專利名稱：微管相互作用劑的脂質(zhì)-油-水納米乳遞送系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療劑和診斷試劑，更具體而言，涉及以適于引入患者中且能夠促進(jìn) 活性選擇劑濃縮入以過度增殖為特征的細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞中的脂質(zhì)-油-水納米乳形式的 微管相互作用劑的制劑。
背景技術(shù)：
藥物在腫瘤及其微環(huán)境內(nèi)分布的作用還沒有被充分地研究。目前，為了得到益處， 必須給予高劑量的甚至最強(qiáng)效的藥物以驅(qū)動(dòng)擴(kuò)散和組織分布。然而，腫瘤塊內(nèi)藥物濃度的 增加并不一定導(dǎo)致細(xì)胞藥物濃度或到達(dá)細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)的能力增加。實(shí)際上，雖然某些藥物可 以通過結(jié)合聚合物、脂質(zhì)體包囊或固體脂質(zhì)納米顆粒制劑增加腫瘤塊內(nèi)的濃度，但是這些 可能事實(shí)上抑制細(xì)胞的攝取和分布。另外，高劑量給藥通過擴(kuò)散驅(qū)動(dòng)腫瘤滲透通常可引起 與癌癥治療的高發(fā)病率有關(guān)的那些副作用。因此，期望設(shè)計(jì)一種藥物遞送技術(shù)，其改善藥物 穿過腫瘤組織的滲透和增加其在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的濃度，同時(shí)表現(xiàn)出增加的安全和功效特征。 雖然研究了多種方法用于藥物被動(dòng)累積到腫瘤中，然而，幾乎沒有技術(shù)能有效地促進(jìn)主動(dòng) 腫瘤細(xì)胞攝取。脂質(zhì)可溶性藥物容易滲透細(xì)胞膜，且可以經(jīng)由細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)。以過度增殖為特征的細(xì) 胞比如癌細(xì)胞通常顯示出脂類代謝異常，特征是它們極大地增加了脂質(zhì)和脂肪酸的優(yōu)先攝 取。因此，對(duì)于癌癥，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)在膜結(jié)構(gòu)、生長和轉(zhuǎn)移、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起主要作 用。對(duì)于脂質(zhì)顆粒、脂質(zhì)體、合成納米顆粒及其它高分子試劑而言，由于腫瘤血管系統(tǒng) 的特征性泄漏特征(leaky features)引起的被稱為滲透性和潴留增加(EPR)效應(yīng)的現(xiàn)象 在實(shí)體瘤中很普遍，并且已經(jīng)被開發(fā)用于例如聚合物-結(jié)合的抗癌藥的更有選擇性的靶向 和腫瘤塊聚集?，F(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)報(bào)道了包囊劑比如高分子微泡、脂質(zhì)體和固體聚合或脂質(zhì) 納米顆粒(各自是以多種組合物、制劑和結(jié)構(gòu)制備的，并且在多種生理?xiàng)l件施用)的用途。 然而，這些試劑僅僅允許被動(dòng)聚集在腫瘤中。而且，這些試劑通常通過廣泛共同聚集在網(wǎng)狀 內(nèi)皮系統(tǒng)中而從循環(huán)中快速清除，并且使用這些試劑會(huì)帶來細(xì)胞毒性和免疫應(yīng)答提高。研究表明多種受體類型和亞型、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和脂筏現(xiàn)象很可能涉及脂質(zhì)攝取到癌細(xì) 胞中，即使在患有同一疾病但遺傳學(xué)改變的患者中。雖然已經(jīng)用各種治療劑制備了基于脂 質(zhì)的納米顆粒或基于HDL或LDL的藥物載體，其模擬天然受體配體且增加靶向和藥物攝取 到癌細(xì)胞，然而，對(duì)于癌癥的治療，仍然缺乏促進(jìn)主動(dòng)腫瘤細(xì)胞藥物攝取的最優(yōu)化制劑。D' Arrigo的美國專利4684479和5215680，將其引入本文作為參考，描述了氣 體-或空氣-填充的脂質(zhì)涂層的微泡(LCM)的形成、其制備方法及用作超聲方法的顯影劑 和藥物遞送的用途。LCM的制備方法是基于簡(jiǎn)單的機(jī)械振搖非離子脂質(zhì)的含水混懸液，所 述非離子脂質(zhì)比如特定鏈長和固定比例的飽和甘油酯和膽固醇酯。在所有情況下，加入的 大部分脂質(zhì)(99% )絮凝或沉淀，當(dāng)過濾時(shí)有另外的物料損失，產(chǎn)率小于1%。還發(fā)現(xiàn)這些 人造的LCM在體外具有非常長的壽命，持續(xù)超過6個(gè)月。而且，盡管它們的過濾率低，但是 LCM足夠小和柔順，足以橫穿腫瘤組織微循環(huán)的有孔毛細(xì)管壁。特別地注意LCM的高選擇性、溫度依賴性、表觀表面可飽和的攝取到嚙齒類動(dòng)物腦腫瘤細(xì)胞以及狗的自發(fā)性腫瘤中， 有可能模擬某些脂質(zhì)的癌細(xì)胞的自然攝取。然而，迄今為止，還沒有利用LCM技術(shù)的藥物化 合 物的有效制劑，當(dāng)向患者施用時(shí)，其呈現(xiàn)最小至不存在的不良副作用水平。紫杉醇是稱為紫杉烷的藥物類的一個(gè)成員，已經(jīng)主要是從太平洋紫杉樹、短葉紫 杉和相關(guān)物種的樹皮中將其分離出。盡管觀察到制劑賦形劑的過敏性反應(yīng)，但是已經(jīng)發(fā)現(xiàn) 紫杉烷用于治療各種癌癥，比如卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌及頭頸癌。施用紫杉烷的困 難是該藥物通常不是水溶性的。因此，將紫杉醇配制在Cremophor EL (聚乙氧基蓖麻油) 和乙醇的1 1混合物中以產(chǎn)生Taxol (Bristol-Myers Squibb，Inc.)。需要在穩(wěn)定約 十二個(gè)小時(shí)的合適載體中重構(gòu)，同時(shí)在線過濾以除去可能結(jié)晶出來的任何藥物。Taxol 已 經(jīng)顯示出在患者中是神經(jīng)毒性的、引起感覺的和有時(shí)伴有運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病。Cremophor EL 部 分地引起神經(jīng)病，因?yàn)樗旧聿粺o顯著的副作用。將紫杉醇配制在穩(wěn)定的脂質(zhì)乳劑中的嘗試同樣沒有成功。據(jù)報(bào)道該藥物不溶于脂 質(zhì)乳劑比如主要包含豆油的Intralipid 或包含大豆油和紅花油的混合物的Liposyn 中。在大豆油或紅花油中加熱紫杉醇，或者甚至當(dāng)超聲處理時(shí)，不會(huì)引起明顯量的藥物溶 出，在勻漿化步驟期間將紫杉醇加入到脂質(zhì)乳劑中同樣得到了令人失望的結(jié)果。已經(jīng)用三 醋精、L-α-卵磷脂、聚山梨酯80、Pluronic F-68、油酸乙酯和甘油配制了包括至多15mg/ ml的紫杉醇的乳劑。然而，這些乳劑是高毒性的且不穩(wěn)定的。也將紫杉醇與Cremophor EL 和乙醇混合在LCM制劑中。然而，雖然從藥物遞送的觀點(diǎn)來看，LCM的腫瘤攝取選擇性 是吸引人的，但是根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的制備產(chǎn)率和藥物負(fù)載容量太低而不可行。使用Cremophor EL 和乙醇與紫杉醇或許也導(dǎo)致該制劑的毒性。另外，制備方法復(fù)雜，小的條件改變可引起粒徑和性質(zhì)特征的顯著不同。典型的方 法包括高剪切勻漿化和超聲、高壓勻漿化、熱勻漿化、冷勻漿化和溶劑乳化蒸發(fā)。無菌過濾 或放射的滅菌也可能是復(fù)雜的。