專利名稱：N-(2-氨基-4-吡啶基)-苯甲酰胺衍生物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N- (2-氨基-4-吡啶基)-苯甲酰胺衍生物，一類組蛋白去乙?；敢?制劑在治療癌癥、白血病及與分化和增殖相關(guān)疾病方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
染色質(zhì)的組蛋白乙?；腿ヒ阴；钦{(diào)節(jié)基因表達(dá)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，而異常的基 因表達(dá)是腫瘤及一些遺傳和代謝疾病發(fā)生的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。組蛋白的乙?；潭龋薪M 蛋白乙?；?HAT)和組蛋白去乙?；?HDAC)協(xié)調(diào)控制。當(dāng)HDAC過(guò)度表達(dá)并被轉(zhuǎn)錄 因子募集，就會(huì)導(dǎo)致特定基因的不正常抑制，從而導(dǎo)致腫瘤和其它疾病。據(jù)以下文獻(xiàn)報(bào)道， HDAC的活性與癌癥、免疫性疾病、某些精神類、心血管類疾病的發(fā)生有關(guān)。實(shí)驗(yàn)證明，HDAC 抑制劑會(huì)使染色質(zhì)組蛋白乙?；教岣?，因此導(dǎo)致特定基因激活表達(dá)，相應(yīng)的導(dǎo)致細(xì)胞 的末端分化或癌細(xì)胞的調(diào)亡。初步的臨床研究表明，人類可以安全地通過(guò)抑制HDAC的活性 來(lái)獲得組蛋白高乙?；?。因此，HDAC已成為目前腫瘤化療藥物研發(fā)領(lǐng)域最新、最熱門 的靶標(biāo)。文獻(xiàn)(1)British Journal of Pharmacology(2007)，150(7)，862—872.(2)Bioorganic & Medicinal Chemistry(2008),16(9),5254-5265.(3)WO 2003083067(4)Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America(2006)，103(5)，1587-1592.(5)Journal of biomedicine & biotechnology 2006(2),13474.組蛋白去乙酰酶是個(gè)很大的家族，基于序列的相同性可以把它分為三類，第一類 是rpd3相似蛋白HDAC 1、HDAC2、HDAC3、HDAC8、HDAC11這類酶含有大約400-500個(gè)氨基酸， 主要存在于細(xì)胞核中；第二類是酵母HDAl相似蛋白HDAC4、HDAC5、HDAC6、HDAC7、HDAC9、 HDAC10，這類蛋白是含有約1000個(gè)氨基酸的蛋白，其催化部位主要是在肽的C-端，但是其 中HDAC6還含有一個(gè)復(fù)制的催化中心在N-端；第三類是酵母SIR-2類似蛋白，這類蛋白含 有煙酰胺嘌呤二核苷酸(NAD+)-相存活性。上述大多數(shù)亞型具有結(jié)構(gòu)相似性。從原核生物 到真核生物都具有這些蛋白，但是大多數(shù)還沒(méi)有得到定性的研究。目前國(guó)外已報(bào)道了幾種類型的組蛋白去乙?；敢种苿谒鼈兊幕瘜W(xué)結(jié)構(gòu)將 其分為以下幾種(1)羥廂酸(Hydroxamic acid)類，如曲古抑菌素(TSA)，Suberolanilide hydroxamic acid (SAHA)；(2)環(huán)肽類，如 Apicidin ；(3)苯酰胺(benzamides)類，如 MS-275 ；(4)短鏈和芳香脂肪酸類，如丁酸鈉；(5)雜環(huán)化合物類，如D印udecina。
以上各類抑制劑中，第一類即羥肟酸類，屬可逆性HDAC抑制劑。代表藥物SAHA，是 目前唯一上市的組蛋白去乙?；敢种苿Ｔ撍幱?006年10月6日獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)， 用于其它藥物治療時(shí)或治療后仍不能治愈、或惡化、或病情反復(fù)情況下的轉(zhuǎn)移性皮膚T淋 巴細(xì)胞瘤(CTCL)。第三類即苯酰胺(benzamides)類，體外作用效果較第一類差，但體內(nèi)效 果較好，選擇性強(qiáng)，是目前研究的熱點(diǎn)。MS-275與CI-994是其代表藥物。由于組蛋白去乙?；竵喰徒Y(jié)構(gòu)的相似性，現(xiàn)有的大多數(shù)組蛋白去乙?；敢种?劑并不具有亞型選擇性，通常同時(shí)抑制多個(gè)亞型，造成一定的毒副反應(yīng)，從而影響了成藥 性。因此，設(shè)計(jì)合成高選擇性的組蛋白去乙?；敢种苿?，以得到療效好，毒副作用，低，安 全性高的新型抗惡性腫瘤劑是目前該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)及技術(shù)難點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題之一是公開(kāi)一類N-(2-氨基-4-吡啶基)_苯甲酰胺 衍生物，其為新型的組蛋白去乙?；敢种苿?，以滿足臨床應(yīng)用的需要；本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題之二是在于公開(kāi)所述組蛋白去乙?；敢种苿┰谥?備抗惡性腫瘤及治療與分化和增殖相關(guān)疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所說(shuō)的組蛋白去乙酰化酶抑制劑，為具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)通式的化合物或其
Trrt. 其中，其中R為氫、1至5個(gè)碳原子的烷基、C5或C6的脂肪環(huán)、芳環(huán)或雜環(huán)，芳環(huán)或 雜環(huán)可以含有1至4個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、1至4個(gè)碳原 子的烷基、1至4個(gè)碳原子的烷氧基、1至4個(gè)碳原子的氨烷基、1至4個(gè)碳原子的烷氨基、2 至4個(gè)碳原子的?；?至4個(gè)碳原子的酰氨基、1至4個(gè)碳原子的硫代烷基、三氟甲基、1至 4個(gè)碳原子的羧基、1至4個(gè)碳原子的烷氧基羰基、苯基或雜環(huán)取代基；R1為氫、C1-C5的烷基、C5,或C6的脂肪環(huán)，苯基或取代苯基；n = 0，l，2，3。本發(fā)明所述的“芳環(huán)”，具有芳香性的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，可含有取代基；所述的取代苯基為苯環(huán)上含有1至4個(gè)取代基，其取代基可以是鹵素、羥基、硝基、 氰基、1至4個(gè)碳原子的烷氧基、1至4個(gè)碳原子的烷基或氨基基團(tuán)；所述的“雜環(huán)”，是指含一個(gè)或多個(gè)雜原子(氮、氧、硫)的飽和或不飽和雜環(huán)，如四 氫吡咯、二氫吡唑、哌啶、嗎啉、咪唑或吡啶等；所述的鹵素優(yōu)選氟、氯、溴或碘；所述的1至4個(gè)碳原子的烷基，優(yōu)選甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或 特丁基等；所述的1至4個(gè)碳原子的烷氧基優(yōu)選甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧 基或異丁氧基等；所述的1至4個(gè)碳原子的氨基烷基優(yōu)選氨基乙基、1-氨基丙基或2-氨基丙基等；
所述的1至4個(gè)碳原子的烷基氨基優(yōu)選N-甲氨基、N-乙氨基或N-異丙氨基；所述的2至4個(gè)碳原子的?；鶅?yōu)選乙?；?、丙酰基或異丁?；?；所述的2至4個(gè)碳原子的酰氨基優(yōu)選乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基或異丁酰氨基 等；所述的2至4個(gè)碳原子的硫代烷基優(yōu)選甲硫基、乙硫基或丙硫基等；所述的鹽為鹽酸鹽、溴氫酸鹽、硫酸鹽、三氟醋酸鹽或甲磺酸鹽，所說(shuō)的鹽含0. 5-3 分子的結(jié)晶水。優(yōu)選的化合物包括V--IN-(2-氨基-4-_吡啶基)-4_-(乙酰氨甲基)苯甲酰胺、
V--2N- (2-氨基-4-_吡啶基)-4_-(丙酰氨甲基)苯甲酰胺、
V--3N- (2-氨基-4-_吡啶基)-4_-(丁酰氨甲基)苯甲酰胺、
V--4N- (2-氨基-4-_吡啶基)-4_-(環(huán)己酰氨甲基)苯甲酰胺、
V--5N- (2-氨基-4-_吡啶基)-4_-(苯甲酰氨甲基)苯甲酰胺、
V--6N- (2-氨基-4-_吡啶基)-4_-[(4-甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、
V--7N- (2-氨基-4-_吡啶基)-4_-[(4-氟苯甲酰基)氨甲基]苯甲酰胺、
V--8N- (2-氨基-4-_吡啶基)-4_-[(3-甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、
V--9N- (2-氨基-4--吡啶基)ι-_(乙酰氨基)苯甲酰胺、
V--10N-(2-氨基一ι- 吡啶基)-ζ(丙酰氨基)苯甲酰胺、
V--IlN-(2-氨基-ζι-吡啶基)-ζ(丁酰氨基)苯甲酰胺、
V--12N-(2-氨基-ζι-吡啶基)-ζt-(環(huán)己酰氨基)苯甲酰胺、
