專利名稱：：丹參素和丹酚酸b的組合物及其用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種以丹參素和丹酚酸B為活性成分的藥物組合物及其在心腦血管方面的藥理活性研究。技術背景丹參為常用屮藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。中國藥典(2005年版)規(guī)定丹參為唇形科植物丹參5^Wa肌7"o2T^f幼Bge.的干燥根及根莖。丹參具有祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩等功能，用于月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕積聚，胸腹剌痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠，肝脾腫大，心絞痛。丹參素和丹酚酸B是丹參中的最主要活性成份，具有多方面的藥理作用，二者有相同的藥理作用，也有不同的藥理作用。由于二者分子結構差異較大，故藥理作用的不同是必然的；即使相同的藥理作用，其作用機制也可能是不同的。將二者組合在一起，能起到互相彌補，取長補短的作用，使藥效更好。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>丹酚酸B的化學結構以丹參素和丹酚酸B為活性成分的藥物組合物及其藥理活性或在治療疾病方面的應用未見報到。本發(fā)明公開了一種以丹參素和丹酚酸B為活性成分的藥物組合物，并提供藥理實驗證明了該藥物組合物的藥理活性；藥理實驗表明，丹參素和丹酚酸B組合物的藥理活性好于丹參素的藥理活性和丹酚酸B的藥理活性，有顯著性差異。丹酚酸B的藥理作用銀杏葉提取物EGb761己經(jīng)成為美國市場上最暢銷的保健品之一，在歐洲一些國家己經(jīng)作為處方藥來治療一些與衰老相關的疾病，如AD(早老性癡呆)。中國醫(yī)學科學院藥物研究所張均田教授對丹酚酸B和EGb761的藥理作用進行了比較，無論是抗氧化、清除自由基、各種原因致細胞損傷的保護以及抗細胞凋亡等等，丹酚酸B的有效劑量為0.0070.7ug/ml，而EGb761為50100ug/ml，相差1001000倍，在MCAO模型二者均顯示抗腦缺血作用，丹酚酸B的有效劑量比EGb761低十幾倍之多。丹酚酸B對0-AP神經(jīng)毒性(AD的主要病因)的抑制作用強于EGb761，也強于褪黑素。丹酚酸B具有如此好的活性可能源于兩點強抗氧化活性和鈣拮抗作用。丹酚酸B的抗氧化活性是維生素E、甘露醇和EGb761的100倍。細胞內(nèi)鈣濃度過高和自由基生成過多是神經(jīng)元損傷、死亡的關鍵因素；丹酚酸B是一個強抗氧化劑，并且能消除細胞內(nèi)鈣超載，將其開發(fā)成治療老年癡呆藥物，無疑具有重要的理論意義和使用價值?？梢哉J為丹酚酸B是繼青蒿素、人參之后的又一個有國際影響的中藥[中國藥理通訊，2006;23(4):第十二屆全國神經(jīng)精神藥理學學術交流會大會報告。藥學學報，2006;41(8):706711。醫(yī)藥導報，2007;26(2):107110]。一、保護腦血管(1)鐵依賴性脂質(zhì)過氧化(IDLPO)在腦損傷的發(fā)生發(fā)展過程中起極其重要的作用。丹酚酸B對大鼠腦勻漿鐵依賴性脂質(zhì)過氧化有影響，能抑制大鼠腦勻漿丙二醛的生成，呈量效關系，提示作用機理與鐵鰲合有關(中華老年學雜志，1997年6月第17巻)。(2)谷氨酸(Glu)和P-淀粉樣蛋白[AP^c]可以引起神經(jīng)元NO的釋放增加，導致神經(jīng)元的損傷，產(chǎn)生神經(jīng)毒性，丹酚酸B能顯著增加神經(jīng)細胞損傷時的細胞活力，減少乳酸脫氫酶(LDH)釋放率，減少NO的釋放，達到保護神經(jīng)細胞的作用，有望治療老年癡呆[藥學學報，2000，35(12):881885]。G)線粒體是供應生物體內(nèi)能量的主要來源，腦缺血再灌注所引起的能量障礙主要與線粒體的功能損傷有關。丹酚酸B具有良好的抗氧化作用，可縮小局灶性腦缺血后梗賽面積。丹酚酸B可明顯抑制腦缺血再灌注所引起的腦線粒體內(nèi)SOD活性下降和GSH含量下降，同時降低線粒體損傷，發(fā)揮保護腦功能的作用(中國藥理通訊，2003年第二十巻第一期)。(4)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)可引起腦血管通透性升高，丹酚酸B可顯著抑制VEGF的血管通透作用，提示其對腦血管有一定的保護作用(解放軍藥學學報，2002年2月第18巻第l期)。二、保護肝臟(1)丹酚酸B可促進肝細胞增殖，抑制細胞的膠原生成，可抑制體外培養(yǎng)HSC(肝星狀細胞)的增生，這種抑制作用與抗氧化作用有一定的關系，提示丹酚酸B有一定的抗肝纖維化作用[屮華肝臟病雜志，1996年12月第4巻第4期；世界華人消化雜志，2002，10(3):317319]。(2)丹酚酸B抗肝纖維化的部分機理在于抑制了活化貯脂細胞增殖，并通過抑制貯脂細胞生成細胞外基質(zhì)而減少了膠原纖維在肝內(nèi)的沉積及干擾了狄氏間隙基底膜的形成而減輕了肝竇毛細胞血管化(中華肝臟病雜志，1996年6月第4巻第2期)。(3)丹酚酸B對于肝粘附性細胞，有促進其PGl2生成的作用，而對于肝粘附性細胞勻漿液中的環(huán)加氧酶則呈抑制作用，可能與丹酚酸B作為色氨酸樣輔助因子的作用有關。PGl2對肝血竇的微循環(huán)狀態(tài)有調(diào)節(jié)作用，而環(huán)加氧酶的抑制與抗炎癥作用有關，可部分說明丹酚酸B抗肝損傷的機制(中國中藥雜志，1994年第19巻第2期)。(4)四氯化碳體外損傷原代培養(yǎng)大鼠肝細胞的[311]胸腺嘧啶核苷摻入量顯著降低，培養(yǎng)液中ALT活性顯著增高，丹酚酸B能有效地阻抑細胞的這種病理變化(中國中藥雜志，1997年第22巻第5期)。(5)在人身上試驗表明，丹酚酸B可有效逆轉慢乙肝肝纖維化(組織學逆轉率達36.67%)，對血清HA含量的改善，4項纖維化血清學指標的綜合下降及B超積分變化優(yōu)于IFN-r。丹酚酸B和IFN-r均可改善慢乙肝患者癥狀體征和肝功能；未發(fā)現(xiàn)丹酚酸B的臨床不良反應(醫(yī)學研究通訊，2003年第32巻第2期)。(6)丹酚酸B抗大鼠D"半乳糖胺肝損傷，可顯著降低血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉移酶(AST)活性，減輕肝細胞壞死。提高肝非實質(zhì)細胞花生四烯酸代謝產(chǎn)物6-酮基-前列腺素Fia(6-keto-PGFia)、前列腺素D2(PGD2)及前列腺素總的生成量。表明丹鼢酸B可能是丹參抗肝損傷的主要成分，其提高肝非實質(zhì)細胞前列腺素(PGs)總的生成量可能是其抗肝損傷的機制之一(中國中西醫(yī)結合雜志，1993年第13巻第6期)。三、保護心血管1、動脈粥樣硬化(1)VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)可增強血管內(nèi)皮細胞的通透性，可能在動脈粥樣硬化(AS)的形成和發(fā)展過程中起一定作用。丹酚酸B對VEGF誘導的血管內(nèi)皮通透性升高有顯著的抑制作用，提示丹酚酸B對AS有治療作用[中國藥理學與毒理學雜志，2003，17(1):1923]。(2)泡沫細胞是動脈粥樣硬化(AS)斑塊內(nèi)出現(xiàn)的特征性病理細胞，在AS斑塊組織中，VEGF的表達明顯升高，在體外培養(yǎng)的U937泡沫細胞模型中發(fā)現(xiàn)，丹酚酸B可呈劑量依賴性的抑制泡沫細胞VEGF的表達，為丹酚酸B臨床應用于AS的預防和治療提供了進一步依據(jù)[藥學學報，2002，37(2):8689]。