorski，J.，andWahl，S.M.(1997)J.Immunol.159,1059-1062.5.Prossnitz，E.R.，andYe，R.D.(1997)Pharmacol.Ther.74，73-102.6.Su，S.B.，Gong，W.H.，Gao，J.L.，Shen，W.P.，Gri線M.C.，Deng，X.，Murphy，P.M.，Oppenheim,J.J.，andWang，J.M.(1999)Blood93,3885-3892.7.Walther，A.，Riehema皿，K.，andGerke，V.(2000)Mol.Cell.5，831-840.8.Baek，S.H.，Seo，J.K.，Chae，C.B.，Suh，P.G.，andRyu，S.H.(1996)J.Biol.Chem.271,8170-8175.9.Seo，J.K.，Choi，S.Y.，Kim，Y.，Baek，S.H.，Kim，K.T.，Chae，C.B.，Lambeth，J.D.，Suh，P.G.，andRyu，S.H.(1997)J.Immunol.158，1895-1901.10.Bae，Y.S.，Ju，S.A.，Kim，J.Y.，Seo，J.K.，Baek，S.H.，Kwak，J.Y.，Kim，B.S.，Suh，P.G.，andRyu，S.H.(1999)J.Leukoc.Biol.65，241-248.11.Bae，Y.S.，Kim，Y.，Kim，Y.，Kim，J.H.，Suh，P.G.，andRyu，S.H.(1999)J.Leukoc.Biol.66,915-922.12丄e，Y.，Gong，W.，Li，B.，Dunlop，N.M.，Shen，W.，Su，S.B.，Ye，R.D.，andWang，J.M.(1999)J.Immunol.163,6777—6784.13.He，R.，Tan，L.，Browning,D.D.，Wang，J.M.，andYe，R.D.(2000)J.Immunol.165,4598-4605.14.Bae，Y.S.，Bae，H.，Kim，Y.，Lee，T.G.，Suh，P.G.，andRyu，S.H.(2001)Blood972854-2862.15.Grynkiewicz，G.，Poenie，M.，andTsien，R.Y.(1986)J.Biol.Chem.260，3440-3450.16.Hu，J.Y.，Le，Y.，Gong，W.，D皿lop，N.M.，Gao，J.L.，Murphy，P.M.，andWang，J.M.(2001)J.Leukoc.Biol.70，155—1561.17.King,J.，andLaemmli，U.K.(1971)J.Mol.Biol.62，465—477.18.Haribabu，B.，Zhelev，D.V.，Pridgen，B.C.，Richardson,R.M.，Ali，H.，andSnyderman，R.(1999)J.Biol.Chem.274,37087-37092.19.Franke，T.F.，Yang，S.I.，Chan，T.0.，Datta，K.，Kazlauskas，A.，Morrison,D.K.，Kaplan,D.R.，andTsichlis，P.N.(1995)Cell.81，727-736.20.Jin，X.，Sh印herd，R.K.，Duling，B.R.，andLinden,J.(1997)J.Clin.Invest.100,2849-2857.21.Thomas,W.G.，Qian，H.，Chang，C.S.，andKarnik，S.(2000)J.Biol.Chem.275，2893-2900.22.Palanche，T.，lien，B.，Zoffma皿，S.，Reck，M.P.，Bucher，B.，Edelstein，S.J.，andGalzi，J.L.(2001)J.Biol.Chem.276,34853-34861.23.Prossnitz，E.R.，Quehenberger，0.，Cochrane,C.G.，andYe，R.D.(1993)Biochem.J.294,581-587.24.Mietti體，H.M.，Gripentrog，J.M.，Mason，M.M.，andJesaitis，A.J.(1999)JBiol.Chem.274,27934-27942.序列表〈110〉P0SC0公司(P0SC0)P0STECHFoundation〈120〉免疫調(diào)節(jié)肽〈130〉0PP030092KR〈150>US60/352，930〈151>2002-01-29〈160>24〈170〉Kopatentln1.71〈210>1〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>1Trp-Lys-Gly-Met-Val-Met15〈210>2〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>2Trp_Lys_Tyr_Met_Gly_Met15〈210>3〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈400>3Trp_Lys_Tyr_Met_Val_Gly15〈210>4〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>4Trp_Arg_Tyr_Met_Val_Met15〈210>5〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>5Trp-Glu-Tyr-Met-Val-Met15〈210>6〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>6Trp-His-Tyr-Met-Val-Met15〈210>7〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-MetTrp_Asp_Tyr_Met_Val_Met15〈210>8〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>MOD_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>8Trp_Lys_His_Met_Val_Met15〈