專利名稱:透明質(zhì)酸酶抑制劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及化學(xué)領(lǐng)域,具體地,涉及以1,2,3,4,6-五-^沒食子 葡萄糖為活性成分的透明質(zhì)酸酶抑制劑或化妝品或保健 品或藥品,及其制備方法和其在制備透明質(zhì)酸酶抑制劑或化妝品或保 健品或藥品中的應(yīng)用。
背景技術(shù):
1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?》~D-葡萄糖 (1, 2, 3, 4, 6-penta-^galloyH-D-glucose, PGG)為水解單寧, 由葡萄糖與5個沒食子酸通過酯鍵相連形成的沒食子酸單寧。藥理研 究表明,該化合物具有多方面的生理活性,如抗腫瘤、抗病毒、抗氧 化、拮抗內(nèi)毒素/脂多糖、降糖祛脂等。但是,迄今為止沒有關(guān)于對 透明質(zhì)酸酶抑制作用的報道。
透明質(zhì)酸酶是透明質(zhì)酸的特異性裂解酶,而透明質(zhì)酸廣泛地存在 于動物的各種組織中,在機體內(nèi)顯示出多種重要的生理功能,如潤滑 關(guān)節(jié)、調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的運轉(zhuǎn)、促進創(chuàng)傷愈合等。更為重要的是,它具有 良好的保濕作用,在保濕的同時,又是良好的透皮吸收促進劑。含透 明質(zhì)酸的化妝品目前在國際上被公認為"仿生化妝品"、"第四代化妝 品"。透明質(zhì)酸酶是I型過敏反應(yīng)和腫瘤細胞增殖的參與者,它與炎 癥、過敏有強相關(guān)性。因此,抑制透明質(zhì)酸酶的活性,既能使透明質(zhì) 酸不被分解以維持其正常的生理功能,又能達到抗炎、抗過敏、抗腫
4瘤的功效。另外,在含有透明質(zhì)酸的制劑(特別地,如美容增強劑和 組織填充劑)中加入透明質(zhì)酸酶抑制劑,能夠增強制劑作用的持久性, 避免規(guī)律性地重復(fù)給藥。所以,透明質(zhì)酸酶抑制劑的開發(fā)在制藥、保 鍵品、化妝品行業(yè)具有重要意義??梢宰鳛榉乐购透纳蒲装Y的藥品或 保鍵品。亦可作為抗過敏和抗炎的化妝品。此外,可作為含有透明質(zhì) 酸制劑的添加劑,增強制劑的穩(wěn)定性、持久性和活性。
目前,已報道的透明質(zhì)酸酶抑制劑根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為蛋白質(zhì) 類、葡糖氨基聚糖類、多糖類、生物堿、萜類等。它們主要提取自蛇 毒、動植物器官、微生物或經(jīng)人工合成制得。但是,大批量制備所需
成本較高。迄今,沒有1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?^"D-葡萄糖 (PGG)對透明質(zhì)酸酶活性的抑制作用的報道;目前,PGG主要從植 物提取物中分離純化,但此方法因為PGG為水溶性好的水解單寧,存 在極性大,分離純化過程繁瑣,得率低等問題,迄今沒有以單寧酸為 原料,工業(yè)化批量生產(chǎn)PGG的制備工藝。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題,本發(fā)明的目的在于提供一種以 1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基-^ HD-葡萄糖(PGG)為活性成分的透明 質(zhì)酸酶抑制劑,提供一種成本低、得率高、純度高、制備過程簡單安 全易行、生產(chǎn)周期短,易于批量制備和工業(yè)化生產(chǎn)l,2,3,4,6-五-^" 沒食子?;?^^-葡萄糖(PGG)的制備方法及其作為透明質(zhì)酸酶抑 制劑的用途。
為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的,本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案
透明質(zhì)酸酶抑制劑,含有1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ "D-葡 萄糖。所述的1, 2, 3, 4, 6-五-^-沒食子酰基-》~D-葡萄糖即PGG的制備 方法,是以將單寧酸溶于含有pH = 6的HAc- NaAc緩沖溶液的90% 的甲醇或乙醇溶液中,5CTC水浴中密閉水解12小時,在48"下減壓 蒸干,溶于甲醇或乙醇后經(jīng)葡聚糖凝膠柱洗脫得PGG粗品;再經(jīng)大孔 吸附樹脂分離純化,用水、10%、 20%、 30%、 40%甲醇或乙醇水溶液梯 度洗脫,收集洗脫液,濃縮、干燥即可。
