專(zhuān)利名稱(chēng)：：抗腫瘤基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的制作方法抗腫瘤基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑所屬領(lǐng)域本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別涉及一類(lèi)抗腫瘤基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑。
背景技術(shù)：
：近年來(lái)，抗腫瘤基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)領(lǐng)域研究進(jìn)展迅速，人源的23種MMPs已全部被克隆。在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，癌細(xì)胞首先需要降解細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,ECM)及基底膜(BM),ECM成分的降解是癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的必要步驟。而這個(gè)降解功能主要由蛋白水解酶完成，MMPs是蛋白水解酶中較為重要的一類(lèi)，是其中最重要的一種降解ECM蛋白酶。MMPs可以通過(guò)對(duì)基底膜和血管基質(zhì)的降解增強(qiáng)腫瘤性血管的生成作用并促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。由于MMPs在腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移中起著重要的作用，因此對(duì)MMPs抑制劑(MMPIs)的研究開(kāi)發(fā)倍受重視，為攻克癌癥開(kāi)辟了一條新的途徑。國(guó)內(nèi)外對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的設(shè)計(jì)與合成經(jīng)歷了幾個(gè)發(fā)展階段。最初MMPIs多是通過(guò)模仿MMPs底物而設(shè)計(jì)，即所謂的第一代基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑。它們多數(shù)都屬于多肽或其衍生物類(lèi)抑制劑，其中都包含一個(gè)能與鋅離子鰲合的基團(tuán)，如羥胺、羧基、巰基等。但由于他們的選擇性抑制不強(qiáng)，羥胺類(lèi)物質(zhì)的口服利用度低，代謝的不穩(wěn)定性，溶解性差，改造后的藥物生物毒性增大等缺點(diǎn)，因此對(duì)于第一代來(lái)說(shuō)面臨著選擇另一種基團(tuán)代替羥胺作為鋅離子鰲合基團(tuán)，或者構(gòu)建出一種非肽類(lèi)物質(zhì)作為新的MMPIs。以此為動(dòng)力，加之非肽類(lèi)抑制劑的發(fā)展和新型藥物設(shè)計(jì)理念的產(chǎn)生，逐漸推動(dòng)了第二代開(kāi)發(fā)，這類(lèi)藥物主要是經(jīng)過(guò)高通量篩選，得到先導(dǎo)化合物，再進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，得到抑制效果更好的新藥。這類(lèi)藥物結(jié)構(gòu)上同3樣包含著一個(gè)與鋅離子鰲合的基團(tuán)，同時(shí)還含有一個(gè)能與蛋白結(jié)合的基團(tuán)。此類(lèi)藥物雖然改善了多肽類(lèi)藥物的以上缺點(diǎn)并具有了一些選擇性的抑制能了阻礙。隨著研究的深入，MMPs的很多宿主細(xì)胞防御功能和各種正常的生理功能已經(jīng)為人們所了解。以往開(kāi)發(fā)的無(wú)論是多肽類(lèi)還是小分子類(lèi)抑制劑，在結(jié)構(gòu)上大都依賴(lài)一個(gè)能與鋅離子鰲合的基團(tuán)，以及另夕l、一個(gè)能與MMPs的S,結(jié)合的基團(tuán)。而鋅離子鰲合抑制劑結(jié)構(gòu)本身就降低了其對(duì)MMPs的選擇性抑制能力。這些抑制劑不但能夠抑制在疾病中起重要作用的MMPs,而且能抑制其它起正常生理作用的MMPs和金屬蛋白酶。近年來(lái)對(duì)特異性抑制某種MMP的MMPIs報(bào)道逐漸增加，對(duì)非金屬鰲合劑類(lèi)MMPIs也開(kāi)始見(jiàn)諸報(bào)道。由于人工合成的小分子抑制劑在臨床應(yīng)用中的各種問(wèn)題，使得越來(lái)越多的研究者關(guān)注從天然產(chǎn)物中篩選MMPs抑制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一類(lèi)三價(jià)金屬鹽作為MMPs抑制劑的用途。本發(fā)明所述的三價(jià)金屬鹽可以為自由的三價(jià)金屬鹽或三價(jià)金屬配合物。