專利名稱：：一種抗病毒提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種抗病毒提取物及其制備方法，具體涉及一種經(jīng)典中藥復(fù)方"翹荷湯"的提取物及其制備方法，以及該提取物在制備預(yù)防和/或治療流感病毒藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：流行性感冒病毒，簡稱流感病毒，是一種造成人類及動物患流行性感冒的RNA病毒，在分類學(xué)上，流感病毒屬于正黏液病毒科，它會造成急性上呼吸道感染，并借由空氣迅速的傳播，在世界各地常會有周期性的大流行。流行性感冒病毒在免疫力較弱的老人或小孩及一些免疫失調(diào)的病人會弓I起較嚴重的癥狀，如肺炎或是心肺衰竭等。中醫(yī)藥治療流感具備顯著優(yōu)勢，從傳統(tǒng)方劑的現(xiàn)代藥理廣泛篩選中，翹荷湯具備顯著的抗流感效果。翹荷湯來源于《溫病條辨》(清代著名溫病四大名家"之一的吳鞠通所著著)巻一。主要組分為薄荷4.5克、連翹4.5克、生甘草3克、黑梔皮4.5克、桔梗9克、綠豆皮6克；主要功用為清上宣肺。主治燥氣化火、清竅不利、耳鳴目赤、齦脹咽痛。傳統(tǒng)上主要治療當以輕清宣透清解上焦燥熱為主。是主要治療咽炎類為主的方劑?！端拇ㄖ嗅t(yī)》2002，20(12):46發(fā)表了《翹荷湯治療小兒外感高熱154例》秦亮著，文獻中表明翹荷梔豉湯治療小兒外感發(fā)熱154例，總有效率達94.8%，療效滿意?？梢娫摲絼χ委熗飧邪l(fā)熱有明顯的效果。傳統(tǒng)上，該方劑的制備工藝及服用方法"上藥以水400毫升，煮取200毫升，頓服之。日服二劑，甚者日三服"?？梢?，傳統(tǒng)上其工藝粗糙，且服用、攜帶不方便，服用量大，也不適宜加工成其他劑型。復(fù)方中薄荷主要為薄荷醇、薄荷酮、胡薄荷酮等為主的萜類成分；連翹中主要含連翹苷等為主的揮發(fā)油成分；甘草主要含甘草黃酮及甘草皂苷類成分；桔梗也主要含桔梗皂苷類成分；原復(fù)方制備工藝通過直接水提方法，可提取部分水溶性成分，如桔梗皂苷類等，而對脂溶性成分難以提出來，使薄荷及連翹等大部分有效成分的揮發(fā)性成分損失。因此，傳統(tǒng)工藝對有效成分的保留很不合理，有必要進行深入研究，對其工藝進行革新。有關(guān)該方劑的現(xiàn)代制備及相關(guān)工藝研究均為空白，在臨床應(yīng)用中，《四川中醫(yī)》2002，20(12):46發(fā)表的《翹荷湯治療小兒外感高熱154例》中，一方面作者對古方"翹荷湯"做了適當調(diào)整，如增加了大黃，同時，也均是傳統(tǒng)水提方法，因此，對于該方劑的新的制備工藝等研究均是空白，限制了該方劑的擴大應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種抗病毒提取物。本發(fā)明的進一步目的在于提供該抗病毒提取物的制備方法。解決直接水提方法的揮發(fā)性有效成分損失大的問題，有效地富集了各藥材的主要成分。3本發(fā)明的再一個目的在于提供該提取物在制備預(yù)防和/或治療痔流感病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種抗病毒提取物，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準備藥材；通過超臨界制備工藝富集總黃酮、總皂苷、總萜類成分；其特征在于所述的抗病毒提取物中成分重量比總黃酮含量大于6%，皂苷含量大于15%，連翹苷含量大于0.3%，總揮發(fā)油含量大于2%。上述抗病毒提取物的制備方法，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準備藥材；并包括下述方法步驟1)藥材烘干，干燥溫度為50°C±l(TC，干燥時間34h;2)藥材粉碎成粗粉；3)藥材裝進超臨界萃取罐中，加入夾帶劑，萃取條件一級減壓分離壓力為510Mpa，溫度為4060°C，流量1520L/h的條件下進行萃取34h;二級減壓分離壓力為510Mpa，溫度為3550°C;4)提取物進行脫水，干燥。即得"翹荷湯"提取物。進一步的，所述的步驟2)中粗粉粉碎粒度在60200目之間。更進一步的，所述的夾帶劑選自甲醇、乙醇等有機溶劑；夾帶劑與粗粉質(zhì)量比為250:100。