(3)丹酚酸B對腫瘤壞死因子a(TNF一a)損傷的大鼠微血管內(nèi)皮細胞(CMEC)具有直接保護作用，其作用可能與其穩(wěn)定細胞膜、抗脂質(zhì)過氧化有關[天津中醫(yī)，2002;19(6):3839]。2、心肌缺血再灌注(1)心肌缺血再灌注對心肌細胞可產(chǎn)生嚴重損傷，誘發(fā)心律失常，嚴重者可導致死亡。心肌缺血再灌注性損傷可以產(chǎn)生大量的氧自由基，進而導致心肌細胞膜的脂質(zhì)過氧化，而這種過氧化作用是導致心肌細胞再灌注損傷的重要原因之一。丹酚酸B具有很強的抗氧化作用，可以清除氧自由基，故對心肌缺血再灌注損傷具有保護作用(中國藥學雜志，2003年第38巻第8期；遼寧中醫(yī)學院學報，2004年第6巻第〗期)。(2)也有實驗表明，心肌細胞鈣超載和氧自由基增多是造成心肌缺血再灌注損傷的最主要原因之一，丹酚酸B可以抑制心肌細胞缺氧復氧過程中的C^+超載，是其發(fā)揮心肌缺血再灌注損傷心肌保護作用的機制之一[現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2004;13(1)]。(3)心臟微血管內(nèi)皮細胞(CMEC)是心臟缺血缺氧時首先和最易損傷的部位，因此，CMEC的保護作用研究在防治心肌缺血性疾病中具有十分重要的意義。丹酚酸B預處理可激活CMEC內(nèi)源性延遲保護機制，發(fā)揮了拮抗心肌缺血缺氧損傷效應[天津中醫(yī)，2002;19(1):4142]。(4)丹酚酸B能改善缺氧復氧引起的內(nèi)皮細胞損傷，增加內(nèi)皮細胞一氧化氮的釋放。丹酚酸B提高一氧化氮合成的這種機制可能與其改善內(nèi)皮細胞缺氧復氧損傷有關[ActaPharmacolSin2002;23(10):930936]。3、心肌梗死(1)丹酚酸B對犬心肌梗死有治療作用(中成藥，2004年第26巻第3期)。(2)丹酚酸B對大鼠心肌梗死過程中病理形態(tài)學有影響，可以減少心肌梗死面積，促進毛細血管的生長，加速梗死灶的修復，其減少心肌梗死灶的可能機制為提高細胞內(nèi)SOD的含量，減少自由基對心肌細胞的毒害作用，丹酚酸B是一種有效的抗氧化劑(天津中醫(yī)學院學報，2004年第23巻第1期)。4、血液流變學基礎及臨床研究顯示，缺血性心腦血管疾病患者血液粘度升高，降低血液粘度是防治缺血性心腦血管疾病的重要手段之一。丹酚酸B對家兔全血粘度、紅細胞壓積和聚集指數(shù)有明顯的降低作用(微循環(huán)學雜志，2003年01期)。丹參素的藥理作用一、抗動脈粥樣硬化作用(1)丹參素有抑制細胞內(nèi)源性膽固醇(Ch)合成的作用。它具有降低血膽固醇(Ch)、保護血管屏障、防止脂質(zhì)沉積及動脈粥樣硬化(AS)斑塊形成的作用。另外，丹參素還具有抗脂蛋白氧化作用，從而可防止氧化脂蛋白對細胞的損傷[中草藥，1991;22(1):2023]。(2)近年來，動脈粥樣硬化發(fā)生的氧化修飾脂蛋白學說受到世界各國學者的廣泛關注。本實驗所發(fā)現(xiàn)的丹參素具有抑制細胞氧化修飾LDL的作用，為丹參素進一步用于動脈粥樣硬化的防治提供了理論依據(jù)[南京醫(yī)科大學學報，1994;14(4):529531]。(3)丹參素能有效保護機體免受過亞硝酸根損傷，防止動脈粥樣硬化的形成；丹參素具有抑制細胞氧化修飾LDL的作用，其抗氧化能力與丹參素的量呈正相關，提示丹參素可用于動脈粥樣硬化的防治[中國現(xiàn)代應用藥學雜志，2002;19(2):132134]。—、保肝作用(1)丹參素對大鼠免疫性肝纖維化有明顯的防治作用。主要機制為丹參素對HSC(肝星狀細胞)明顯的增殖抑制作用[中華肝臟病雜志，2003;11(5):288290]。(2)氰化鉀致肝細胞損傷與自由基毒性作用密切相關，丹參素具有穩(wěn)定細胞膜、清除自由基的作用，故對實驗性肝細胞損傷具有保護作用[中西醫(yī)結合肝病雜志，1996;6(3):2932]。(3)丹參素能直接刺激肝細胞增殖，呈劑量依賴關系；丹參素對D"半乳糖胺致肝細胞損傷和壞死也有保護作用[南京醫(yī)科大學學報，1996;16(4):346348]。(4)內(nèi)毒素可直接導致肝細胞損傷，丹參素可通過增強SOD活力，減少NO的產(chǎn)生而發(fā)揮對內(nèi)毒素性肝損傷的保護作用[中西醫(yī)結合肝病雜志，1999;9(2):3032]。(5)丹參素具有抗TAA(硫代乙酰胺)肝損傷和刺激損傷后肝細胞再生的作用，其保護作用高于市場銷售的乳豬促肝細胞生長素(PHGF)[中西醫(yī)結合肝病雜志，1998，8(3):153155]。(6)多種肝病，特別是嚴重肝病的情況下，往往出現(xiàn)腸源性內(nèi)毒素血癥。丹參素通過降低腸源性內(nèi)毒素水平，改善肝臟微循環(huán)障礙，從而減輕急性重型肝損傷。丹參素可通過降低內(nèi)皮素(ET)含量減輕肝臟血管收縮，改善肝臟血液灌注。丹參素可通過抑制iNOS表達減少毒性作用NO產(chǎn)生，而促進eNOS表達誘生的NO發(fā)揮了改善微循環(huán)、抑制血小板聚集等保護作用，同時又減少ET的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)血管活性物質(zhì)ET、NO平衡，從而改善受損肝臟微循環(huán)[山西醫(yī)藥雜志，2006，35(2):108110;(6):507508]。(7)胰島素抵抗是引起非酒精性脂肪肝的一個重要因素，導致肝細胞的糖利用障礙；丹參素可以明顯改善脂肪肝細胞對葡萄糖的利用，提高對胰島素的反應性，降低胰島素抵抗的現(xiàn)象[世界華人消化雜志，2005;13(15):1卯71909]。(8)丹參素能明顯的改善非酒精性脂肪肝模型鼠的肝細胞功能，增強肝臟對外源性氧自由基的抵抗力。辛伐他汀雖能降低血清及組織脂質(zhì)過氧化水平，但肝內(nèi)脂質(zhì)含量卻明顯增加，ALT、AST較不用藥組顯著升高，肝病理檢查發(fā)現(xiàn)脂肪變明顯加重，說明其雖降血脂作用明顯，但對高脂血癥性脂肪肝反而增加其脂肪的沉積[江蘇醫(yī)藥，2005;31(10):787789]。三、抗炎及增強機體免疫功能(1)丹參素能激活單核吞噬細胞分泌TNF—a，IL—1，IL一6及IL一8等4種炎性細胞因子，同時還能抑制由內(nèi)毒素誘導的這4種因子的分泌。雖然丹參素能激活單核吞噬細胞分泌細胞因子，但所產(chǎn)生的量均顯著低于由內(nèi)毒素誘導所產(chǎn)生的量。因此推斷丹參素可能具有兩方面的調(diào)節(jié)作用，一方面能抗炎，另一方面能增強機體的免疫功能[中國免疫學雜志，1995;11(6):370372]。(2)丹參素能顯著抑制大鼠腹腔巨噬細胞產(chǎn)生PGE2(前列腺素)及TXB2(血栓素)，它的抗炎作用可能是抑制鈣內(nèi)流[中藥藥理與臨床，1990年04期]。(3)以往的研究表明，活血化瘀藥具有免疫調(diào)節(jié)等作用。丹參是常用的活血化瘀藥，本研究表明，丹參素對IL一2及IFN"r的分泌有促進作用，而糖皮質(zhì)激素氫化考地松同時對IL一2及IFN~r的分泌具有抑制作用。從而進一步證實了丹參素的免疫增強作用及糖皮質(zhì)激素的免疫抑制作用[天津中醫(yī)，1995;12(2):2324]。四、對心肌的作用(1)丹參素具有縮小心機梗死范圍和減輕病情的作用[中成藥研究，1981;(2):3537]。(2)丹參素具有對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用[中國病理生理雜志，1989;5(2):6569]。(3)"心肌缺血再灌注損傷"與心肌細胞鈣濃度大量增加有關，目前認為"鈣超載"是再灌注損傷的一個主要因素，細胞內(nèi)鈣超載是心肌缺血再灌注損傷的重要病理改變之一，被認為是細胞死亡的最后共同通路。丹參素對細胞內(nèi)鈣超載具有一定的防治作用，作用優(yōu)于SOD[中國病理生理雜志，1999;15(10):877879]。