專利名稱：腫瘤微環(huán)境的調(diào)控的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及基于在腫瘤微環(huán)境中對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控的癌癥療法。更特別地，本發(fā)明涉及靶向或改變非惡性細(xì)胞的功能的治療劑，其中所述非惡性細(xì)胞促進(jìn)腫瘤的生長和存活。
背景技術(shù)：
先天性和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的細(xì)胞隨時(shí)準(zhǔn)備對(duì)組織損傷和/或致病性感染快速應(yīng)答。免疫和炎性應(yīng)答的靜止和激活之間的平衡是被高度調(diào)節(jié)的平衡，其控制抗病原體和抗腫瘤免疫應(yīng)答。細(xì)胞表面和分泌的蛋白通過正和負(fù)反饋機(jī)制二者調(diào)節(jié)此平衡，其中所述反饋機(jī)制經(jīng)設(shè)計(jì)用以確保適當(dāng)快速的應(yīng)答同時(shí)將有害的后果最小化。
在癌癥的情況下，構(gòu)成腫瘤的獨(dú)特的、非生理性的組織微環(huán)境包括惡性的和非惡性的細(xì)胞二者。當(dāng)惡性細(xì)胞中的轉(zhuǎn)化或致癌性改變清楚地構(gòu)成未被調(diào)節(jié)的生長和腫瘤演進(jìn)的基礎(chǔ)時(shí)，非惡性細(xì)胞和由惡性和非惡性細(xì)胞的并存所致的腫瘤微環(huán)境在腫瘤起始作用中扮演關(guān)鍵角色。非惡性細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境對(duì)于腫瘤的演進(jìn)也是重要的，其保持支持進(jìn)一步的遺傳不穩(wěn)定性和升高的突變頻率的條件。參見例如Reynolds等，Omcer / 漢，1996，56(24):5754-5757。特別地，正常運(yùn)行以支持炎性和免疫應(yīng)答的非惡性細(xì)胞在某些情況下是在能夠例如通過產(chǎn)生直接或間接地支持腫瘤內(nèi)惡性細(xì)胞生長和生存力的介體，或通過產(chǎn)生直接或間接地抑制惡性細(xì)胞生長和生存力的介體，或通過抑制否則將阻礙腫瘤演進(jìn)的應(yīng)答而促成腫瘤演進(jìn)的腫瘤微環(huán)境內(nèi)的。腫瘤微環(huán)境還通過在腫瘤部位改變藥物代謝或藥物代謝動(dòng)力學(xué)和/或促成抗藥性的產(chǎn)生而影響腫瘤對(duì)治療干預(yù)的接受性。
盡管有越來越多關(guān)于腫瘤微環(huán)境重要性的理解，但是靶向該生物學(xué)的治療策略仍然是有限的。作為一個(gè)例子，已經(jīng)用靶向骨髓基質(zhì)的蛋白酶體抑制劑治療多發(fā)性骨髓瘤患者，并因此減少骨轉(zhuǎn)移。參見Rajkumar等，乂C//". O"co/.,2005,20;23(3):630-399。另外的例子包括調(diào)控血管發(fā)生、低氧和趨化因子的藥物和候選治療劑。參見例如Nagasawa等，5Zo/.尸/ flra. 5m〃.，2006, 29(12):2335-2342; Giles等，Cwm Omcer Z>wg 7^ge", 2006，6(8):659-670。
鑒于對(duì)抗癌療法的持續(xù)需要，本發(fā)明提供調(diào)控存在于腫瘤微環(huán)境中的非惡性細(xì)胞的功能從而破環(huán)支持腫瘤生長和存活的條件的方法。特別地，所述被公開的方法包括施用靶向CD80的治療劑以引起免疫調(diào)控作用，包括腫瘤微環(huán)境中存在的免疫調(diào)節(jié)或炎性細(xì)胞如抗原呈遞細(xì)胞(例如巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、B細(xì)胞)或源自骨髓的抑制性細(xì)胞的耗竭，以及起到支持腫瘤演進(jìn)的作用的T細(xì)胞亞熟例如調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助細(xì)胞)的抑制。所述被公開的方法還與另外的病癥的治療有關(guān)，在所述病癥中調(diào)節(jié)T細(xì)胞的抑制促成病理狀況的惡化。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供在腫瘤微環(huán)境中調(diào)控非惡性細(xì)胞從而抑制腫瘤演進(jìn)的方法。例如，本發(fā)明提供一種治療患有惡性腫瘤的受治療者的方法，所述惡性腫瘤包括惡性和非惡性細(xì)胞的腫瘤微環(huán)境，其中調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能促成或加重惡性腫瘤，所述方法包括對(duì)受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。在本發(fā)明另一個(gè)方面，提供治療患有惡性腫瘤的受治療者的方法，所述惡性腫瘤包括惡性和非惡性細(xì)胞的腫瘤微環(huán)境，其中非惡性的表達(dá)CD80的細(xì)胞促成或加重惡性腫瘤，所述方法包括對(duì)受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。如本文所述的靶向CD80的治療劑還可被用來抑制受治療者腫瘤微環(huán)境中一種或多種炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，和/或使受治療者腫瘤微環(huán)境中非惡性的表達(dá)CD80的細(xì)胞耗竭。
附圖簡述


圖1A描繪當(dāng)與受輻射的SB淋巴瘤細(xì)胞在無處理(對(duì)照，菱形XCTLA-4Ig (三角形、抗CD86抗體(灰色圓圈)、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)或抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養(yǎng)時(shí)CD4+CD25- T細(xì)胞增殖的百分比。
圖1B描繪當(dāng)與LPS刺激的成熟樹突細(xì)胞在無處理(對(duì)照，菱形)、CTLA-4Ig (三角形、抗CD86抗體(灰色圓圈)、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)或抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養(yǎng)時(shí)CD4+CD25- T細(xì)胞增殖的百分比。
圖2A描繪當(dāng)與LPS刺激的成熟樹突細(xì)胞在無處理(對(duì)照，菱形)、CTLA-4Ig (三角形X抗CD86抗體(灰色圓圈)、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)或抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養(yǎng)時(shí)經(jīng)由CD4+CD25-T細(xì)胞的IFN-y的產(chǎn)生。