因此，將藥物加入乙醇和水溶液中，接著高剪切勻漿化以增 加在LCM中的藥物負(fù)載和脂質(zhì)溶解度的嘗試導(dǎo)致形成穩(wěn)定性差的不含氣體的顆粒，其即便 包含也只包含很少的藥物。用合適的遞送媒介物(vehicle)施用治療劑是高度期望的，所述遞送媒介物同時(shí) 促進(jìn)腫瘤塊內(nèi)的聚集和細(xì)胞內(nèi)在化但是限制在健康組織中的聚集。采用更有效地遞送，可 以降低治療劑的全身和健康組織濃度，同時(shí)獲得相同或更好的治療效果，副作用較少或減 少。具有固有程度的腫瘤細(xì)胞選擇性的此類試劑遞送將提供另外的優(yōu)點(diǎn)。進(jìn)一步，不限于 單一腫瘤類型，但是選擇性聚集在腫瘤塊內(nèi)和細(xì)胞內(nèi)在化到多種癌細(xì)胞類型中的遞送媒介 物是特別期望的，其能夠更安全有效地治療癌癥。還能夠提高治療劑的負(fù)載容量的遞送媒 介物將是現(xiàn)有技術(shù)的顯著進(jìn)步。因此，顯然需要一種穩(wěn)定的、容易制備的、生物相容的、有效的微管相互作用劑 (包括紫杉烷比如紫杉醇)的制劑，其促進(jìn)攝取到腫瘤細(xì)胞中，但仍顯示出最小的副作用。本發(fā)明的目的和工業(yè)實(shí)用性因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種用于治療或診斷以細(xì)胞過度增殖為特征的疾 病、病癥和綜合征比如癌癥的藥物組合物，其顯示出快速、選擇性增加和優(yōu)先攝取到腫瘤細(xì) 胞內(nèi)。本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步的目的是提供一種用于治療或診斷以細(xì)胞過度增殖為特征的疾病、病癥和綜合征比如癌癥的藥物組合物，當(dāng)施用時(shí)其引起的副作用最小。本發(fā)明的一個(gè)更進(jìn)一步的目的是提供一種用于治療或診斷以細(xì)胞過度增殖為特 征的疾病、病癥和綜合征比如癌癥的藥物組合物，其容易以最小可能的成本制備，并且能夠 貯存最長可能的 時(shí)期。發(fā)明概述為了獲得這些目的，本發(fā)明廣泛地提供一種用于治療、診斷或預(yù)防包括人類的溫 血?jiǎng)游镏幸赃^度增殖為特征的疾病、病癥或綜合征或其癥狀的藥物組合物，其中所述藥物 組合物包括脂質(zhì)納米乳，其包括包括均勻地分散在水相中的如下定義的脂質(zhì)顆粒的脂 質(zhì)納米乳，能夠選擇性地優(yōu)先內(nèi)在化到病態(tài)細(xì)胞內(nèi)，包括癌細(xì)胞；有效量的與所述脂質(zhì)納米 乳組合的至少一種治療劑；和藥學(xué)可接受的載體。所述脂質(zhì)顆粒各自包括至少一種非雙層形成脂質(zhì)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這樣的合適的脂質(zhì)顆 粒顯著地增加治療劑或診斷劑靶向遞送和濃縮到以細(xì)胞增殖為特征的病態(tài)細(xì)胞包括癌細(xì) 胞中，用于改善治療功效和生物利用度，同時(shí)減少或至少保持獲得期望的治療益處所必需 的施用劑量和頻率。而且，所述納米乳顯示出延長持續(xù)時(shí)間的特別的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，從 而極大地便于所述藥物組合物預(yù)包裝在穩(wěn)定的、即時(shí)施用形式中，以及從而消除了與如目 前采用現(xiàn)有技術(shù)中包含類似活性劑的組合物實(shí)施時(shí)臨床稀釋和配制有關(guān)的問題和不方便。所述脂質(zhì)顆粒同時(shí)包含藥學(xué)活性治療性微管相互作用劑。合適的微管相互作用劑 包括，但不限于紫杉烷，比如例如紫杉醇；埃坡霉素；長春花生物堿，比如例如長春新堿； 軟珊瑚醇；盤皮海綿內(nèi)酯；多拉司他?。磺锼蓧A；考布他丁(combrestatins)；擬莖點(diǎn)霉 毒素A ；軟海綿素B ；海綿抑制素1 ；匍枝珊瑚醇；laulimalides ；和其衍生物、類似物、同源 物及每種前述試劑的組合。所述微管相互作用劑的存在量足夠殺死或至少中止過度增殖細(xì) 胞的生長。在本發(fā)明的進(jìn)一步的方面，提供一種診斷、治療或預(yù)防包括人類的溫血?jiǎng)游镏械?以細(xì)胞過度增殖為特征的疾病、病癥或綜合征或其癥狀包括癌癥的方法，其中所述方法包 括向溫血?jiǎng)游锸┯糜行Я康谋疚墓_的藥物組合物。在本發(fā)明的一個(gè)更進(jìn)一步的方面，提供一種制備本文公開的藥物組合物的方法， 其包括步驟a)混合至少一種非雙層形成脂質(zhì)與有效量的至少一種診斷劑或治療劑，得到脂質(zhì) 部分；b)將所述脂質(zhì)部分加入到水相中，得到分散液；和C)在由此足以分散所述至少一種非雙層形成脂質(zhì)分散的高剪切條件下攪拌所述 分散液，形成包括脂質(zhì)顆粒的脂質(zhì)納米乳。


下述附圖闡述本發(fā)明的實(shí)施方案，而不意味著限制整個(gè)說明書和權(quán)利要求書所包 括的本申請(qǐng)的范圍。圖1圖解了根據(jù)本發(fā)明在20% DMSO中負(fù)載10%紫杉醇的脂質(zhì)顆粒的粒徑分布和 ζ電勢(shì)。圖2通過繪制在蔗糖密度研究中負(fù)載紫杉醇的脂質(zhì)顆粒的百分比溶解度圖顯示紫杉醇包括到根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒中。圖3A和:3B描述顯示通過熒光激活細(xì)胞分選可定量根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒的細(xì)胞 攝取圖。圖4A-4D描繪顯示相對(duì)于HT-29結(jié)腸和SF-539肺腫瘤細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞系對(duì)根據(jù) 本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒的細(xì)胞攝取圖。圖5為顯示與配制在Cremophor EL 中的紫杉醇相比，配制在根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì) 顆粒一個(gè)特定混合物中的紫杉醇的腫瘤細(xì)胞攝取更大量的圖。圖6描述顯示在對(duì)LN和Cremophor EL 藥物培養(yǎng)兩小時(shí)之后，紫杉醇的細(xì)胞攝 取達(dá)到穩(wěn)定水平的圖。圖7圖解確定在根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒中的紫杉醇的量是否對(duì)于細(xì)胞攝取飽和 的試驗(yàn)結(jié)果。圖8A和8B描述顯示膽固醇是根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒的細(xì)胞攝取中關(guān)鍵組分的 圖。圖9A和9B描繪顯示與在Cremophor EL⑧中的紫杉醇相比，在根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì) 顆粒中的紫杉醇的內(nèi)在化達(dá)到更大程度的圖。圖10A-10D描述顯示單獨(dú)的紫杉醇對(duì)比在根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒中的紫杉醇的 細(xì)胞毒性的圖。圖11圖解與配制在Cremophor EL中相比，配制在本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒中的紫杉 醇的細(xì)胞毒性更大的圖。圖12A和12B圖解顯示與配制在Cremophor EL 中相比，配制在本發(fā)明的脂質(zhì)顆 粒中的紫杉醇具有顯著更大抗腫瘤活性的圖。圖13顯示用EmPAC、Abraxane⑧或Taxol 治療且紫杉醇-特異性抗體染色的 A549細(xì)胞的代表性圖像。