專(zhuān)利名稱(chēng)：甲磺酸伊馬替尼在制備治療乙型肝炎藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甲磺酸伊馬替尼的一種新用途，具體涉及甲磺酸伊馬替尼在制備治療乙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乙型肝炎是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的世界性傳染病之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，世
界上已有20億人被乙型肝炎病(HBV)毒感染，其中約3.5億人是慢性感染患者，每年因HBV感染致死的人數(shù)有IOO萬(wàn)左右，而我國(guó)乙型肝炎表面抗原陽(yáng)性患者人數(shù)也在1.2億以上。
目前已經(jīng)被美國(guó)FDA批準(zhǔn)的治療慢性乙型肝炎的藥物有五種，即普通干擾素，聚乙二醇(PEG)干擾素、拉米夫定(lamivudine)、恩替卡韋(entecavir)和阿德福韋(adefovir)。干擾素它的免疫調(diào)節(jié)作用可導(dǎo)致感染的肝細(xì)胞破壞，從而達(dá)到清除病毒的目的。其有效率為30-60%，但對(duì)于重癥肝炎等肝細(xì)胞很少的患者不推薦使用。核苷類(lèi)似物如拉米夫定、恩替卡韋和阿德福韋，主要針對(duì)病毒逆轉(zhuǎn)錄酶，長(zhǎng)期用藥病毒易產(chǎn)生耐藥變異， 一旦耐受后會(huì)導(dǎo)致病毒爆發(fā)。
甲磺酸伊馬替尼膠囊商品名格列衛(wèi)(Gleevec,Glivevc);藥品名甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)或STI571;中文參考商品譯名格列衛(wèi)/甲磺酸伊馬替尼膠囊；分子結(jié)構(gòu)名甲磺酸伊馬替尼；生產(chǎn)廠家Novartis (瑞士諾華制藥)；甲磺酸伊馬替尼的化學(xué)名稱(chēng)為4-[(4-甲基-l-哌嗪)甲基]-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]苯基]-苯胺甲磺酸鹽，分子式為C29H31N70 CH4S03，分子量為589. 7。 Gleevec在體內(nèi)外均可在細(xì)胞水平上抑制Bcr-Abl酪氨酸激酶，能選擇性抑制Bcr-Abl陽(yáng)性細(xì)胞系細(xì)胞、Ph染色體陽(yáng)性的慢性粒細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病病人的新鮮細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)其凋亡。用于治療慢性粒細(xì)胞白血病(CML)急變期、加速期或ct-干擾素治療失敗后的慢性期患者；不能手術(shù)切除或發(fā)生轉(zhuǎn)移的惡性胃腸道間質(zhì)腫瘤(GIST)患者。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供甲磺酸伊馬替尼在制備治療乙型肝炎藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了甲磺酸伊馬替尼在制備抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的藥物中、在制備抑制乙型肝炎病毒增殖的藥物中、在制備抑制乙型肝炎病毒的藥物中或在制備治療乙型肝炎的藥物中的新用途。
具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供了甲磺酸伊馬替尼在制備抑制HL7702細(xì)胞或H印G22.2. 15細(xì)胞中乙型肝炎病毒復(fù)制的藥物中的新用途。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供了甲磺酸伊馬替尼在制備抑制HL7702細(xì)胞或H印G2 2. 2. 15細(xì)胞中乙型肝炎病毒增殖的藥物中的新用途。具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供了甲磺酸伊馬替尼在制備抑制HL7702細(xì)胞或H印G2 2.2. 15細(xì)胞中乙型肝炎病毒的藥物中的新用途。
本發(fā)明還保護(hù)一種抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。
本發(fā)明還保護(hù)一種抑制乙型肝炎病毒增殖的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。
本發(fā)明還保護(hù)一種抑制乙型肝炎病毒的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。
本發(fā)明還保護(hù)一種治療乙型肝炎的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。給藥時(shí)，以上任一所述的藥物可為口服制劑或者靜脈給藥制劑。所述靜脈給藥制劑優(yōu)選水針。
本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)用c-abl的抑制劑Gleevec (甲磺酸伊馬替尼，STI-571)處理被乙肝病毒感染的細(xì)胞或H印G2 2.2. 15乙肝病毒復(fù)制細(xì)胞模型，可以顯著的抑制乙肝病毒復(fù)制并可以抑制細(xì)胞分泌乙肝表面抗原和核心抗原。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