(4)再灌注心律失常的發(fā)生和防治，是心血管領域的研究熱點之一；再灌注性心律失常的氧自由基假說，得到許多臨床和動物實驗的證實。丹參素能明顯地降低再灌注性心律失常和外源性自由基誘導的心律失常發(fā)生率，這與丹參素能清除氧自由基和減輕細胞內(nèi)鈣超載有關[中國中醫(yī)藥科技，2000;7(3):171172]。(5)丹參素對大鼠心肌缺血/再灌注時線粒體發(fā)生的脂質(zhì)過氧化損害有保護作用；采用ESR自旋捕集技術發(fā)現(xiàn)丹參素對外源性氧自由基有清除作用，因而推測，丹參素可能作為一種氧自由基的清除劑保護心肌線粒體免受氧自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化損害[中國病理生理雜志，1990;6(6):420423]。(6)丹參素能通過抑制血管緊張素II(AngII)誘導的心肌細胞凋亡而產(chǎn)生心肌保護作用，具有防止心肌細胞肥大作用，從而防治心室肥厚[中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2006;4(6):494495]。五、改善微循環(huán)及抗凝作用(1)丹參素具有改善微循環(huán)障礙及降低血漿乳酸含量的作用[上海醫(yī)科大學學報，1987;14(1):2529]。(2)丹參素具有提高機體抗凝和纖溶活性的作用[上海第二醫(yī)科大學學報，19卯；10(3):208211]。(3)丹參素具有明顯的抗凝血及抑制體外血栓形成的作用[中西醫(yī)結合雜志，1983;3(5):297299]。(4)考察丹參素對血小板、白細胞和血管內(nèi)皮細胞表達細胞粘附分子的影響，結果表明丹參素可抑制血管內(nèi)皮細胞和粒細胞表達細胞粘附分子，這可能是丹參素發(fā)揮抗血栓形成作用的機制之一[中國藥理學通報，2000;16(6):682685]。六、對血管的作用(1)丹參素能顯著舒張豬離體冠狀動脈[藥學學報，1982;17(3):226228]。(2)丹參素具有抑制血小板合成與釋放TXA2等前列腺素類血管物質(zhì)的能力[中西醫(yī)結合雜志，1984;4(9):532565]。(3)丹參素具有擴張動脈的作用，并且可抑制血小板釋放收縮物質(zhì)；丹參素有拮抗低氧性肺血管收縮作用，表明丹參素可能為肺心病、成人t^吸窘迫綜合癥(ARDS)等危重疾病的治療提供幫助[中華麻醉學雜志，1994;14(3):163165]。(4)肢體移植及血管吻合等手術能造成缺血再灌注損傷，在很多離體再灌注的組織中，可觀察到有大量超氧自由基形成。丹參素能減少缺血再灌注血管H202的量，對氧自由基損傷有保護作用[上海醫(yī)科大學學報，1998;25(2):115117]。七、對血細胞的作用(1)丹參素能明顯抑制血小板的聚集性，而且在抑制血小板聚集劑量的丹參素作用下，血小板膜流動性明顯增加，表明丹參素治療冠心病有效，可能與糾正冠心病患者血小板膜的分子缺陷、增加血小板膜的流動性有關[中藥藥理與臨床，1990;6(4):3134]。(2)丹參素可減少紅細胞的破壞，其作用途徑是提高紅細胞的負電荷、使彼此不易積聚，激活纖溶酶系統(tǒng)，增加紅細胞膜的機械強度[山東醫(yī)科大學學報，1991;29(3):237239]。(3)丹參素具有鈣拮抗作用，通過抑制紅細胞膜上的電壓依賴通道，抑制紅細胞的鈣內(nèi)流，使細胞內(nèi)鈣水平降低。[長治醫(yī)學院學報，1997;11(2):106107]。(4)丹參素能明顯抑制由ADP誘導的大鼠血小板體外聚集活性，延長電刺激大鼠頸總動脈后血栓形成時間，降低"血瘀"大鼠全血粘度、血漿粘度、紅細胞壓積、紅細胞電泳時間、卡松屈服應力以及紅細胞聚集指數(shù)，改善機體血液流變性。丹參素能明顯降低血液"濃、粘、聚、凝"狀態(tài)，具有良好的活血化瘀作用[中成藥，2003;25(8):637639〗。八、保護腦血管(1)丹參素能改善大腦中動脈栓塞所致腦缺血大鼠的行為障礙，減少腦缺血區(qū)梗死面積[中草藥，2005;36(7):10411043]。(2)丹參素可抑制缺氧/缺糖損傷所致的線粒體膜電位和活性的降低，從而具有穩(wěn)定線粒體膜電位的作用，抑制神經(jīng)細胞凋亡的發(fā)生，對腦缺血性損傷時的神經(jīng)細胞具有保護作用[中華中醫(yī)藥雜志，2006;21(6):329332]。(3)腦組織缺血性損傷過程中存在著神經(jīng)細胞凋亡，細胞內(nèi)<^2+超載是缺血性腦損傷的發(fā)病機制之一，被認為是凋亡的始動因素。丹參素能抑制細胞內(nèi)Ca"升高，可減輕細胞損傷的程度，對缺血性損傷的神經(jīng)細胞具有保護作用[中草藥，2004;35(8):921924]。
發(fā)明內(nèi)容1、本發(fā)明提供了一種以丹參素和丹酚酸B為活性成分的藥物組合物，其重量比為1:1010:1，優(yōu)選重量比為1:22:1，1:1.51.5:1，1:1.2L2:1，1:1。2、該藥物組合物中，丹參素和丹酚酸B還可以以鹽的形式存在，優(yōu)選為鈉鹽和鎂鹽。3、該藥物組合物中，丹參素和丹酚酸B的純度或丹參素鹽和丹酚酸B鹽的純度大于或等于80%;優(yōu)選丹參素和丹酚酸B的純度或丹參素鹽和丹酚酸B鹽的純度大于或等于90%;進一步優(yōu)選丹參素和丹酚酸B的純度或丹參素鹽和丹酚酸B鹽的純度大于或等于98%。4、該藥物組合物可用于治療冠心病、心絞痛、缺血性腦血栓、動脈粥樣硬化、心肌缺血或心肌梗死，慢性乙肝肝纖維化、脂肪肝、老年癡呆癥、癌癥等。5、該藥物組合物可制成注射劑、口服制劑和外用制劑。注射劑包括水針劑、粉針劑和輸液劑；口服制劑包括片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、顆粒劑、口服液、膠丸、水丸；外用制劑包括透皮吸收制劑；也可制成控釋制劑和緩釋制劑。6、本發(fā)明所述的丹參素和丹酚酸B及其鹽可以用任何一種方法制備，對制備方法沒有任何限制。7、本發(fā)明進行了藥理試驗，證明了以丹參素和丹酚酸B為活性成分的藥物組合物在治療心腦血管疾病方面的醫(yī)藥用途。具體實施方式下述各實施例僅用于說明本發(fā)明而非對本發(fā)明的限制實施例一丹參素鈉的制備按專利方法制備，丹參素鈉純度大于或等于98%。專利申請?zhí)?00710166154.8
專利名稱：丹參素鈉純品的制備方、法丹參(個子貨)3kg，加水煮3次，第一次加水7倍量，煮8小時，后二次各加水5倍量，各煮4小時，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫，加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為50%;于室溫放置12小時后，過濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為80%，于室溫放置12小時后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加入4倍量的水，邊加邊攪拌，放置1^2小時，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(AB-8，800g)，用水洗脫，收集洗脫液，洗脫液上聚酰胺柱(60~100目，250g)，用水洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至適量，拌硅膠1000g(100~200目)，至烘箱中烘干(65'C)。硅膠裝柱，用乙酸乙酯甲酸(50:0.1)洗硅膠柱，收集洗脫液，回收至干，得干膏。取干膏，加甲醇溶解，用碳酸氫鈉水溶液調(diào)PH值至弱堿性，放置，析晶，得丹參素鈉結晶(丹參素鈉含量為98.85%)。實施例二丹酚酸B的制備按專利方法制備，丹酚酸B純度大于或等于98%。專利申i青號200710166155.2