三價(jià)金屬鹽可以為三價(jià)稀土鹽或三價(jià)過(guò)渡金屬鹽或三價(jià)主族金屬鹽，具體地將，三價(jià)金屬鹽為Al3+、Fe"或Cy+鹽，Al3—鹽如硫酸鋁銨、硫酸鋁鐘、三氯化鋁、硫酸鋁、硝酸鋁或磷酸鋁。由于三價(jià)金屬鹽可作為MMPs抑制劑，顯然含有三價(jià)金屬鹽的制劑也可作為抗腫瘤基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，制劑可按照常規(guī)方法制備成注射劑、片劑、丸劑、膠嚢、懸浮劑或乳劑。與以往的MMPs抑制劑相比，本發(fā)明的三價(jià)金屬鹽對(duì)MMPs抑制活性相對(duì)較強(qiáng)，并且結(jié)構(gòu)筒單、價(jià)格低廉，方便獲得。圖l為單體(A1NH4(S04)2.12H20)對(duì)MMP-16的抑制曲線(xiàn)圖2為單體對(duì)其它MMPs抑制濃度梯度曲線(xiàn)(A:MMP-2;B:MMP-9;4C:MMP隱13;D:MMP-3);圖3不同鋁鹽對(duì)MMP-16的抑制濃度梯度曲線(xiàn)(A:KA1(S04)2;B:A12(S04)3;C:A1(N03)3;D:A1C13);圖4不同三價(jià)金屬鹽對(duì)MMP-16的抑制濃度梯度曲線(xiàn)(A:Fe2(S04)3;B:FeCl3;C:CrCl3);圖5稀土金屬鹽對(duì)MMP-16的抑制濃度梯度曲線(xiàn)(A:LaCl3;B:CeCl3;C:PrCl3;D:SmCl3;E:EuCl3;F:TbCl3;G:HoCI3;H:ErCl3;I:TmCl3)。具體實(shí)施例方式發(fā)明人以MMPs為分子單巴點(diǎn)，通過(guò)活性追蹤，^v關(guān)白附中篩選分離出了一個(gè)活性很高的單體，根據(jù)X-射線(xiàn)單晶衍射分析，最終確定單體結(jié)構(gòu)為A1NH4(S04)2.12H20。十二水合硫酸鋁銨又名石危酸鋁4妄、銨明釩、鋁銨夙等。主要用途是媒染劑、凈水劑，也常用于食品添加劑，作為膨松劑用于千咸菜和燉食品的保色劑，也有用于醫(yī)藥等。醫(yī)藥主要用作收斂劑、利尿劑、催吐劑及瀉藥，但未見(jiàn)其作為MMPs抑制劑的報(bào)道。發(fā)明人進(jìn)一步研究了同類(lèi)化合物(硫酸鋁鉀、三氯化鋁、硫酸鋁、硝酸鋁、磷酸鋁、Fe^鹽、Cr"稀土鹽)對(duì)MMPs的抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所研究的三價(jià)離子的復(fù)鹽及鹽類(lèi)化合物均對(duì)MMPs有很好的抑制作用，為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面通過(guò)實(shí)驗(yàn)和結(jié)果來(lái)說(shuō)明其對(duì)MMPs的抑制活性。1單體(NH4A1(S04)2.12H20)的活性表征1.1單體對(duì)MMP-16的抑制作用MMP-16的抑制作用，并測(cè)定其半抑制濃度ICs。，結(jié)果表明單體對(duì)MMP-16有較好的抑制作用，且抑制率與其濃度有一定計(jì)量關(guān)系，隨著單體濃度的增加，其對(duì)MMP-16的抑制率也增加，當(dāng)單體的濃度為10(imol/L時(shí)，其對(duì)MMP-16的抑制率幾乎達(dá)到100%,經(jīng)計(jì)算得其對(duì)MMP-16的IC5。為3.405(imol/L。1.2對(duì)其他MMPs的抑制作用進(jìn)一步研究了單體A1NH4(S04)2.12H20對(duì)其他MMPs的抑制作用(如圖2所示)，單體對(duì)MMPs抑制濃度梯度IC5()見(jiàn)表1。單體對(duì)屬于同類(lèi)的明膠MMP-9和MMP-2的抑制作用尤為突出，其活性相仿，ICso分別僅為0.505pmol/L和0.538(imol/L。明膠酶的底物為IV、V、VII、IX、X型膠原、纖維粘連蛋白、彈性蛋白，主要通過(guò)對(duì)IV型膠原的降解，在胎膜破裂的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。同時(shí)單體對(duì)底物為非膠原成分如蛋白多糖的核心蛋白、層粘連蛋白、纖維粘連蛋白、明膠和基底膜膠原中的非螺旋部分的基質(zhì)溶解酶(MMP-3)也有較好的抑制作用，IC5。為4.797^mol/L。對(duì)底物主要為1、II、III、X型間質(zhì)膠原的間質(zhì)膠原酶(MMP-13)的作用一般，IC50為11.878(imol/L。由1.1可知單體對(duì)膜型MMPs(MMP-16)也有較強(qiáng)的抑制作用，可見(jiàn)該單體對(duì)各種類(lèi)型的MMPs(如明膠酶、間質(zhì)膠原酶、基質(zhì)溶解酶和膜型的基質(zhì)金屬蛋白酶)都有較好的抑制作用，推測(cè)其為廣譜型MMPs抑制劑。