V--13N-(2-氨基-ζι-吡啶基)-ζ(苯甲酰氨基)苯甲酰胺、
V--14N-(2-氨基一ι-吡啶基)-ζt-[(4-甲氧基苯甲?；?氨基]苯甲酰胺、
V--15N-(2-氨基一ι-吡啶基)-ζt-[(4_氟苯甲?；?氨基]苯甲酰胺、
V--16N-(2-氨基一ι-吡啶基)-ζt-[(3-甲氧基苯甲酰基)氨基]苯甲酰胺、
V--17N-(2-氨基-ζι-吡啶基)-ζt-(乙酰氨乙基)苯甲酰胺、
V--18N-(2-氨基ι-吡啶基)-ζt-(i-乙酰氨丙基)苯甲酰胺、
V--19N-(2-氨基一ι-吡啶基)-ζt-(l-乙酰氨基乙基)苯甲酰胺、
V--20N-(2-氨基一ι-吡啶基)-ζt-(l-乙酰氨基2-苯基乙基)苯甲酰胺、
V--2IN-(2-氨基-ζι-吡啶基)-ζt-(2-乙酰氨基丙基)苯甲酰胺、
V--22N-(2-氨基-ζι-吡啶基)-ζt-[(3，4-二甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、
V--23N-(2-氨基―1-吡啶基4-[(3，4，5_三甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰妝、
V--24N- (2-氨基一ι-吡啶基)-ζt-[(4-吡啶甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、
V--25N-(2-氨基一ι-吡啶基)-ζt-[(4-嗎啉甲酰基)氨甲基]苯甲酰胺、
V--26N-(2-氨基一ι-吡啶基)-ζ(3-三氟甲基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、
V--27N-(2-氨基-ζι-吡啶基)t-[(3-硝基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、
V--28N-(2-氨基ι-吡啶基)t-[(3-氨基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、
V--29N-(2-氨基一ι-吡啶基)t-[(3_氯苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、
V--30N-(2-氨基ι-吡啶基)t-[(2，4-二氯苯甲酰基)氨甲基]苯甲酰胺、
V-31N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_苯基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺或V-32N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_苯基苯甲酰基)氨甲基]苯甲酰胺。其結(jié)構(gòu)式如下
V-32本發(fā)明的化合物可采用如下的方法進(jìn)行合成通法
將原料I (IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g,40mmol)溶于IOml溶劑甲中，加熱回流4小 時(shí)，減壓蒸出溶劑及未反應(yīng)的氯化亞砜，將所得物在冰浴下滴加至化合物II(IOmm0I)的和 氫氧化鈉(10ml lmol/L)的混合液中，滴加完畢繼續(xù)室溫?cái)嚢?小時(shí)。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào) 節(jié)PH到6左右，析出大量固體，過(guò)濾，干燥得中間體III ；將中間體III (Immol)、化合物 IV(Immol)、O-(IH-苯并三唑-1-基)-N，N, N'， N'-四甲基異脲六氟化磷(簡(jiǎn)稱HBTU) (0. 379g，lmmol)依次加入IOml N, N- 二甲基甲酰 胺中，保持冰浴冷卻滴加三乙胺(2mmol)，再于室溫繼續(xù)攪拌4小時(shí)。將反應(yīng)液倒入冰水中， 鹽酸調(diào)節(jié)PH到7-9左右，二氯甲烷萃取，無(wú)水硫酸鎂干燥。過(guò)濾，濃縮有機(jī)相，剩余物經(jīng)柱 層析純化得產(chǎn)品V。上述反應(yīng)通法中的R、禮、η同上所述；其中，溶劑甲為苯、甲苯、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺或氯化亞砜等。化合物I，II，VI和HBTU可以通過(guò)商業(yè)渠道購(gòu)買；化合物IV參照文獻(xiàn) HeterocyclicChem.，23，669 (1986)的方法合成。藥理試驗(yàn)表明，本發(fā)明所述的化合物或其鹽，不僅對(duì)組蛋白去乙酰化酶具有很強(qiáng) 的抑制作用，而且對(duì)某些腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)分化和抗增殖活性，可以用于治療癌癥 及與分化和增殖相關(guān)的疾病，尤其對(duì)血癌和實(shí)體瘤具有優(yōu)異療效。本發(fā)明還涉及一種組合物，包括治療有效量的所述的化合物或其鹽和醫(yī)藥學(xué)上 可接受的載體，所說(shuō)的載體如香料、甜味劑、液體或固體填料或稀釋劑等常用載體物質(zhì)，并 采用本領(lǐng)域公知的方法，制成常見(jiàn)的藥用制劑，如片劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑或針 劑，制劑通常含有重量百分比為1-70%的有效成分，較佳重量含量為5-50% ；本發(fā)明所說(shuō)的化合物在臨床上可以通過(guò)口服或注射方式對(duì)哺乳動(dòng)物(包括人)進(jìn) 行給藥，其中尤以口服方式最佳。用藥劑量為每日0.0001 200mg/kg體重。最佳劑量視 個(gè)體而定，通常開(kāi)始時(shí)劑量較小，然后逐漸增加用量。動(dòng)物試驗(yàn)證明，本發(fā)明的化合物或其鹽，毒性較小。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于，所述化合物及其藥用制劑對(duì)于治療基因表達(dá)異常而引起的疾 病，如腫瘤、內(nèi)分泌紊亂、免疫系統(tǒng)疾病、遺傳病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病有很好的療效。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但單本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于這些 實(shí)例。本發(fā)明所述的百分比出特別注明外，均為重量百分比。實(shí)施例1V-IN- (2-氨基-4-吡啶基)-4-(乙酰氨甲基)苯甲酰胺將乙酸酐(1. 02g, 1 Ommol)常溫下緩慢加入到對(duì)氨甲基苯甲酸(1. 51g, IOmmol)的 氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH到6左右，析出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-l)1.66g，收率86.2%。M-I (0. 193g，lmmol)、3，4-二氨基吡啶(0. 109g，lmmol)、HBTU (0. 379g，lmmol)、N， N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 147g，收率 51. 9%0MS (ES+) :m/e 285. 13.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 68 (s, 1Η)，8· 38 (t, 1Η)，8· 10(s, 1Η)，7· 94 (d, 2Η, J = 8. OHz) ,7. 81 (dd, 1Η，J = 3· 6，5. 2Ηζ)，7. 44 (d, 2Η, J = 4. 8Ηζ)，7. 40 (d, 2Η, J = 8. 4Ηζ)，5. 13 (s，2Η)，4. 34 (d, 2Η, J = 6. OHz)，1. 90 (s, 3Η)實(shí)施例2V-2N- (2-氨基-4-吡啶基)_4_ (丙酰氨甲基)苯甲酰胺將丙酰氯(0. 92g，1 Ommol)常溫下緩慢加入到對(duì)氨甲基苯甲酸(1. 51g, IOmmol)的 氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH到6左右，析 出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-2)1.87g，收率90. 1%。M-2 (0. 207g，lmmol)、3，4-二氨基吡啶(0. 109g，lmmol)、HBTU (0. 379g，lmmol)、N， N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 197g，收率 66. 2%oMS (ES+) :m/e 299. 14.1H-WrGOOMHz, DMS0_d6) δ ppm 9. 65 (s, 1Η) ,8. 30 (t, 1Η, J = 5. 6Hz) ,8. 10 (s, 1Η)，7. 91 (d, 2Η, J = 8. OHz)，7. 80 (d, 1Η, J = 5. 2Ηζ)，7. 43 (d, 2Η, J = 5. 2Ηζ)，7. 38 (d, 2Η, J = 8. 0Hz)，5. 13 (s，2Η)，4· 31 (s，2Η)，2. 16 (q, 2H, J = 7. 6Hz)，1. 02 (t, 3H, J = 7. 6Hz)實(shí)施例3V-5N- (2-氨基-4-吡啶基)_4_ ( 丁酰氨甲基)苯甲酰胺將正丁酰氯(0. 