試驗實施例l是各提取物的主成分含量分析，表明本發(fā)明所述的提取物，是指采用超臨界制備方法，按傳統(tǒng)藥物復(fù)方組成比例進行制備而成，以黃酮類、皂苷、萜類成分為主要組分的提取物。本發(fā)明的原理是，復(fù)方中薄荷主要為薄荷醇、薄荷酮、胡薄荷酮等為主的萜類成分；連翹中主要含連翹苷等為主的揮發(fā)油成分；甘草主要含甘草黃酮及甘草皂苷類成分；桔梗也主要含桔梗皂苷類成分；原復(fù)方制備工藝通過直接水提方法，可提取部分水溶性成分，如桔梗皂苷類等，而對脂溶性成分難以提出來，使薄荷及連翹等大部分有效成分的揮發(fā)性成分損失。因此，本發(fā)明通過超臨界制備工藝，有效地富集了各藥材的主要成分，體現(xiàn)了該復(fù)方的綜合物質(zhì)基礎(chǔ)，同時，提取物很容易加成工各種劑型，同時使其實用性大大提高，改變了原方劑直接水提的單一用藥的限制，擴大了其使用范圍。試驗實施例2是提取物的抗炎實驗研究，對超臨界所制備的提取物，和原水提方劑進行比較，對抗炎、鎮(zhèn)痛效果，均優(yōu)于原方劑，表明提取物具有顯著的抗炎作用。實施例3是提取物的抗流感病毒實驗研究，表明提取物均有顯著抑制肺病變程度，顯示均有較好的抗流感病毒效果。擴大了原方劑的治療作用。根據(jù)本發(fā)明的再一個目的，本發(fā)明所述的提取物在制備預(yù)防和/或治療流感病毒中藥物的應(yīng)用，包括上述藥物的組合物均可以進一步包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。例如，一種藥物組合物可以是總黃酮提取物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑按照一定的配比混合而成；還可以是將總黃酮提取物、其它中藥提取物和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑按照一定的配比混合而成。上述藥物組合物可進一步按照常規(guī)制劑方法配制成可供給藥的形式，包括經(jīng)口或胃腸外給藥形式。在可供給藥的形式中，應(yīng)包含治療有效量的預(yù)防及治療流感病毒提取物。所謂"治療有效量"是指在該劑量下，本發(fā)明的提取物能夠改善或減輕疾病癥狀，或能夠抑制或阻斷疾病的發(fā)展?？晒┙o藥的組合物可以為片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑、貼劑、凝膠劑、粉劑或液體制劑(如口服或無菌胃腸外溶液或懸浮液)。這些可供給藥的組合物還可以根據(jù)需要制備成緩控釋制劑或靶向制劑?？诜o藥的形式可以為片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑等，它們可以含有常規(guī)賦形劑如粘合劑像糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸；壓片潤滑劑如硬脂酸鎂；崩解劑如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚維酮、羥乙酸淀粉鈉或微晶纖維素或藥學(xué)上可接受的潤濕劑如十二烷基硫酸鈉。液體組合物(如口服液體組合物)可以制備為乳液、糖漿劑或酏劑形式，或者將它們制備為干燥產(chǎn)物形式，在使用前，用水或其它適當?shù)娜苊饺芙?。此類液體制劑可以含有常規(guī)的添加劑，如懸浮劑像山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠、氫化可食用脂肪；乳化劑如卵磷脂、脫水山梨醇單油酸酯或阿拉伯膠；非水溶性溶媒(可以包括食用油)如杏仁油、分餾椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇的酯；防腐劑如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨醇；并且如果需要可以含有常規(guī)的矯味劑或著色劑。胃腸外組合物(如胃腸外給藥組合物)可以含有所述活性化合物和無菌溶媒，根據(jù)使用的濃度，所述活性化合物可以懸浮于或溶解于該溶媒中。制備胃腸外給藥的溶液時，可以將本發(fā)明的組合物溶于注射用水中，過濾除菌，然后灌裝于適當?shù)墓苤破炕虬碴持胁⒚芊?。最好將輔助劑如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑溶解于所述溶媒中。