專利名稱：丹酚酸B純品的制備方法丹參個子貨3kg，加鹽酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸漬20次，每次IO小時，過濾，濾液上聚酰胺(60~100目，1kg)柱，上完各次酸水浸漬液后，用2—3%乙醇水溶液洗聚酰胺柱除雜質(zhì)，然后用水洗色譜柱，將醇洗凈后，用0.03%碳酸氫鈉水溶液洗色譜柱，收集洗脫液，用鹽酸調(diào)洗脫液使PH值小于2，上大孔吸附樹脂(AB—8，2kg)柱，上完大孔吸附樹脂柱后，用10%乙醇水溶液洗樹脂柱除雜質(zhì)，再用95%乙醇洗樹脂柱，收集95%乙醇洗脫液，回收至干，得干粉A。取干粉A，加丙酮15倍量溶解，過濾，回收濾液至干，得干粉B;取干粉B，加乙酸乙酯15倍量溶解，過濾，回收濾液至干，得干粉C。取干粉C，加50%甲醇水溶液適量溶解，上SephadexLH-20柱，用50%甲醇水溶液洗色譜柱，根據(jù)TLC合并洗脫液，回收至干，得干粉D(丹酚酸B含量為99.35%)。實施例三制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的凍干粉針取丹參素40g，丹酚酸B40g,溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成每支含丹參素40mg，丹酚酸B40mg的凍干粉針。實施例四制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素80g，丹酚酸B80g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例五制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的凍干粉針取丹參素13g，丹酚酸B65g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成每支含丹參素13mg，丹酚酸B65mg的凍干粉針。實施例六制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的凍干粉針取丹參素65g，丹酚酸B13g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成每支含丹參素65mg，丹酚酸B13mg的凍干粉針。實施例七制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的凍干粉針取丹參素17g，丹酚酸B68g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成每支含丹參素17mg，丹酚酸B68mg的凍干粉針。實施例八制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的凍干粉針取丹參素68g，丹酚酸B17g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成每支含丹參素68mg，丹酚酸B17mg的凍干粉針。實施例九制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素40g，丹酚酸B120g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，60。C以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素120g，丹酚酸B40g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十一制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素46g，丹酚酸B115g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十二制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素115g，丹酚酸B46g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十三制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素80g，丹酚酸B88g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十四制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素88g，丹酚酸B80g，淀粉160g,糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十五制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素70g，丹酚酸B91g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十六制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素91g，丹酚酸B70g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十七制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素65g，丹酚酸B91g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十八制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素91g，丹酚酸B65g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，60。C以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例十九制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素60g，丹酚酸B96g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素96g，丹酚酸B60g，淀粉160g，糊精(粉)20g,混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十一制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素60g，丹酚酸B102g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十二制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素102g，丹酚酸B60g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十三制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素55g，丹酚酸B99g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十四制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素99g，丹酚酸B55g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十五制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