專利名稱：：一種Ⅱ型膠原海綿支架及其用途的制作方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明屬于生物醫(yī)學領域，涉及一種組織工程中軟骨修復用的II型膠原海綿支架。
背景技術(shù)：
：軟骨缺損在臨床上尚無特效治療方法，組織工程軟骨移植是目前治療軟骨缺損最新、最有希望的治療技術(shù)之一，即將體外培養(yǎng)的種子細胞種植于天然或人工合成的、可在機體降解和吸收的材料支架上，然后將復合物移植入動物或人體內(nèi)的缺損部位，形成具有類似軟骨結(jié)構(gòu)和功能的組織，從而完成缺損部位的修復與再造。組織工程對支架材料的要求較高，它決定了組織工程軟骨的質(zhì)量。為了尋找理想的軟骨移植材料，國內(nèi)外的學者對各種材料做了大量研究。如對聚乳酸、聚乳酸二聚羥基乙酸(PLGA)、聚酐等多種人工合成材料進行了體外或在體實驗研究后發(fā)現(xiàn)，人工合成材料缺乏粘附能力，細胞容易滑落，難以進入多孔的支架材料中生長繁殖，另外其降解產(chǎn)物還有一定的毒性。膠原是人體內(nèi)含量最豐富的蛋白，具有良好的生物相容性，生物降解性，低免疫原性，廣泛應用于生物醫(yī)用材料領域，膠原作為支架材料在組織工程研究應用中主要以廣泛存在于體內(nèi)的I型膠原為主，如人工骨、人造皮膚、人造血管的研究等等。II型膠原是透明軟骨的主要成份之一，是維持軟骨細胞功能的關(guān)鍵角色，在體內(nèi)主要存在于透明軟骨及彈性軟骨中，II型膠原由正常軟骨細胞分泌。II型膠原在維持軟骨組織結(jié)構(gòu)完整性方面具有多種生理功能，例如，傳送營養(yǎng)到細胞，通過細胞表面受體的相互作用進行生理上的調(diào)節(jié)，支持從基質(zhì)到細胞之間傳送信息等，其在調(diào)節(jié)細胞的存活、繁殖、分化、骨重塑和軟骨形4成中扮演重要角色。但由于n型膠原提取方法復雜，材料支架成形的研究及動物實驗相對困難，目前有很多n型膠原提取方法的文獻報道，但提取的多為混合物或粗提物，中國第200810045418號專利申請"一種醫(yī)用級II型膠原的制備方法"及葉春婷、李斯明等在《中國矯形外科雜志》2001年1月第8巻第l期上的"II型膠原的研制及其在軟骨細胞培養(yǎng)中的應用"和《生物醫(yī)學工程學雜志》上的"高純度豬軟骨n型膠原的制備與檢測，，等文獻公開了的目前較為理想的n型膠原的提取方法，可以得到高純度的n型膠原。以此為基礎，把提取得到的n型膠原冷凍干燥，得到的膠原海綿易溶于水，難以作為細胞培養(yǎng)支架材料；也有文獻報道采用凝膠狀II型膠原作為組織工程移植材料，但其缺乏力學強度，移植到體內(nèi)后迅速被機體溶解吸收，由于該n型膠原支架分解吸收速度過快，軟骨組織還沒有成型，難以達到軟骨修復的目的。
發(fā)明內(nèi)容為了克服上述缺陷，本發(fā)明提供一種具有合適孔徑及力學性能的軟骨ii型膠原海綿支架。本發(fā)明的n型膠原海綿支架，是通過如下方法制備的(1)n型膠原溶液的制備，提供高純度n型膠原溶液；(2)n型膠原溶液的濃縮，將步驟(i)得到的n型膠原溶液注入透析袋中，用足量的聚乙二醇粉劑包埋透析袋，然后置于低溫下濃縮，收集備用；(3)冷凍干燥，將步驟(2)得到的濃縮n型膠原溶液注入凍干瓶中，于-80。C低溫冰箱中冷凍，然后在真空冷凍干燥機中冷凍干燥，即得均勻連通孔徑的n型膠原海綿；(4)交聯(lián)，配制碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺的乙醇溶液作交聯(lián)劑，將步驟(3)得到的n型膠原海綿浸泡在上述交聯(lián)劑中進行交聯(lián)，交聯(lián)后的n型膠原海綿用蒸餾水清洗干凈，再進行步驟(3)的冷凍干燥步驟，即得n型膠原海綿支架。其中，步驟(2)中用聚乙二醇粉劑包埋透析袋后，置于4。C下濃縮1.5小時。