表1單體對(duì)各種MMPs的半抑制濃度MMPsIC5o(拜ol/L)MMP-90.505MMP-134.797MMP-311.8782單體抑制MMPs活性基團(tuán)的研究為了研究A1NH4(S04)2.12H20中抑制MMP-16的活性基團(tuán)，選擇A1NH4(S04)2.2H20的類(lèi)似化合物(復(fù)鹽)和其他的NH4+、Al3+、8042-的化合物，考察它們對(duì)MMP-16的抑制活性(如圖3所示)，它們對(duì)MMP-16的抑制ICso結(jié)果見(jiàn)表2。從表2的數(shù)據(jù)可知，所有含A產(chǎn)的鹽類(lèi)如NH4A1(S04)2、KA1(S04)2、A12(S04)3、A1C13、A1(N03)3無(wú)論是復(fù)鹽還是簡(jiǎn)單6的鹽對(duì)MMP-16均有4艮好的抑制活性，而不含有A產(chǎn)的鹽類(lèi)，如SO^和NH4+的所有鹽，(NH4)2S04和K2S04對(duì)MMP-16均沒(méi)有抑制作用。A產(chǎn)作為MMPs的抑制劑相比以往的MMPs的抑制劑來(lái)講結(jié)構(gòu)筒單，其抑制活性相對(duì)較強(qiáng)。表2單體抑制MMP-16的活性離子研究結(jié)果化合物IC50(拜ol/L)NH4A1(S04)23.4KAI(S04)22.99A12(S04)31.56A1(N03)34A1C1310NH4C1無(wú)(NH4)2S04無(wú)K2S。4無(wú)3三價(jià)、二價(jià)和一價(jià)金屬離子對(duì)MMP-16的抑制作用為了進(jìn)一步驗(yàn)證其他三價(jià)金屬離子是否也具有抑制MMP-16活性以及是否只有三價(jià)金屬離子具有抑制MMP-16的活性的特異性，發(fā)明人進(jìn)一步考察了部分三價(jià)和二價(jià)、一價(jià)金屬鹽對(duì)MMP-16的抑制活性，結(jié)果見(jiàn)表3和圖4,可知其他三價(jià)金屬離子如Fe"和(y+對(duì)MMP-16也有較好的抑制作用，而二價(jià)和一價(jià)金屬Cu2+、Ca2+、Na+和K+等金屬離子鹽對(duì)MMP-16均無(wú)抑制作用，因此得出了三價(jià)金屬離子對(duì)MMP-16抑制作用的特異性。7表3三價(jià)、二價(jià)和一價(jià)金屬離子鹽抑制MMP-16的活性比較化合物IC50(Mmol/L)Fe2(S04)324.3FeCl38.3CrCl310.0FeS04無(wú)抑制CaCl2無(wú)抑制CaS04無(wú)抑制MgS04無(wú)抑制CuS04無(wú)抑制K2S04無(wú)抑制NaCl無(wú)抑制Na2S04無(wú)抑制4三價(jià)稀土金屬對(duì)MMP-16的抑制作用稀土元素是指元素周期表中鑭系元素及其同族的鈧(Sc)和釔(Y)，共17種元素。4艮據(jù)它們的化學(xué)、物理性質(zhì)分為三組，即輕稀土組為鑭(La)、鈰(Ce)、鐠(Pr)、釹(Nd);中稀土組為釤(Sm)、銪(Eu)、禮(Gd)、鋱(Tb)、鏑(Dy);重稀土組為鈥(Ho)、鉺(Er)、銩(Tm)、鐿(Yb)、镥(Lu)。隨著稀土的開(kāi)采以及在工農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用日漸擴(kuò)展，稀土也廣泛進(jìn)入生態(tài)環(huán)境并由食物鏈進(jìn)入人體。因此，稀土的生物學(xué)效應(yīng)及人體健康效應(yīng)越來(lái)越引起人們的關(guān)注和重視。三價(jià)稀土金屬離子對(duì)MMP-16抑制作用的規(guī)律，工C5o結(jié)果見(jiàn)表4和圖5。從稀土金屬的鹽酸鹽對(duì)MMP-16的IC5Q可見(jiàn)，在輕稀土中，各稀土鹽對(duì)MMP-16的ICso的大小次序?yàn)長(zhǎng)aCl3<CeCl3<PrCl3;中稀土中SmCl3<EuCl3<TbCl3;重稀土中HoCl3<ErCl3<TmCl3。由此可見(jiàn)，稀土金屬離子對(duì)MMP-16的抑制作用呈現(xiàn)出一定的規(guī)律性，即分別在輕、中、重稀土金屬組中，對(duì)MMP-16的抑制活性隨著原子序數(shù)的增加而減小。8表4稀土金屬鹽對(duì)MMP-16的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>5復(fù)鹽及配合物對(duì)MMP-16的抑制作用發(fā)明人考察了金屬配合物對(duì)MMP-16的抑制活性，進(jìn)一步驗(yàn)證了三價(jià)金屬離子對(duì)MMP-16的抑制活性的特異性。ICso結(jié)果見(jiàn)表5,三價(jià)鐵形成配合物或復(fù)鹽后，對(duì)MMP-16仍具有較好的抑制活性，如K3[Fe(CN)6]對(duì)MMP-16的IC5o僅為0.10nmol/L，NH4Fe(S04)2的ICso為16.96。說(shuō)明三價(jià)金屬離子形成配合物和復(fù)鹽后不影響三價(jià)金屬離子對(duì)MMP-16的抑制作用。