106g，IOmrnol)常溫下緩慢加入到對(duì)氨甲基苯甲酸(1. 51g， 1 Ommol)的氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH 到6左右，析出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-3) 1. 70g,收率76. 7%。M-3 (0. 221g，lmmol)、3，4-二氨基吡啶(0. 109g，lmmol)、HBTU (0. 379g，lmmol)、N， N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 206g，收率 66. 1% οMS (ES+) :m/e 313. 16.1H-NMR(400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 33 (t, 1Η)，8· 09(s, 1Η)，7· 91 (d, 2Η, J = 8. 4Ηζ)，7. 80 (d, 1Η, J = 5. 2Ηζ)，7. 42 (d, 2Η, J = 5. 2Ηζ)，7. 38 (d, 2Η, J = 8. OHz)， 4· 31 (s，2Η)，2. 14 (t, 2Η, J = 7. 2Ηζ)，1. 55 (m, 2Η)，0. 88 (t, 3Η, J = 7. 2Hz)實(shí)施例4V-4N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_(環(huán)己酰氨甲基)苯甲酰胺環(huán)己基甲酸(1. 28g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按 通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-4)2. 00g，收率76.7%。將3,4- 二氨基吡啶(0. 109g, lmmol)、Μ_4(0· 208g, lmmol) ,HBTU(0. 379g, lmmol)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 174g，收率 49. 5%。
12
MS (ES+) :m/e 353. 17.1H-WrGOOMHz, DMS0_d6) δ ppm 9. 74 (s, 1H) ,8. 26 (t, 1H, J = 6. OHz) ,8. 09 (s, 1H)，7. 91 (d, 2H, J = 7. 6Hz)，7. 79 (d, 1H, J = 5. 6Hz)，7. 43 (d, 2H, J = 5. 2Hz)，7. 35 (d, 2H, J = 7. 2Hz)，6. 94 (m, 1H,)，5· 15 (s，2H) ,4. 31 (d, 2H, J = 5. 6Hz)，2. 18 (m, 1H)，1. 61-1. 72 (m, 4Η)，1· 14-1. 41(m，5H)實(shí)施例5V-5N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_(苯甲酰氨甲基)苯甲酰胺苯甲酸(1. 22g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按通法 中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-5)2. 00g，收率76.7%。M-5 (0. 255g，lmmol)、3，4-二氨基吡啶(0. 109g，lmmol)、HBTU (0. 379g，lmmol)、N， N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法二產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 191g，收率 55. 3%oMS (ES+) :m/e 347. 17.1H-WrGOOMHz, DMS0_d6) δ ppm 9. 71 (s, 1H), 9. 09 (t, 1H, J = 5. 6Hz) ,8. 09 (s, 1Η)，7. 89-7. 95 (m, 4Η)，7. 79 (d, 2Η, J = 5. 2Ηζ)，7. 43-7. 56 (m, 5Η)，5. 13 (s, 2H)，4. 55 (d, 2H, J = 5. 6Hz)實(shí)施例6V-6N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺4-甲氧基苯甲酸(1. 52g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞 砜，按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-6)2. 15g，收率75.6%。將3,4- 二氨基吡啶(0. 109g, lmmol)、Μ_6(0· 285g, lmmol) ,HBTU(0. 379g, lmmol)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 204g，收率 54. 3% οMS (ES+) :m/e 377. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 9. 65 (s, 1Η)，8. 91 (t, 1H)，8. 09 (s, 1H)，
7.87-7. 92 (m, 4H)，7. 80 (d, 1H, J = 4. 8Hz)，7. 45 (d, 2H, J = 8. OHz)，7. 44-7. 50 (m, 4H)， 6. 62 (dd, 1H，J = 4. 8，7. 6Hz)，5. 69 (s, 2H)，4. 56 (d, 2H, J = 5. 6Hz)實(shí)施例7V-7N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_氟苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺4-氟苯甲酸(1. 40g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按 通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-7) 1. 91g，收率70. 1%.將3,4- 二氨基吡啶(0. 109g, lmmol)、Μ_7(0· 273g, lmmol) ,HBTU(0. 379g, lmmol)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 195g，收率 53. 6%oMS (ES+) :m/e 365. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 10. 44 (s, 1H) ,9. 63 (s, 1H) ,8. 11 (s, 1H)，
8.06-8. 10(m，2H)，8. 00(d，2H，J = 8. 8Hz)，7. 93 (d，2H，J = 8. 8Hz)，7. 81 (d，1H，J = 5. 2Hz)，7. 45 (d, 1H, J = 5. 2Hz)，7. 36-7. 41 (m, 2H, J = 5. 2Hz)，5. 14 (s, 2H)，4. 55 (d, 2H, J =6. 0Hz)
實(shí)施例8V-8N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺3-甲氧基苯甲酸(1. 52g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞 砜，按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-8)2. 15g，收率75.6%。將3,4- 二氨基吡啶(0. 109g, Immo 1)、Μ_8(0· 285g, Immo 1) ,HBTU(0. 379g, Immo 1)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 204g，收率 54. 3% οMS (ES+) :m/e 377. 12.1H-WrGOOMHz, DMS0_d6) δ ppm 9. 65 (s, 1H) ,9. 06 (t, 1H, J = 5. 6Hz) ,8. 10 (s, 1H)，7· 93(d，2H，J = 8. 4Hz)，7. 80 (d，2Η，J = 5. 6Hz), 7. 37-7. 50 (m, 6H) ,7.11 (m, 1H), 5. 12 (s，2H)，4. 55 (d, 2H, J = 6. OHz)，3. 80 (s, 3H)實(shí)施例9V-9N-(2-氨基-4-吡啶基)_4_(乙酰氨基)苯甲酰胺將乙酸酐(1. 02g, 1 Ommol)常溫下緩慢加入到對(duì)氨基苯甲酸(1. 37g, IOmmol)的氫 氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH到6左右，析出 大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-9)1.54g，收率86.2%。M-9 (0. 179g，lmmol)、3，4-二氨基吡啶(0. 109g，lmmol)、HBTU (0. 379g，lmmol)、 NN-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 141g，收率 52. 3%0MS (ES+) :m/e 271. 13.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 10. 