為增加穩(wěn)定性，可以將該組合物灌裝于管制瓶中后冷凍并真空去除水分。以基本相同的方法可以制備胃腸外懸浮液，但是所述活性化合物是懸浮于溶媒中而不是溶解于溶媒中，并且除菌不能通過過濾進行?？梢詫⑺龌衔锿ㄟ^暴露于環(huán)氧乙烷中滅菌，然后將其懸浮于無菌溶媒中。最好該組合物中含有表面活性劑或潤濕劑以有助于活性組分的均勻分布。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明通過超臨界制備工藝，能有效地富集總黃酮、總皂苷、總萜類成分。體現(xiàn)了原復(fù)方的綜合物質(zhì)基礎(chǔ)。主要有效成分顯著高于古方傳統(tǒng)工藝所制備所得的成分，該總黃酮提取物具有明顯的抗流感病毒的作用，其提取物與原湯劑相比，抗炎、抗流感病毒作用更顯著。同時，提取物很容易加成工各種劑型，可直接應(yīng)用于抗流感病毒藥物的開發(fā)。其實用性大大提高，改變了原方劑直接水提的單一用藥的限制，擴大了其使用范圍。具有制備工藝簡單、提取率高、成本低等特點。以下將結(jié)合實施例，對本發(fā)明進行較為詳細的說明。具體實施例方式實施例l"翹荷湯"提取物的制備取中藥材薄荷4.5公斤、連翹4.5公斤、生甘草3公斤、黑梔皮4.5公斤、桔梗9公斤、綠豆皮6公斤，在溫度為5(TC干燥3h;粉碎藥材，粒度在200目之間。再加入5夾帶劑甲醇0.6公斤，超臨界二氧化碳萃取的分離罐中進行萃取，萃取條件一級減壓分離壓力為5Mpa，溫度為4(TC，流量為1520L/h，萃取34h;二級減壓分離壓力為5Mpa，溫度為35t:。收集提取物所得為樣品l。該工藝技術(shù)突出優(yōu)點是(l)提取效率高；(2)有效地富集了主要活性成分，特別是對于萜類成分等，得到有效地富集，而原湯劑在直接煎煮基礎(chǔ)上，基本損失了大量的該類成分，使主藥連翹，薄荷的應(yīng)用效果，受到限制，且提取物體積小，提高了中藥的內(nèi)在質(zhì)量；(3)充分祛除了其多糖類等雜質(zhì)等；(4)減少了產(chǎn)品的吸潮性；(5)去除了大量的無機鹽、粘液質(zhì)等，從而增強了產(chǎn)品的穩(wěn)定性；(6)容易制備成外觀美觀的各種劑型；(7)工藝成本低。實施例2"翹荷湯"提取物的制備取中藥材薄荷4.5公斤、連翹4.5公斤、生甘草3公斤、黑梔皮4.5公斤、桔梗9公斤、綠豆皮6公斤，在溫度為6(TC干燥3h;藥材粉碎，粒度在60目之間。將干粉放置于提取罐中，加入夾帶劑乙醇15公斤，超臨界二氧化碳萃取的分離罐中進行一級減壓分離壓力為10Mpa，溫度為60°C;二級減壓分離壓力為10Mpa，溫度為50°C。收集提取物所得為樣品2實施例3"翹荷湯"按古方記載的傳統(tǒng)方法制備取中藥材薄荷4.5公斤、連翹4.5公斤、生甘草3公斤、黑梔皮4.5公斤、桔梗9公斤、綠豆皮6公斤，按傳統(tǒng)制備方法加水，加熱回流提取2次，提取液濃縮成干燥浸膏，作為樣品3。供樣品1，2比較使用。實施例4片劑(膠囊)劑制備將本發(fā)明制備實施例中樣品1或樣品2加入淀粉、微結(jié)晶纖維素，乳糖，糊精等輔料的一種或幾種混合物，混勻，制粒，壓片(填膠囊)，即為片劑或膠囊劑。作為治療及預(yù)防流行性感冒藥物。試驗實施例1各提取物的主成分含量分析下列質(zhì)量分析中所用樣品包括按實施例1的方法制備的樣品1，按實施例2的方法制備的樣品2，按實施例3的方法制備的樣品3。各樣品均低溫干燥至提取物，按生藥比折算計算含量。測定方法總黃酮以甘草苷為對照品，紫外分光光度法測定；揮發(fā)油含量按中國藥典所規(guī)定的揮發(fā)油測定方法；皂苷是按中國藥典中桔梗皂苷的測定方法，連翹苷是以中國藥典連翹藥材的高效液相分析方法測定的。結(jié)果見表1。表1.各樣品的含量測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>可見，樣品l，2中各成分均高于樣品3，有效地富集了各成分的含量。由此可見，與傳統(tǒng)制備工藝比較，該抗病毒提取物，主要有效成分顯著高于古方傳統(tǒng)工藝所制備所得的成分，其成分特征重量比為總黃酮含量大于6%，；皂苷含量大于15%，連翹苷含量大于0.3%，總揮發(fā)油含量大于2%。試驗實施例2提取物的抗炎實驗研究昆明小鼠50只，分為模型組、消炎痛(吲哚美辛)、樣品l、樣品2、樣品3共五組。每組動物各10只，各組小鼠連續(xù)灌胃給藥10天，末次給藥后于小鼠右耳涂布二甲苯0.02ml/只致炎。