表5幾種復(fù)鹽及配合物對(duì)MMP-16的抑制作用配合物IC5()(|imolZL)K3[Fe(CN)6]0.10NH4Fe(S04)216,96(NH4)2Fe(S04)2無(wú)抑制實(shí)施例1:硫酸鋁銨對(duì)MMP-16的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl，10mmol/LCaCl2,20(imol/LZnCl2，1Ommol/LMgCl2和0.01%Brij-35。在一定酶濃度下，將碌u酸鋁銨按不同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37°C放置30分鐘，反應(yīng)通過(guò)加入1pL，200嗎/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng)。抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定.熒光采用FLX800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek)一企測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)在.495nm,發(fā)射波長(zhǎng)在515nm。所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的測(cè)量值減去背景熒光吸收矯正。測(cè)得硫酸鋁銨對(duì)MMP-16有纟艮好的抑制作用，其IQ。為3.14jimol/L。實(shí)施例2:硫酸鋁鉀對(duì)MMP-16的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl,10mmol/LCaCl2,20pmol/LZnCl2，10mmol/LMgCl2和0.01%Brij-35。在一定濃度的酶濃度下，將硫酸鋁鉀按不同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37。C放置30分鐘，反應(yīng)通過(guò)加入1fiL，200嗎/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng)。抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定，熒光采用FLX800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek)檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)在495nm，發(fā)射波長(zhǎng)在5]5nm。所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的測(cè)量值減去背景熒光吸收矯正。測(cè)得硫酸鋁鉀對(duì)MMP-16有很好的抑制作用，其IC50為2.99|imol/L。實(shí)施例3:硫酸鋁對(duì)MMP-16的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl,10mmol/LCaCl2,20pmol/LZnCl2，10mmol/LMgCl2和0.01%Brij-35。在一定濃度的酶濃度下，將硫酸鋁按不同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37°C放置30分鐘。反應(yīng)通過(guò)加入lpL,200嗎/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng).抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定，熒光采用FLX800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek)檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)在495nm,發(fā)射波長(zhǎng)在515nm。所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的測(cè)量值減去背景熒光吸收矯正。測(cè)得硫酸鋁對(duì)MMP-16有很好的抑制作用，其ICso為1.56(imol/L。實(shí)施例4:三氯化鋁對(duì)MMP-16的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體10系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl，10mmol/LCaCl2，20nmol/LZnCl2，10mmol/LMgCl2和0.01%Brij-35。在一定濃度的酶濃度下，將三氯化鋁按不同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37。C放置30分鐘，反應(yīng)通過(guò)加入1pL,200呢/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng)。抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定。熒光采用FLX800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek)檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)在495nm,發(fā)射波長(zhǎng)在515nm。所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的測(cè)量值減去背景熒光吸收矯正。測(cè)得三氯化鋁對(duì)MMP-16有很好的抑制作用，其IQ;。為10.0pmol/L。實(shí)施例5:硝酸鋁對(duì)MMP-16的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl,1Ommol/LCaCl2，20|imol/LZnCl2,10mmol/LMgCl2和0.01%Brij-35，在一定濃度的酶濃度下，將硝酸鋁按不同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37。C放置30分鐘.反應(yīng)通過(guò)加入1pL，200嗎/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng)。抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定，熒光采用FLX800焚光酶標(biāo)儀(Bio-Tek)檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)在495nm，發(fā)射波長(zhǎng)在515nm.所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的測(cè)量值減去背景熒光吸收矯正。測(cè)得硝酸鋁對(duì)MMP-16有很好的抑制作用，其1(250為4.0|imol/L。實(shí)施例6:三氯化鐵對(duì)MMP-16的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl，10mmol/LCaCl2,2(^mol/LZnCl2,10mmol/LMgCl2和0.01%Brij-35，在一定濃度的酶濃度下，將三氯化鐵按不同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37°C放置30分鐘.反應(yīng)通過(guò)加入1(iL,200(ig/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng)。抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定，焚光采用FLX800萸光酶標(biāo)儀(Bio-Tek^全測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)在495nm,發(fā)射波長(zhǎng)在515nm.所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的11測(cè)量值減去背景熒光吸收矯正。測(cè)得三氯化鐵對(duì)MMP-16有很好的抑制作用，其1(:50為4.0(imol/L實(shí)施例7:三氯化鉻對(duì)MMP-16的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl,10mmol/LCaCl2,20(imol/LZnCl2,10mmol/LMgCl2和0.01%Brij-35。在一定濃度的酶濃度下，將三氯化鉻按不同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37。C放置30分鐘。反應(yīng)通過(guò)加入1|iL，200|ig/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng)。抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定.熒光采用FLX800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek)4全測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)在495nm，發(fā)射波長(zhǎng)在515nm.所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的測(cè)量值減去背景熒光吸收矯正。測(cè)得三氯化鉻對(duì)MMP-16有很好的抑制作用，其ICso為4.0pmol/L。實(shí)施例8:稀土鹽對(duì)MMP-16的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl,10mmol/LCaCl2,20(imol/LZnCl2，10mmol/LMgCl2和0.01%Brij-35。