素60g，丹酚酸B114g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十六制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑，取丹參素114g，丹酚酸B60g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十七'制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素50g，丹酚酸B105g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十八制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素105g，丹酚酸B50g，淀粉160g，糊精(粉)20g,混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例二十九制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素50g，丹酚酸B110g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素110g，丹酚酸B50g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十一制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素50g，丹酚酸B115g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十二制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素115g，丹酚酸B50g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十三制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素45g，丹酚酸B108g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十四制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素108g，丹酚酸B45g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，60'C以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十五制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素45g，丹酚酸B117g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十六制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素117g，丹酚酸B45g,淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十七制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素40g，丹酚酸B108g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十八制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素108g，丹酚酸B40g，淀粉160g,糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例三十九制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素40g，丹酚酸B112g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例四十制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素112g，丹酚酸B40g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例四H^—制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素40g，丹酚酸B116g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例四十二制備以丹參素和丹酚酸B為活性成分的片劑取丹參素116g，丹酚酸B40g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例四十三丹參素鈉的制備丹參3kg，加水煮3次，第一次加水7倍量，煮8小時，后二次各加水5倍量，各煮4小時，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫，加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為50%;于室溫放置12小時后，過濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為80%，于室溫放置12小時后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加入4倍量的水，邊加邊攪拌，放置l一2小時，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(AB-8，800g)，用水洗脫，收集洗脫液，洗脫液上聚酰胺柱(60~100目，250g)，用水洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至適量，拌硅膠1000g(100~200目)，至烘箱中烘干(65°C)。硅膠裝柱，用乙酸乙酯甲酸(50:0.1)洗硅膠柱，收集洗脫液，回收至干，得干粉，丹參素鈉含量為92.27%。實施例四十四丹參素鈉的制備丹參3kg，加水煮3次，第一次加水7倍量，煮8小時，后二次各加水5倍量，各煮4小時，過濾，合并三次濾液；濃縮至適量，冷卻至室溫，加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為50%;于室溫放置12小時后，過濾，濾液濃縮至適量，冷卻至室溫；加入95%乙醇，邊加邊攪拌，至溶液含醇量為80%，于室溫放置12小時后，過濾；濾液濃縮至適量，冷卻至室溫，加入4倍量的水，邊加邊攪拌，放置l一2小時，過濾；濾液上大孔吸附樹脂柱(AB-8，800g)，用水洗脫，收集洗脫液，洗脫液上聚酰胺柱(60~100目，250g)，用水洗脫，收集洗脫液；濃縮洗脫液至干，得干粉，丹參素鈉含量為81.86%。實施例四十五丹酚酸B的制備丹參3kg，加鹽酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸漬20次，每次10小時，過濾，濾液上聚酰胺(60—100目，lkg)柱，上完各次酸水浸漬液后，用2—3%乙醇水溶液洗聚酰胺柱除雜質(zhì)，然后用水洗色譜柱，將醇洗凈后，用0.03%碳酸氫鈉水溶液洗色譜柱，收集洗脫液，用鹽酸調(diào)洗脫液使PH值小于2，上大孔吸附樹脂(AB—8，2kg)柱，上完大孔吸附樹脂柱后，用10%乙醇水溶液洗樹脂柱除雜質(zhì)，再用50%乙醇洗樹脂柱，收集50%乙醇洗脫液，回收至干，得干粉A。取干粉A,加丙酮15倍量溶解，過濾，回收濾液至干，得千粉B;取干粉B，加乙酸乙酯15倍量溶解，過濾，回收濾液至干，得干粉d酚酸B含量為91.16°/。。