步驟(3)中濃縮n型膠原溶液在凍干瓶中于-80。C低溫冰箱中冷凍24小時。步驟(3)中-80。C冷凍后的II型膠原海綿在冷凍干燥機中于-30-4(TC下進行冷凍干燥25小時。步驟(4)中所述交聯(lián)劑為碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，溶解在95%乙醇里，配制成的碳化二亞胺濃度為33mmol/L、N-羥基琥珀酰亞胺濃度為8mmol/L的交聯(lián)劑。所述II型膠原海綿在交聯(lián)劑中交聯(lián)的時間為24小時。進一步地，步驟(4)制備出來的II型膠原海綿支架，用0)6()進行消毒后備用。本發(fā)明中用到的高純度II型膠原溶液的提取，可以采用現(xiàn)有的提取方法，詳細可參照李斯明、葉春婷等在《生物醫(yī)學工程學雜志》(2001,18(4)592-594)上的"高純度豬軟骨II型膠原的制備與檢測"中公開的制備方法。該制備方法是以豬透明軟骨為原料，采用鹽酸胍抽提蛋白多糖，酸性條件下酶解，中間過程經(jīng)多步純化去除雜質(zhì)、降解及變性產(chǎn)物，鹽析純化制備出產(chǎn)品，經(jīng)SDS-PAGE電泳、氨基酸成份分析和紫外最大吸收光譜的結(jié)果表明，所提取的II型膠原為高純度II型膠原，該提取方法采用豬作原料，來源豐富，成本低，是一種較理想的提取方法。本發(fā)明的II型膠原海綿支架制備過程中，采用聚乙二醇對提取后的II型膠原溶液進行濃縮，可以控制凍干后膠原海綿的孔徑大小，未經(jīng)過濃縮的n型膠原溶液的濃度為2.9mg/ml3.1mg/ml,其凍干后的海綿孔徑為130mm左右，孔徑偏大，經(jīng)過本發(fā)明的提供的方法把II型膠原溶液可濃縮為4.1mg/ml，其凍干后制得的膠原海綿的孔徑為92mm左右，孔徑適中，更適合軟骨細胞或骨髓間充質(zhì)細胞的生長。II型膠原海綿制備之后還進行交聯(lián)，用碳化二亞胺(EDC)和N-雍基琥珀酰亞胺(NHS)雙重交聯(lián)，提高了II型膠原海綿材料的力學強度，增加了孔徑結(jié)構(gòu)的三維穩(wěn)定性，交聯(lián)后的海綿支架在彈性模量及極限拉應力方面均有很大程度的提高。交聯(lián)后的n型膠原海綿支架適合在水溶性培養(yǎng)基中作為支架材料與種子細胞長期共培養(yǎng)，而未交聯(lián)的海綿材料易溶于水，難以進行三維細胞培養(yǎng)。本發(fā)明的n型膠原海綿支架可作為組織工程植入物，用于修復關(guān)節(jié)軟骨缺損；從動物實驗結(jié)果中顯示本發(fā)明的n型膠原海綿支架在體內(nèi)降解時間約為23個月，原缺損處由大片新生骨和軟骨組織替代，有良好的修復效果。本發(fā)明的n型膠原海綿支架可作為組織工程植入物，細胞培養(yǎng)支架材料或藥物控釋等應用于軟骨損傷修復的防治。圖l為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料外觀圖2a為未濃縮的II型膠原海綿激光共聚焦顯微鏡掃描圖(x200);圖2b為濃縮的II型膠原海綿激光共聚焦顯微鏡掃描圖(x200);圖3為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料的電子顯微鏡掃描圖4為熒光顯微鏡下(xl00)，轉(zhuǎn)染GFP基因的3T3細胞在本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料中增殖情況圖5為激光共聚焦顯微鏡下(x400)轉(zhuǎn)染GFP基因的軟骨細胞在本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料中立體培養(yǎng)，成團生長情況圖，其中箭頭所示為GFP轉(zhuǎn)染軟骨細胞集落；圖6為