(1)抗病毒效果更好從體外抗病毒模型H印G2 2.2. 15實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，對(duì)乙肝表面抗原和核心抗原的抑制率均可達(dá)到40%左右；(2)可以抑制變異后的乙肝病毒復(fù)
制現(xiàn)有的藥物無(wú)法解決病毒變異的問(wèn)題，而本藥物由于針對(duì)的是宿主本身的蛋白，
所以應(yīng)該能夠解決耐藥性的問(wèn)題。
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，并非對(duì)本發(fā)明的限制。凡依照本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容所做的任何本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。


圖1為STI571對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用。
圖2為STI571對(duì)H印G2 2. 2. 15細(xì)胞e抗原分泌的抑制作用。圖3為STI571對(duì)H印G2 2. 2. 15細(xì)胞乙肝表面抗原分泌的抑制作用。
具體實(shí)施方式
以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為自常規(guī)生化試劑商店購(gòu)買(mǎi)得到的。以下實(shí)施例中的％，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為質(zhì)量百分含量。以下實(shí)施例中實(shí)驗(yàn)均設(shè)置三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。
細(xì)胞培養(yǎng)板等耗材均購(gòu)自康寧公司。HL7702細(xì)胞和H印G2 2.2. 15細(xì)胞均購(gòu)自中科院上海細(xì)胞所細(xì)胞保存中心。乙肝病毒陽(yáng)性血清由北京軍區(qū)總醫(yī)院肝膽內(nèi)科提供，經(jīng)熒光定量PCR檢測(cè)血清的HBV DNA滴度為108。 Lipofectamine 2000購(gòu)自invitrogen公司。Gleevec自瑞士諾華制藥有限公司。乙肝病毒DNA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自華美生物有限公司。
實(shí)施例1、 STI571對(duì)乙肝病毒的抑制作用
一、 STI571對(duì)乙肝病毒復(fù)制的抑制作用
HL7702細(xì)胞轉(zhuǎn)至6CM平板24小時(shí)后進(jìn)行HBV感染實(shí)驗(yàn)，感染HBV的細(xì)胞分成兩組， 一組加入STI571，另一組為陰性對(duì)照，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。
STI571組每孔加入2ml含有30。/。乙肝病毒陽(yáng)性血清(體積百分含量)的培養(yǎng)基，再加入20iJl STI571水溶液，使每孔中STI571的終濃度為IO"M;
陰性對(duì)照足每孔加入2ml含有30。/。乙肝病毒陽(yáng)性血清的培養(yǎng)基，再加入20ijI無(wú)菌水。
感染后不同時(shí)間用PBS清洗，然后收集細(xì)胞，進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示STI571可以抑制乙肝病毒的復(fù)制。病毒感染后若不加任何處理，病毒隨時(shí)間的增加而增加，當(dāng)加入STI571后，病毒復(fù)制速度明顯減慢。
二、 STI571對(duì)H印G2 2. 2. 15細(xì)胞e抗原分泌和乙肝表面抗原分泌的抑制作用將H印G2 2.2. 15細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板，設(shè)置四個(gè)處理，其中三個(gè)為不同濃
度的STI571處理，剩余的一個(gè)為陰性對(duì)照，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)復(fù)孔。
處理一 (STI571低濃度組)每孔加入含10%FBS的DMEM lml;次日移除上述
培養(yǎng)基，每孔加入含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基2ml，再加入5|jl STI571水溶液，STI571
的終濃度為mol/L。
處理二 (STI571中濃度組)每孔加入含10%FBS的DMEM lml;次日移除上述
培養(yǎng)基，每孔加入含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基2ml，再加入10|jl STI571水溶液，STI571
的終濃度為10|J mol/L。處理三(STI571高濃度組)每孔加入含10%FBS的DMEM lml;次日移除上述 培養(yǎng)基，每孔加入含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基2ml，再加入20|j| STI571水溶液，STI571 的終濃度為20|J mol/L。