圖2B描繪當(dāng)與LPS刺激的成熟樹突細(xì)胞在無處理(對(duì)照，菱形)、CTLA-4Ig (三角形X抗CD86抗體(灰色圓圈)、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)或抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養(yǎng)時(shí)經(jīng)由CD4+CD25-T細(xì)胞的白細(xì)胞介素-2的產(chǎn)生。
圖3A描繪當(dāng)與受輻射的SB淋巴瘤細(xì)胞以1:120的SB:T比在無處理(對(duì)照，菱形X人IgGl (同種型對(duì)照，正方形)、CTLA-4Ig (三角形X抗CD86抗體(X X抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)以及抗CD86和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養(yǎng)時(shí)供體202的CD4+CD25+ T細(xì)胞的調(diào)節(jié)T細(xì)胞誘導(dǎo)的百分比。還顯示的是當(dāng)與受輻射的SB淋巴瘤細(xì)胞以1:10的SB:T比共培養(yǎng)(加號(hào))以及不共培養(yǎng)即CD4+CD25+T細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)(長方形)時(shí)供體202的CD4+CD25+T細(xì)胞的調(diào)節(jié)T細(xì)胞誘導(dǎo)的百分比。圖3B描繪當(dāng)與受輻射的SB淋巴瘤細(xì)胞以1:160的SB:T比在無處理 (對(duì)照，菱形)> 人IgGl (同種型對(duì)照，正方形)、CTLA-4Ig (三角形X 抗CD86抗體(X 、抗CD80抗體(加利昔單抗，空心圓圈)以及抗CD86 和抗CD80抗體的組合(黑色圓圈)的存在下共培養(yǎng)時(shí)供體133的 CD4+CD25+ T細(xì)胞的調(diào)節(jié)T細(xì)胞誘導(dǎo)的百分比。還顯示的是當(dāng)與受輻射 的SB淋巴瘤細(xì)胞以1:10的SB:T比共培養(yǎng)(加號(hào))以及不共培養(yǎng)即 CD4+CD25+ T細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)(長方形)時(shí)供體202的CD4+CD25+ T細(xì)胞 的調(diào)節(jié)T細(xì)胞誘導(dǎo)的百分比。
圖4A-4F描繪在純化的人血清骨髓瘤IgGl (同種型對(duì)照X抗CD80 抗體(加利昔單抗)或CTLA-4Ig的存在下，經(jīng)由CD14+單核細(xì)胞(空心 柱、與尺^淋巴瘤細(xì)胞共培養(yǎng)的〔014+單核細(xì)胞(灰色柱X與CD14十 單核細(xì)胞共培養(yǎng)的CD4+T細(xì)胞(陰影柱)以及與CD14+單核細(xì)胞和Raji 淋巴瘤細(xì)胞共培養(yǎng)的CD4+T纟田胞(黑色柱)的白細(xì)胞介素-8 (圖4A、 4C 和4E )和白細(xì)胞介素-6 (圖4B、 4D和4F )的產(chǎn)生。細(xì)胞群體是從供體A (圖4A-4B X供體B (圖4C-4D )和供體C (圖4E-4F )分離的。
詳述
本發(fā)明提供在腫瘤微環(huán)境中調(diào)控非惡性細(xì)胞的方法，其中所述非惡性 細(xì)胞正常起作用以調(diào)節(jié)炎癥以及先天性和適應(yīng)性免疫力，而且直接或間接 地支持腫瘤演進(jìn)。被公開的方法對(duì)于提高癌癥免疫力即癌癥反應(yīng)性T細(xì)胞 的抗癌活性也是有用的。被公開的方法使用靶向CD80的治療劑，其在阻 斷CD80介導(dǎo)的T細(xì)胞功能調(diào)節(jié)或內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定方面是有效的，和/或使支持 腫瘤生長、遷移和/或血管發(fā)生的表達(dá)CD80的非惡性細(xì)胞耗竭。在本發(fā)明 的一個(gè)方面，提供了通過對(duì)受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療 劑而治療患有疾病或病癥的受治療者的方法，所述疾病或病癥中的調(diào)節(jié)T 細(xì)胞的功能促成疾病病理學(xué)。代表性的適應(yīng)癥包括癌癥，其包括血液的以 及非血液的惡性腫瘤。在本發(fā)明的其他方面，提供了使用靶向CD80的治 療劑在受治療者中提高癌癥免疫力或降低腫瘤演進(jìn)的免疫或炎性支持的 方法，此過程是通過以下實(shí)現(xiàn)的調(diào)控存在于腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞，例如降低存在于腫瘤微環(huán)境中的免疫調(diào)節(jié)或炎性細(xì)胞比如抗原呈遞細(xì)胞 (例如巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、B細(xì)胞)或源自骨髓的抑制性細(xì)胞(例如源 自骨髓的單核細(xì)胞和表達(dá)tie-2的單核細(xì)胞)的數(shù)量，抑制起支持腫瘤演進(jìn)
作用的T細(xì)胞亞群(例如調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助T細(xì)胞)，和/或抑制腫
瘤微環(huán)境中一種或多種炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
I .腫瘤微環(huán)境
本發(fā)明基于對(duì)直接或間接地促成疾病發(fā)病或演進(jìn)/持續(xù)的細(xì)胞的調(diào)控， 其中調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能促成疾病。在本發(fā)明的一個(gè)方面，腫瘤微環(huán)境的非 惡性細(xì)胞被調(diào)控以至于那些細(xì)胞對(duì)腫瘤演進(jìn)的直接貢獻(xiàn)被抑制，而且那些 細(xì)胞支持調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能的功能也被抑制。
