專利名稱：：蛇葡萄素前藥及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，尤其涉及新穎的蛇葡萄素前藥化合物，其制備方法和以該化合物為活性成份的制劑。
背景技術(shù)：
：蛇葡萄素又名二氫楊梅素，該化合物首次由Kotake和Kubota于1940從葡萄科蛇葡萄屬植物福建茶即楝葉玉葡萄A.Meliaefolia的葉中分離得到，命名為蛇葡萄素。蛇葡萄素被證明有抗腫瘤、抗氧化、降血脂、消炎、抑菌等功效，但由于其溶解度小，且在腸道內(nèi)可能經(jīng)細(xì)菌作用而被代謝，因此口服給藥生物利用度低。另由于其水中溶解度小，不利于制成注射給藥形式。這些都是影響其在臨床上應(yīng)用的障礙，目前還未見蛇葡萄素單體的相關(guān)產(chǎn)品應(yīng)用于臨床。雖然有文獻(xiàn)報(bào)道(RuanLP,YuBY,et.al.Improvingthesolubilityofampelopsinbysoliddispersionsandinclusioncomplexes.JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis.2005,38(3):457-64)采用固體分散體技術(shù)、環(huán)糊精包合技術(shù)等制劑技術(shù)來提高蛇葡萄素的溶解度，但這些方法存在制備工藝復(fù)雜、成本高、不易工業(yè)化生產(chǎn)等缺點(diǎn)。而采用表面活性劑、乙醇、二甲基亞砜等試劑來增加溶解度，又存在毒性或刺激性大的缺點(diǎn)。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)有效而又低毒的增加蛇葡萄素水溶性的方法。蘭州大學(xué)秦紅巖等人，提出了用鈉離子不飽和替代蛇葡萄素中的氫原子，形成一種新的蛇葡萄素不飽和鈉鹽，(公開CN101045721A，公開日2007年10月3日的中國發(fā)明專利申請)，其目的是為了顯著減低蛇葡萄素的毒性，且未公開溶解度數(shù)據(jù)，與本發(fā)明的方法與目的均存在根本的不同。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一類新的、水溶性高的蛇葡萄素前藥化合物，該化合物適用于制造粉針劑。本發(fā)明的另一目的是提供該蛇葡萄素前藥化合物的制備方法。本發(fā)明提供的蛇葡萄素前藥化合物具有如下結(jié)構(gòu)(I):BOH(I)式中B表示堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)，優(yōu)選葡萄糖胺類物質(zhì)，優(yōu)選葡甲胺。本發(fā)明也涉及上述化合物(I)在藥學(xué)上的劑型，如有效量的蛇葡萄素前藥及可藥用載體和/或賦形劑，它包括片劑，膠囊劑，顆粒劑，特別是用于制造注射用的粉針劑。本發(fā)明提供的化合物(I)的制備方法，包括以下步驟-1)先將堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)加入適量的無水乙醇中，357(TC加熱回流，攪拌至全部溶解；另取蛇葡萄素溶解于無水乙醇中，保持相同溫度；將堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)溶液緩緩加入蛇葡萄素溶液中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)，減壓蒸去部分溶劑，置低溫處析晶，過濾得粗品；2)粗品加入少量無水乙醇或乙酸乙酯中攪拌洗滌，除去過量的蛇葡萄素，過濾，減壓干燥或五氧化二磷干燥或冷凍干燥，得化合物(I)。上述制備方法中蛇葡萄素與堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)的投料量按摩爾比為l1.1:1，優(yōu)選1.05:1。上述制備方法特點(diǎn)之一選用不含水的試劑為反應(yīng)溶劑，優(yōu)選無水乙醇。由于所用的堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)在無水乙醇中溶解度小，通過加熱回流溶解，以減少溶劑用量。將堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)溶液緩緩加入反應(yīng)體系中，避免過量的堿基接觸蛇葡萄素，以保持與構(gòu)效相關(guān)的基團(tuán)的穩(wěn)定性。