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料移植動物實驗術(shù)后2周顯微鏡下觀察圖，可見仍有大量支架材料存在于缺損區(qū)中，并有大量的纖維母細^^和類軟骨細胞爬行進入材料中生長；圖7為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料移植動物實驗術(shù)后2周顯微鏡下觀察圖，II型膠原材料免疫組化染色顯示移植材料呈現(xiàn)陽性，表明植入物為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料；圖8為本發(fā)明的n型膠原海綿支架材料移植動物實驗術(shù)后6周的顯樣吏鏡下觀察圖，可見大部分材料已經(jīng)被降解和吸收，原缺損處由大片新生骨和軟骨組織填充，僅余少量支架材料殘留(方框內(nèi)所示)。具體實施方式實施例一、1、高純度n型膠原的制備參照李斯明、葉春婷等，高純度豬軟骨II型膠原的制備與檢測，生物醫(yī)學工程學雜志，2001,18(4)592-594材料新鮮豬關(guān)節(jié)軟骨取材于屠場新鮮屠宰的豬的四肢關(guān)節(jié)軟骨鹽酸胍Farco500g/弁瓦胃蛋白酶Sigma100g/瓶其余均為國產(chǎn)分析純試劑。方法從新鮮屠宰的豬四肢關(guān)節(jié)中切取透明軟骨，切成薄片，脫脂、搗碎、制勻漿，然后用10倍體積的4M(pH7.5)鹽酸胍攪拌24小時，離心分離；沉淀徑充分洗滌，稱取沉淀濕重約為260g軟骨顆粒，用質(zhì)量比l/50的胃蛋白酶在酸性條件下酶解24~48h,離心，上清液經(jīng)EDTA終止酶解后用10%NaCl鹽析，沉淀用2000ml的0.5MHAc使其充分溶解，對水透析脫鹽和脫酸，得到"交原溶液原液(濃度為2.9mg/ml左右，以下實驗都以此濃度的膠原溶液為基礎進行檢測及實驗)。上述制備方法制備的II型膠原溶液，純度較高，若需要進一步得到更高純度的II型膠原溶液，可將上述制備方法制備出的II型膠原溶液進一步上SepharoseH.P.陰離子柱,再進行層析純化。2、II型膠原溶液的純度檢測根據(jù)李斯明、葉春婷等在《生物醫(yī)學工程學雜志》2001，18(4)592-594上的"高純度豬軟骨II型膠原的制備與檢測，，中公開的檢測方法對II型膠原溶液進行純度檢測，此處不再贅述。3、II型膠原溶液的濃縮，將上述得到的初始濃度為2.9mg/ml的II型膠原溶液注入長約15cm直徑約為5cm的透析袋中，密封后置于500ml的燒杯中，再加入足量的聚乙二醇粉劑(分子量6000D)包埋透析袋，然后置于干燥皿中在4'C下濃縮1.5小時，收集備用。4、冷凍干燥，上述得到的濃縮后的II型膠原溶液注入凍干瓶中，于-80。C低溫水箱中冷凍24小時，然后置于真空冷凍干燥機中在-30。C-4(TC下冷凍干燥25小時取出，即得均勻連通孔徑的II型膠原海綿。5、交聯(lián)，將碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶解在95%的乙醇溶液中，配制成EDC濃度為33mmol/L,NHS濃度為8mmol/L的交聯(lián)劑，將上述得到的均勻連通孔徑的II型膠原海綿浸泡在上述交聯(lián)劑中，室溫下交聯(lián)24小時，交聯(lián)后的II型膠原海綿用蒸餾水清洗干凈，再進行上述的冷凍干燥步驟，即得n型膠原海綿支架材料。把n型膠原海綿支架用co6Q消毒備用。圖1所示為本發(fā)明的II型膠原海綿支架外觀結(jié)構(gòu)圖。實驗例一、II型膠原海綿支架材料的孔徑檢測按上述方法制得n型膠原海綿材料，分為原液無交聯(lián)組、原液交聯(lián)組、濃縮無交聯(lián):組、濃縮交聯(lián):組。采用激光共聚焦顯微鏡對各種孔徑的膠原海綿進行膠原自發(fā)熒光分層掃描，激發(fā)波長為488nm,發(fā)射波長為520nm，以自發(fā)焚光信號強度為限進行測量，測定海綿材料的孔徑大?。