210>9〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>MOD_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>9Trp_Lys_Glu_Met_Val_Met15〈210>10〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>MOD_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>10Trp_Lys_Trp_Met_Val_Met15〈210>11〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>11Trp_Lys_Arg_Met_Val_Met15〈210>12〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>12Trp_Lys_Asp_Met_Val_Met15〈210>13〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES(修飾殘基)〈222〉(6)〈223>D-MetTrp_Lys_Phe_Met_Val_Met15〈210>14〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>MOD_RES〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>14Trp_Lys_Tyr_Met_Tyr_Met15〈210>15〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>MOD_RES〈222〉(6)〈223>D-Met〈400>15Trp-Lys-Tyr-Met-(Phe/Trp)-Met-15〈210>16〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈400>16Trp_Lys_Tyr_Met_Val_Glu15〈210>17〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈400>17Trp-Lys-Tyr-Met-Val-Val15〈210>18〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈400〉18Trp_Lys_Tyr_Met_Val_Arg15〈210>19〈211>6〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈400〉19Trp_Lys_Tyr_Met_Val_Trp15〈210>20〈211>5〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈400>20Trp_Lys_Tyr_Met_Val15〈210>21〈211>5〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES〈222〉(5)〈223>D-Met〈400>21Lys-Tyr-Met-Val—1;〈210>22〈211>4〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈400>22Lys_Tyr_Met_Val1〈210>23〈211>4〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES〈222〉(4)〈223>D-Met〈400>23Tyr_Met_Val_Met1;〈210>24〈211>3〈212>PRT〈213〉人工序列〈220〉〈223〉免疫調(diào)節(jié)肽〈220〉〈221>M0D_RES〈222〉(3)〈223>D-Met〈400>24Met-Val-Met權利要求一種包含氨基酸序列選自SEQIDNO1～SEQIDNO3和SEQIDNO8～SEQIDNO24的肽。2.權利要求l的肽，其中所述肽激活白細胞，并且是分離的和基本上是純的形式。3.—種衍生自肽的物質(zhì)，所述肽的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24。4.權利要求1的肽，其中所述肽具有至少一項下列性質(zhì)(a)由人單核細胞或嗜中性白細胞誘導超氧化物的產(chǎn)生；(b)由人外周血單核細胞或嗜中性白細胞誘導細胞內(nèi)鈣增加；(c)與甲?；氖荏w或類甲?；氖荏w1結合；(d)體外誘導人單核細胞或嗜中性白細胞的趨化遷移；(e)誘導甲?；氖荏w表達的細胞或類甲?；氖荏w1表達的細胞中的脫粒作用；(f)通過激活甲?；氖荏w或類甲?；氖荏w1剌激細胞外信號-調(diào)節(jié)蛋白激酶磷酸化；以及(g)通過激活甲?；氖荏w或類甲?；氖荏w1剌激Akt磷酸化。5.—種藥物組合物，包括氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDN0:3禾PSEQIDNO:8SEQIDNO:24的肽；或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。6.—種治療由改變白細胞數(shù)量或激活狀態(tài)伴隨或引起的疾病的方法，所述方法包括對需要這種治療的宿主施用治療有效量的肽，所述肽的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。7.權利要求14所述的方法，其中疾病為細菌、支原體、酵母、真菌或病毒感染。8.權利要求14所述的方法，其中疾病為炎癥。9.一種增加宿主中白細胞數(shù)或提升白細胞激活狀態(tài)的方法，包括向需要增加更大量白細胞數(shù)或更高白細胞激活狀態(tài)宿主施用治療有效量的肽，所述肽的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)。10.—種誘導需要這種治療的病人的白細胞細胞外鈣增加方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDN0:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。