間隔3h后頸椎脫臼法處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑8mm打孔器在兩耳同一部位打下耳片并稱重。結(jié)果見表2。與模型組相比，陽性對照組、樣品l，2，3對小鼠耳腫脹度與陰性對照組有極顯著差異(p〈0.01);說明各樣品顯著的抗炎作用，同時，樣品l和2抗炎效果均強于樣口Q口口do表2.對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(x士s，n=10)組別劑量(g/kg)腫脹度(mg)模型組-8.05±2.12消炎通2.測03.45±1，60***樣品l0,453.46±1,70***樣品20.454,62±1.12**樣品30.905.08±1.04*與模型組相比，*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001實施例3提取物的抗流感病毒實驗研究采用A3型流感病毒液(H3N2)感染小鼠為模型，觀察三種樣品及陽性對照藥(病毒唑)對感染小鼠肺指數(shù)、肺病變程度的影響，結(jié)果見表3，表明三個樣品均有顯著抑制肺病變程度，顯示該方劑的三個樣品均有較好的抗流感病毒效果。表3.對流感病毒的作用(x±s，n=10)組別劑量(mg/kg)腫脹度(mg)模型組1.35士0.12病毒唑組801.能±1.60**凈羊？JJ160L05±1.70**才羊品2601.02±1.12**樣品360L38±1,04*與模型組相比，*p<0.05;**p<0.01;***p<0.001。權(quán)利要求一種抗病毒提取物，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準備藥材；通過超臨界制備工藝富集總黃酮、總皂苷、總萜類成分；其特征在于所述的抗病毒提取物中成分重量比總黃酮含量大于6％，皂苷含量大于15％，連翹苷含量大于0.3％，總揮發(fā)油含量大于2％。2.權(quán)利要求1所述的提取物的制備方法，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準備藥材；并包括下述方法步驟1)藥材烘干，干燥溫度為50°C±10°C，干燥時間34h;2)藥材粉碎成粗粉；3)藥材裝進超臨界萃取罐中，加入夾帶劑，萃取條件一級減壓分離壓力為510Mpa，溫度為4060。C，流量1520L/h的條件下進行萃取34h;二級減壓分離壓力為510Mpa，溫度為3550°C;4)提取物進行脫水，干燥。3.如權(quán)利要求2所述的提取物的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中粗粉粉碎粒度在60200目之間。4.如權(quán)利要求2所述的提取物的制備方法，其特征在于所述的夾帶劑選自甲醇、乙醇等有機溶劑；夾帶劑與粗粉質(zhì)量比為250:100。5.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，進一步包含藥學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。6.權(quán)利要求1所述的提取物在制備預(yù)防和/或治療流感病毒藥物中的應(yīng)用。全文摘要一種抗病毒提取物，先按重量組分薄荷4.5份、連翹4.5份、生甘草3份、黑梔皮4.5份、桔梗9份、綠豆皮6份準備藥材；通過下述方法步驟制備得到1)藥材烘干，干燥溫度為50℃±10℃，干燥時間3～4h；2)藥材粉碎成粗粉；3)藥材裝進超臨界萃取罐中，加入夾帶劑乙醇或甲醇，萃取條件一級減壓分離壓力為5～10Mpa，溫度為40～60℃，流量15～20L/h的條件下進行萃取3～4h；二級減壓分離壓力為5～10Mpa，溫度為35～50℃；4)提取物進行脫水，干燥。通過該超臨界制備工藝，能有效地富集總黃酮、總皂苷、總萜類成分。該抗病毒提取物，其成分特征重量比總黃酮含量大于6％，皂苷含量大于15％，連翹苷含量大于0.3％，總揮發(fā)油含量大于2％。具有抗炎、抗流感病毒作用更顯著，制備工藝簡單，提取率高，成本低等特點。文檔編號A61P31/16GK101690755SQ20091019022公開日2010年4月7日申請日期2009年9月25日優(yōu)先權(quán)日2009年9月25日發(fā)明者嚴啟新,李勇,李姿,高媛申請人:深圳海王藥業(yè)有限公司