實施例四十六丹酚酸B的制備丹參3kg，加鹽酸水溶液(PH值小于1.5)20倍量，浸漬20次，每次IO小時，過濾，濾液上聚酰胺(60—100目，lkg)柱，上完各次酸水浸漬液后，用2—3%乙醇水溶液洗聚酰胺柱除雜質(zhì)，然后用水洗色譜柱，將醇洗凈后，用0.03%碳酸氫鈉水溶液洗色譜柱，收集洗脫液，用鹽酸調(diào)洗脫液使PH值小于2，上大孔吸附樹脂(AB—8，2kg)柱，上完大孔吸附樹脂柱后，用10%乙醇水溶液洗樹脂柱除雜質(zhì)，再用70%乙醇洗樹脂柱，收集70%乙醇洗脫液，回收至干，得干粉A，丹酚酸B含量為82.95M。實施例四十七制備以丹參素(丹參素鈉含量為92.27%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為91.16%)為活性成分的凍干粉針取丹參素40g，丹酚酸B40g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成凍干粉針。實施例四十八制備以丹參素(丹參素鈉含量為92.27%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為91.16%)為活性成分的片劑取丹參素80g，丹酚酸B80g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例四十九制備以丹參素(丹參素鈉含量為81.86%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為82.95%)為活性成分的凍干粉針取丹參素13g，丹酚酸B65g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，、凍干，制成凍干粉針。實施例五十制備以丹參素(丹參素鈉含量為81.86%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為91.16%)為活性成分的凍干粉針取丹參素65g，丹酚酸B13g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成凍干粉針。實施例五十一制備以丹參素(丹參素鈉含量為92.27%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為82.95%)為活性成分的凍干粉針取丹參素17g，丹酚酸B68g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)PH值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成凍干粉針。實施例五十二制備以丹參素(丹參素鈉含量為81.86%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為82.95%)為活性成分的凍干粉針取丹參素68g，丹酚酸B17g，溶于5000ml注射用水中，加入30g甘露醇，攪拌溶解，加入氫氧化鈉調(diào)ra值至47之間，超濾，得到無熱源的澄清液，凍干，制成凍干粉針。實施例五十三制備以丹參素(丹參素鈉含量為81.86%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為82.95%)為活性成分的片劑取丹參素40g，丹酚酸B120g,淀粉160g，糊精(粉)20g，混勾，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例五十四制備以丹參素(丹參素鈉含量為92.27%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為82.95%)為活性成分的片劑取丹參素120g，丹酚酸B40g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。實施例五十五制備以丹參素(丹參素鈉含量為81.86%)和丹酚酸B(丹酚酸B含量為91.16%)為活性成分的片劑取丹參素46g，丹酚酸B115g，淀粉160g，糊精(粉)20g，混勻，制成顆粒，6(TC以下干燥，加入硬脂酸鎂6g，壓制成1000片，包糖衣，即得。藥理試驗藥物A是丹參素鈉，純度是98.85%;藥物B是丹酚酸B,純度是99.35%;藥物A、B由北京科士藍醫(yī)藥技術有限公司提供。試驗例一藥物A、B不同配比對大鼠離體心臟冠脈流量的影響1.實驗材料.1實驗儀器及試劑Powerlab/8spLangendorff離體心臟灌流系統(tǒng)，ADInstrumentPtyLtd(澳大利亞)。Krebs-Henseleit液，其組成為(mmol/L):NaCl118，KC14.7,MgS04*7H201.2，CaCl22.0，NaHCO320，KH2P041.2，Glucose11.1，PH值7.2-7.4。1.2受試藥物及配制藥物兩種，編號為A、B;由北京科士藍醫(yī)藥技術有限公司提供，批號20071103。實驗前藥物A、B用Krebs-Henseleit液配成A:B分別為lOmg:10mg/ml、6.66mg:13.33mg/ml、5mg:15mg/ml、13.33mg:6.66mg/ml、15mg:5mg/ml、20mg:Omg/ml、Omg:20mg/ml的藥液。按A:B分另iJ為2mg:2mg、1.33mg:2.66mg、lmg:3mg、2.66mg:133mg、3mg:lmg、4mg:Omg、Omg:4mg/心臟給藥，給藥體積為0.2ml。1.3實驗動物健康Wistar大鼠，雄性，體重350g土30g，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。2.實驗方法2.1分組方法實驗分為藥物A組、藥物B組和A+B藥物組，A+B藥物組包括1:1配比組、1:2配比組、1:3配比組、2:1配比組、3:1配比組。共設7組，每組14只大鼠。分組方法、藥物劑量及給藥濃度見表l。表l實驗分組方法<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>2.2實驗操作方法大鼠斷頭處死，迅速取出心臟，置于4"K-H液中，輕輕排出殘留血液，將心臟連接到灌流裝置并固定，開始灌流，灌流液維持37°C，并通入95%的氧氣。待心電平穩(wěn)后，將灌注壓調(diào)節(jié)在60-70ramHg進行穩(wěn)壓灌流，穩(wěn)定后記錄給藥前冠脈流量，經(jīng)給藥孔緩慢注入0.2ml/心臟配制好的藥液，給藥完畢后立即記錄上述各項指標，持續(xù)觀察6分鐘。23檢測指標灌注壓力(mmHg);心率(次/分)；給藥前及給藥后即刻、1、2、3、4、5分鐘冠脈流量(ml/min)、冠脈流量變化率(％)。2.4統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)用均數(shù)土標準差G±s)表示，采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，組間變化率比較采用one-wayANOVA分析，前后實測值采用配對f檢驗，戶<0.05為有顯著性差異。3.結果3.1各組藥物對大鼠離體心臟心率的影響實驗前將灌注壓調(diào)節(jié)在60-70mmHg進行穩(wěn)壓灌流，藥物對大鼠離體心臟心率無顯著影響，結果見表2。表2給藥前后各組大鼠離體心臟灌注壓力、心率<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>3.2各組藥物對冠脈流量的影響給藥前各組之間冠脈流量無顯著性差異(/^>0.05);給藥后各組大鼠離體心臟冠脈流量均有不同程度的升高，與給藥前相比，差異有統(tǒng)計學意義(尸<0.05或尸<0.01)，給藥后即刻、1、2、3、4分鐘時，各配比組與單用藥物A、B相比有顯著性差異(尸<0.05或尸<0.01);A+B藥1:1配比組有優(yōu)于其它組的趨勢；結果見表3。