腫瘤微環(huán)境的細(xì)胞包括惡性細(xì)胞以及支持它們生長和存活的非惡性 細(xì)胞。所述非惡性細(xì)胞，也被稱作基質(zhì)細(xì)胞，占據(jù)或聚集在與惡性細(xì)胞相 同的細(xì)胞空間中，或與惡性細(xì)胞相鄰或接近的細(xì)胞空間中，其調(diào)控腫瘤細(xì) 胞的生長或存活。腫瘤微環(huán)境的非惡性細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肌成纖維細(xì) 胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、上皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、脈管細(xì)胞(包括血液和淋巴脈 管的內(nèi)皮細(xì)胞和周細(xì)胞)> 駐留型和/或募集型炎性和免疫(例如，巨噬細(xì) 胞、樹突細(xì)胞、骨髓抑制性細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等X能夠產(chǎn)生或分 化成上述非惡性細(xì)胞中的任一種的駐留型和/或募集型干細(xì)胞以及本領(lǐng)域 已知的上述細(xì)胞的任何功能上不同的亞型。這些細(xì)胞活躍地參與腫瘤細(xì)胞 的生長和轉(zhuǎn)移。
在實(shí)行本文所公開的方法時(shí)，使用下述標(biāo)準(zhǔn)中的一個(gè)或多個(gè)來鑒定腫 瘤微環(huán)境(a)包括與惡性細(xì)胞共享相同生理環(huán)境或直接相鄰的非惡性細(xì) 胞的區(qū)域；(b )延伸的腫瘤區(qū)域；(c )環(huán)繞或臨近于腫瘤的炎癥區(qū)域；(d ) 調(diào)節(jié)T細(xì)胞增殖數(shù)目或速率被升高的區(qū)域；和(e )巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞 或源自骨髓的抑制性細(xì)胞被升高的區(qū)域。在非實(shí)體瘤類型的情況中，腫瘤 微環(huán)境還可由惡性細(xì)胞之間以及惡性細(xì)胞和任何相鄰或附近的非惡性細(xì) 胞之間的局部細(xì)胞-細(xì)胞相互作用而確定。這種相互作用可包括例如細(xì)胞粘 附事件和/或腫瘤微環(huán)境中經(jīng)由一種細(xì)胞(惡性或非惡性)所產(chǎn)生的可溶介
體對(duì)另一種細(xì)胞(惡性或非惡性)的旁分泌作用。當(dāng)評(píng)估上述標(biāo)準(zhǔn)中任一個(gè)的水平例如炎癥水平或調(diào)節(jié)T細(xì)胞的數(shù)目 時(shí)，所述水平是相對(duì)于合理的對(duì)照水平被評(píng)估的。例如，相關(guān)的對(duì)照可包 括從患腫瘤的受治療者身上和從所述受治療者對(duì)側(cè)相同組織和類似區(qū)域 取出的樣品。作為另一個(gè)對(duì)照，可以從處于相似狀態(tài)(年齡、性別、整體 的健康等)的無腫瘤的受治療者的相同組織和類似區(qū)域取出樣品。就治療
依賴性應(yīng)答的評(píng)估來說，還可通過治療前對(duì)照樣品的平行分析來確定治療 后的作用。
當(dāng)對(duì)定義腫瘤微環(huán)境的上述標(biāo)準(zhǔn)中的任一種的水平進(jìn)行定量的時(shí)候， 在相對(duì)于對(duì)照水平評(píng)估時(shí)的差別被鑒定為這樣的差別至少約兩倍于對(duì)照 水平或更少，或至少約五倍于對(duì)照水平或更少，或至少約十倍于對(duì)照水平 或更少，至少約二十倍于對(duì)照水平或更少，至少約五十倍于對(duì)照水平或更 少，或至少約一百倍于對(duì)照水平或更少。上述標(biāo)準(zhǔn)中的差別當(dāng)相對(duì)于對(duì)照 水平被評(píng)估時(shí)，也可被視為與對(duì)照水平相比至少20%的差別，例如至少 30% ,或至少40% ,或至少50% ,或至少60% ,或至少70% ,或至少80% , 或至少卯％ ，或至少100% ,或更多。例如，升高的調(diào)節(jié)T細(xì)胞的數(shù)目可 相對(duì)于無腫瘤患者的調(diào)節(jié)T細(xì)胞的已知生理水平被評(píng)估?；谏鲜觯绢I(lǐng) 域普通技術(shù)人員(例如腫瘤學(xué)臨床醫(yī)師)將能夠容易地使用上述標(biāo)準(zhǔn)和適 當(dāng)對(duì)照的選擇來鑒定構(gòu)成患者腫瘤微環(huán)境的區(qū)域。受治療者還可有一個(gè)或 多個(gè)腫瘤微環(huán)境，其中每個(gè)與可區(qū)分的腫瘤有關(guān)。腫瘤微環(huán)境的特性可相 對(duì)于腫瘤的組織部位、腫瘤級(jí)別、腫瘤階段、腫瘤形態(tài)或分子表型等而改 變。腫瘤微環(huán)境也可隨腫瘤演進(jìn)而改變。
調(diào)節(jié)T細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境的非惡性細(xì)胞之一 ，它在許多腫瘤中以較高 的頻率被觀察到，其中所述腫瘤包括霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤
(Shi等，J/Z/^"g.,2004， 23(5):597-601(只有摘要)X惡性黑素瘤(Viguier 等，《/. /mw柳o/., 2004， 173(2): 1444-53; Javia等，/mm訓(xùn)oA", 2003， 26(1):85-93 )和卵巢(Woo等，07臟r細(xì)"2001, 61(12):4766-72 \胃腸道
(Ichihara等，C"" C朋cer 7 ej" 2003, 9(12):4404誦4408; Sasada等，Omcer， 2003, 98(5): 1089-1099 )、 乳腺(Liyanage等， / /mww"o/" 2002， 169(5):2756-2761 X肺(Woo等，Cancer Res" 2001， 61(12):4766-72 )和胰腺(Uyanage等，J/m畫o/,, 2002,169(5):2756-2761 )的癌癥。調(diào)節(jié)T細(xì)胞 響應(yīng)由腫瘤細(xì)胞分泌的趨化因子而募集到腫瘤部位。參見例如，Curiel等, A^,. Mec/.， 2004, 10:942-949。調(diào)節(jié)T細(xì)胞數(shù)目的增加還可與預(yù)后不良相關(guān) (Curiel等，7V饑Med， 2004, 10:942-949; Sasada等，O^cer, 2003, 98:1089-1099 )o相反地，在化學(xué)療法之后觀察到調(diào)節(jié)T細(xì)胞減少(Beyer 等，2005, 106:2018-2025 )b
據(jù)顯示，與腫瘤相聯(lián)系的巨噬細(xì)胞的存在還與腫瘤預(yù)后不良和存活相 關(guān)，其中所述腫瘤例如乳腺、卵巢、前列腺、子宮頸和肺的癌癥(Pollard,
i ev: Cawce。 2004， 4:71-77 )b相似的相關(guān)性在患有濾泡性淋巴瘤的患者 中被觀察至IJ ( Farinha等，5/oo《2005, 15:2169-2174 )b相似地,源自骨髓的 抑制性細(xì)胞據(jù)說在調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答中起作用。