發(fā)明詳述本發(fā)明通常涉及用于治療、診斷或預(yù)防溫血?jiǎng)游镏械囊约?xì)胞過度增殖為特征的疾 病、病癥或綜合征或其癥狀的藥物組合物。這樣的動(dòng)物包括哺乳動(dòng)物類的那些，比如人類、 馬、牛、家畜包括狗和貓等，易患以細(xì)胞過度增殖為特征的疾病及其它病理學(xué)病癥和綜合征 包括癌癥。本發(fā)明的藥物組合物包括包括如下述定義的脂質(zhì)顆粒的納米乳，與其操作締合 的至少一種治療或診斷微管-相互作用劑，所述脂質(zhì)顆粒對(duì)于微管相互作用劑具有增加的 負(fù)載容量，和藥學(xué)可接受的載體或賦形劑，從而使得所述脂質(zhì)顆粒特別適合選擇性地遞送 到并有效濃縮于這樣的病態(tài)細(xì)胞和組織如腫瘤細(xì)胞和組織內(nèi)。設(shè)計(jì)所述納米乳的脂質(zhì)顆粒的結(jié)構(gòu)以促進(jìn)同時(shí)提高被動(dòng)聚集和主動(dòng)內(nèi)在化到病 態(tài)細(xì)胞和組織內(nèi)，包括腫瘤細(xì)胞和組織。所述脂質(zhì)顆粒通過主動(dòng)代謝攝取進(jìn)入這些細(xì)胞，同 時(shí)它們被動(dòng)地聚集在病態(tài)組織的血管區(qū)內(nèi)。因此，本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒提供一種遞送媒介物， 其選擇性地優(yōu)先靶向用于以過度增殖為特征的細(xì)胞包括腫瘤和癌細(xì)胞的攝取和內(nèi)在化。如 本文使用的“內(nèi)在化”指所述脂質(zhì)顆粒被細(xì)胞主動(dòng)攝取。這樣的提高的內(nèi)在化水平與顆粒 對(duì)治療劑或診斷劑的高負(fù)載容量提供了一種通過向這樣的靶點(diǎn)遞送有效量的治療劑或診 斷劑，從而誘導(dǎo)有益的治療效果，包括終止生長、誘導(dǎo)分化或殺死細(xì)胞，來治療或診斷這些 靶點(diǎn)的有效媒介物。因此，特別是與現(xiàn)有技術(shù)的遞送系統(tǒng)相比較，本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒不僅增加了向病態(tài)細(xì)胞和組織遞送治療劑，而且減少了獲得期望的功效所需的治療劑的量。本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒經(jīng)延長的時(shí)期是物理或化學(xué)上特別穩(wěn)定的，因此，受到由于現(xiàn) 有技術(shù)的遞送系統(tǒng)中通常顯示的不期望的沉淀、聚集或不溶性引起的治療劑或診斷劑的損 失最小。而且，這些脂質(zhì)顆粒顯示出其它有利的特征，包括控制釋放；增加的藥物穩(wěn)定性； 積極的藥物負(fù)載容量；與疏水性藥物的較好相容性；相對(duì)低的生物毒性；和低的有機(jī)溶劑 含量。本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒的制備和施用也相對(duì)簡(jiǎn)單方便。如本文使用的術(shù)語“脂質(zhì)顆?！敝赴ê腥魏沃|(zhì)的結(jié)構(gòu)，典型地為納米化的， 其是形成納米乳部分的至少基本上完整的顆粒。術(shù)語“基本上完整的”指與脂質(zhì)體相反，在 不存在膜的情況下，所述顆粒保持其形狀。所述脂質(zhì)顆粒包括至少一種非雙層形成脂質(zhì)。脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)或排列典型地是由具有親水端(極性頭區(qū))和疏水端(非極性尾 區(qū))的某些種類的脂質(zhì)形成，所述脂質(zhì)包括兩親性分子比如磷脂，其顯示出在水溶液中自 組裝成兩個(gè)相對(duì)的脂質(zhì)分子層的能力和/或傾向。所述兩個(gè)相對(duì)的脂質(zhì)分子層排列成使得 它們的疏水端彼此相對(duì)，形成含油芯，而它們的親水端面向所述雙層結(jié)構(gòu)的任一面的水溶 液。在本發(fā)明中，術(shù)語“非雙層形成脂質(zhì)”包括缺乏在水相環(huán)境中形成脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)或排列 的這種能力和/或傾向的脂質(zhì)。非雙層形成脂質(zhì)的實(shí)例包括只是弱極性的脂質(zhì)，優(yōu)選基本 上非極性或中性的脂質(zhì)。在本發(fā)明中，更優(yōu)選的脂質(zhì)是中性脂質(zhì)。本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒與在美國專利號(hào)4684479和5215680中描述的包含氣體的微泡 不同，在結(jié)構(gòu)上也與脂質(zhì)體比如例如在美國專利號(hào)6565889和6596305中描述的那些不同， 將其都引入本文作為參考。特別地，所述脂質(zhì)顆粒是由非雙層形成脂質(zhì)的混合物形成的，所 述非雙層形成脂質(zhì)的混合物是生理學(xué)可接受的，且至少基本上不含帶電脂質(zhì)或極性脂質(zhì)， 包括例如磷脂。非雙層形成脂質(zhì)的合適的實(shí)例包括選自下述的那些飽和的和不飽和的羧 酸的甘油單酯；飽和的脂肪族醇的甘油單酯；留醇芳香酸酯；留醇；萜烯；膽汁酸；膽汁酸 的堿金屬鹽；脂肪族酸的留醇酯；糖酸的留醇酯；糖酸的酯；脂肪族醇的酯；糖酯；脂肪族 酸的酯；糖酸；皂苷；皂苷元；甘油；脂肪族酸的甘油二酯；脂肪族酸的甘油三酯；脂肪族醇 的甘油二酯；脂肪族醇的甘油三酯；及其組合。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)顆粒是通過首先形成一組選擇的非雙層形 成脂質(zhì)的混合物制備的，所述脂質(zhì)提供具有下文描述的粒徑的脂質(zhì)顆粒，當(dāng)應(yīng)用于靶向病 態(tài)組織和細(xì)胞時(shí)，所述粒徑有助于高內(nèi)在化水平。所述脂質(zhì)混合物通常包括a)至少一種第一成員，選自由以下組成的組包含約9至18個(gè)碳原子的羧酸的甘 油單酯和包含約10至18個(gè)碳原子的脂肪族醇；b)至少一種第二成員，選自由以下組成的組留醇芳香酸酯；和c)至少一種第三成員，選自由以下組成的組留醇、萜烯、膽汁酸和膽汁酸的堿金 iM ^Tt- d)至少一種任選的第四成員，選自由以下組成的組包含約1至18個(gè)碳原子的脂 肪族酸的留醇酯；糖酸的留醇酯；糖酸和包含約10至18個(gè)碳原子的脂肪族醇的酯；糖和包 含約10至18個(gè)碳原子的脂肪族酸的酯；糖酸，皂苷；和皂苷元；和e)至少一種任選的第五成員，選自由以下組成的組甘油；含約10至18個(gè)碳原 子的脂肪族酸的甘油二酯或三酯；和包含約10至18個(gè)碳原子的脂肪族醇。雖然如上所述的脂質(zhì)混合物僅僅包括成員(a)至(C)，更優(yōu)選地其包括成員(d)和/或(e)，因?yàn)槔碚撋洗嬖谶@兩種任選的成員增加了所述脂質(zhì)顆粒的長期穩(wěn)定性和粒徑一 致性。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，配制形成本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒的脂質(zhì)混合物的 五種成員(包括兩種任選的成員)以(1-5) (0. 25-3) (0. 25-3) (0-3) (0_3)的 (a) (b) (c) (d) (e)的重量比混合。雖然已經(jīng)描述了所述脂質(zhì)混合物的第一成員包括含有約10至18個(gè)碳原子的飽和 羧酸的甘油單酯，預(yù)期包含約9至18個(gè)碳原子的單-或多不飽和羧酸的甘油單酯，比如但 不限于9-碳油酸或反油酸，也對(duì)于所述脂質(zhì)混合物的構(gòu)成有用。