24 (s, 1H), 9. 84 (s, 1H), 8. 09 (s, 1Η), 7. 93 (d, 2Η, J = 8. 8Ηζ)，7. 80 (d, 2Η, J = 5. 2Ηζ) ,7. 71 (d, 2Η, J = 8. 8Ηζ)，7. 43 (d, 1Η, J = 5. 2Ηζ)， 5. 14(s，2H)，2· 09(s，3H)實(shí)施例10V-ION-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(丙酰氨基)苯甲酰胺將丙酰氯(0. 92g，1 Ommol)常溫下緩慢加入到對(duì)氨基苯甲酸(1. 37g，1 Ommol)的氫 氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH到6左右，析出 大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-10)1.87g，收率84. 1%。M-IO (0. 193g, lmmol) ,3,4- 二氨基吡啶(0. 109g, lmmol)、HBTU(0. 379g, lmmol)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 171g，收率 60. 4%。MS (ES+) :m/e 285. 14.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 10. 09 (s, 1Η)，9· 58 (s, 1Η)，8· 10 (s，1Η)，7· 93 (d, 2Η, J = 8. 8Ηζ)，7. 80 (d, 2Η, J = 5. 2Ηζ)，7. 73 (d, 2Η, J = 8. 8Ηζ)，7. 43 (d, 1Η, J = 4. 8Ηζ)， 5. 11 (s，2Η)，2. 37 (q, 2Η, J = 7. 6Ηζ)，2. 09 (t, 3Η, J = 7. 6Hz)實(shí)施例11V-2IN-(2-氨基-4-吡啶基)-4-( 丁酰氨基)苯甲酰胺將正丁酰氯(0. 106g, 1 Ommol)常溫下緩慢加入到對(duì)氨基苯甲酸(1. 37g，1 Ommol) 的氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH到6左右，析出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-ll)1.70g，收率76.7%。M-Il (0. 207g, Immo 1) ,3,4- 二氨基吡啶(0. 109g, Immo 1)、HBTU(0. 379g, Immo 1)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 182g，收率 61. 3%oMS (ES+) :m/e 299. 16.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :10· 09 (s, 1Η)，9· 58 (s, 1Η)，8· 10(s, 1Η)，7· 93 (d, 2Η, J = 8. 8Ηζ)，7. 80 (d, 2Η, J = 5. 2Ηζ)，7. 73 (d, 2Η, J = 8. 8Ηζ)，7. 43 (d, 1Η, J = 4. 8Ηζ)， 5. ll(s，2H)，2. 32(t，2H，J = 7. 2Hz)，1· 63 (m，2Η)，0· 93(t，3H，J = 7. 2Hz)實(shí)施例12V-12N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_(環(huán)己酰氨基)苯甲酰胺環(huán)己基甲酸(1. 28g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按 通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-12)1.89g，收率76.7%。將3，4_ 二 氨基批啶(0. 109g，lmmol)、M-12(0. 247g，lmmol)、HBTU(0. 379g， lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 189g，收率55. 8%0MS (ES+) :m/e 339. 17.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 10. 09 (s, 1H)，9· 58 (s, 1H)，8· 10(s, 1Η)，7· 93 (d, 2H, J = 8. 8Hz)，7. 80 (d, 2H, J = 5. 2Hz)，7. 73 (d, 2H, J = 8. 8Hz)，7. 43 (d, 1H, J = 4. 8Hz)， 5. 11 (s，2H)，2. 36 (m, 1H)，1. 62-1. 80 (m, 5H)，1. 47-1. 75 (m, 5H)實(shí)施例13V-13N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_(苯甲酰氨基)苯甲酰胺苯甲酸(1. 22g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按通法 中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-13)1.85g，收率76.7%。M-13(0. 241g g, lmmol)、3，4_二氨基吡啶(0. 109g, lmmol) ,HBTU(0. 379g, lmmol)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法二產(chǎn)品V的方法制備得白色固 體 0. 186g，收率 55. 8%oMS (ES+) :m/e 333. 11.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 10. 46 (s, 1H) ,9. 62 (s, 1H) ,8. 10 (s, 1H)， 7. 93-8. 00 (m, 6H)，7. 81 (d, 1H, J = 4. 8Hz)，7. 61 (m, 1H)，7. 55 (m, 2H)，7. 44 (d, 1H, J = 4. 8Hz) ,5. 13(s，2H)實(shí)施例14V-14N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_甲氧基苯甲?；?氨基]苯甲酰胺4-甲氧基苯甲酸(1. 52g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞 砜，按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-14)2. 05g，收率75.6%。將3，4-二 氨基批啶(0. 109g，lmmol)、M-14(0. 271g，lmmol)、HBTU(0. 379g， lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 224g，收率61. 8%。MS (ES+) :m/e 363. 14.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 10. 30 (s, 1Η) ,9. 61 (s, 1Η) ,8. 10 (s, 1Η)，7.92-8. 01 (m,6H) ,7. 81 (d, 1H, J = 5. 2Hz), 7. 44 (d, 1H, J = 5. 2Hz)，7. 08 (d，2H，J =
8.8Hz)，5. 12(s，2H)，3. 86(s，3H)實(shí)施例15V-15N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_[(4-氟苯甲?；?氨基]苯甲酰胺4-氟苯甲酸(1. 40g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按 通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-15)1.91g，收率70.1%。將3，4_ 二 氨基批啶(0. 109g，lmmol)、M-15(0. 259g，lmmol)、HBTU(0. 379g， lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 205g，收率58. 6%0MS (ES+) :m/e 351. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 10. 44 (s, 1H) ,9. 63 (s, 1H) ,8. 11 (s, 1H)， 8. 06-8. 10(m，2H)，8. 00(d，2H，J = 8. 8Hz)，7. 93 (d，2H，J = 8. 8Hz)，7. 81 (d，1H，J = 5. 2Hz)，7. 45 (d, 1H, J = 5. 2Hz)，7. 36-7. 41 (m, 2H, J = 5. 2Hz)，5. 14 (s, 2H)實(shí)施例16V-16N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_[(3-甲氧基苯甲?；?氨基]苯甲酰胺3-甲氧基苯甲酸(1. 52g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞 砜，按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-16)2. 05g，收率75.6%。將2，3-二 氨基批啶(0. 109g，lmmol)、M-16(0. 271g，lmmol)、HBTU(0. 379g， lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 227g，收率62. 8%。MS (ES+) :m/e 363. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 10. 43 (s, 1Η) ,9. 63 (s, 1Η) ,8. 11 (s，1Η)，7· 99 (d， 2Η, J = 8. 8Hz)，7. 94(d，2H，J = 8. 8Hz)，7. 81 (d，1Η，J = 4. 8Hz)，7. 44-7. 59 (m，4H)，