被公開的方法作為治療干預(yù)的一個(gè)機(jī)會(huì)靶向腫瘤微環(huán)境的非惡性免 疫細(xì)胞。在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了抑制調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助T細(xì)胞 功能的方法。這種抑制構(gòu)成了 T細(xì)胞數(shù)目的減少和/或T細(xì)胞抑制抗腫瘤 應(yīng)答的功能化能力的破環(huán)。例如，調(diào)節(jié)T細(xì)胞的相關(guān)功能包括產(chǎn)生促炎性 細(xì)胞因子例如白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素 -12、轉(zhuǎn)化生長因子p和干擾素-y。參見例如，Mocellin等， / /mmw"oAw， 2001，24(5):3920407。產(chǎn)生的炎性腫瘤微環(huán)境吸引巨噬細(xì)胞，而巨噬細(xì)胞反 過來提供帶有營養(yǎng)或存活信號(hào)的惡性細(xì)胞，促進(jìn)血管發(fā)生，改變抗原呈遞 細(xì)胞和樹突細(xì)胞的表型和功能，擴(kuò)增調(diào)節(jié)T細(xì)胞，這些共同地導(dǎo)致免疫抑 制的細(xì)胞環(huán)境。Th2輔助細(xì)胞的相關(guān)功能相似地包括促進(jìn)相聯(lián)系的惡性細(xì) 胞存活的信號(hào)的產(chǎn)生，其中所述信號(hào)例如CD40/CD40L信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、白細(xì)胞 介素-1或白細(xì)胞介素-6。 Th2輔助細(xì)胞還通過分泌趨化因子而促成炎性腫 瘤微環(huán)境，其中所述趨化因子募集抗原呈遞細(xì)胞(包括巨噬細(xì)胞)b
調(diào)節(jié)T細(xì)胞可被鑒定為富集于CD4+CD25hi群體中，而且可被進(jìn)一步 表征為表達(dá)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4( CTLA4 X糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的 腫瘤壞死因子受體家族相關(guān)基因(GITR )> CC趨化因子受體4 ( CCR4 X 叉頭盒p3 ( FOXP3 X CC趨化因子受體6 ( CCR6 )和/或CD30。此外， 調(diào)節(jié)T細(xì)胞可以是CD62Lhi、 CD45RB1。、 CD45ROhi和/或CD45RA。參見McHugh等，J.爿〃e《;；C"". /附mw"o/.， 2002, 110:693-701; Hori等，Sc/e"ce, 2003, 299:1057-1061; Iellem等，《/. Exp. Mec ., 2001, 194:847-853;第 2006/0063256號(hào)美國專利申請(qǐng)公布。
輔助T細(xì)胞包括CD4+CD25—Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞。Thl細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞 免疫力，即誘導(dǎo)抗原特異性的CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞。Th2輔助T細(xì)胞可 抑制Thl細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫力，例如，通過分泌抑制Thl細(xì)胞產(chǎn)生干擾 素-Y的細(xì)胞因子(Fiorentino等，丄五取Med.， 1989， 170: 2081-2095 )b
CD80-CD28信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助細(xì)胞分化和維持的主 要共調(diào)節(jié)途徑，而且在不存在CD80共刺激時(shí)T細(xì)胞顯著地減少。參見 Zheng等，J: /附mw"o/., 2004, 172:2778-2784; Liang等，Med， 2005, 201: 127-137;和Tang等，《//immmo/., 2003， 171:3348-3352。如本文所述，有 用的靶向CD80的治療劑包括這樣的分子，其阻斷CD80/CD28信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)從 而減弱調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助T細(xì)胞的免疫抑制作用，然后允許腫瘤反應(yīng) 性T細(xì)胞介導(dǎo)抗腫瘤活性。對(duì)CD80/CD28信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的選擇性阻斷，即不 存在CD80/CTLA4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的阻斷，可提供改善的治療效力，假定未破環(huán) CD80/CTLA4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)免疫應(yīng)答的負(fù)調(diào)控。
調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助T細(xì)胞的激活產(chǎn)生吸引巨噬細(xì)胞的炎性腫瘤微 環(huán)境。所述巨噬細(xì)胞通過分泌細(xì)胞因子例如IL-1和IL-6促進(jìn)惡性細(xì)胞的 存活。巨噬細(xì)胞還分泌趨化因子以將另外的免疫效應(yīng)細(xì)胞募集到腫瘤微環(huán) 境，所述趨化因子例如吸引嗜中性粒細(xì)胞的IL-8和吸引白細(xì)胞的MIP-1(X。 巨噬細(xì)胞還分泌血管生成因子，其促成腫瘤的血管形成。
耙向CD80的治療劑還可直接結(jié)合腫瘤微環(huán)境的抗原呈遞細(xì)胞上表達(dá) 的CD80。因此，它們可以通過誘導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC 、補(bǔ)體 依賴的細(xì)胞毒性和/或凋亡而被耗竭。評(píng)估這些活性的相關(guān)方法是本領(lǐng)域眾 所周知的。
評(píng)估腫瘤微環(huán)境的非惡性免疫細(xì)胞的變化的代表性方法在本文下面 關(guān)于治療有效劑量的確定中和實(shí)施例中被描述。