皇褂肅LSM圖像分析系統(tǒng)進行操作和分析，然后以SPSS13.O軟件包對數(shù)據(jù)處進行統(tǒng)計。如圖2所示，激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示各組的膠原海綿均具有明顯的自發(fā)熒光，表明制備的材料具有膠原特有的生物學特性，經(jīng)聚乙二醇濃縮后，本發(fā)明的II型月交原海綿孔徑明顯縮小。激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示經(jīng)聚乙二醇濃縮后膠原海綿的孔徑明顯縮小，92.17±29.55^m的孔徑符合軟骨細胞的生長要求。交聯(lián)前后材料孔徑變化不大，結(jié)果如表1所示。由表中看出，本發(fā)明的膠原海綿支架(濃縮交聯(lián)組)具有適宜的軟骨細胞生長的孔徑。而未經(jīng)濃縮的原液組海綿孔徑偏大。表in型膠原海綿孔徑分析結(jié)果比較(<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注原液組與交聯(lián)組比較代0.01,各組交聯(lián)前后比較》0.05實驗例二n型膠原支架材料的溶解度檢測按上述方法制得II型膠原海綿材料，分為交聯(lián)組和未交聯(lián)組。將II型膠原海綿材料剪裁成1xlcm2大小，放入6孔培養(yǎng)板中，加入DMEM培養(yǎng)基3ml，37°C條件下觀察海綿狀況。結(jié)果顯示未交聯(lián)的II型膠原海綿材料加入培養(yǎng)液后即出現(xiàn)膨脹現(xiàn)象，部分溶解，材料變軟，呈半透明狀態(tài)；7日后材料完全溶解。經(jīng)過交聯(lián)后的海綿材料加入培養(yǎng)液后外觀保持不變，種入細胞后至50天時仍能保持完整狀態(tài)。實驗例三掃描電鏡觀察II型膠原支架材料表面結(jié)構(gòu)將實施例一制得的凍干的海綿支架材料制備成直徑4腿,厚2腿的圓柱形，密封備用。取備用的支架材料行離子濺射儀真空鍍金，掃描電鏡觀察II型膠原海綿材料的表面結(jié)構(gòu)。結(jié)果如圖3所示，電鏡下掃描本發(fā)明的n型膠原海綿支架材料有均勻的連通孔徑。實驗例四n型膠原支架材料的生物力學分析按上述方法制得n型膠原海綿材料，分為交聯(lián)組和未交聯(lián)組；將n型膠原海綿材料剪裁成O.5xl.5cm2大小，備用。用卡尺精確量度材料的寬度和厚度，換算出橫截面積。以拉力測試機對II型膠原海綿材料以1GOmm/min的速度進行單軸拉伸力學測試，材料斷裂時終止力學測試，使用拉力測試機自帶軟件測定材料的極限抗張強度、最大應變、拉伸率、最大負荷、彈性模量等指標，并分析其力學性能。以SPSS13.0軟件包對數(shù)據(jù)結(jié)果進行單因素方差分析，如表2所示，結(jié)果顯示交聯(lián)后II型膠原海綿支架材料的極限抗張強度較未交聯(lián)組明顯升高；彈性模量明顯增大，表明交聯(lián)后的海綿支架材料韌性增強。綜合分析交聯(lián)后的海綿材料學性能有明顯改善。表2II型膠原海綿力學性能分析比較(；±^膠原濃度4.lmg/ml)極限抗張強度(N)彈性模量(MP/m"已交聯(lián)II型膠原海綿(n==10)1.47±0.110.098±0.0017未交聯(lián)n型膠原海綿(n-=10)4.27±1.542.18±0.47注兩組比較代O.01實驗例五n型膠原海綿支架材料的細船目容性觀察接種3T3細胞于25cm2培養(yǎng)瓶中，接種密度為1x106個細胞/瓶。加入DMEM完全培養(yǎng)基(含有血清和抗生素)，37°C,5%0)2條件下孵育過夜。加入攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的病毒上清液感染細胞，用DMEM培養(yǎng)基，37。