應(yīng)當(dāng)理解，所述脂質(zhì)混合物的成員的比例可根據(jù)一些因素變化，所述因素包括，但 不限于靶向遞送的細(xì)胞和/或組織的類型、負(fù)載的治療劑或診斷劑、治療劑或診斷劑的預(yù) 期劑量、使用的藥學(xué)可接受的載體、施用方式、存在的其它賦形劑或添加劑等。而且，能夠使 所述脂質(zhì)顆粒被靶向病態(tài)組織和細(xì)胞選擇性地內(nèi)在化的因素不僅包括所述脂質(zhì)混合物的 組成和得到的脂質(zhì)顆粒的結(jié)構(gòu)，而且包括如下文描述的顆粒的尺寸和分子量。本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒保持期望的粒徑分布，優(yōu)選地其中所述顆粒的大部分具有約 0. 02至0. 2 μ (微米)，優(yōu)選0. 02 μ至0. 1 μ的平均粒徑，變化的小量顆粒落在上述范圍之 上或之下，某些脂質(zhì)顆粒的僅僅為至多約200nm。在本發(fā)明的脂質(zhì)顆粒中可得到的粒徑范圍 進(jìn)一步引起經(jīng)延長的時(shí)間增加的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，和不期望的凝聚和藥物沉淀的實(shí)質(zhì)性 減少。而且，該范圍特別適于治療癌癥；較大的顆?？赡苓m于其它用途(例如，靶向其它類 型的細(xì)胞或組織)。本文提供的范圍將部分由應(yīng)用的脂質(zhì)混合物和加入的治療劑或診斷劑 的類型和量確定。本發(fā)明中應(yīng)用的治療劑或診斷劑可以是不帶電荷或帶電荷、非極性的或極性的、 天然的或合成的等。如本文使用的術(shù)語“治療劑”包括影響微管生成、結(jié)構(gòu)、締合、功能和破 壞的任何物質(zhì)，包括，但不限于藥物、激素、維生素、營養(yǎng)物質(zhì)等，因此，其用于預(yù)防和治療以 細(xì)胞過度增殖為特征的疾病、病癥、綜合征或其癥狀，包括癌癥。因此，用于本發(fā)明的治療劑 包括影響微管生成、結(jié)構(gòu)、締合、功能和破壞的所有類型的藥物、親脂性多肽、細(xì)胞毒素、寡 核苷酸、細(xì)胞毒素抗腫瘤劑、抗代謝藥、激素和放射性分子。術(shù)語“寡核苷酸”包括反義寡核 苷酸和有義寡核苷酸，(例如，通常稱為載體的核酸)。寡核苷酸可以是“天然的”或在亞基 或亞基之間的鍵方面“修飾的”。然而，在本發(fā)明的一個(gè)特定方面，所述治療劑為微管相互作用劑，選自由以下組成 的組紫杉烷，比如例如紫杉醇、多西他賽、三尖杉寧堿、漿果赤霉素-IIIUO-脫乙?；?漿果赤霉素-III、脫乙酰基紫杉醇和脫乙?；?7-表紫杉醇；長春花生物堿，比如例如長 春新堿、長春堿、長春瑞濱、長春地辛及其類似物；埃坡霉素；軟珊瑚醇；盤皮海綿內(nèi)酯；多 拉司他汀；秋水仙堿；考布他丁 ；擬莖點(diǎn)霉毒素A ；軟海綿素B ；海綿抑制素1 ；匍枝珊瑚醇； Iaulimalides ；衍生物、類似物、同源物及每種前述試劑的組合；和已知顯示出這樣的微 管-相互作用活性的類似藥物或物質(zhì)。紫杉烷比如紫杉醇也可以作為抗炎劑以較小時(shí)間釋放劑量使用。該用途在外科手 術(shù)放置到患者內(nèi)的生物醫(yī)療裝置比如支架方面特別重要。雖然期望在支架周圍和內(nèi)部的細(xì) 胞有一些聚集，因?yàn)樵摼奂纬晒饣母采w層，從而將該裝置引入到動(dòng)脈本身，但是這樣的 細(xì)胞聚集也可以阻塞內(nèi)部通道和引起動(dòng)脈再狹窄。因此，Boston Scientific Corporation制備了一種用專有的聚合物涂層的紫杉醇-洗脫冠狀動(dòng)脈支架系統(tǒng)，所述聚合物結(jié)合支架 表面上的紫杉醇。所述紫杉醇-聚合物復(fù)合物能夠精確控制紫杉醇的劑量和時(shí)間-釋放特 征，能夠洗脫足量的藥物以抑制支架周圍的細(xì)胞聚集和顯著地預(yù)防支架周圍的再狹窄和血 管的再形成。預(yù)期本發(fā)明的藥物組合物，特別是當(dāng)治療劑是紫杉烷或其它微管相互作用劑 時(shí)，將類似地用于調(diào)節(jié)外科手術(shù)植入的生物醫(yī)療裝置周圍的細(xì)胞聚集。本發(fā)明的藥物組合物顯示出長期的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，使這樣的組合物能夠方 便地預(yù)包裝成穩(wěn)定的、即時(shí)施用的劑型，從而消除了通常與現(xiàn)有技術(shù)中類似的組合物相關(guān) 的施用前臨床稀釋和配制的必要。本發(fā)明的藥物組合物顯示出經(jīng)延長的時(shí)期(例如，在約 30°C下至少14天和在4°C下至少12個(gè)月)的期望的藥物和乳化穩(wěn)定性。本發(fā)明的藥物組 合物包含的脂質(zhì)顆粒的量為約0. 1 μ g/ml至1000 μ g/ml，優(yōu)選約10 μ g/ml至800 μ g/ml， 最優(yōu)選約200 μ g/ml至600 μ g/ml。基于所述藥物組合物的總量計(jì)，所述治療劑或診斷劑的 典型的濃度可以是至少0. 001% w/v，優(yōu)選0. 001%至90% w/v，更優(yōu)選約0. 至25% w/ ν。所述藥物組合物中存在的治療劑或診斷劑的量可以為約0. 001 μ g/ml至ΙΟΟΟμ g/ml，優(yōu) 選約 0. 1 μ g/ml 至 800 μ g/ml，更優(yōu)選約 60 μ g/ml 至 400 μ g/ml。本發(fā)明的藥物組合物還可以包括促乳化劑，其選自基于植物的脂肪源、溶劑、表面 活性劑或其組合。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)單獨(dú)或組合的所述促乳化劑理論上通過減少或最小化脂質(zhì)顆粒 的不期望的沉淀或聚集，增加了所述脂質(zhì)顆粒的穩(wěn)定性和保持其小粒徑性質(zhì)，從而正面影 響和促進(jìn)所述脂質(zhì)顆粒主動(dòng)攝取到癌細(xì)胞中。所述促乳化劑也將改善本發(fā)明的藥物組合物 的物理和化學(xué)穩(wěn)定性及藥物負(fù)載容量。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述基于植物的脂肪源包括通常為植物油 形式的植物衍生的脂肪酸，比如例如大豆油、亞麻籽油(flaxseed oil)、大麻籽油、亞麻油 (linseed oil)、芥子油、菜籽油、低芥酸菜子油(canola oil)、紅花油、芝麻油、葵花油、葡 萄籽油、扁桃仁油、杏仁油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、椰子油、榛子油、印度楝樹油、橄欖油、 棕櫚油、棕櫚堅(jiān)果油、花生油、南瓜子油、米糠油、核桃油及其混合物。更優(yōu)選的植物油是大 豆油。植物油的常用存在量足夠使所述納米乳具有較高的表面張力，其依次增加靶細(xì)胞 的質(zhì)膜或其上受體的疏水性相互作用的概率。所述基于植物的脂肪源的存在量可以為約 0. 001% ν/ν 至 5.0% ν/ν，更優(yōu)選地為約 0. 005% ν/ν 4. 0% ν/ν，最優(yōu)選地為約 0. 01 % ν/ ν 至 2. 5% ν/ν。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述表面活性劑為選自非離子表面活性劑 的那些。非離子表面活性劑的實(shí)例包括脫水山梨糖醇酯及其混合物，比如脂肪?；拿撍?山梨糖醇酯及其聚氧乙烯衍生物及其混合物，包括但不限于泊洛沙姆化合物(188、182、407 和908)、泰洛沙泊、聚山梨酯20、60和80、羥乙酸鈉、十二烷基硫酸鈉等，及其組合。更優(yōu)選 的非離子表面活性劑為洗滌劑聚山梨酯，比如例如吐溫 -80。所述表面活性劑的存在量通常為足夠通過穩(wěn)定所述納米乳的疏水性組分和親水 性組分之間的界面和保持疏水性組分不結(jié)合而增加該納米乳的動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定性，因此，一旦 形成，該納米乳在貯存中不會(huì)有顯著地變化。