II.靶向CD80的治療劑本發(fā)明靶向CD80的治療劑包括阻斷腫瘤微環(huán)境中調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2 輔助細(xì)胞的激活和/或使腫瘤微環(huán)境中表達(dá)CD80的細(xì)胞耗竭的分子。耗竭 可通過任何誘導(dǎo)細(xì)胞破環(huán)的機(jī)制發(fā)生，其包括凋亡的誘導(dǎo)、細(xì)胞生長的抑 制或減少和/或抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC >因此，靶向CD80 的治療劑包括CD80拮抗劑以及與細(xì)胞毒性劑軛合的CD80結(jié)合分子。本 發(fā)明中有用的靶向CD80的治療劑包括具有上述特性的任何合成的、重組 的或天然的產(chǎn)物或組合物。代表性的劑包括但不限于肽、蛋白、核酸(例 如適體)> 小分子(例如化合物》抗體和核酸-蛋白融合體。
對(duì)于結(jié)合CD80的軛合物，細(xì)胞毒性劑可以與結(jié)合CD80的分子直接 或間接相連或結(jié)合，例如，使用連接體分子或生物的或合成的基質(zhì)。細(xì)胞 毒性劑可與結(jié)合CD80的分子共價(jià)結(jié)合，其使用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)例 如使用異雙功能交聯(lián)試劑。所述連接體分子可以是可裂解的連接體，其促 進(jìn)細(xì)胞中細(xì)胞毒性藥物的釋放。例如，可以使用酸性易變連接體、肽酶敏 感的連接體、二甲基連接體或含二硫化物的連接體。
有用的細(xì)胞毒性劑在本領(lǐng)域是已知的，其包括本文下面所述的任何 劑，當(dāng)與靶向CD80的治療劑如放射性同位素、化療劑和毒素(例如細(xì)菌、 真菌、植物或動(dòng)物來源的小分子毒素或酶活性毒素或其片段)聯(lián)合時(shí)更有 用。另外的代表性細(xì)胞毒性劑包括細(xì)胞抑制劑、烷化劑、抗代謝劑、抗增 殖劑、微管蛋白結(jié)合劑、激素和激素拮抗劑以及諸如此類。另外的代表性 細(xì)胞毒素包括抗腫瘤抗生素的烯二炔家族的成員或衍生物，其包括刺孢霉 素、埃斯培拉霉素或達(dá)內(nèi)霉素。
II.A.抗CD80抗體
本發(fā)明的靶向CD80的治療劑包括抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段。 天然存在的抗體包括兩條相同的多肽輕鏈(每條具有大約23,000道爾頓的 分子量)以及兩條相同的重鏈(每條具有53，000-70，000道爾頓的分子量)b 所述四條鏈聯(lián)合而形成三個(gè)球狀結(jié)構(gòu)域，其通過柔性鉸鏈區(qū)而連接。輕 (VL )和重(VH )鏈二者的可變結(jié)構(gòu)域決定抗原的識(shí)別和特異性。輕銜CL ) 和重鏈(CH1、 Ch2或CH3 )的恒定結(jié)構(gòu)域使之具有例如Fc受體結(jié)合、補(bǔ) 體結(jié)合以及諸如此類的生物特性。本發(fā)明中有用的抗CD80抗體可包括多克隆抗體、單克隆抗體(mAb X人源化或嵌合的抗體、含有人恒定區(qū)和 靈長類(食蟹獼猴(cynomolgus macaque ))可變區(qū)的PRIMATIZED⑧抗體、 人單克隆抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab，)2片段、由Fab表達(dá)庫產(chǎn)生的 片段、抗獨(dú)特型(抗Id )抗體和上述任一個(gè)的表位結(jié)合片段。這種抗體可 具有天然存在的抗體、其多價(jià)體形式或其片段的結(jié)構(gòu)。
作為特定抗原的抗體的同源群體的單克隆抗體可以由任何技術(shù)獲得， 所述技術(shù)通過培養(yǎng)的連續(xù)細(xì)胞系提供抗體分子的產(chǎn)生。這些包括但不限于 Kohler和Milstein, 7Va^w, 1975， 256:495-497和第4,376,110號(hào)美國專利中 的雜交瘤技術(shù)、人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)(Kosbor等，/mmw"o/ogy 7Way, 1983, 4:72; Cote等，M //.」c"J. 1983， 80:2026-2030 )和EBV雜交
瘤技術(shù)(Cole等，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy (《單克隆 抗體和癌癥療法》)中，1995, Alan R. Liss, Inc., New York, 77-96頁)b這種 抗體可屬于任何免疫球蛋白類及其任何亞類，其中所述免疫球蛋白類包括 IgG、 IgM、 IgE、 IgA、 IgD。產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤可以在體外或體內(nèi) 被培養(yǎng)。
嵌合的抗體是其不同部分來源于不同動(dòng)物物種的分子，例如具有來源 于鼠mAb的可變區(qū)和人免疫球蛋白恒定區(qū)的那些。嵌合的抗體可通過將 來自具有適當(dāng)抗原特異性的小鼠抗體分子的基因和來自具有適當(dāng)生物活 性的人抗體分子的基因剪接在一起而產(chǎn)生(Morrison等，尸rac. iVfl" Xcad
"&4, 1984, 81:6851-6855; Takeda等，Mm/re， 1985， 314:452-454》
人源化抗體是一種嵌合的抗體，其中負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的可變區(qū)殘基(即 互補(bǔ)決定區(qū)的殘基和參與抗原結(jié)合的任何其他殘基)來源于非人物種，而 余下的可變區(qū)殘基(即框架區(qū)的殘基)和恒定區(qū)至少部分地來源于人抗體 序列。人源化抗體可變區(qū)和恒定區(qū)的殘基還可來源于非人來源。人源化抗 體的可變區(qū)還被描述為人源化的(即人源化的輕或重鏈可變區(qū))b非人物 種通常是用于以抗原免疫接種的物種，例如小鼠、大鼠、兔、非人靈長類 或其他非人哺乳動(dòng)物物種。可使用多種方法中的任一種來制備人源化抗
體，所述方法包括如下所述的鑲飾(veneer 互補(bǔ)決定區(qū)(CDR )的移植、 縮短的CDR的移植、特異性決定區(qū)(SDR )的移植和Frankenstein組合。這些普通步驟可以與標(biāo)準(zhǔn)的致突變作用和合成技術(shù)結(jié)合以產(chǎn)生具有任何 期望序列的CD80抗體。
本發(fā)明所述抗體還可以是人單克隆抗體，例如由永生化人細(xì)胞、 SCID-hu小鼠或其他能夠產(chǎn)生人抗體的非人動(dòng)物所產(chǎn)生的那些。人抗體還 可從抗體噬菌體庫中被分離，例如如Marks等，iWb/. 5/o/.， 1991， 222:581-597所述。鏈改組和重組技術(shù)可被用來生產(chǎn)具有增加的抗體多樣性 的噬菌體庫，例如包括具有增加的結(jié)合親和力的抗體的庫。參見Marks等, 5/o/ec/ "o/ogy, 1992, 10:779-783和Waterhouse等，M/c.爿"A 1993, 21:2265-2266。