C,5%C02條件下培養(yǎng)過夜，在熒光顯微鏡下觀察GFP的綠色熒光表達。將轉(zhuǎn)染了GFP基因的3T3細胞接種于本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料中在DMEM完全培養(yǎng)基(含有血清和抗生素)進行立體培養(yǎng)，隔天換液，長期培養(yǎng)觀察細胞在材料中的生長情況；一周內(nèi)每天觀察，一周后每三天觀察一次。在激光共聚焦顯微鏡下三維立體觀察GFP的綠色熒光表達，可見大量的細胞成團生長，在支架材料中(本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料)附著良好，并隨著時間的延長，如圖4所示，細胞集落逐漸增多，細胞與材料之間呈現(xiàn)著良好的相容性。實驗例六(GFP)轉(zhuǎn)染軟骨細胞構(gòu)建組織工程軟骨移植材料原代分離兔軟骨細胞，將第三代軟骨細胞接種于25cn^培養(yǎng)瓶中，接種密度為7.5x105個細胞/瓶。加入DMEM完全培養(yǎng)基(含有血清和抗生素)，37。C,5%(:02條件下孵育過夜。加入攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的病毒上清液感染軟骨細胞，用而EM-F12培養(yǎng)基，37°C,5%C02條件下培養(yǎng)過夜，在熒光顯微鏡下觀察GFP的綠色熒光表達。將轉(zhuǎn)染GFP基因的軟骨細胞接種于本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料中，在DMEM-F12完全培養(yǎng)基(含有血清和抗生素)進行立體培養(yǎng)，隔天換液，長期培養(yǎng)觀察細胞在材料中的生長情況；一周內(nèi)每天觀察，一周后每三天觀察一次，觀察時間最長為60天。在激光共聚焦顯微鏡下三維立體觀察GFP的綠色熒光表達，如圖5所示，可見大量的細胞成團生長，在支架材料(本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料)中附著良好，并隨著時間的延長，細胞集落逐漸增多，細胞與材料之間呈現(xiàn)著良好的相容性。實驗例七n型膠原海綿支架材料的降解性II型膠原海綿支架材料的制備方法如前所述。動物實驗在體重質(zhì)量為3.0~3.5kg的成年新西蘭雄兔股骨髁負重面正中鉆直徑5mm、深3mm的小孔造成軟骨缺損，深達軟骨下骨，然后植入本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料，術(shù)后分別于2、6、12周取材，大體觀察并作組織學檢查。從HE染色結(jié)果來看，術(shù)后2周仍有大量支架材料存在于缺損區(qū)中，并有大量的纖維母細胞和類軟骨細胞爬行進入支架材料中生長；術(shù)后6周可見大部分膠原海綿支架材料已被降解和吸收，原缺損處由大片新生骨和軟骨組織填充，僅僅余少量材料殘留；術(shù)后12周，本發(fā)明的II型膠原海綿材料已被完全吸收，原缺損處大片新生骨和軟骨與周邊組織整合良好。結(jié)果如圖6、7、8所示，圖6為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料移植動物實驗術(shù)后2周，仍有大量支架材料存在于缺損區(qū)中(圖中箭頭所示)，并有大量的纖維母細胞和類軟骨細胞爬行進入支架材料中生長；圖7為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料移植動物實驗術(shù)后2周，II型膠原免疫組織化學染色顯示移植材料呈現(xiàn)陽性，表明植入物為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料；圖8所示為本發(fā)明的II型膠原海綿支架材料移植動物實驗術(shù)后6周，可見大部分材料已經(jīng)被降解和吸收，原缺損處由大片新生骨和軟骨組織填充，僅余少量支架材料殘留(方框內(nèi)所示)。