上述制備方法特點(diǎn)之二獲得的產(chǎn)品是橙黃色的粉末，具有引濕性，在制備注射劑時(shí)能夠快速溶解在冷水中，制成冷凍干燥的原液，避免加熱等操作對穩(wěn)定性的不良影響。一般來說，含氮有機(jī)堿化合物與蛇葡萄素復(fù)合成鹽，能增加其在水中的溶解度，但不同的含氮有機(jī)堿化合物，其復(fù)合后效果改善的程度也不同。發(fā)明人通過大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)某些含氮有機(jī)堿化合物與蛇葡萄素復(fù)合后并不能顯著提高溶解度，且存在較大的刺激性，如苯甲胺、乙二胺等。因而本發(fā)明的B表示選取堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)，優(yōu)選葡萄糖胺類物質(zhì)，優(yōu)選葡甲胺。本發(fā)明提供的化合物具有很好的水溶性，以下部分為部分實(shí)驗(yàn)對象在25。C下的溶解度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)對比表<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>顯然，蛇葡萄素與葡萄糖胺類化合物經(jīng)復(fù)合形成的前藥化合物在水中溶解度有非常明顯的提高。而且，化合物(I)水溶液在即使在濃度為1%(g/100ml)時(shí)，溶液的pH值為8.74，符合人用注射液要求pH值不超過9的一般要求，這樣在常用靜脈滴注體積100500ml情況下，一次可以滴注15g化合物(I)，這個(gè)劑量已經(jīng)完全能達(dá)到人用有效劑量的要求。這些性質(zhì)使得化合物(I)可以采用冷凍干燥法等常用方法制造粉針劑，臨用前加滅菌注射用水或生理鹽水注射液溶解后靜脈滴注，實(shí)現(xiàn)直接加工成注射劑，可提高生物利用度，實(shí)現(xiàn)了臨床應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明所提供的化合物(I)及其制備方法不使用有毒的有機(jī)溶劑，所用低毒或無毒溶劑均可回收利用，也不使用其他對環(huán)境不友好的試劑。該化合物得率高，水溶性好，可制成藥學(xué)上的各種劑型，包括注射劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑，特別適用于制造注射用粉針劑。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例子，進(jìn)一步闡明本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例l化合物(I)的制備(1)蛇葡萄素葡甲胺復(fù)合物的制備按蛇葡萄素與葡甲胺摩爾比1.05:1投料。稱取葡甲胺1.95g加入100ml無水乙醇中，6(TC加熱回流，攪拌至全部溶解；另稱取蛇葡萄素3.36g溶解于10ml無水乙醇中，加熱保持相同溫度；將上述葡甲胺無水乙醇溶液緩緩加至蛇葡萄素溶液中，邊加邊攪拌，保持6(TC反應(yīng)30min，減壓蒸去部分溶劑至溶液開始變渾濁，置-15C保存12h，過濾得粗品。(2)精制粗品加入10ml無水乙醇中攪拌洗滌，過濾，重復(fù)三次，減壓干燥，得化合物(I)。得率為74.2%。實(shí)施例2化合物(I)的制備(1)蛇葡萄素葡甲胺復(fù)合物的制備按蛇葡萄素與葡甲胺摩爾比l:l投料。稱取葡甲胺195mg加入20ml無水乙醇中，5(TC加熱回流，攪拌至全部溶解；另稱取蛇葡萄素320mg溶解于5ml無水乙醇中，加熱保持相同溫度；將葡甲胺無水乙醇溶液緩緩加入至蛇葡萄素溶液中，邊加邊攪拌，保持5(TC反應(yīng)20mim減壓蒸去部分溶劑至溶液開始變渾濁，置-4t保存12h，過濾得粗品。(2)精制粗品加入5ml無水乙醇中攪拌洗滌，過濾，重復(fù)三次，置于五氧化二磷干燥器中干燥，得化合物(I)。得率為69.5%。實(shí)施例3化合物(I)的制備(1)蛇葡萄素葡甲胺復(fù)合物的制備按蛇葡萄素與葡甲胺摩爾比1.03:1投料。稱取葡甲胺390mg加入40ml無水乙醇中，4(TC加熱回流，攪拌至全部溶解；另稱取蛇葡萄素660mg溶解于lOml無水乙醇中，加熱保持相同溫度；將葡甲胺無水乙醇溶液緩緩加入至蛇葡萄素溶液中，邊加邊攪拌，保持4(TC反應(yīng)20mim減壓蒸去部分溶劑至溶液開始變渾濁，置-4"C保存12h，過濾得粗品。