所述的原料為單寧酸,包括但不限于工業(yè)單寧酸,單寧酸,含單 寧酸的提取物。
單寧酸質(zhì)量(g), HAc-NaAc緩沖溶液(mL)和甲醇或乙醇(mL) 的比例為1 : 1.5 : 13.5。
用于檢測和指導(dǎo)柱層析分離的薄層層析法是以7:3:0.5的氯仿-甲醇-水為展開劑,F(xiàn)eCl3乙醇液為顯色劑。
柱層析分離用的葡聚糖凝膠柱填充劑為葡聚糖凝膠,包括但不限 于S印hadexG, S印hadex C-50, S印hadex LH-20;大孔吸附樹脂填 充劑為聚苯乙烯型的大孔吸附樹脂,包括但不限于SEPABEADS SP825 (SP850, SP70, SP207, SP700) 、 MCI gel CHP20P (75-150 m)、 Diaion HP20 (HP20SS) 、 XAD-2、 XAD—4、 D—101、 KB—8。
1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ ^-葡萄糖在制備透明質(zhì)酸酶抑 制劑中的應(yīng)用。
1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基-^-D-葡萄糖在制備藥物中的應(yīng)用。
1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ 3-葡萄糖在制備化妝品中的應(yīng)用。
1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^-D-葡萄糖在制備保健品中的應(yīng)用。通過本發(fā)明的活性評價試驗結(jié)果表明,1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子 ?;?》"D-葡萄糖(PGG)對透明質(zhì)酸酶活性的抑制作用(ICs。 0. 01 mM) 顯著強于陽性對照色甘酸鈉(IC5。 6.99 mM),可作為一個很好的透明 質(zhì)酸酶抑制劑,添加入含有透明質(zhì)酸的制劑中,增強藥品、化妝品或 保健品的穩(wěn)定性、持久性和活性。此外,可用于制備抗過敏和抗炎的 化妝品,或防止和改善炎癥的藥品或保鍵品。
與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的方法具有下述的優(yōu)點
1. 本發(fā)明是工業(yè)單寧酸,單寧酸或含單寧酸提取物中的任何一 種為原料制備1, 2, 3, 4, 6-五-^"沒食子酰基-^"D-葡萄糖。
2. 本發(fā)明用含水低級醇(可以是甲醇或乙醇)為溶劑,用HAc-NaAc緩沖溶液水解制備1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基-^ H3-葡萄糖, 得率高,成本低。
3. 本發(fā)明水解溶液為弱酸,溫度為5(TC,無有機溶劑的殘留, 安全,簡單易行、成本低。
4. 本發(fā)明使用的柱層析填充劑為聚苯乙烯型大孔吸附樹脂和葡 聚糖凝膠,填充劑材料可以重復(fù)使用。
5. 本發(fā)明采用術(shù)層析的方法純化1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?-^H)-葡萄糖,不僅產(chǎn)品形狀好、純度高、無溶劑殘留,而且簡單易 行、成本低。
6. 本發(fā)明提供了 1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?^"D-葡萄糖作 為透明質(zhì)酸酶抑制劑的新用途。
具體實施例方式
下面以本發(fā)明的試驗例和實施例來進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性 內(nèi)容,但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
7試驗例h