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、一種II型膠原海綿支架，其特征在于，是通過如下方法制備的(1)II型膠原溶液的制備，提供高純度II型膠原溶液；(2)II型膠原溶液的濃縮，將步驟(1)得到的II型膠原溶液注入透析袋中，用足量的聚乙二醇粉劑包埋透析袋，然后置于低溫下濃縮，收集備用；(3)冷凍干燥，將步驟(2)得到的濃縮II型膠原溶液注入凍干瓶中，于-80℃低溫冰箱中冷凍，然后在真空冷凍干燥機中冷凍干燥，即得均勻連通孔徑的II型膠原海綿；(4)交聯(lián)，配置碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺的乙醇溶液作交聯(lián)劑，將步驟(3)得到的II型膠原海綿浸泡在上述交聯(lián)劑中進行交聯(lián)，交聯(lián)后的II型膠原海綿用蒸餾水清洗干凈，再進行步驟(3)的冷凍干燥步驟，即得II型膠原海綿支架。2、如權(quán)利要求1所述的II型膠原海綿支架，其特征在于，步驟(2)中用聚乙二醇粉劑包埋透析袋后，置于4。C下濃縮。3、如權(quán)利要求2所述的II型膠原海綿支架，其特征在于，步驟(2)中用聚乙二醇粉劑包埋透析袋后，置于4。C下濃縮1.5小時。4、如權(quán)利要求1所述的II型膠原海綿支架，其特征在于，步驟(3)中濃縮II型膠原溶液在凍干瓶中于-8(TC低溫水箱中冷凍24小時。5、如權(quán)利要求4所述的II型膠原海綿支架，其特征在于，步驟(3)中-8(TC冷凍后的II型膠原海綿在冷凍干燥機中于-30—4(TC下進行冷凍干燥。6、如權(quán)利要求5所述的II型膠原海綿支架，其特征在于，步驟(3)中II型膠原海綿在冷凍干燥機中于-30-40。C下進行冷凍干燥25小時。7、如權(quán)利要求1所述的II型膠原海綿支架，其特征在于，步驟(4)中所述交聯(lián)劑為碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺溶解在95%乙醇里，配制成的碳化二亞胺濃度為33mmol/L、N-羥基琥珀酰亞胺濃度為8mmol/L的交聯(lián)劑。8、如權(quán)利要求1所述的II型膠原海綿支架，其特征在于，步驟(4)中II型膠原海綿在交聯(lián)劑中交聯(lián)的時間為24小時。9、如權(quán)利要求1所述的II型膠原海綿支架，其特征在于，步驟(4)制備出來的II型膠原海綿支架，用Co^進行消毒后備用。10、如權(quán)利要求1所述的II型膠原海綿支架，在軟骨修復中的應用。全文摘要本發(fā)明屬于生物醫(yī)學領域，涉及一種組織工程中軟骨修復用的Ⅱ型膠原海綿支架。本發(fā)明的Ⅱ型膠原海綿支架是在提取出的高純度Ⅱ型膠原溶液后，用聚乙二醇濃縮法，對Ⅱ型膠原溶液進行濃縮，然后用EDC和NHS雙重交聯(lián)劑對濃縮后的Ⅱ型膠原進行交聯(lián)制備得到的。本發(fā)明的Ⅱ型膠原海綿支架具有適合細胞生長的均勻連通孔徑，還具有較好的力學強度和孔徑結(jié)構(gòu)的三維穩(wěn)定性，能夠在水溶性培養(yǎng)基中作為支架材料與種子細胞長期共培養(yǎng)。本發(fā)明的Ⅱ型膠原海綿支架可作為組織工程植入物，細胞培養(yǎng)支架材料或藥物控釋等應用于軟骨損傷修復的防治。文檔編號A61L27/56GK101549171SQ20091003966公開日2009年10月7日申請日期2009年5月21日優(yōu)先權(quán)日2009年5月21日發(fā)明者楊小紅,秦勝男,陳鴻輝申請人:廣州市創(chuàng)傷外科研究所