(2)精制粗品加入少量乙酸乙酯中攪拌洗滌，過濾，重復(fù)三次，經(jīng)冷凍干燥，得化合物(I)。得率為71.5%。實(shí)施例4蛇葡萄素前藥化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析對實(shí)施例1中制備的蛇葡萄素葡甲胺復(fù)合物進(jìn)行了化學(xué)結(jié)構(gòu)分析。通過比較化合物(I)與蛇葡萄素分別在乙醇中的紫外吸收光譜，結(jié)果顯示，兩者在E帶都存在同樣的吸收峰，即存在同樣的苯環(huán)精細(xì)結(jié)構(gòu)；在B帶，兩者在292ran處都有最大吸收峰，但化合物(I)的吸收強(qiáng)度與蛇葡萄素相比明顯減弱；此外，化合物(I)在R帶，即325nm處還出現(xiàn)新的最大吸收峰，而蛇葡萄素在此處沒有最大吸收峰，即相對紅移了533nm。說明所合成的化合物(I)與蛇葡萄素相比，沒有發(fā)生大的結(jié)構(gòu)變化，只是多了個(gè)助色團(tuán)，使吸收峰向長波方向移動。此外，實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，往化合物(I)的溶液體系中加入0.1N鹽酸溶液調(diào)pH至酸性后，其紫外光譜又轉(zhuǎn)變與蛇葡萄素的紫外光譜一致，說明化合物(I)在酸性條件下會轉(zhuǎn)變?yōu)樯咂咸阉兀虼嘶衔?I)是蛇葡萄素的前藥化合物。反應(yīng)物對應(yīng)的分子量分別為MpC7H17N05=195;M2=C15H1208=320;則化合物(I)M=M,+M2-H=195+320-1=514。由質(zhì)譜分析，其中兩個(gè)重要的質(zhì)譜峰歸屬解析為正離子檢測模式對應(yīng)為196(Mt+H)+，515(M+H)+，說明化合物(I)是由蛇葡萄素與葡甲胺按1:1的摩爾比復(fù)合而成。本發(fā)明的化合物(I)的化學(xué)分子式C22H28N013，元素分析結(jié)果如下C%H%N%分析值51.425.442.76計(jì)算值51.365.452.72分析與計(jì)算值相差在0.5%內(nèi)，說明結(jié)構(gòu)正確。實(shí)施例5不同濃度的化合物(I)水溶液pH值的測定取化合物(I)0.5g溶于50ml水中配成1%濃度的溶液，測得pH值為8.74;將該溶液稀釋10倍，即濃度約為O.1%，測得稀釋后溶液pH為值8.05，均符合注射要求。實(shí)施例6化合物(I)的質(zhì)量控制方法以實(shí)施例1中制備的蛇葡萄素葡甲胺復(fù)合物為例，進(jìn)行了質(zhì)量控制方法的研究。[紫外測定]精密稱取化合物(I)20mg于25ml容量瓶中，加入50%乙醇溶液，超聲波振蕩溶解后，取O.2ml于10ml容量瓶中，加入0.IN鹽酸溶液稀釋定容，搖勻后，按紫外分光光度法，在292nm處測定吸光度值。另取經(jīng)105'C干燥恒重的蛇葡萄素對照品適量，同前述方法處理，配成一定濃度的溶液，同法測定，計(jì)算，結(jié)果乘以1.606，即得。色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱為U不銹鋼柱；流動相為甲醇水磷酸(65:35:0.2);流速0.7ml/min;檢測波長為292nm;進(jìn)樣量為20ul;柱溫為室溫。理論塔板數(shù)按蛇葡萄素計(jì)算應(yīng)不低于3000。測定法精密稱取化合物(I)20mg于25ml容量瓶中，加入50%乙醇溶液，超聲波振蕩溶解后，取0.2ml于10ml容量瓶中，加入0.1N鹽酸溶液稀釋定容，搖勻后，超聲處理10min脫氣，0.45微米的微孔濾膜過濾，量取20ul進(jìn)樣，記錄峰面積。另取經(jīng)105'C干燥恒重的蛇葡萄素對照品適量，同前述方法處理，配成一定濃度的溶液，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果乘以1.606，即得。實(shí)施例7化合物(I)安全性考察以實(shí)施例1中制備的蛇葡萄素葡甲胺復(fù)合物為例，進(jìn)行了安全性考察。[血管刺激性試驗(yàn)]取健康雄性家兔4只，體重22.3Kg，分成兩組，每只家兔右耳為給藥組，給予本發(fā)6明的蛇葡萄素葡甲胺復(fù)合物的生理鹽水溶液，左耳為生理鹽水對照組，每只家兔右耳靜脈注射等容量的生理鹽水。每日一次，連續(xù)三日，然后觀察動物耳部血管刺激反應(yīng)癥狀，并取標(biāo)本進(jìn)行病理組織學(xué)檢査。