11.一種在需要這種治療的病人中由人單核細胞或嗜中性白細胞誘導超氧化物產(chǎn)生的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDN0:3和SEQIDN0:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。12.—種在需要這種治療的病人中由人外周血單核細胞誘導趨化遷移的方法，所述這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDN0:3禾口SEQIDN0:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。13.—種為需要這種治療的病人提供誘導甲?；氖荏w表達細胞或類甲酰基肽受體1表達細胞中脫粒作用的方法，所述這種方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。14.一種為需要這種治療的病人提供與WKYMVm競爭結合甲酰基肽受體表達細胞中甲?；氖荏w的肽的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。15.—種為需要這種治療的病人提供與WKYMVm競爭結合類甲?；氖荏w1表達細胞中類甲酰基肽受體1的肽的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。16.—種為需要這種治療的病人提供剌激甲?；氖荏w表達細胞或類甲酰基肽受體1表達細胞中細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24的月太，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24肽的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。17.—種為需要這樣治療的病人提供剌激甲酰基肽受體表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中Akt的方法，所述方法包括向所述病人施用一定量的氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24的肽，或衍生自氨基酸序列選自SEQIDNO:1SEQIDNO:3和SEQIDNO:8SEQIDNO:24月太的物質(zhì)，所用量為對這種誘導或脫敏作用的治療或預防有效。18.權利要求所述6的方法，其中所述宿主受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。19.權利要求9所述的方法，其中所述宿主受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。20.權利要求10所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。21.權利要求11所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球性腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。22.權利要求12所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。23.權利要求13所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。24.權利要求14所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。25.權利要求15所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。26.權利要求16所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。27.權利要求17所述的方法，其中所述病人受由下列導致的疾病侵擾，感染、風濕性關節(jié)炎、蘭姆氏關節(jié)炎、痛風、膿毒癥綜合征、體溫過高、潰瘍性結腸炎、小腸結腸炎、骨質(zhì)疏松癥、巨細胞病毒、牙周疾病、腎小球腎炎、肺慢性非感染性炎癥反應、結節(jié)病、吸煙者者肺、肉芽腫形成、肝纖維化、肺纖維化、移植排斥反應、移植物對宿主的疾病、慢性骨髓白血病、急性骨髓白血病、瘤形成的疾病、支氣管哮喘、I型胰島素依賴型糖尿病、動脈硬化、動脈粥樣硬化、牛皮癬、慢性B淋巴細胞白血病、普通可變型免疫缺陷病、播散性血管內(nèi)凝血、全身性硬皮病、腦脊髓炎、肺炎癥反應、高IgE綜合征、癌癥轉移、癌癥生長、繼承性免疫治療、獲得性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥、再灌注綜合征、術后炎癥反應、器官移植或禿頭癥。28.—種分離的核苷酸，包括的堿基序列編碼氨基酸序列選自SEQIDN0:1SEQIDNO:3禾PSEQIDNO:8SEQIDNO:24序列的月太。29.包含權利要求25核苷酸的載體。全文摘要本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)肽，具體地，本發(fā)明公開了具有SEQIDNOs1～24的肽，所述肽能誘導人單核細胞或嗜中性白細胞產(chǎn)生超氧化物；能誘導人外周血單核細胞或嗜中性白細胞中細胞內(nèi)鈣增加；能與甲?；氖荏w或類甲酰基肽受體1結合；能誘導人單核細胞或嗜中性白細胞的體外趨化遷移；能誘導甲?；氖荏w表達細胞或類甲?；氖荏w1表達細胞中的脫粒作用；能經(jīng)甲酰基肽受體或類甲?；氖荏w1的激活，從而刺激細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)激酶磷酸化；或能經(jīng)甲?；氖荏w或類甲?；氖荏w1的激活，刺激Akt磷酸化。文檔編號A61P35/00GK101709078SQ20091020774公開日2010年5月19日申請日期2003年1月28日優(yōu)先權日2002年1月29日發(fā)明者宋芝英,徐判吉,柳成浩,裵外植申請人:Posco公司;學校法人浦項工科大學校