取任何一種單寧酸或含單寧酸的提取物,溶于含有HAc- NaAc緩 沖溶液(ra=6)的低級醇-水溶液中,5(TC水浴中密閉水解12小時。 水解液應(yīng)在48。C下減壓蒸干后再溶于低級醇,經(jīng)葡聚糖凝膠柱層析 分離,用含水低級醇(乙醇或甲醇)洗脫,收集富含1,2,3,4,6-五 -^沒食子?;?》刁-葡萄糖(PGG)的洗脫液,濃縮干燥,得 1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;? 》HD-葡萄糖(PGG)粗品。將1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基-》"D-葡萄糖(PGG)粗品溶于低級醇,經(jīng)大孔樹脂 柱層析分離,用水、10%、 20%、 30%、 40%低級醇水溶液梯度洗脫,得 1,2,3,4,6-五-^沒食子酰基-萬"D-葡萄糖(PGG)純品,收率高,純 度大于90%,無有機溶劑的殘留,可直接用作為制藥,保健品及化 妝品的原料或其添加劑。
原料為工業(yè)單寧酸,單寧酸或含單寧酸的提取物,如五倍子 提取物,洋甘菊提取物,綠茶提取物,赤芍總苷,塔拉果莢提取物, 葡萄汁提取物、石榴提取物、漆樹葉提取物、黃櫨提取物、金縷梅樹 提取物等。
用正交實驗從水解時間、低級醇濃度、溫度、以及投料比四個因 素,設(shè)定!U(3"正交實驗表(表1),考察水解1, 2, 3, 4, 6-五-0-沒食 子?;?P -D-葡萄糖的最佳條件,應(yīng)為將原料溶于含有HAc- NaAc緩 沖溶液(ra=6)的90%低級醇-水溶液中,50。C水浴中密閉水解12 小時。單寧酸質(zhì)量(g), HAc- NaAc緩沖溶液(mL)和低級醇(主要 指甲醇或乙醇)(mL)的比例為1:1.5:13.5。
8表1單寧酸水解因素水平表
水平因素因素因素因素因素
A水解時間(h)B甲醇濃度c溫度rc)D料液比(m/v)
11230室溫1:5
22460371:10
33690501:15
應(yīng)用高壓液相色譜法楚W亍(HPLC)測定水解液中PGG的含量(表2)。表2高壓液相色譜法(HPLC)測定水解液中PGG的含量結(jié)果
因 \素 實 ^\ 驗\^爿5
1A1B 1C1D14. 3
2A1B 2C2D211. 6
3A1B 3C3D323. 6
4A2B 1C2D327.0
5A2B 2C3D124- 0
6A2B 3c1D28. 1
7A3B 1c3D214. 4
8A3B 2c1D315. 3
9A3B 3c2D116. 1
I j39. 545. 727. 744.4
II j59. 150.954. 734. 1
45. 847. 86265. 9
SSj1976. 1591913.9722127.0522084. 919
用于柱層析分離用的葡聚糖凝膠柱填充劑為葡聚糖凝膠的樹脂。
使用S印hadex G, S印hadex C-50, S印hadex LH-20等。41X6. 4 cm 的柱材料載樣約lOOg單寧酸。
9用于葡聚糖凝膠柱柱層析分離的洗脫溶液可以是含水低級醇(乙 醇或甲醇)。
用于柱層析分離的大孔吸附樹脂為聚苯乙烯型大孔吸附樹脂
SEPABEADS SP825 (SP850, SP70, SP207, SP700), MCI gel CHP20P (75—150 m), Diaion HP20 (HP20SS), XAD—2, XAD—4, D—101, KB—8 等。35X3.6 cm的MCI-gel CHP 20P柱載樣約20 g PGG粗品。
用于大孔吸附樹脂柱層析分離的洗脫溶液是含水低級醇(乙醇或 甲醇)。
PGG的干燥方法可用加熱干燥、冷凍干燥、噴霧干燥或微波干燥。 上述制備工藝操作簡單可行,產(chǎn)品收率高,純度大于90%,無有 機溶劑的殘留。
活性測定表明,1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ "D-葡萄糖對透 明質(zhì)酸酶活性的抑制作用(IC5。 0. 01 mM)顯著強于陽性對照色甘酸鈉 (IC5。 6.99 mM),可直接用作為制藥,保健食品及化妝品的原料或其 添加劑。
實施例h
本發(fā)明制備1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ 3-葡萄糖及其活性
測定的具體步驟如下
(1) 將單寧酸溶于含有HAc- NaAc緩沖溶液(PH=6)的甲醇-水溶液中,5(TC水浴中密閉水解12小時。
(2) 上述水解液48'C下減壓蒸干溶于甲醇后緩緩傾入葡聚糖凝 膠柱(如S印hadex LH-20等)層析柱的上端。41X6.4 cm的柱材 料載樣約100g單寧酸。利用甲醇洗脫,洗脫流速控制在2 mL/min左右。收集富含得1, 2, 3, 4, 6-五-f沒食子酰基-^ 3-葡萄糖的洗脫液, 濃縮,干燥,得PGG粗品,HPLC檢測其純度大于85M。