7.19 (dd, 1H, J = 2. 4，8. OHz)，5. 13 (s, 2H)，3. 86 (s, 3H)實(shí)施例17V-17N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_(乙酰氨乙基)苯甲酰胺將乙酸酐(1. 02g, 1 Ommol)常溫下緩慢加入到對(duì)氨乙基苯甲酸(1. 65g, IOmmol)的 氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH到6左右，析 出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-17)1.78g，收率86%。M-17(0. 207g, lmmol) ,3,4- 二氨基吡啶(0. 109g, lmmol)、HBTU(0. 379g, lmmol)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 155g，收率 51. 9%oMS (ES+) :m/e 299. 13.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 68 (s, 1Η)，8· 38 (t, 1Η)，8· 10(s, 1Η)，7· 94 (d, 2Η, J = 8. OHz) ,7. 81 (dd, 1Η，J = 3· 6，5. 2Ηζ)，7. 44 (d, 2Η, J = 4. 8Ηζ)，7. 40 (d, 2Η, J =
8.4Ηζ)，5. 13 (s，2Η)，3. 53 (m, 2Η)，2. 74 (t, 2Η)，1. 90 (s, 3H)實(shí)施例18V-17N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_(乙酰氨丙基)苯甲酰胺將乙酸酐(1. 02g, 1 Ommol)常溫下緩慢加入到對(duì)氨丙基苯甲酸(1. 79g，1 Ommol)的
16氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH到6左右，析 出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-18)1.83g，收率83%。M-17(0. 221g, Immo 1) ,3,4- 二氨基吡啶(0. 109g, Immo 1)、HBTU(0. 379g, Immo 1)、 N，N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 157g，收率 50%。MS (ES+) :m/e 313. 13.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 68 (s, 1Η)，8· 38 (t, 1Η)，8· 10(s, 1Η)，7· 94 (d, 2Η, J = 8. OHz) ,7. 81 (dd, 1Η，J = 3· 6，5. 2Ηζ)，7. 44 (d, 2Η, J = 4. 8Ηζ)，7. 40 (d, 2Η, J = 8. 4Ηζ)，5. 13 (s，2Η)，3. 20 (m, 2Η)，2. 55 (t, 2Η)，1. 88 (m, 2H)，1. 90 (s, 3H)實(shí)施例19V-19N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-(1-乙酰氨基乙基)苯甲酰胺將乙酸酐(1. 02g，IOmrnol)常溫下緩慢加入到4_(1_氨基乙基)苯甲酸(1. 65g， 1 Ommol)的氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH 到6左右，析出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-19) 1. 61g，收率78%。M-I (0. 207g，lmmol)、3，4-二氨基吡啶(0. 109g，lmmol)、HBTU (0. 379g，lmmol)、N， N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 154g，收率 51. 7%0MS (ES+) :m/e 299. 13.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 68 (s, 1Η)，8· 38 (t, 1Η)，8· 10(s, 1Η)，7· 94 (d, 2Η, J = 8. OHz) ,7. 81 (dd, 1Η，J = 3· 6，5. 2Ηζ)，7. 44 (d, 2Η, J = 4. 8Ηζ)，7. 40 (d, 2Η, J = 8. 4Ηζ)，5. 13 (s，2Η)，4. 94 (m, 1Η)，1. 90 (s, 3Η)，1. 44 (d, 3H)實(shí)施例20V-20N-(2-氨基_4_吡啶基)-4_(1_乙酰氨基_2_苯基乙基)苯甲酰胺將乙酸酐(1. 02g，IOmrnol)常溫下緩慢加入到4_(1_氨基_2_苯基乙基)苯甲酸 (2. 41g, IOmmol)的氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸 調(diào)節(jié)PH到6左右，析出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-20)2.09g，收率74%。M-I (0. 283g，lmmol)、3，4-二氨基吡啶(0. 109g，lmmol)、HBTU (0. 379g，lmmol)、N， N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 191g，收率 51. 0%oMS (ES+) :m/e 375. 16.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 68 (s, 1Η)，8· 38 (t, 1Η)，8· 10(s, 1Η)，7· 94 (d, 2Η, J = 8. OHz) ,7. 81 (dd, 1Η，J = 3· 6，5. 2Ηζ)，7. 44 (d, 2Η, J = 4. 8Ηζ)，7. 40 (d, 2Η, J = 8. 4Ηζ)，7. 24 (s，5Η)，5. 26 (m, 1Η)，5. 13 (s, 2Η)，2. 97 (d, 2H)，1. 90 (s, 3H)實(shí)施例21V-21N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-(2_乙酰氨基丙基)苯甲酰胺將乙酸酐(1. 02g, IOmmol)常溫下緩慢加入到4_(2_氨基丙基)苯甲酸(1. 79g， 1 Ommol)的氫氧化鈉溶液(10ml，lmol/L)當(dāng)中，常溫?cái)嚢柽^(guò)夜。停止反應(yīng)，5N鹽酸調(diào)節(jié)pH 到6左右，析出大量固體。過(guò)濾、干燥得白色固體(中間體M-21) 1. 68g，收率76%。M-I (0. 221g，lmmol)、3，4-二氨基吡啶(0. 109g，lmmol)、HBTU (0. 379g，lmmol)、N，
17N-二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 303g，3mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得白色固體 0. 166g，收率 53. 0%oMS (ES+) :m/e 313. 16.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 68 (s, 1Η)，8· 38 (t, 1Η)，8· 10(s, 1Η)，7· 94 (d, 2Η, J = 8. OHz) ,7. 81 (dd, 1Η，J = 3· 6，5. 2Ηζ)，7. 44 (d, 2Η, J = 4. 8Ηζ)，7. 40 (d, 2Η, J = 8. 4Ηζ)，5. 13 (s，2Η)，2. 89 (m, 1Η)，2. 64 (m, 2Η)，1. 30 (d, 3H)實(shí)施例22V-22N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3，4_ 二甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺3，4-二 甲氧基苯甲酸(1. 82g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，4(kimol)、IOml 溶劑氯化 亞砜，按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-22)2. 38g，收率75.6%。將3，4-二 氨基批啶(0. 109g，lmmol)、M-22(0. 315g，lmmol)、HBTU(0. 