4.結論在升高大鼠離體心臟冠脈流量方面，由A、B兩個藥物組成的5個配比(l:l、1:2、1:3、2:1、3:1)組中，以1:1配比組為優(yōu)。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>A與B藥物不同配E對小鼠常壓耐缺氧的影響1.實驗材料1.1動物KM小鼠，雌雄各半，20-22g。由中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供，合格證號SCXK(京)2005-0013。1.2藥品藥物兩種，編號為A、B。由北京科士藍醫(yī)藥技術有限公司提供，批號20071103。心得安(10mg/片)，天津力生制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號0411015。1.3試劑凡士林，天津市石油化學實驗廠，批號071019。鈉石灰，上海市納輝干燥試劑廠，批號20040724。2.實驗方法2.1A、B藥單味給藥對小鼠常壓耐缺氧的影響小鼠100只，雌、雄各半，按體重、性別隨機分為10組，每組10只。分別設空白對照組，A、B藥單味藥給藥組劑量分為72mg/kg、36mg/kg、18mg/kg、9mg/kg組，陽性對照藥心得安50mg/kg組。A、B藥組在實驗前用0.9%的氯化鈉配制成相應濃度的溶液，濃度分別為3.6mg/ml、1.8mg/ml、0.9mg/ml、0.45mg/ml，心得安濃度為2.5mg/ml。按體重0.2ml/10g腹腔給藥，每日一次，連續(xù)給藥7天，空白對照組給予等體積的0.9%氯化鈉。于末次給藥后0.5h，取各組體重相近小鼠各一只，作為同批檢測動物。將小鼠迅速放入盛有15g鈉石灰的250ml廣口磨口瓶內(nèi)，每瓶一只(密封)，立即秒表計時，記錄小鼠因缺氧而死亡時間。以最后一次張口喘氣為死亡時間，觀察小鼠的存活時間，計算存活時間延長百分率[1]。存活吋間延長百分率=給藥組平均存活時間-對照組平均存活時間,100^對照組平均存活時間2.2A、B藥不同配比對小鼠常壓耐缺氧的影響小鼠140只，雌、雄各半，按體重、性別隨機分為14組，每組10只。分別設空白對照組、A+B給藥組、陽性對照藥心得安50mg/kg組。給藥組劑量設置A、B藥按3個配比給藥，每個配比各設四個劑量組，1:l配比，給藥劑量為72(36+36)mg/kg、36(18+18)mg/kg、18(9+9)mg/kg、9(4.5+4.5)mg/kg。1:2配比，給藥劑量為72(24+48)mg/kg、36(12+24)mg/kg、18(6+12)mg/kg、9(3+6)mg/kg。2:1配比，給藥劑量為72(48+24)mg/kg、36(24+12)mg/kg、18(12+6)mg/kg、9(6+3)mg/kg組。A、B藥在實驗前用0.9%的氯化鈉配制成相應濃度的溶液，三個配比給藥濃度分別為3.6mg/ml、1.8mg/ml、0.9mg/ml、0.45mg/ml，心得安濃度為2.5mg/ml。按體重0.2ml/10g腹腔給藥，每日一次，連續(xù)給藥7天，空白對照組給予等體積的0.9%氯化鈉(檢測方法同上)。2.3統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)士標準差(^±0表示，組間比較采用t檢驗，顯著水平以0.05和0.01為標準。3.實驗結果3.1A、B藥單味給藥對小鼠常壓耐缺氧的影響A、B藥單味腹腔給藥7天，與空白對照組比較，均無明顯延長小鼠常壓耐缺氧時間作用(P>0.05)。結果見表l。表1A.B藥單味給藥對小鼠常壓耐缺氧的影響(x±s)(n=l0)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>注與空白對照組比較，**P<0.01。3.2A、B藥不同配比對小鼠常壓耐缺氧的影響A+B藥物腹腔給藥7天，與空白對照組比較，1:l配比，其中72(36+36)mg/kg、36(18+18)mg/kg組均不同程度延長小鼠常壓耐缺氧時間，延長率分別為21,4%、30.9%(P<0.05-0.01)。2:1配比，其中72(48+24)mg/kg、9(6+3)mg/kg組，延長率分別為24.4%、16.3%(P<0.05)。心得安能夠明顯延長小鼠常壓耐缺氧時間，延長率為71.4%(PO.Ol)。結果見表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>2.1動物實驗動物成年健康SD大鼠，雄性，體重(250±20)g。飼養(yǎng)于室內(nèi)通風柜內(nèi)，恒溫(22±2)°C，自然晝夜，自由食水。動物合格證編號SCXK(京)2004—0001。2.2分組及給藥藥物兩種，編號為A、B。由北京科士藍醫(yī)藥技術有限公司提供，批號20071103。大鼠按體重分組，隨機分為6組，每組10只。1)正常對照組；2)假手術組；3)模型組；4)受試藥A&B高劑量組A:B=36mg/kg:36mg/kg5)受試藥A&B中劑量組A:B=18mg/kg:18mg/kg6)受試藥A&B低劑量組A:B=9mg/kg:9mg/kg給藥方法術前禁食過夜，自由飲水。術后給藥7天，末次給藥后lh取材。2.3動物模型制備動物以戊巴比妥腹腔注射麻醉(30mg/kg)，仰位固定，以標準II導聯(lián)監(jiān)測動物心電圖；切開氣管，插入氣管插管，接動物人工呼吸機行人工呼吸(90次/分，呼吸比值1.5:1);左側第45肋間開胸，破開心包膜，暴露心臟，于冠狀動脈前降支根部穿線(3/8弧帶針縫合線，0/3尼龍線)，備結扎用；穿線后穩(wěn)定10分鐘，結扎(無ST段及T波改變者淘汰)，縫合胸壁，恢復自然呼吸。2.4主要儀器16道生理記錄儀(MP-150，美國BIOPAC);AE200型電子分析天平(上海，梅特勒-托利多儀器有限公司)。2.5統(tǒng)計學處理用SPSSIO.O軟件包進行統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)用(3f±,s)表示，組間比較應用t檢驗，P<0.05為顯著性差異，P<0.Ol為非常顯著性差異。2.6指標檢測大鼠心肌梗塞面積的測定末次給藥后lh取材，摘取心臟，放置-2(TC冰箱30min后取出，沿心臟結扎線以下橫切6片，置W紅四氮唑(TTC)磷酸緩沖液中染色10-15min(37'C水浴)。肉眼觀察，梗死區(qū)呈灰白色，未梗死區(qū)呈紅色。沿壞死組織邊緣分離將梗死心肌組織與未梗死心肌組分別稱重，以梗死心肌占整個心臟重量的百分比表示梗死范圍。3.結果A:B(1:1比例)藥物對大鼠心肌梗塞面積的影響大鼠結扎冠狀動脈前降支后心肌缺血明顯，模型組大鼠心肌壞死區(qū)重量分別占左心室和全心臟重量的18.49%，13.96%，給予A:B(1:1比例)藥物7天后心肌缺血情況均有不同程度的改善，主要以A:B(l:1比例)藥物72mg/kg劑量效果顯著，與模型組比較P〈0.05。見表l，表2。表lA:B(1:1比例)藥物對大鼠心肌梗塞面積的影響(X土S，N=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表2A:B(1:l比例)藥物對大鼠心肌梗塞面積的影響(X±S，N=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>與模型組比較*P<0.05。4.小結釆用結扎大鼠冠狀動脈前降支造成心肌缺血模型，灌胃給A&B藥物1:l配比7天(按著72mg/kg、36mg/kg、18mg/kg劑量)。結果顯示A:B(1:1比例)藥物72mg/kg劑量組能夠減輕心肌缺血程度，與模型組比較差異顯著(P〈0.05);5.