本發(fā)明所述抗體還可包括單鏈抗體，其通常通過經(jīng)由氨基酸橋連接Fv 區(qū)的重鏈和輕鏈片段產(chǎn)生單鏈多肽而形成。參見例如第4,946,778號(hào)美國 專禾!J; Bird， Sc/e"ce, 1988, 242:423426; Huston等，尸rac. TVa". Zcad 1988, 85:5879-83和Ward等，TVa,ww, 1989, 334:544-546。
本發(fā)明中有用的抗體還包括非巖藻糖化的抗體。這種抗體包括Fc區(qū) 和結(jié)合至所述Fc區(qū)的復(fù)合的N-糖苷連接的糖鏈，其中在所述結(jié)合至所述 Fc區(qū)的復(fù)合的N-糖苷連接的糖鏈的整體中，巖藻糖未結(jié)合至所述糖鏈的 還原端的N-乙酰葡糖胺的糖鏈的比例至少是20%。與對(duì)照巖藻糖化的抗體 相比，所述非巖藻糖化的抗體具有增強(qiáng)的Fc受體結(jié)合以及增強(qiáng)的效應(yīng)功 能。參見2007年3月28日提交的第60/卯8，643號(hào)美國臨時(shí)申請(qǐng)，其整體 通過引用并入本文。產(chǎn)生非巖藻糖化的抗體的代表性方法在實(shí)施例1中被 闡述。還參見第2004/0093621號(hào)美國專利公布、第6,946,292號(hào)美國專利、 第WO 2006/089232號(hào)PCT國際公布和第1176195號(hào)歐洲公布申請(qǐng)，其中 每個(gè)也整體通過引用并入本文。
本文所述識(shí)別特異性抗原或表面受體的抗體片段可通過已知技術(shù)產(chǎn) 生。例如，這種片段包括F(ab，)2片段或Fc區(qū)(其可通過抗體分子的胃蛋 白酶消化而產(chǎn)生辨Fab片l效其可通過還原F(ab')2片段的二硫鍵而產(chǎn)生)o 可選擇地,可構(gòu)建Fab表達(dá)庫(Huse等，Sc/證,1989， 246:1275-1281 )以 允許具有期望特異性的單克隆Fab片段的快速和簡單鑒定。
本文所述抗體或抗體片段對(duì)抗原的特異性結(jié)合指的是在包括多種不同抗原的異質(zhì)樣品中抗體對(duì)抗原的優(yōu)先結(jié)合。基本上缺乏結(jié)合描述的是抗 體對(duì)對(duì)照蛋白或樣品的結(jié)合水平，即表征為非特異性或背景結(jié)合的結(jié)合水 平。抗體與抗原的結(jié)合是特異性的，如果結(jié)合親和力至少是約1(^M或更 高，例如至少約10—8m或更高，包括至少約10力m或更高，至少約io"m 或更高，或至少約10^M或更高。
本發(fā)明中有用的代表性抗CD80抗體是加利昔單抗，它可選地被稱作 PRIMATIZED 16C10、 IDEC-114或PRIMATIZED⑧抗體，其具有由美國 典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC )登錄號(hào)為HB-12119的雜交瘤所產(chǎn)生的抗體 產(chǎn)生的可變區(qū)。依據(jù)國際承認(rèn)用于專利程序的微生物保藏布達(dá)佩斯條約 ("布達(dá)佩斯條約")的條款，于1996年5月29日將HB-12119雜交瘤保藏 在ATCC ,其目前位于弗吉尼亞州馬納薩斯大學(xué)大道10801號(hào)(郵編 20110-2209 )( 10801 University Boulevard, Manassas， VA 20110-2209 >>加利 昔單抗是含有人恒定區(qū)和靈長類(食蟹獼猴)可變區(qū)的PRIMATIZED⑧抗 CD80免疫球蛋白(Ig)Gl X單克隆抗體。加利昔單抗和本發(fā)明中有用的 其他抗CD80抗體的氨基酸和核酸序列被公開在第6,113,898號(hào)美國專利 中，其整體通過引用被并入。
另外的代表性抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段包括在結(jié)合抑制測(cè)定 中與16C10或加利昔單抗競爭結(jié)合CD80的抗體和其CD80結(jié)合片段。這 種結(jié)合抑制測(cè)定是技術(shù)人員所熟知的。本發(fā)明還包括可以結(jié)合至與16C10 或加利昔單抗相同的CD80表位的抗CD80抗體和CD80結(jié)合片段。與加 利昔單抗和其他抗CD80抗體競爭結(jié)合CD80的抗CD80抗體，例如可以 結(jié)合至與加利昔單抗相同的表位的抗體，在第7,153,508號(hào)美國專利中被 公開，其整體通過引用被并入。確定抗體結(jié)合特異性的方法可由免疫沉淀 或體外測(cè)定例如放射免疫測(cè)定(RIA )或酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA )而 確定，這些都是技術(shù)人員所熟知的。
本發(fā)明還包括那樣的抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段一其包括加 利昔單抗的可變區(qū)或來源于加利昔單抗可變區(qū)的可變區(qū)，例如通過引入一 個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、置換或其他突變。本發(fā)明中有用的另外的抗CD80 抗體和CD80結(jié)合片段包括具有含加利昔單抗的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域即加利昔單抗的互補(bǔ)決定區(qū)的殘基的抗體。
本發(fā)明中有用的抗體可以使用標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)重組地制備。參見例如， Harlow & Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (《抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》)， 1988， Cold Spring Harbor Laboratory Press (冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社)，Cold Spring Harbor (冷全港)，New York (紐約)和第4,196,265、 4,946,778、 5,091,513、 5,132,405、 5,260,203、 5,658,570、 5,677,427、 5,892,019、 5,985,279、 6,054,561號(hào)美國專利。生產(chǎn)包括16C10可變區(qū)的抗體的代表性方法在第 6，113，898號(hào)美國專利中被描述。還參見第20030103971和200301802卯號(hào) 美國專利申請(qǐng)公布。