處理四(陰性對(duì)照組)每孔加入含10。/oFBS的DMEM lml;次日移除上述培養(yǎng) 基，每孔加入含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基2ml，再加入10|jl無(wú)菌水。
每2d收集培養(yǎng)上清100|J|，細(xì)胞放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，ELISA檢測(cè)表面抗原和e 抗原含量。
用乙肝病毒表面抗原試劑盒(購(gòu)自華美公司)檢測(cè)乙肝病毒表面抗原。用乙肝 病毒e抗原試劑盒(購(gòu)自華美公司)檢測(cè)乙肝病毒e抗原。具體方法如下各取50 ul以上獲得的上清液加入96孔板中，再加入50ul相應(yīng)的酶標(biāo)結(jié)合物，37。C孵 育lh。相應(yīng)洗液洗板5次，再依次加入50ul顯色液A及50ul顯色液B ， 37 。C避光顯色15min，最后加入50 y 1終止液。在多標(biāo)記酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)定450nm 處ls吸光值A(chǔ)。抑制率=(對(duì)照組的吸光值A(chǔ)-藥物處理組的吸光值A(chǔ))/對(duì)照組的吸 光值A(chǔ)。
STI571對(duì)H印G2 2. 2. 15細(xì)胞e抗原分泌的抑制作用見(jiàn)圖2。 STI571對(duì)H印G2 2.2. 15細(xì)胞乙肝表面抗原(S抗原)分泌的抑制作用見(jiàn)圖3。結(jié)果顯示，STI571可 以抑制H印G2 2. 2. 15細(xì)胞分泌乙肝表面抗原和e抗原，隨著藥物濃度增加和作用 時(shí)間的延長(zhǎng)，這種抑制作用逐漸增強(qiáng)。
結(jié)論STI571在實(shí)驗(yàn)濃度下，可抑制感染的HL7702細(xì)胞病毒復(fù)制；也可抑制 H印G2 2.2. 15細(xì)胞表面抗原和e抗原的表達(dá)。
權(quán)利要求
1、甲磺酸伊馬替尼在制備抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的藥物中的應(yīng)用。
2、 如權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為甲磺酸伊馬替尼在制備抑制HL7702細(xì)胞或H印G2 2. 2. 15細(xì)胞中乙型肝炎病毒復(fù)制的藥物中的應(yīng)用。
3、 甲磺酸伊馬替尼在制備抑制乙型肝炎病毒增殖的藥物中的應(yīng)用。
4、 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為甲磺酸伊馬替尼在制備抑制HL7702細(xì)胞或H印G2 2. 2. 15細(xì)胞中乙型肝炎病毒增殖的藥物中的應(yīng)用。
5、 甲磺酸伊馬替尼在制備抑制乙型肝炎病毒的藥物中的應(yīng)用。
6、 甲磺酸伊馬替尼在制備治療乙型肝炎的藥物中的應(yīng)用。
7、 一種抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。
8、 一種抑制乙型肝炎病毒增殖的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。
9、 一種抑制乙型肝炎病毒的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。
10、 一種治療乙型肝炎的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了甲磺酸伊馬替尼在制備治療乙型肝炎藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供本了甲磺酸伊馬替尼在制備抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的藥物中、在制備抑制乙型肝炎病毒增殖的藥物中、在制備抑制乙型肝炎病毒的藥物中或在制備治療乙型肝炎的藥物中的新用途。本發(fā)明所提供的藥物，它的活性成分為甲磺酸伊馬替尼。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)(1)抗病毒效果更好從體外抗病毒模型HepG2 2.2.15實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，對(duì)乙肝表面抗原和核心抗原的抑制率均可達(dá)到40％左右；(2)可以抑制變異后的乙肝病毒復(fù)制現(xiàn)有的藥物無(wú)法解決病毒變異的問(wèn)題，而本藥物由于針對(duì)的是宿主本身的蛋白，所以應(yīng)該能夠解決耐藥性的問(wèn)題。
文檔編號(hào)A61K31/506GK101632674SQ200910091699
公開(kāi)日2010年1月27日 申請(qǐng)日期2009年8月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月28日
發(fā)明者湘 何, 劉京梅, 錚 姜, 睿 張, 靜 袁, 鄭子瑞, 輝 鐘, 陳宣南, 魏從文, 黃留玉 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍疾病預(yù)防控制所