(3) 將上述1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?;~D-葡萄糖粗品溶 于小體積水溶液后緩緩傾入大孔吸附樹脂(如DiaionHP20, D-101, kb-8等)層析柱的上端。先用水、10%、 20%、 30%、 40%甲醇水溶液 梯度洗脫,每個梯度的洗脫液用量約1-1.2倍柱體積,收集富含 1,2,3,4,6-五-^沒食子酰基-j5^-葡萄糖的洗脫液,濃縮,干燥, 得1,2,3,4,6-五-^沒食子酰基-萬3-葡萄糖純品。35X3.6 cm的 MCI-gel CHP 20P柱載樣約20 g PGG粗品。
(4) 1,2,3,4,6-五-^"沒食子?;?^"D-葡萄糖純品的干燥,可
用加熱干燥、冷凍干燥、噴霧干燥或微波干燥等。
(5) 1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ ~D-葡萄糖的高壓液相色譜 (HPLC)定量分析按以下的方法進行
儀器與試劑島津10AD高效液相色譜儀,高壓二元泵,SPD-10Avp 二極管陣列檢測器,CLASS-LC10工作站,色譜純乙腈,超純水。
色譜條件及檢測波長的選擇固定相為安杰倫Zorbax SB-C18 (4.6X250 mm, 5Mm)色譜柱,流動相為乙腈-O. 34%磷酸水梯度洗脫 (0-45 min, 4%-40%乙腈),流速lmL/min,柱溫30。C,檢測波長280
含量測定由上述工藝制備的1,2,3,4,6-五-^"沒食子?;?-^^-葡萄糖的含量〉90%。 '
(6) 1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ 3-葡萄糖對透明質(zhì)酸酶抑 制活性測定按以下方法進行儀器與試劑Emax酶標儀測定,軟件為SOFT max PR0。透明質(zhì) 酸,分析純透明質(zhì)酸酶,分析純磷酸鹽,分析純西吡氯銨。
條件及檢測波長待測樣品、透明質(zhì)酸以及透明質(zhì)酸酶分別溶于
0. 1 M PH = 5. 3的磷酸鹽緩沖液中,使酶的終濃度分為60 U/mL。 將 50 PL待測樣品液與50 ML透明質(zhì)酸酶加入Eppendorf管中,37。C條 件下培養(yǎng)20 min,然后加入100 ^透明質(zhì)酸,震搖30 min后在100 。C水浴中加熱5 min。冷卻之后,移取160化反應(yīng)液至96孔板中, 再向96孔板中加入100卞L 1% (w/v)的西吡氯銨水溶液,室溫震搖 30 min,在595 nm波長下測吸光度。并計算IQ。值。
透明質(zhì)酸酶的抑制率=(A-B)/AX100%
A:空白對照溶液吸光值
B:待測樣品溶液吸光值
活性測定1, 2, 3, 4, 6-五-0-沒食子?;? 6 -D-葡萄糖(PGG): IC50 = 0.01 mM
陽性對照色甘酸鈉(DSCG): IC5。 = 6.99 mM
經(jīng)過上述工藝制備得到的1, 2, 3, 4, 6-五-屮沒食子酰基-^ 3-葡 萄糖,收率高,產(chǎn)品的純度大于90%,無有機溶劑的殘留,對透明質(zhì) 酸酶活性的抑制作用(IC5。 0. 01 mM)顯著強于陽性對照色甘酸鈉(IC5。 6.99mM),可直接作為制藥,保健食品或化妝品的原料或其添加劑。
按照上述步驟和方法,具體地例子如下 (1)稱取2.7 g單寧酸置100 mL錐形瓶中,加入3 mL PH=6. 0 的HAc- NaAc緩沖溶液、27 mL甲醇,配制成溶液。37。C水浴中密閉 反應(yīng)24 h (隔數(shù)小時震搖一次)。(2) 上述水解液48'C下減壓蒸干溶于小體積甲醇后緩緩傾入葡 聚糖凝膠柱(S印hadexLH-20)層析柱的上端。利用甲醇洗脫,洗脫 流速控制在2 mL/min左右。收集富含1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基 -^^-葡萄糖的洗脫液,濃縮,干燥,得PGG粗品,HPLC檢測其純 度大于85%。
(3) 將上述1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?葡萄糖粗品溶 于小體積水溶液后緩緩傾入大孔吸附樹脂(如DiaionHP20, D-101, KB-8等)層析柱的上端。先用水、10%、 20%、 30%、 40%甲醇水溶液 梯度洗脫,收集富含1, 2, 3, 4, 6-五-0-沒食子?;?e -D-葡萄糖的洗 脫液,濃縮,干燥,得1,2,3,4,6-五-^"沒食子酰基-^"D-葡萄糖純 品260 mg,得率9. 6%。