可以按照例如第WO 02/096948號(hào)PCT國際公布中所述制備包括兩個(gè) 完整的四聚體抗體的四價(jià)抗體(H4L4 ),其包括同源二聚體和異源二聚體。 抗體二聚體還可使用異雙功能的交聯(lián)劑通過在抗體恒定區(qū)引入促進(jìn)鏈間 二硫鍵形成的半胱氨酸殘基(Wolff等，Cancer Res.， 1993, 53:2560_2565 )或 通過重組生產(chǎn)以包含雙恒定區(qū)(Stevenson等，Anticancer Drug Des., 1989， 3:219-230 )而制備。
II.B.小分子
本發(fā)明還提供可用作靶向CD80的治療劑的小分子。這些分子包括如 下所述的式(I )和第11/539,153號(hào)美國專利申請(qǐng)中的雜環(huán)化合物。這種化 合物抑制CD80和CD28之間的相互作用，其是調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助細(xì) 胞的激活所必需的?？稍谒l(fā)明的方法中使用的雜環(huán)化合物的例子包括式 (I )的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。這、些式(I )的雜環(huán)化合物基本上 按照第7，081，456號(hào)美國專利中所述而制4 ,其整體通過引用并入本文。 式(I)被描繪在下面其中
R,和R3獨(dú)立地代表H、 F、 Cl、 Br、 -N02、 -CN、可選地被F或Cl 取代的Q C6烷基或可選地被F取代的d C6烷氧基；
R2代表H或可選地被取代的Q Ce烷基、C3 C7環(huán)烷基或可選地被取代 的苯基；
Y代表-O-、 -S-、 N-氧化物或-N(R5)-，其中R5代表H或Q Ce烷基； X代表鍵或二價(jià)的d Q亞烷基基團(tuán)；
R4代表-Q^O)NR6R7 ,其中R6代表式-(Alk)b-Q的基團(tuán)，其中b是1而
Alk是可選地被取代的二價(jià)直鏈或支鏈d Q2亞烷基、C2 d2亞烯基或C2
C,2亞炔基基團(tuán)，其可被一個(gè)或多個(gè)不相鄰的-O-、 -S-或-N(Rs)-基團(tuán)間斷， 其中R8代表H或C, C4烷基、C3 C4烯基、C3 C4炔基或C3 C6環(huán)烷基，以 及
Q代表H、 -CF3、 -OH、 -SH ; -NR8R8 ,其中每個(gè)Rg可以是相同的或 不同的；酯基或可選地被取代的苯基、C3 C7環(huán)烷基、C5 C7環(huán)烯基或具有 5至8個(gè)環(huán)原子的雜環(huán)；以及
R7代表H或d C6烷基，或當(dāng)與它們所連接的原子合在一起時(shí)R6和 R7形成可選地被取代的具有5至8個(gè)環(huán)原子的雜環(huán)。
式(I )的代表性分子包括稠合的吡唑啉酮，其具有下面的結(jié)構(gòu)A和B :iii.治療應(yīng)用
如本文所述，靶向CD80的治療劑可被用來調(diào)控與病理狀況相聯(lián)系的 T細(xì)胞，其中所述病理狀況被調(diào)節(jié)T細(xì)胞和/或Th2輔助細(xì)胞的功能所惡化。 耙向CD80的治療劑還可用來使腫瘤微環(huán)境中的免疫調(diào)節(jié)和炎性細(xì)胞(例 如，抗原呈遞細(xì)胞和源自骨髓的抑制性細(xì)胞)耗竭，其中所述細(xì)胞支持腫 瘤生長、遷移、血管發(fā)生等。因此，本文所述靶向CD80的治療劑起作用 以增強(qiáng)適應(yīng)性免疫應(yīng)答，包括調(diào)節(jié)T細(xì)胞的抑制功能的抑制。靶向CD80 的治療劑可單獨(dú)地或與另外的治療劑聯(lián)合使用，如下面的進(jìn)一步描述。受 治療者可接受靶向CD80的治療劑作為一線療法，或用于復(fù)發(fā)的或頑固的 狀況的治療。
iii.a.適應(yīng)癥
在本發(fā)明的一個(gè)方面，靶向CD80的治療劑可通過靶向腫瘤微環(huán)境的 非惡性細(xì)胞而用來治療血液的或非血液的惡性腫瘤。靶向CD80的治療劑 同樣地用于抑制非惡性增殖病癥的細(xì)胞的生長，所述非惡性增殖病癥例如 過度增生、組織變形或最特別地發(fā)育異常(關(guān)于這種異常生長狀況的綜述， 參見DeVita, Jr.等，Cancer: Principles and Practice (癌癥原則和實(shí)踐),第 6版，2001年，Lippincott Williams & Wilkins )o
例如，本文所述靶向CD80的治療劑可被用來治療B細(xì)胞惡性腫瘤， 例如白血病和淋巴瘤，包括緩慢進(jìn)展的、侵入性、低度惡性的、中度惡性 的或高度惡性的白血病或淋巴瘤。代表性的B細(xì)胞惡性腫瘤包括霍奇金氏淋巴瘤、B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病B-CLL X淋巴漿細(xì)胞樣淋巴蠓LPL X 外套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤 (DLCL 、 Burkitt氏淋巴瘤(BL 、 AIDS相關(guān)的淋巴瘤、單核B細(xì)胞淋 巴瘤、血管免疫母細(xì)胞性淋巴結(jié)病、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤；濾泡性、彌漫 性大細(xì)胞；彌漫性小裂細(xì)胞；大細(xì)胞免疫母細(xì)胞淋巴母細(xì)胞瘤；小的、無 裂的Burkitt氏和非Burkitt氏濾泡性、有優(yōu)勢(shì)的大細(xì)胞；濾泡性、有優(yōu) 勢(shì)的小裂細(xì)胞；和濾泡性、混合的小裂和大細(xì)胞淋巴瘤。具有上述所鑒定 的B細(xì)胞惡性腫瘤中任一種的受治療者包括復(fù)發(fā)的受治療者或?qū)χ暗寞?法抵制的受治療者。
可用公開的靶向CD80的治療劑治療的另外的癌癥包括在乳腺、結(jié)腸、 直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小腸、包 括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、 男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內(nèi)分泌腺、甲狀腺、腎上腺、垂體腺、 皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經(jīng)、眼、腦膜中的原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性腫瘤。 其他相關(guān)的實(shí)體瘤包括有B細(xì)胞參與的那些。
III.B.劑量和施用