試驗(yàn)結(jié)果給藥組、生理鹽水對照組家兔耳部血管均無充血，結(jié)節(jié)、水腫及組織變性或壞死等反應(yīng)癥狀，病理學(xué)檢査也無異常改變，表明供試品無明顯血管刺激性，符合注射給藥的規(guī)定要求。取健康豚鼠12只，雌雄兼用，雌無孕，健康，體重220250g。按無菌操作，給藥組每只動物均隔日腹腔注射供試品溶液0.5ml(W蛇葡萄素葡甲胺復(fù)合物的生理鹽水溶液，以蛇葡萄素葡甲胺計(jì))，共3次，陽性對照組每只動物隔日腹腔注射W卵白蛋白0.5ml共3次；其中給藥組的第一組于首次給藥后14日靜脈注射供試品2ml進(jìn)行攻擊，第二組于首次給藥后21日同法攻擊陽性對照組的第一組于首次給藥后14日靜脈注射1%白蛋白2ml進(jìn)行攻擊，第二組于首次給藥后21日同法攻擊，觀察攻擊后動物的過敏反應(yīng)癥狀。試驗(yàn)結(jié)果給藥給動物在注射后均無豎毛、呼吸困難、痙攣、休克及死亡等過敏反應(yīng)癥狀，而陽性對照組動物在注射后均有不同程度的豎毛、抓鼻、痙攣等過敏癥狀，表明供試藥品無明顯過敏性，符合規(guī)定要求。安全性試驗(yàn)結(jié)果表明化合物(I)能達(dá)到注射給藥的要求。實(shí)施例8粉針劑制備取化合物(I)lg，甘露醇lg，用50ml注射用水溶解，經(jīng)0.22微米的微孔濾膜過濾，分裝于7ml容量的玻璃小瓶，2ml/瓶，置冷凍干燥機(jī)千燥24小時(shí)，加膠塞和鋁蓋密封，即得。干燥后的橙紅色塊裝物加滅菌注射用水5ml，振搖5秒鐘全部溶解。該溶液用100ml注射用水稀釋，稀釋后溶液pH值為8.34，適合靜脈滴注。權(quán)利要求1.下述通式(I)的蛇葡萄素前藥式中B表示堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的蛇葡萄素前藥，其特征在于所述的B為葡甲胺。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的蛇葡萄素前藥，其特征在于其劑型為粉針劑。4.權(quán)利要求1或2所述的蛇葡萄素前藥的制備方法，包括以下步驟-1)先將堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)加入無水乙醇中，357(TC加熱回流，攪拌至全部溶解；另取蛇葡萄素溶解于無水乙醇中，保持相同溫度；將堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)溶液緩緩加入蛇葡萄素溶液中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)，減壓蒸去部分溶劑，置低溫處析晶，過濾得粗品；2)粗品加入少量無水乙醇或乙酸乙酯中攪拌洗滌，除去過量的蛇葡萄素，過濾，減壓干燥或五氧化二磷干燥或冷凍干燥，得化合物(I)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的蛇葡萄素前藥的制備方法，其特征在于蛇葡萄素與堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)的投料量按摩爾比為11.1:1。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛇葡萄素前藥的制備方法，其特征在于蛇葡萄素與堿性氨基酸或葡萄糖胺類物質(zhì)的投料量按摩爾比為1.05:1。7.根據(jù)權(quán)利要求4或5或6所述的蛇葡萄素前藥的制備方法，其特征在于葡萄糖胺類物質(zhì)為葡甲胺。8.—種包含權(quán)利要求1或2或3所述的有效量的蛇葡萄素前藥及可藥用載體和/或賦形劑。全文摘要本發(fā)明公開了一種蛇葡萄素前藥及其制備方法與應(yīng)用，所述的蛇葡萄素前藥的通式(I)如右所示，該化合物與蛇葡萄素相比，顯著提高了水溶性。其制備方法不使用有毒的有機(jī)溶劑，所用溶劑均可回收利用，也不使用其他對環(huán)境不友好的試劑。本發(fā)明公開的蛇葡萄素前藥化合物可制成藥學(xué)上的各種劑型，包括注射劑、片劑、膠囊、顆粒劑，特別是用于制造注射用粉針劑。文檔編號A61P31/04GK101555241SQ20091011180公開日2009年10月14日申請日期2009年5月20日優(yōu)先權(quán)日2009年5月20日發(fā)明者黃仁杰申請人:福建衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院