379g， lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 220g，收率54. 3%0MS (ES+) :m/e 407. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm 9. 65 (s, 1H)，8. 91 (t, 1H)，8. 09 (s, 1H)， 7. 87-7. 92 (m, 4H)，7. 80 (d, 1H, J = 4. 8Hz)，7. 61 (s，1H)，7. 45 (d, 2H, J = 8. OHz)， 7. 44-7. 50 (m, 2H)，6. 62 (dd, 1H，J = 4. 8，7. 6Hz)，5. 69 (s, 2H)，4. 56 (d, 2H, J = 5. 6Hz)實(shí)施例23￥-23^(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3，4，5_三甲氧基苯甲酰基)氨甲基]苯甲酰胺3，4，5_三甲氧基苯甲酸(2. 12g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，4(kimol)、IOml 溶劑氯 化亞砜，按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-23)2.61g，收率75.6%。將3，4- 二氨基批啶(0. 109g, lmmol)、M-23 (0. 345g, lmmol)、HBTU (0. 379g, lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 235g，收率54%。MS (ES+) :m/e 437. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 91 (t, 1Η)，8· 09 (s，1Η)，7· 92 (m, 1Η)，7. 80 (d, 2Η, J = 7. 6Ηζ)，7. 24 (d, 2Η, J = 7. 6Ηζ)，6. 83 (s, 2Η)，6. 62 (d, 1Η, J = 7. 6Ηζ)， 5. 69 (s，2Η)，4. 56 (d, 2Η, J = 5. 6Hz)實(shí)施例24V-24N_(2-氨基-4-吡啶基)-4_[(4-吡啶甲?；?氨甲基]苯甲酰胺4-吡啶甲酸(1. 23g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按 通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-24) 1.97g，收率77%。將3，4- 二氨基批啶(0. 109g, lmmol)、Μ_24(0· 256g, lmmol)、HBTU(0. 379g, lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 205g，收率59%。MS (ES+) :m/e 348. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 91 (t, 1Η)，8· 38 (s，1Η)，8· 77 (d, 2Η)，8. 08 (d, 1Η)，7. 73 (d, 2Η)，7. 83 (d, 2Η)，7. 37 (m, 1H)，7. 24 (d, 2H)，6. 66 (d, 1H)，5. 69 (s, 2H), 4. 56(d，2H)
實(shí)施例25V-25N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_嗎啉甲?；?氨甲基]苯甲酰胺將CDI (1. 62g，IOmrnol)溶于IOml無(wú)水四氫呋喃中，冰浴控制溫度在0-10°C。在 10分鐘內(nèi)分三次加入嗎啉(0. 87g，1 Ommol)和IOml無(wú)水四氫呋喃混合液，保持0-10°C繼 續(xù)反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)液變澄清。在0-10°C下將上述混合液滴加到對(duì)氨甲基苯甲酸(1.51g， 1 Ommol)和氫氧化鈉的水溶液(10ml，lmol/L)中，室溫繼續(xù)攪拌4小時(shí)，停止反應(yīng)。5N鹽酸 調(diào)節(jié)PH到5左右，反應(yīng)液變澄清。減壓蒸出溶劑約15ml，大量固體析出，過(guò)濾、真空干燥得 白色固體(中間體M-25)2. 28g，收率86. 2%。將3，4- 二氨基批啶(0. 109g, Immo 1)、Μ_24(0· 264g, Immo 1)、HBTU(0. 379g, lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 209g，收率59%。MS (ES+) :m/e 356. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 91 (t, 1Η)，8· 38 (s，1Η)，8· 08 (d, 1Η)，7. 83 (d, 2Η)，7. 24 (d, 2Η)，6. 66 (d, 1Η)，5. 69 (s, 2H)，4. 56 (d, 2H)，3. 56 (d, 2H)，3. 31 (d, 2H)實(shí)施例26V-26N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_三氟甲基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺3-三氟甲基苯甲酸(1. 90g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞 砜，按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-26)2.51g，收率78%。將3，4- 二氨基批啶(0. 109g, lmmol)、M-26 (0. 323g, lmmol)、HBTU (0. 379g, lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 194g，收率47%。MS (ES+) :m/e 415. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 91 (t, 1Η)，8· 38 (s，1Η)，8· 14 (s， 1Η)，8. 08 (d, 1Η)，7. 95 (d, 1Η)，7. 92 (d, 1H)，7. 83 (d, 2H)，7. 37 (m, 1H)，7. 24 (d, 2H)，6. 66 (d, 1H), 5. 69(s，2H) ,4. 56 (d, 2H)實(shí)施例27V-27N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_硝基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺3-硝基苯甲酸(1. 67g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜， 按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-27)2.51g，收率81%。將3，4- 二氨基批啶(0. 109g, lmmol)、M-27 (0. 300g, lmmol)、HBTU (0. 379g, lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 215g，收率55%。MS (ES+) :m/e 392. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 91 (t, 1Η)，8· 72 (s，1Η)，8· 51 (d, 1Η)，8. 38 (s，1Η)，8. 34 (d, 1Η)，8. 08 (d, 1Η)，5. 69 (s, 2H)，7. 85 (m, 1H)，7. 83 (d, 2H)，7. 24 (d, 2H), 6. 66 (d, 1H), 4. 56(d，2H)實(shí)施例28V-28N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_氨基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺
將V-27(0. 391g，lmmol)溶于甲醇中，加入二水合氯化亞錫(0. 76g，4mmol)，加熱 回流3h，反應(yīng)完畢，蒸干甲醇，加水100ml，飽和碳酸鉀調(diào)pH到10，二氯甲烷提取，無(wú)水硫酸 鎂干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，得產(chǎn)品0. 292g，收率81 %。MS (ES+) :m/e 362. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s，1H)，8· 38 (s，1H)，8· 08 (d，1H)，7· 83 (d， 2Η)，7. 31 (d, 1H)，7. 24 (d, 2H)，7. 19 (m, 1H)，7. 15 (s, 1H)，6. 71 (d, 2H)，6. 66 (d, 1H)，5. 69 (s, 2H), 5. 85(s，2H) ,4. 56 (d, 2H)實(shí)施例29V-29N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_氯苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺3-氯苯甲酸(1. 56g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按 通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-28)2. 40g，收率83%。將3，4- 二氨基批啶(0. 109g, Immo 1)、M-28 (0. 289g, Immo 1)、HBTU (0. 379g, lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 205g，收率54%。MS (ES+) :m/e 381. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 38 (s, 1Η)，8· 08 (d, 1Η)，7· 87 (s, 1Η)，7. 83 (d, 2Η)，7. 69 (d, 1Η)，7. 67 (d, 1Η)，7. 58 (m, 1H)，7. 24 (d, 2H)，6. 66 (d, 1H)，5. 69 (s, 2H), 4. 56(d，2H)實(shí)施例30V-30N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(2，4_ 二氯苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺3-氯苯甲酸(1. 89g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜，按 通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-29)2. 84g，收率88%。將3，4- 二氨基批啶(0. 109g, lmmol)、M-29 (0. 323g, lmmol)、HBTU (0. 379g, lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 207g，收率50%。MS (ES+) :m/e 415. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 38 (s, 1Η)，8· 08 (d, 1Η)，7· 83 (d, 2Η)，7. 61 (s，1Η)，7. 49 (d, 1Η)，7. 46 (d, 1Η)，7. 24 (d, 2Η)，6. 66 (d, 1H)，5. 69 (s, 2H)，4. 56 (d, 2H)實(shí)施例31V-31N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_苯基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺4-苯基苯甲酸(1. 98g，1 Ommol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜， 按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-30)2. 64g，收率80%。將3，4-二 氨基批啶(0. 109g，lmmol)、M-30(0. 331g，lmmol)、HBTU(0. 379g， lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(10ml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 231g，收率55%。MS (ES+) :m/e 423. 12.1H-NMR (400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 38 (s, 1Η)，8· 08 (d, 1Η)，7· 83 (d, 2Η)，7. 82 (d, 2Η)，7. 75 (d, 2Η)，7. 48 (m, 1Η)，7. 46 (m, 2H)，7. 24 (d, 2H)，7. 09 (d, 2H)，6. 66 (d,
201H), 5. 69(s，2H) ,4. 56 (d, 2H)實(shí)施例32V-31N_(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_苯基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺3-苯基苯甲酸(1. 98g，IOmmol)、氯化亞砜(4. 72g，40mmol)、IOml溶劑氯化亞砜， 按通法中間體III的制備方法得白色固體(中間體M-30)2. 64g，收率80%。將3，4-二 氨基批啶(0. 109g，lmmol)、M-30(0. 331g，lmmol)、HBTU(0. 379g， lmmol)、N, N- 二甲基甲酰胺(IOml)、三乙胺(0. 202g，2mmol)，按通法產(chǎn)品V的方法制備得 白色固體0. 231g，收率55%。MS (ES+) :m/e 423. 12.1H-NMR(400MHz, DMS0_d6) δ ppm :9· 65 (s, 1Η)，8· 38 (s, 1Η)，8· 17(s, 1Η)，8· 08 (d, 1Η)，7. 91 (d, 1Η)，7. 83 (d, 2Η)，7. 75 (d, 2Η)，7. 73 (d, 1H)，7. 50 (m, 1H)，7. 48 (m, 1H)，7. 46 (m, 2H)，，7. 24 (d, 2H)，6. 66 (d, 1H)，5. 69 (s, 2H)，4. 46 (d, 2H)實(shí)施例33化合物的組蛋白去乙酰化酶體外抑制活性測(cè)定參照HDAC抑制劑篩選試劑盒 (Biovision公司/Catalog#K340-100)說(shuō)明書進(jìn)行。將待測(cè)化合物分別配制成200uM、40uM 的溶液，檢測(cè)化合物在該濃度下的抑酶情況。結(jié)果如下 實(shí)施例34化合物的腫瘤細(xì)胞體外抑制活性測(cè)定化合物在ΙΟΟμΜ和ΙΟμΜ下對(duì)Hut78T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞、Jurkat E6-1人 T細(xì)胞淋巴瘤、PANC-I人胰腺癌細(xì)胞、A549人肺癌細(xì)胞、K562人慢性髓原白血病細(xì)胞、Hep3B2. 1-7人肝癌細(xì)胞、MDA_MB_435s人乳腺癌細(xì)胞、Colo320人直腸癌細(xì)胞系、PC-3人前 列腺癌、HCT 116人結(jié)腸癌細(xì)胞、HepG2人肝癌細(xì)胞株、MDA-MB-435人乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞、 MKN-45胃癌細(xì)胞株抑制率通過(guò)CCK-8法測(cè)得。具體結(jié)果如下
化合物對(duì) Hut78、Jurkat E6-1、PANC-1、A549、HepG2 細(xì)胞的抗增殖作用 化合物對(duì) Κ562、H印3Β2. 1-7、MDA-MB-435S、Colo320、PC-3 細(xì)胞的抗增殖作用
K562
Hep3B2.1-7 MDA-MB-435S
Colo320
PC-3
100 μΜ10 μΜ100 μΜV-I337-11V-25020-12V-36929-18V-47456-12V-581728
100 μΜ10 μΜ100 μΜΙΟμΜ100 μΜΙΟμΜ-36-25-623-10-13 -21-25 -19-2 -72 -6-5 6-16 0-12-56-8O16413-164313-5
22 化合物對(duì)MKN-45、MDA-MB-435、HCTl 16細(xì)胞的抗增殖作用
實(shí)施例35
對(duì)實(shí)施例5、6、7、8、12、13、14、15、16的化合物進(jìn)行小鼠LD50測(cè)試，灌胃給藥方法參照北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社出版的《現(xiàn)代藥理實(shí)馬僉方法》第LD50值均大于2g/kg。
實(shí)施例36
片劑實(shí)施例1-32的化合物IOmg
蔗糖150mg
玉米淀粉38mg
硬脂酸鈣2mg
制備方法將活性成分與蔗糖、玉米淀粉混合，加水濕潤(rùn)，攪拌均勻，干燥，粉碎過(guò) 篩，加入硬脂酸鈣，混合均勻，壓片。每片重200mg，活性成分含量為10mg。實(shí)施例37針劑實(shí)施例1-32的化合物 20mg注射用水80mg制備方法將活性成分溶解與注射用水，混合均勻，過(guò)濾，將所獲得的溶液在無(wú)菌 條件下分裝與安瓿瓶中，每瓶10mg，活性成分含量為2mg/瓶。
權(quán)利要求