所述表面活性劑的存在量可以為約0. 01 % w/ ν 至 4. 0% w/v，更優(yōu)選約 0. w/v 至 3. 0% w/v，和最優(yōu)選約 0. 2% w/v 至 2. 5% w/v。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述溶劑包括任何藥學(xué)可接受的水可混溶性稀釋劑或溶劑，比如例如極性質(zhì)子和極性非質(zhì)子溶劑。這樣的溶劑優(yōu)選地選自1，3_ 丁 二醇；二甲亞砜；醇，比如甲醇、丁醇、苯甲醇、異丙醇和乙醇 ’等。一種更優(yōu)選的溶劑為苯甲所述溶劑的存在量通常為足夠控制所述納米乳中非離子表面活性劑聚集的程度。 所述溶劑的存在量可以為約0. 001% ν/ν至99. 9% ν/ν，更優(yōu)選地為0. 005% ν/ν至80% ν/ν，和最優(yōu)選地為約0. 005% ν/ν至70% ν/ν。本發(fā)明的組合物不限制或改變治療劑或診斷劑的潛在藥理學(xué)活性或化學(xué)性質(zhì)，而 是僅僅提高所述試劑遞送至和內(nèi)在化到包括癌細(xì)胞或組織的病態(tài)細(xì)胞或組織內(nèi)，以賦予治 療或診斷益處。與紫杉烷作為治療癌癥的治療劑的用途有關(guān)的教導(dǎo)的實(shí)例公開在例如美國 專利號(hào) 6346Μ3 ；6384071 ；6387946 ；6395771 ；6403634 ；和 6500858 中，將其引入本文作為參考。通常，本發(fā)明的藥物組合物是通過聯(lián)合所述脂質(zhì)顆粒與治療劑或診斷劑和將其充 分地混合制備的。在與治療劑或診斷劑混合之前，所述脂質(zhì)混合物可以與表面活性劑和基 于植物的脂肪源的組合混合，所述治療劑或診斷劑本身可以與用于溶解的水可混溶性溶劑 混合。然后，將該脂質(zhì)顆粒-治療劑/診斷劑組合與水，優(yōu)選純凈水混合。然后，使得到的混 合物經(jīng)受典型地在標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)高剪切勻漿化攪拌器或勻漿器中產(chǎn)生的高剪切力，以制備包括 分散在水相內(nèi)的脂質(zhì)顆粒的納米乳。足夠的高剪切力可以用合適的高剪切勻漿化攪拌器或 勻菜器比如由 Microfluidics of Newton,ΜΑ.銷售的 Microfluidizer Fluid Materials !Processors產(chǎn)生。為了得到可用于向包括人類的溫血?jiǎng)游锸┯玫母兓男问?，可以?duì)得 到的納米乳進(jìn)行進(jìn)一步處理。在某些情況下，期望從混合過程除去不適當(dāng)?shù)拇箢w粒，以便使粒徑分布保持 在期望的范圍內(nèi)。合適的過濾系統(tǒng)，比如來自Millipore Corporation of ffaltham, Massachusetts的那些，可用于該目的。因此，合適的過濾系統(tǒng)的選擇可能是將所述脂質(zhì)顆 粒的粒徑分布控制在期望的范圍的因素，其在本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)技術(shù)范圍內(nèi)?？蛇x地， 可以通過透析處理所述納米乳以除去雜質(zhì)，得到的滲析液保留用于藥物用途。透析是一種 除去任何非-顆?；|(zhì)混合物成分、藥物和/或溶劑和獲得任何期望的緩沖液更換或濃 縮的優(yōu)選的方法。可以使用額定分子量截留5000至500000的滲析膜，分子量為10000至 300000是優(yōu)選的。當(dāng)比如通過透析純化除去非顆?；乃幬飼r(shí)，可以表征如所描述得到的 脂質(zhì)顆粒以確定所述脂質(zhì)顆?？赡軆?nèi)在化到靶細(xì)胞，比如例如C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的程 度。本發(fā)明的組合物還可以包括藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。藥學(xué)可接受的載體的實(shí) 例是本領(lǐng)域熟知的，其包括在藥物組合物中通常使用的那些，比如但不限于抗氧化劑、緩沖 劑、螯合劑、香味劑、著色劑、防腐劑、提高生物利用度的攝取促進(jìn)劑、抗微生物劑及其組合。 這樣的添加劑的量取決于期望的性質(zhì)，其可以由在本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確定。本發(fā)明藥物組合物通?？梢园}、緩沖劑、防腐劑和相容性載體，任選地與其它 治療成分組合。當(dāng)在藥物中使用時(shí)，所述鹽應(yīng)當(dāng)是藥學(xué)可接受的，但是非藥學(xué)可接受的鹽可 方便地用于制備其藥學(xué)可接受的鹽，且沒有從本發(fā)明的范圍中排除。這樣的藥理學(xué)和藥學(xué) 可接受的鹽包括，但不限于由下述酸制備的那些鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、 乙酸、palicylic、對(duì)-甲苯磺酸、酒石酸、檸檬酸、甲烷磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。藥學(xué)可接受的鹽也可以制備成堿金屬或堿土金屬鹽，比如羧酸基的鈉鹽、鉀鹽 或鈣鹽。本發(fā)明還提供用治療劑或診斷劑治療或診斷患者的方法，其通過向細(xì)胞遞送有效 量的至少一種治療劑或診斷劑用于實(shí)施預(yù)防、診斷或治療以細(xì)胞過度增殖為特征的疾病、 病癥或綜合征或其癥狀。改進(jìn)的癌癥治療是特別預(yù)期的，包括通過控制腫瘤細(xì)胞增殖、血管 生成、轉(zhuǎn)移性生長、細(xì)胞凋亡治療原發(fā)腫瘤，和治療外科手術(shù)切除之后或同時(shí)的微小轉(zhuǎn)移的 發(fā)展；及放射性或其它化療性治療原發(fā)腫瘤。本發(fā)明的藥物組合物用于這樣的癌癥類型， 如原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性黑素瘤、淋巴瘤、肉瘤、肺癌、肝癌、霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤、白 血病、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、腎癌、結(jié)腸癌和腺癌比如乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌和胰腺 癌。對(duì)于治療和診斷應(yīng)用，當(dāng)與藥學(xué)可接受的載體混合時(shí)，所述藥物組合物可以直接 地施用至患者。該方法可以通過施用單獨(dú)的治療劑或診斷劑或與有效量的另一種治療劑或 診斷劑的組合來實(shí)施，其可以是或可以不是第二種微管相互作用劑。當(dāng)不是微管相互作用 劑時(shí)，該第二種試劑可以是，但不限于細(xì)胞生長抑制劑、葉酸抑制劑、烷化劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑 制劑、酪氨酸激酶抑制劑、鬼白霉素、抗腫瘤抗生素、化療劑、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑及其組合。這 樣的治療劑還可以包括代謝抑制試劑。許多這樣的治療劑是本領(lǐng)域已知的。當(dāng)需要放大或 保證患者對(duì)治療方法的反應(yīng)時(shí)，所述組合治療方法提供同時(shí)、順序或單獨(dú)用于治療這樣的 病癥。本發(fā)明的方法可以使用醫(yī)學(xué)上可接受的任何施用方式實(shí)施，并且產(chǎn)生了有效的活 性化合物水平，而不會(huì)引起臨床不可接受的副作用。