在一定濃度的酶濃度下，將各種稀土鹽按不同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37。C放置30分鐘，反應(yīng)通過(guò)加入1|iL,200[ig/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng)。抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定。熒光采用FLX800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek)檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)在495nm,發(fā)射波長(zhǎng)在515nm。所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的測(cè)量值減去背景熒光吸收矯正。測(cè)得稀土鹽對(duì)MMP-16有很好的抑制作用，三氯化鑭、三氯化鈰、三氯化鐠、三氯化衫、三氯化銪、三氯化鋱、三氯化鈥、三氯化4尋、三氯化銩的ICso分別為3.51nmol/L、4.18pmol/L、9.14)imol/L、4.94)imol/L、5.42pmol/L、14.90pmol/L、6.07|_unol/L、9.30pmol/L、9.68pmol/L。實(shí)施例9:復(fù)鹽及配合物對(duì)MMP46的抑制作用反應(yīng)是在50mmol/LHEPES緩沖體系(pH6.8)中進(jìn)行，其中含有200mmol/LNaCl,1Ommol/LCaCl2,20|amol/LZnCl2,10mmol/LMgCl2和0.01°/。Brij-35。在一定濃度的酶濃度下，將三鐵的配合物(鐵氰化鐘)和其復(fù)鹽(硫酸鐵銨)同濃度添加到反應(yīng)混合物中，在37°C放置30分鐘，反應(yīng)通過(guò)加入1pL,200叱/mlDQ-gelatin底物起始反應(yīng)。抑制效率通過(guò)比較有無(wú)抑制劑存在下的酶活性決定。茇光采用FLX800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek)檢測(cè)。激發(fā)波長(zhǎng)在495nm,發(fā)射波長(zhǎng)在515nm。所有的實(shí)驗(yàn)均在96孔板中進(jìn)行，每次的測(cè)量值減去背景焚光吸收矯正。測(cè)得稀土鹽對(duì)MMP-16有很好的抑制作用，鐵氰化鐘和硫酸鐵銨的IC5o分別為O.10pmol/L、16.96(imol/L。權(quán)利要求1、三價(jià)金屬鹽作為抗腫瘤基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的應(yīng)用。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述用途，其特征在于所述三價(jià)金屬鹽為自由的三價(jià)金屬鹽或三價(jià)金屬配合物。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述用途，其特征在于三價(jià)金屬鹽為三價(jià)稀土鹽或三價(jià)過(guò)渡金屬鹽或三價(jià)主族金屬鹽。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述用途，其特征在于三價(jià)金屬鹽為Al3+、F^+或Cr3+鹽。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述用途，其特征在于三價(jià)金屬鹽為A產(chǎn)鹽。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述用途，其特征在于三價(jià)金屬鹽為A1NH4(S04)2.12H20。7、含有三價(jià)金屬鹽的制劑作為抗腫瘤基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一類(lèi)三價(jià)金屬鹽作為MMPs抑制劑的用途，該三價(jià)金屬鹽可以為自由的三價(jià)金屬鹽或三價(jià)金屬配合物。三價(jià)金屬鹽可以為三價(jià)稀土鹽或三價(jià)過(guò)渡金屬鹽或三價(jià)主族金屬鹽。與以往的MMPs抑制劑相比，本發(fā)明的三價(jià)金屬鹽對(duì)MMPs抑制活性相對(duì)較強(qiáng)，并且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉，方便獲得。文檔編號(hào)A61K33/26GK101559076SQ20091002273公開(kāi)日2009年10月21日申請(qǐng)日期2009年5月27日優(yōu)先權(quán)日2009年5月27日發(fā)明者房學(xué)迅,聰李,田渭花,申燁華,坤蔣申請(qǐng)人:西北大學(xué)