N (2 氨基 4 吡啶基) 苯甲酰胺衍生物，其特征在于，為具有如下化學(xué)結(jié)構(gòu)通式的化合物或其鹽其中，其中R為氫、1至5個(gè)碳原子的烷基、C5或C6的脂肪環(huán)、芳環(huán)或雜環(huán)，R1為氫、C1 C5的烷基、C5，或C6的脂肪環(huán)，苯基或取代苯基；n＝0，1，2，3。F2009100519366C0000011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-(2-氨基-4-吡啶基)_苯甲酰胺衍生物，其特征在于，芳 環(huán)或雜環(huán)含有1至4個(gè)取代基，其取代基為鹵素、氨基、羥基、硝基、氰基、1至4個(gè)碳原子的 烷基、1至4個(gè)碳原子的烷氧基、1至4個(gè)碳原子的氨烷基、1至4個(gè)碳原子的烷氨基、2至4 個(gè)碳原子的酰基、2至4個(gè)碳原子的酰氨基、1至4個(gè)碳原子的硫代烷基、三氟甲基、1至4個(gè) 碳原子的羧基、1至4個(gè)碳原子的烷氧基羰基、苯基或雜環(huán)取代基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-(2-氨基-4-吡啶基)_苯甲酰胺衍生物，其特征在于，所 述的取代苯基為苯環(huán)上含有1至4個(gè)取代基，其取代基為鹵素、羥基、硝基、氰基、1至4個(gè)碳 原子的烷氧基、1至4個(gè)碳原子的烷基或氨基基團(tuán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-(2-氨基-4-吡啶基)_苯甲酰胺衍生物，其特征在于，所 述雜環(huán)為四氫吡咯、二氫吡唑、哌啶、嗎啉、咪唑或吡啶。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的N-(2-氨基-4-吡啶基)_苯甲酰胺衍生物，其特征在 于，所述的鹵素為氟、氯、溴或碘。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的Ν-(2-氨基-4-吡啶基)-苯甲酰胺衍生物，其特征在于所 述的1至4個(gè)碳原子的烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或特丁基；所述的1至4個(gè)碳原子的烷氧基為甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基或異 丁氧基；所述的1至4個(gè)碳原子的氨基烷基為氨基乙基、1-氨基丙基或2-氨基丙基；所述的1至4個(gè)碳原子的烷基氨基為N-甲氨基、N-乙氨基或N-異丙氨基；所述的2至4個(gè)碳原子的?；鶠橐阴；⒈；虍惗□；?；所述的2至4個(gè)碳原子的酰氨基為乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基或異丁酰氨基；所述的2至4個(gè)碳原子的硫代烷基為甲硫基、乙硫基或丙硫基。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的N-(2-氨基-4-吡啶基)_苯甲酰胺衍生物，其特征在于所述的1至4個(gè)碳原子的烷氧基為甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基或異丁氧基，1至4個(gè)碳原子的烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或特丁基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-(2-氨基-4-吡啶基)_苯甲酰胺衍生物，其特征在于所 述的鹽為鹽酸鹽、溴氫酸鹽、硫酸鹽、三氟醋酸鹽或甲磺酸鹽。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的Ν-(2-氨基-4-吡啶基)-苯甲酰胺衍生物，其特征在于所 說(shuō)的鹽含0. 5-3分子的結(jié)晶水。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的N-(2-氨基-4-吡啶基)_苯甲酰胺衍生物，其特征在于 所述的化合物包括V-IN- (2-氨基-4-吡啶基)-4-(乙酰氨甲基)苯甲酰胺、V-2N- (2-氨基-4-吡啶基)-4-(丙酰氨甲基)苯甲酰胺、V-3N- (2-氨基-4-吡啶基)-4- ( 丁酰氨甲基)苯甲酰胺、V-4N- (2-氨基-4-吡啶基)-4-(環(huán)己酰氨甲基)苯甲酰胺、V-5N- (2-氨基-4-吡啶基)-4-(苯甲酰氨甲基)苯甲酰胺、V-6N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-7N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4-氟苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-8N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-9N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(乙酰氨基)苯甲酰胺、V-10N- (2-氨基-4-吡啶基)-4-(丙酰氨基)苯甲酰胺、V-IIN- (2-氨基-4-吡啶基)-4- ( 丁酰氨基)苯甲酰胺、V-12N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(環(huán)己酰氨基)苯甲酰胺、V-13N- (2-氨基-4-吡啶基)-4-(苯甲酰氨基)苯甲酰胺、V-14N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_甲氧基苯甲?；?氨基]苯甲酰胺、V-15N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4-氟苯甲酰基)氨基]苯甲酰胺、V-16N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3_甲氧基苯甲酰基)氨基]苯甲酰胺、V-17N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(乙酰氨乙基)苯甲酰胺、V-18N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(1_乙酰氨丙基)苯甲酰胺、V-19N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(1-乙酰氨基乙基)苯甲酰胺、V-20N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(1-乙酰氨基2-苯基乙基)苯甲酰胺、V-21N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-(2_乙酰氨基丙基)苯甲酰胺、V-22N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3，4_ 二甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-23N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3，4，5_三甲氧基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-24N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4_吡啶甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-25N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4-嗎啉甲酰基)氨甲基]苯甲酰胺、V-26N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3-三氟甲基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-27N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3-硝基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-28N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3-氨基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-29N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3-氯苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-30N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(2，4_ 二氯苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺、V-31N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(4-苯基苯甲酰基)氨甲基]苯甲酰胺或V-32N-(2-氨基-4-吡啶基)-4-[(3-苯基苯甲?；?氨甲基]苯甲酰胺。
11.權(quán)利要求1 10任一項(xiàng)所述的化合物或其鹽在制備治療癌癥及與分化和增殖相關(guān) 的疾病藥物中的應(yīng)用。
12.—種組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1 10任一項(xiàng)所述的化合物或其鹽和醫(yī) 藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種N-(2-氨基-4-吡啶基)-苯甲酰胺衍生物及其應(yīng)用，為一類組蛋白去乙?；敢种苿Ｋ龅鞍兹ヒ阴；敢种苿┛捎糜谥委煱┌Y、白血病及與分化和增殖有關(guān)的疾病。該組蛋白去乙?；敢种苿榫哂幸韵陆Y(jié)構(gòu)通式的化合物或其鹽
文檔編號(hào)A61P35/02GK101899001SQ20091005193
公開(kāi)日2010年12月1日 申請(qǐng)日期2009年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月25日
發(fā)明者馮娟, 張子學(xué), 李建其, 殷濤, 蔡王平 申請(qǐng)人:江蘇國(guó)華投資有限公司;上海醫(yī)藥工業(yè)研究院