盡管特別地適合腸胃外施用的劑型是 優(yōu)選的，本發(fā)明的組合物也可以配制用于吸入、口服、局部、透皮、鼻腔、眼部、肺部、直腸、經(jīng) 粘膜、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、胸內(nèi)、胸膜內(nèi)、子宮內(nèi)、瘤內(nèi)或輸注方法或施用，以氣溶 膠、噴霧齊 、粉齊 、凝膠齊 、洗劑、乳膏齊 、栓齊 、軟膏劑等形式。如果這樣的制劑是期望，可以 包括本領(lǐng)域熟知的其它添加劑，以賦予所述制劑期望的稠度及其它性質(zhì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到施用治療劑或診斷劑的特定的方式取決于選擇的特定 的試劑；所述施用是用于治療、診斷還是預(yù)防疾病、病癥、綜合征或其癥狀；待治療或診斷 的醫(yī)學(xué)病癥的嚴(yán)重性；和治療效果所需的劑量。例如，用于治療白血病而施用抗癌劑的優(yōu)選 的方式包括靜脈內(nèi)施用，而用于治療皮膚癌的優(yōu)選的方法可包括局部施用或真皮內(nèi)施用。如本文使用的“有效量”指獲得期望的治療或診斷效果的該治療劑或診斷劑的劑 量或多劑量。通常，治療劑或診斷劑的有效量可以隨如下因素而變化使用的特定試劑的活 性；所述試劑的代謝穩(wěn)定性和作用時(shí)長；受試者的種類、年齡、體重、一般健康狀態(tài)、飲食狀 態(tài)、性別和飲食；施用方式和時(shí)間；排泄速率；藥物組合(如果有)；和待治療的特定病癥的 表現(xiàn)程度和/或嚴(yán)重性。精確劑量可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定，而不需要過度實(shí)驗(yàn)，為 了獲得期望的結(jié)果，每天施用一次或多次，并且為了獲得期望的治療效果或如果發(fā)生任何 并發(fā)癥，可以由獨(dú)立的執(zhí)業(yè)醫(yī)師調(diào)節(jié)劑量。重要地，當(dāng)用于治療癌癥時(shí)，使用的治療劑的劑 量應(yīng)當(dāng)足夠抑制或殺死腫瘤細(xì)胞，同時(shí)保持正常細(xì)胞基本上不受傷害。包括在本發(fā)明的藥物組合物內(nèi)的治療劑或診斷劑可以以不超過可以被給定脂質(zhì) 顆粒溶解、懸浮或操作締合的最大量的任何期望量配制。所述診斷劑或治療劑的量可以為 0. 001 μ g/ml 至 ΙΟΟΟμ g/ml，優(yōu)選約 0. 1 μ g/ml 至 800 μ g/ml，更優(yōu)選約 300μ g/ml。
通常，所述脂質(zhì)顆粒以足夠向患者施用有效量的方式遞送。所述劑量可以為約 0. lmg/kg 至 175mg/kg，優(yōu)選約 lmg/kg 至 80mg/kg，和更優(yōu)選 5mg/kg 至 60mg/kg。所述劑量 可以以單劑量或獨(dú)立的分劑量施用，所述分劑量比如每天一次至四或多次。在某些劑量下 受試者的反應(yīng)不足的情況下，可以使用甚至更高的劑量(或不同的、更定位的遞送途徑的 有效更高劑量)至患者耐受的程度。為了獲得治療劑或診斷劑的合適的全身或靶向水平， 預(yù)期每天多劑量。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用微管相互作用劑作為體外診斷劑。如前 所述，根據(jù)所述的特定腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞類型，在抑制不同的腫瘤類方面，不同的微管相互作 用劑的功效可以不同。因此，例如，在其中診斷或選擇合適的化療策略可能困難的情況下， 體外的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)物與已知靶向特定腫瘤細(xì)胞類型的微管相互作用劑的試驗(yàn)提供了鑒 定腫瘤類型和有效治療的另一種方法。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供一種制備本發(fā)明的藥物組合物的方法。將所述脂質(zhì) 混合物加入到一定量的治療劑或診斷劑中，使得當(dāng)用水相加工時(shí)，該組合物形成包括脂質(zhì) 顆粒分散液的脂質(zhì)納米乳，其中脂質(zhì)顆粒的分散相以納米級(jí)粒徑的大分子或小分子簇形式 存在。在制備本發(fā)明的組合物中，將所述脂質(zhì)混合物和治療劑或診斷劑與包括水，優(yōu)選過濾 水的水相混合。加工得到的混合物，形成具有平均粒徑范圍典型地為，但不總是至多200nm 范圍的脂質(zhì)顆粒，所述粒徑是特別適于治療癌癥的粒徑，較大的顆粒適于其它用途。得到的 范圍部分地受使用的脂質(zhì)混合物、加入到該脂質(zhì)混合物中的治療劑或診斷劑的類型和量及 常用于制備脂質(zhì)顆粒的技術(shù)的影響。本發(fā)明的藥物組合物可以使用常規(guī)分散液制備技術(shù)或本領(lǐng)域已知的方法制備。這 樣的技術(shù)包括，但不限于高剪切勻漿化、超聲攪拌或超聲處理、高壓勻漿化、溶劑乳化/蒸 發(fā)等。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述脂質(zhì)顆?？梢允墙?jīng)由常規(guī)高壓勻漿化技術(shù)，使用合 適的高壓勻漿器制備的。合適規(guī)格的勻漿器是市售可獲得的。高壓勻漿器通常設(shè)計(jì)用于在 典型地為約100至2000bar的高壓下，推動(dòng)流體穿過跨距約幾微米的狹窄縫隙。加壓流體 經(jīng)非常短的距離加速至超過1000km/h的非常快的速度。包含所述脂質(zhì)混合物的加壓流體 遭遇非常高的剪切應(yīng)力和空化力(cavitation forces)，將所述脂質(zhì)混合物有效地破碎和 粉碎成亞微米范圍的顆粒。如前所述，大部分的脂質(zhì)顆粒具有的平均粒徑范圍為約0. 02 μ 至0.2 μ，優(yōu)選0.02 μ至0. 1 μ，變化的小量顆粒落在上述范圍之上或之下，某些脂質(zhì)顆粒 的僅僅為至多約200nm。在制備脂質(zhì)顆粒的另一個(gè)特定的方法中，所述脂質(zhì)混合物可以與基于植物的脂肪 源比如植物油和表面活性劑比如非離子表面活性劑混合，得到脂質(zhì)相。所述治療劑或診斷 劑可以與溶劑比如水可混溶性溶劑混合，得到治療劑或診斷劑相。此后，在水相的存在下， 優(yōu)選地通過超聲處理，混合所述脂質(zhì)和治療劑或診斷劑相，并摻合在一起。之后，在高剪切 力下，勻漿化得到的混合物，以制備本發(fā)明的相應(yīng)納米乳。然后，可以通過0.2μ膜過濾該 納米乳，滅菌和/或除去雜質(zhì)比如未用的脂質(zhì)物質(zhì)、過量的治療劑或診斷劑等，得到適于作 為藥物組合物向需要治療或診斷的包括人類的溫血?jiǎng)游镞f送的純化形式。提供下述實(shí)施例用于幫助理解本發(fā)明的藥物組合物。實(shí)施例1EmPAC 的配制
選擇紫杉醇作為第一種藥物候選物，其將被測(cè)試經(jīng)由負(fù)載在脂質(zhì)納米顆粒(LN) 上的配制并將被發(fā)展為市售可用的產(chǎn)品。所述紫杉醇/LN制劑是直接在水和4%乙 醇中，接著是用 IlOY Microfluidics Microf luidizer 高壓勻菜器(Model M-I ΙΟΥ, Microfluidics,Inc. ,Newton,ΜΑ)以18000psi高壓勻漿化四個(gè)周期制備的。盡管之前的研 究表明紫杉醇可以以至多-25% w/w脂質(zhì)濃度結(jié)合到LN中，但是據(jù)發(fā)現(xiàn)該制劑僅僅穩(wěn)定幾 小時(shí)，盡管與藥物結(jié)合相比，這樣的問題似乎與穩(wěn)定性更相關(guān)。在發(fā)現(xiàn)在ImM焦磷酸鈉(pH 9.5)中制備的LN保持穩(wěn)定至少兩個(gè)月之后，選擇ImM焦磷酸鈉(pH 9.5)作為藥物結(jié)合研 究的第一種試驗(yàn)介質(zhì)。據(jù)發(fā)現(xiàn)如果以15000psi勻漿化3次，將紫杉醇結(jié)合到具有在ImM焦磷酸鈉中4% 乙醇含量的LN中，則僅僅具有5%藥物負(fù)載的制劑是穩(wěn)定的，并且甚至該最終制劑不能穩(wěn) 定顯著的時(shí)期。在結(jié)合之后的第二天，在5%負(fù)載的樣品中觀察到微小的濁度，在第三天， 其變成全部沉淀。而在33%和16%藥物負(fù)載的樣品中，觀察到立即混濁。將這些發(fā)現(xiàn)概 括在表1中。這樣的穩(wěn)定性降低的可能原因可能是紫杉醇在水中的溶解性差、乙醇含量低 (4% )、最終溶液的pH高(pH 11. 5)和/或不相容的脂質(zhì)濃度。表1.負(fù)載到在4%乙醇中制備的LN中的紫杉醇