結論A&B藥物1:1配比在72mg/kg劑量能夠減輕心肌梗死面積，A:B(1:1比例)在72mg/kg劑量有一定的抗大鼠心肌缺血作用。試驗例四丹參素和丹酚酸B組合物對大鼠局灶性腦缺血影響的實驗研究摘要采用三氯化鐵局部貼敷大腦中動脈造成局灶性腦缺血損傷模型，通過對模型大鼠神經(jīng)癥狀和腦梗塞范圍的測定，探討受試藥對模型大鼠的保護作用。結果表明，丹參素和丹酚酸B組合物于術后30分鐘靜脈注射、術后2小時和23小時腹腔注射可以明顯改善造模后6小時和24小時的神經(jīng)癥狀，明顯縮小模型動物腦血栓形成24小時的腦梗塞范圍(P<0.01)。結論丹參素和丹酚酸B組合物可通過抑制腦血栓形成，減輕局灶性腦缺血損傷，其療效好于丹參素組和丹酚酸B組。實驗目的觀察丹參素和丹酚酸B組合物對大鼠大腦中動脈阻斷造成的大鼠局灶性腦缺血的影響。實驗材料一、動物SD大鼠，雄性，體重200-220g，合格證號SCXK(京)2004-0001，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。二、藥品與試劑受試藥A是丹參素，純度是98.85y。；B是丹酚酸B，純度是99.35%;A+B組中A:B-1:1。受試藥由北京科士藍醫(yī)藥技術有限公司提供。試劑紅四氮唑(TTC),為淡黃色粉末，北京馬氏精細化學品有限公司產(chǎn)品，批號011102。三、儀器XTT實體顯微鏡，云南光學儀器廠產(chǎn)品；AEG-220型電子分析天平，日本Shimadzu公司產(chǎn)品；307-6臺式牙科車，上海齒科醫(yī)械廠產(chǎn)品；HZQ-C空氣浴振蕩器，哈爾濱東明醫(yī)療儀器廠產(chǎn)品。實驗方法和結果一、分組及給藥實驗動物按體重隨機分為五組，即假手術組、模型對照組、A組、B組、A+B組。各組動物均于術后30分鐘舌下靜脈給藥，術后2小時和23小時腹腔注射給藥二次。假手術組和模型對照組給予等容積的生理鹽水。注射劑量采用0.4ml/100g體重。二、大腦中動脈血栓模型制作大鼠腹腔注射10X水合氯醛溶液(350mg/kg)麻醉，右側臥位固定，在眼外眥和外耳道連線中點作一弧形切口，長約L5cm，夾斷顳肌并切除，暴露顳骨，于實體顯微鏡下，用牙科鉆在顴骨與顳鱗骨接合處靠近口側lmm處作一直徑2.5mm的骨窗，清理殘渣，暴露大腦中動脈(位于嗅束及大腦下靜脈之間)，置一小片塑料薄膜保護血管周圍組織。將吸有50%氯化鐵溶液IO^iL的小片定量濾紙敷在此段大腦中動脈上，30min后取下濾紙，用生理鹽水沖洗局部組織，逐層縫合，回籠飼養(yǎng)。室溫控制在24。C。假手術組除不滴加氯化鐵溶液外，其余手術步驟同模型照。三、神經(jīng)癥狀評分標準_對試驗動物在術后24h，進行行為檢測。評分標準①提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱前伸，記為0分；如手術對側前肢出現(xiàn)肩屈曲、肘屈曲、肩內(nèi)旋或兼具，記為1分。②將動物置于平面上，分別推雙肩向?qū)纫苿?，檢查阻力。如雙側阻力對等且有力，記為0分；如手術對側阻力下降，記為1分。③將動物兩前肢置一金屬網(wǎng)上，觀察肌張力。雙側肌張力對等且有力為O分；手術對側前肢肌張力下降記為1分。④提鼠尾，動物有不停地向手術對側旋轉者，記為1分。根據(jù)以上標準評分，滿分為4分，分數(shù)越高，動物的行為障礙越嚴重。四、腦梗塞范圍的測定動物經(jīng)行為評分后，斷頭取腦。去掉嗅球、小腦和低位腦干后的剩余部分在4°C以下冠狀切成5片，并迅速將腦片置于TTC染液中(每5ml染液中含4%TTC1.5ml，lMK2HP040.1ml，其余加蒸餾水至刻度)，37。C避光溫孵30分鐘，取出后置于10X甲醛液中避光保存24h。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細挖下稱重，以梗塞組織重量占全腦重量及患側腦重量的百分比作為腦梗塞范圍。五、結果上述實驗結果用x^表示，統(tǒng)計學檢驗采用組間配對比較f檢驗，結果見表l和表2。表l受試藥對MCAT大鼠神經(jīng)癥狀的影i"向(±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>表2受試藥對MCAT大鼠腦梗塞范圍的影響(±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>注與模型對照組相比，*P<0.05，**P<0.01小結從上表可以看出，A+B、A、B于術后30分鐘靜脈注射、術后2小時和23小時腹腔注射均可以明顯改善造模后6小時和24小時的神經(jīng)癥狀；且A+B、A、B還可以明顯縮小模型動物腦血栓形成24小時的腦梗塞范圍(PO.Ol，P<0.05，P<0.05)。結論A+B、A、B均可通過抑制腦血栓形成，減輕局灶性腦缺血損傷，而且A+B組的療效好于A組和B組。權利要求1、一種以丹參素和丹酚酸B為活性成分的藥物組合物，其特征在于，重量比為1∶10～10∶1。2、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，優(yōu)選重量比為1:22:1。3、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，優(yōu)選重量比為1:1.51.5:1。4、根據(jù)權利要求l所述的組合物，其特征在于，優(yōu)選重量比為1:1.21.2:1。5、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，優(yōu)選重量比為l:l。6、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，丹參素和丹酚酸B還可以以鹽的形式存在。7、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，丹參素鹽和丹酚酸B鹽優(yōu)選為鈉鹽和鎂鹽。8、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，丹參素和丹酚酸B的純度或丹參素鹽和丹酚酸B鹽的純度大于或等于80%。9、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，丹參素和丹酚酸B的純度或丹參素鹽和丹酚酸B鹽的純度大于或等于90%。10、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，丹參素和丹酚酸B的純度或丹參素鹽和丹酚酸B鹽的純度大于或等于98%。11、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，可用于治療冠心病，心絞痛，缺血性腦血栓，動脈粥樣硬化，心肌缺血或心肌梗死，慢性乙肝肝纖維化，脂肪肝、老年癡呆癥和癌癥等。12、根據(jù)權利要求1所述的組合物，其特征在于，可制成藥劑學上所說的任何一種劑型，可制成注射劑、口服制劑和外用制劑；注射劑包括水針劑、粉針劑和輸液劑，口服制劑包括片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、顆粒劑、口服液、膠丸，水丸。外用制劑包括透皮吸收制劑。也可制成控釋制劑和緩釋制劑。全文摘要本發(fā)明提供了一種以丹參素和丹酚酸B為活性成分的藥物組合物，丹參素和丹酚酸B的純度或丹參素鹽和丹酚酸B鹽的純度大于或等于80％，該藥物組合物可用于治療冠心病、心絞痛、缺血性腦血栓、動脈粥樣硬化、心肌缺血或心肌梗死，慢性乙肝肝纖維化、脂肪肝、老年癡呆癥和癌癥等。文檔編號A61K31/343GK101564388SQ200910119200公開日2009年10月28日申請日期2009年3月9日優(yōu)先權日2008年4月21日發(fā)明者峰魏申請人:北京科士藍醫(yī)藥技術有限公司