(4) 冷凍干燥1,2,3,4,6-五-^沒食子酰基-""D-葡萄糖的純
P
口n o
(5) 按1,2,3,4,6-五-^-沒食子?;?^~D-葡萄糖的高壓液相 色譜(HPLC)定量分析方法進行含量測定純度90. 6%。
(6) 按1,2,3,4,6-五-^沒食子酰基-^^-葡萄糖對透明質(zhì)酸 酶抑制活性測定方法進行活性測定IC5。 = 0. 01 niM,陽性對照品色 甘酸鈉IC5。 二 6. 99 mM。
實施例2:
(1) 稱取工業(yè)單寧酸90 g,與135 mL pH二6. 0的HAc- NaAc緩 沖溶液、1.2L甲醇配制成溶液,在5(TC水浴中密閉水解12h。
(2) 述水解液48X:下減壓蒸干溶于小體積甲醇后緩緩傾入葡聚 糖凝膠柱(S印hadexLH-20)層析柱的上端。利用甲醇洗脫,洗脫流速控制在2 mL/min左右。收集富含得1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基 -^^-葡萄糖的洗脫液,濃縮,干燥,得PGG粗品,HPLC檢測其純 度大于85%。
(3)將上述1,2,3,4,6-五-O"沒食子?;?^刁-葡萄糖粗品溶 于小體積水溶液后緩緩傾入大孔吸附樹脂(如DiaionHP20, D-101, KB-8等)層析柱的上端。先用水、10%、 20%、 30%、 40%甲醇水溶液 梯度洗脫,收集富含1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?,^-葡萄糖的洗 脫液,濃縮,干燥,得1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?》3-葡萄糖純 品11.6 g,得率12.8%。
(4) 冷凍干燥1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基-^ 3-葡萄糖的純品。
(5) 按1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ 葡萄糖的高壓液相色 譜(HPLC)定量分析方法進行含量測定純度93.0%。
(6) 按1,2,3,4,6-五-^沒食子?;?^-D-葡萄糖對透明質(zhì)酸 酶抑制活性測定方法進行活性測定IC5。 = 0. 01 mM,陽性對照品色 甘酸鈉IC5。 二 6.99 mM。
實施例3:
片劑實施例2所得化合物1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基-"^-葡萄糖10 mg,乳糖180 mg,淀粉55 mg,硬脂酸鎂5 mg;
制備方法將化合物、乳糖和淀粉混合,用水均勻濕潤,把濕潤 后的混合物過篩并干燥,再過篩,加入硬脂酸鎂,然后將混合物壓片, 每片重250 mg,化合物含量為10 mg。
實施例4:
安瓿劑實施例2所得化合物1,2,3,4,6-五-^沒食子酰基 -^^-葡萄糖2 mg,氯化鈉10 mg;
14制備方法將化合物和氯化鈉溶解于適量的注射用水中,過濾所 得溶液,在無菌條件下裝入安瓿瓶中。 實施例5:
膠囊劑實施例2所得化合物1,2,3,4,6-五-^"沒食子?;?-》"D-葡萄糖 10 mg,乳糖187 mg,硬脂酸鎂3 mg;
制備方法將化合物與助劑混合,過篩,均勻混合,把得到的混 合物裝入硬明膠膠囊,每個膠囊重200 mg,活性成分含量為IO mg。
實施例6:
含有化合物1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ 3-葡萄糖的美白霜 配方(TO):
1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?^ 葡萄糖 0. 05
硬脂酸 8.0
C16醇 2. 0 自乳化單甘酯 2.0 氫化羊毛脂 2.0
液體石蠟 12.0 甘油 7.0 乳化劑 1.5
防腐劑 0.2
香精 0.2
去離子水 加至100
按常規(guī)制作化妝品的方法制得本發(fā)明上述配方的化妝品實施例7:含有化合物1,2,3,4,6-五-&沒食子?;?^"D-葡萄 糖的乳劑配方(W%):
1,2,3,4,6-五-^"沒食子?;?^"D-葡萄糖0.05
硬脂酸1.4
鯨蠟醇0. 1
2-乙基醇鯨蠟基硬脂酸酯1. 8
肉豆蔻酸異丙酯0. 2
2-己基-1-癸醇1.0
液體石蠟7. 5
甘油3.0
丙二醇8.0
三乙醇胺1. 0
羧乙烯基聚合物0. 35