權(quán)利要求
1.一種用于治療或預(yù)防包括人類的溫血?jiǎng)游镏幸约?xì)胞過度增殖為特征的疾病、病癥或 綜合征或其癥狀的藥物組合物，所述藥物組合物包括脂質(zhì)納米乳，其包括各自包括至少一種能夠優(yōu)先選擇性地內(nèi)在化到病態(tài)細(xì)胞內(nèi)的非雙 層形成脂質(zhì)的脂質(zhì)顆粒；有效量的與所述脂質(zhì)納米乳組合的至少一種治療劑； 和藥學(xué)可接受的載體，其中所述藥物組合物是通過勻漿化加工制備的。
2.權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述治療劑為微管相互作用劑。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中所述微管相互作用劑選自由以下組成的 組紫杉烷、長春花生物堿、埃坡霉素、軟珊瑚醇、多拉司他汀、考布他丁、匍枝珊瑚醇、 laulimalide、盤皮海綿內(nèi)酯、秋水仙堿、擬莖點(diǎn)霉毒素A、軟海綿素B、海綿抑制素1和其衍 生物、類似物、同源物及組合。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中所述紫杉烷選自由以下組成的組紫杉醇、三 尖杉寧堿、多西他賽、漿果赤霉素-IIIUO-脫乙酰基漿果赤霉素-III、脫乙?；仙即?、脫 乙酰基-7-表紫杉醇和其衍生物、同源物、類似物及組合。
5.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中所述長春花生物堿選自由以下組成的組長 春新堿、長春堿、長春瑞濱、長春地辛和其衍生物、同源物、類似物及組合。
6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述治療劑的量為基于所述藥物組合物總量 的至少0. 001%重量。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其中所述治療劑的量為基于所述藥物組合物總量 的約0. 至90%重量。
8.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述非雙層形成脂質(zhì)只是弱極性的。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中所述非雙層形成脂質(zhì)基本上是非極性的或中 性的。
10.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中所述非雙層形成脂質(zhì)是中性的。
11.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒包括非雙層形成脂質(zhì)的混合物。
12.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒穩(wěn)定地分散在水相中至少七天。
13.如權(quán)利要求12所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒穩(wěn)定地分散在水相中至少 十四天。
14.如權(quán)利要求13所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒穩(wěn)定地分散在水相中至少一 個(gè)月。
15.如權(quán)利要求14所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒穩(wěn)定地分散在水相中至少六 個(gè)月。
16.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒穩(wěn)定地分散在水相中至少一年。
17.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其還包括促乳化劑。
18.如權(quán)利要求17所述的藥物組合物，其中所述促乳化劑選自由以下組成的組表面活性劑、基于植物的脂肪源、溶劑及其組合。
19.如權(quán)利要求18所述的藥物組合物，其中所述表面活性劑為非離子表面活性劑。
20.如權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其中所述非離子表面活性劑為洗滌劑聚山梨酯。
21.如權(quán)利要求20所述的藥物組合物，其中所述洗滌劑聚山梨酯為吐溫 -80。
22.如權(quán)利要求18所述的藥物組合物，其中所述非離子表面活性劑為脫水山梨醇酯。
23.如權(quán)利要求22所述的藥物組合物，其中所述脫水山梨醇酯選自由以下組成的組 脂肪_酰化的脫水山梨醇酯和其聚氧乙烯衍生物、及其混合物。
24.如權(quán)利要求18所述的藥物組合物，其中所述表面活性劑以足以防止所述納米乳在 儲(chǔ)存期間變質(zhì)的量存在。
25.如權(quán)利要求24所述的藥物組合物，其中所述表面活性劑以約0.01% w/v至4. 0% w/v的量存在。
26.如權(quán)利要求25所述的藥物組合物，其中所述表面活性劑以約0.w/v至3. 0%w/v的量存在。
27.如權(quán)利要求18所述的藥物組合物，其中所述溶劑為水-可混溶性溶劑。
28.如權(quán)利要求27所述的藥物組合物，其中所述水-可混溶性溶劑選自由以下組成的 組極性溶劑及其組合。
29.如權(quán)利要求28所述的藥物組合物，其中所述溶劑選自由以下組成的組極性非質(zhì) 子溶劑、極性質(zhì)子溶劑及其組合。
30.如權(quán)利要求29所述的藥物組合物，其中所述極性非質(zhì)子溶劑為二甲亞砜。
31.如權(quán)利要求29所述的藥物組合物，其中所述極性質(zhì)子溶劑為醇。
32.如權(quán)利要求31所述的藥物組合物，其中所述醇選自由以下組成的組丁醇、丙醇、 乙醇、甲醇、苯甲醇及其組合。
33.如權(quán)利要求18所述的藥物組合物，其中所述溶劑以足以控制所述表面活性劑聚集 程度的量存在。
34.如權(quán)利要求33所述的藥物組合物，其中所述溶劑以約0.001% w/v至99. 9% w/v的量存在。
35.如權(quán)利要求34所述的藥物組合物，其中所述溶劑以約0.005% w/v至80% w/v的量存在。
36.如權(quán)利要求18所述的藥物組合物，其中所述基于植物的脂肪源為植物油。
37.如權(quán)利要求36所述的藥物組合物，其中所述植物油選自由以下組成的組大豆油、 亞麻籽油、大麻籽油、亞麻油、芥子油、菜籽油、低芥酸菜子油、紅花油、芝麻油、葵花油、葡萄 籽油、扁桃仁油、杏仁油、蓖麻油、玉米油、棉籽油、椰子油、榛子油、印度楝樹油、橄欖油、棕 櫚油、棕櫚堅(jiān)果油、花生油、南瓜子油、米糠油、核桃油及其組合。
38.如權(quán)利要求37所述的藥物組合物，其中所述植物油為大豆油。
39.如權(quán)利要求18所述的藥物組合物，其中所述基于植物的脂肪源以足以使所述納米 乳具有較高的表面張力的量存在，從而增加與靶細(xì)胞質(zhì)膜的疏水性相互作用的概率。
40.如權(quán)利要求39所述的藥物組合物，其中所述基于植物的脂肪源以約0.001% w/v 至5. 0% w/v的量存在。