Arlacel 1652. 0
防腐劑0. 2
香精0. 2
去離子水加至100
按常規(guī)制作化妝品的方法制得本發(fā)明上述配方的化妝16實施例8:
含有的1, 2, 3, 4, 6-五-仏沒食子酰基-^ 葡萄糖的乳酸菌飲料 配方(W%):
1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子酰基-^ ~D-葡萄糖 0. 05
發(fā)酵乳 15 果糖葡萄糖液精 13 檸檬酸 0.08 果膠 0- 5
香精 0-2
去離子水 加至ioo
按常規(guī)制作食品的方法制得本發(fā)明的上述飲料。
1權(quán)利要求
1、透明質(zhì)酸酶抑制劑,含有1,2,3,4,6-五-0-沒食子?;?β-D-葡萄糖。
2、 權(quán)利要求1的1,2,3,4,6-五-^沒食子酰基-i5~D-葡萄糖即 PGG的制備方法,以將單寧酸溶于含有pH = 6的HAc- NaAc緩沖溶 液的90%的甲醇或乙醇溶液中,5(TC水浴中密閉水解12小時,在48°C 下減壓蒸干,溶于甲醇或乙醇后經(jīng)葡聚糖凝膠柱洗脫得PGG粗品;再 經(jīng)大孔吸附樹脂分離純化,用水、10%、 20%、 30%、 40%甲醇或乙醇水 溶液梯度洗脫,收集洗脫液,濃縮、干燥即可。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于所述的原料為單寧 酸,包括但不限于工業(yè)單寧酸,單寧酸,含單寧酸的提取物。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于,單寧酸質(zhì)量(g), HAc-NaAc緩沖溶液(mL)和甲醇或乙醇(mL)的比例為1 : 1. 5 : 13.5。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,用于檢測和指導(dǎo)柱層析分離的 薄層層析法是以7:3:0.5的氯仿-甲醇-水為展開劑,F(xiàn)eCl3乙醇液為 顯色劑。
6、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法,其特征在于柱層析分離用的葡 聚糖凝膠柱填充劑為葡聚糖凝膠,包括但不限于S印hadex G, S印hadex C-50, S印hadex LH-20;大孔吸附樹脂填充劑為聚苯乙烯 型的大孔吸附樹脂,包括但不限于SEPABEADS SP825 (SP850, SP70, SP207, SP700) 、 MCI gel CHP20P (75-150 m) 、 Diaion HP20 (HP20SS) 、 XAD-2、 XAD-4、 D-101、 KB-8。
7、 1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?""D-葡萄糖在制備透明質(zhì)酸酶抑制劑中的應(yīng)用。
8、 1, 2, 3, 4, 6-五-^"沒食子?;?^ ~D-葡萄糖在制備藥物中的應(yīng)用。
9、 1, 2, 3, 4, 6-五-^沒食子?;?》"D-葡萄糖在制備化妝品中的 應(yīng)用。
10、 1, 2, 3, 4, 6-五-^"沒食子酰基-》HD-葡萄糖在制備保健品中 的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用單寧酸制備1,2,3,4,6-五-O-沒食子?;?β-D-葡萄糖(PGG)的新方法及其新用途。單寧酸經(jīng)酸水解制得PGG粗品;再經(jīng)大孔吸附樹脂和葡聚糖凝膠柱層析分離純化得PGG,純度>90%。該方法所得PGG色澤好,純度高,制備過程簡單安全易行,成本較低,生產(chǎn)周期短,易于批量制備和工業(yè)化生產(chǎn)?;钚栽u價表明PGG對透明質(zhì)酸酶活性的抑制作用(IC<sub>50</sub> 0.01mM)顯著強于陽性對照色甘酸鈉(IC<sub>50</sub> 6.99mM),可以直接用作藥劑,保健食品及化妝品的原料或其添加劑。
文檔編號A61K31/7024GK101480407SQ200910094058
公開日2009年7月15日 申請日期2009年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月23日
發(fā)明者喬春玲, 青 劉, 張穎君, 楊崇仁, 敏 許 申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所