41.如權(quán)利要求40所述的藥物組合物，其中所述基于植物的脂肪源以約0.005% w/v 至4. 0% w/v的量存在。
42.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述至少一種非雙層形成脂質(zhì)選自由以下 組成的組羧酸的甘油單酯、脂肪族醇、留醇芳香酸酯、留醇、萜烯、膽汁酸、膽汁酸的堿金屬 鹽、脂肪族酸的留醇酯、糖酸的留醇酯、糖酸的酯、脂肪族醇的酯、糖的酯、脂肪族酸的酯、糖 酸、皂苷、皂苷元、甘油、脂肪族酸的甘油二酯、脂肪族酸的甘油三酯、脂肪族醇的甘油二酯 和脂肪族醇的甘油三酯及其組合。
43.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述至少一種非雙層形成脂質(zhì)是脂質(zhì)混合 物的形式，包括a)至少一種第一成員，選自由以下組成的組包含約9至18個(gè)碳原子的羧酸的甘油單 酯和包含約10至18個(gè)碳原子的脂肪族醇；b)至少一種第二成員，選自由以下組成的組留醇芳香酸酯；和c)至少一種第三成員，選自由以下組成的組留醇、萜烯、膽汁酸和膽汁酸的堿金屬 鹽。
44.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中所述羧酸的甘油單酯是飽和的。
45.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中所述羧酸的甘油單酯是不飽和的。
46.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)混合物的(a) (b) (c)的重 量比為基于所述脂質(zhì)顆?？傊亓康?1-5) (0.25-3) (0.25-3)。
47.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)混合物還包括d)至少一種第四成員，選自由以下組成的組包含約1至18個(gè)碳原子的脂肪族酸的甾 醇酯；糖酸的留醇酯；糖酸和包含約10至18個(gè)碳原子的脂肪族醇的酯；糖和包含約10至 18個(gè)碳原子的脂肪族酸的酯；糖酸，皂苷；和皂苷元；和e)至少一種第五成員，選自由以下組成的組甘油；含約10至18個(gè)碳原子的脂肪族酸 的甘油二酯和三酯；和包含約10至18個(gè)碳原子的脂肪族醇。
48.如權(quán)利要求47所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)混合物的 (a) (b) (c) (d) (e)的重量比為基于所述脂質(zhì)顆?？傊亓康?1-5) (0.25-3) (0. 25-3) (0. 25-3) (0. 25-3)。
49.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒以約0.1 μ g/ml至1000 μ g/ ml的量存在。
50.如權(quán)利要求49所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒以約10μ g/ml至800 μ g/ml 的量存在。
51.如權(quán)利要求50所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒以約200μ g/ml至600 μ g/ ml的量存在。
52.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒的平均粒徑為至多0.2μ (微 米)。
53.如權(quán)利要求52所述的藥物組合物，其中所述脂質(zhì)顆粒的平均粒徑為約0.02μ至 0. 2μ。
54.一種用于診斷包括人類的溫血?jiǎng)游镏械募膊?、病癥、綜合征或其癥狀的藥物組合 物，所述藥物組合物包括脂質(zhì)納米乳，其包括各自包括至少一種能夠優(yōu)先選擇性地內(nèi)在化到病態(tài)細(xì)胞內(nèi)的非雙 層形成脂質(zhì)的脂質(zhì)顆粒，所述病態(tài)細(xì)胞包括癌細(xì)胞；有效量的與所述脂質(zhì)納米乳組合的至少一種診斷劑；和藥學(xué)可接受的載體，其中所述藥物組合物是通過勻漿化加工制備的。
55.一種治療或預(yù)防包括人類的溫血?jiǎng)游镏械募膊?、病癥和其癥狀的方法，其包括向所 述動(dòng)物施用有效量的權(quán)利要求1的藥物組合物。
56.如權(quán)利要求55所述的方法，其中所述藥物組合物嵌入手術(shù)插入動(dòng)物體內(nèi)的生物醫(yī) 療裝置的表面。
57.如權(quán)利要求56所述的方法，其中所述生物醫(yī)療裝置為支架。
58.一種制備權(quán)利要求1的藥物組合物的方法，其包括如下步驟a)混合至少一種非雙層形成脂質(zhì)與有效量的至少一種治療劑，得到脂質(zhì)部分；b)將所述脂質(zhì)部分加入到水相中，得到分散液；和c)在由此足以分散所述至少一種非雙層形成脂質(zhì)的高剪切條件下攪拌所述分散液，形 成包括脂質(zhì)顆粒的脂質(zhì)納米乳。
59.如權(quán)利要求58所述的方法，還包括向所述藥物組合物添加促乳化劑的步驟。
60.如權(quán)利要求59所述的方法，其中所述促乳化劑選自由以下組成的組表面活性劑、 溶劑、基于植物的脂肪源及其組合。
61.如權(quán)利要求60所述的方法，還包括在與所述治療劑混合的步驟之前混合所述表面 活性劑與所述至少一種非雙層形成脂質(zhì)的步驟。
62.如權(quán)利要求60所述的方法，還包括在與所述治療劑混合的步驟之前混合所述基于 植物的脂肪源與所述至少一種非雙層形成脂質(zhì)的步驟。
63.如權(quán)利要求60所述的方法，還包括在與所述至少一種非雙層形成脂質(zhì)混合的步驟 之前混合所述溶劑與所述治療劑的步驟。
64.如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述攪拌步驟包括通過流體勻漿化方法加工所述 脂質(zhì)混合物。
65.如權(quán)利要求64所述的方法，其中所述流體勻漿化方法選自由以下組成的組高剪 切勻漿化、超聲勻漿化、高壓勻漿化及其組合。
66.如權(quán)利要求58所述的方法，還包括滅菌所述納米乳。
67.如權(quán)利要求58所述的方法，還包括通過無菌過濾加工所述納米乳。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其中所述加工步驟包括使所述納米乳通過0.2μ膜。
69.一種診斷包括人類的溫血?jiǎng)游镏幸约?xì)胞過度增殖為特征的疾病、病癥、綜合征或其 癥狀的方法，所述方法包括向所述溫血?jiǎng)游锸┯糜行Я康臋?quán)利要求54所述的藥物組合物。
全文摘要
一種在治療、診斷和預(yù)防包括人類的溫血?jiǎng)游镏幸约?xì)胞過度增殖為特征的疾病、病癥、綜合征或其癥狀中有益的藥物組合物，及其使用方法和制備方法，所述藥物組合物包括通過勻漿化加工制備的脂質(zhì)納米乳，該脂質(zhì)納米乳包括各自包括至少一種能夠優(yōu)先選擇性地主動(dòng)地內(nèi)在化到病態(tài)細(xì)胞內(nèi)的非雙層形成脂質(zhì)的脂質(zhì)顆粒；有效量的與所述納米乳組合的至少一種治療性或診斷性微管相互作用劑；和藥學(xué)可接受的載體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物也可以由蛋白質(zhì)載體分子和/或促乳化劑組成，所述促乳化劑比如表面活性劑、基于植物的脂肪源、溶劑及其組合。
文檔編號(hào)A61K31/17GK102046011SQ200880129433
公開日2011年5月4日 申請(qǐng)日期2008年4月4日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月4日
發(fā)明者羅伯特·紹爾, 羅伯特·羅德里格斯 申請(qǐng)人:羅伯特·紹爾, 羅伯特·羅德里格斯