從基于細(xì)胞的測(cè)定和動(dòng)物研究(通常是嚙齒類、兔、狗、豬和/或靈長 類)中獲得的數(shù)據(jù)可被用于配制一系列的劑量以用于人。所述動(dòng)物模型還 可用來確定適當(dāng)?shù)臐舛确秶褪┯猛緩?。這種信息然后可被用來確定在人 身上有用的施用劑量和途徑。通常地，施用最小劑量，并且在不出現(xiàn)劑量 限制性細(xì)胞毒性的情況下升高所述劑量。有效量或劑量的確定和調(diào)節(jié)，以 及對(duì)何時(shí)和如何進(jìn)行這種調(diào)節(jié)的評(píng)估，對(duì)于醫(yī)藥領(lǐng)域普通技術(shù)人員是已知 的。
這種化合物的劑量優(yōu)選地存在于循環(huán)濃度范圍內(nèi)，其中所述循環(huán)濃度 包括具有很少或不具毒性的ED5。。劑量可在此范圍內(nèi)變化，其取決于所使 用的劑型和所用的施用途徑。對(duì)于本發(fā)明的方法中所用的任何當(dāng)前的靶向 CD80的治療組合物，治療有效量可最初根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定來估計(jì)?？稍?動(dòng)物模型上配制劑量以獲得包括如細(xì)胞培養(yǎng)中所確定的IC5。(即，達(dá)到癥 狀最大抑制的一半時(shí)測(cè)試化合物的濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。這種信息可被用來更準(zhǔn)確地確定人中的有用劑量?？梢酝ㄟ^例如高效液相色譜法測(cè) 量血漿中的水平。
抗CD80抗體例如加利昔單抗的有效劑量可包括范圍從100 mg/it^至 600 mg/m2的周劑量，例如每周4次輸注劑量為125 mg/m2、 250 mg/m2、 375 mg/m2或500 mg/m2的加利昔單抗?？笴D80抗體還可以更低或更高劑 量被施用，例如，是上面鑒定的加利昔單抗劑量的約卯％ ，或約80% ,或 約70% ,或約60% ，或約50% ，或約40% ，或約30% ,或約20% ,或約 10% ，或更少的劑量。例如，有效劑量可包括10 mg/m2、 12.5 mg/m2、 25 mg/m2、 37.5 mg/m2或50 mg/m2的周劑量。特別地，具有提高的ADCC活 性或其他提高的抗腫瘤活性的非巖藻糖化的抗CD80抗體當(dāng)與相同的抗體 相比時(shí)可以在降低的劑量上有效，其中所述相同的抗體通過不特別去除巖 藻糖殘基的方式制備?？笴D80抗體的劑量還可包括是上面鑒定的加利昔 單抗劑量的約110% ,或約120% ，或約130% ,或約140% ,或約150% ， 或約160% ,或約170% ,或約180% ，或約190% ,或更多的劑量。
根據(jù)本發(fā)明所用的藥物組合物可使用一種或多種生理學(xué)上可接受的 載體或賦形劑以常規(guī)的方式配制。因此，可配制所述組合物和它們生理學(xué) 上可接受的鹽和溶劑化物以通過吸入或吹入(通過嘴或募)或口服、面頰、 腸胃外、局部、皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、胸膜內(nèi)、眼內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、直腸施 用，或在植入物例如基質(zhì)(例如膠原纖維或蛋白聚合物)內(nèi)/上，通過細(xì)胞 轟擊，在滲透泵中，在包括適當(dāng)?shù)剞D(zhuǎn)化的細(xì)胞的移植物等等中施用。對(duì)于 實(shí)體瘤的治療，本發(fā)明的靶向CD80的治療劑可被直接施用在腫瘤部位。 對(duì)于CNS惡性腫瘤的治療，靶向CD80的治療劑可被直接施用在CNS ， 例如，通過鞘內(nèi)的或室內(nèi)的施用。此外，用于促進(jìn)靶向CD80的治療劑跨 越血腦屏障轉(zhuǎn)移的多種技術(shù)是可得的，其包括使用外科手術(shù)或注射、短暫 地打開CNS脈管系統(tǒng)內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘連觸點(diǎn)(adhesion contact)的藥物 以及促進(jìn)易位通過這種細(xì)胞的化合物破環(huán)血腦屏障。
對(duì)于口服施用，所述藥物組合物可采取例如通過常規(guī)方法以藥學(xué)上可 接受的賦形劑制備的片劑或膠囊劑的形式，所述賦形劑例如粘合劑(例如 預(yù)膠化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)、填充劑(例如，乳糖、微晶纖維素或磷酸氫鈣X潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、滑石或 二氧化硅》崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或淀粉乙醇酸鈉)或濕潤劑(例如 十二烷基硫酸鈉 可以使用本領(lǐng)域眾所周知的方法對(duì)所述片劑進(jìn)行包衣。 用來口服施用的液體制劑可采用例如溶液、糖漿或懸浮液的形式，或者它 們可作為干燥的產(chǎn)品被呈現(xiàn)，以便在使用之前用水或其他適合的媒介物構(gòu) 建。這種液體制劑可通過常規(guī)方法使用藥學(xué)上可接受的添加劑制備，所述 添加劑例如懸浮劑(例如，山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂)、 乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯膠X非水媒介物(例如，杏仁油、油酯、 乙醇或分餾的植物油)和防腐劑(例如，對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲 酸丙酯或山梨酸^所述制劑根據(jù)情況還可包含緩沖鹽、調(diào)味劑、著色劑 和甜味劑。
藥物組合物還可包含多種緩沖劑(例如，Tris、醋酸鹽、磷酸鹽X增 溶劑(例如，TWEEN 、聚山梨醇酯X載體例如人血清白蛋白、防腐劑 (硫柳汞(thimerosol》苯甲醇)和抗氧化劑例如抗環(huán)血酸以穩(wěn)定藥物活 性。穩(wěn)定劑可以是去污劑，例如TWEEN -20、 TWEEN -80、 NP-40或 TRITON-X⑧-100。EBP還可被摻入聚合物的微粒制劑以在延長的時(shí)間段里 對(duì)患者控制遞送。藥物組合物中組分的更廣泛的研究在Remington's Pharmaceutical Sci畫《《雷明頓制藥科學(xué)》i 1990,第18版,A. R. Gennaro， 編輯，Mack Publishing, Easton, Pennsylvania (賓夕法尼亞州)中被找到。
除了前面描述的制劑之外，所述化合物還可作為貯庫型(d印ot )制劑 被配制。這種長效制劑可以通過植入(例如，皮下地或肌內(nèi)地)或肌內(nèi)注 射被施用。因此，例如，所述化合物可以用適合的聚合的或疏水的材料(例 如，作為可接受的油中的乳劑)或離子交換樹脂，或作為略溶的衍生物例 如作為略溶的鹽而被配制。
如果希望，所述組合物可以被呈現(xiàn)在包裝或分散設(shè)備中，所述設(shè)備可 包含一個(gè)或多個(gè)含有活性成分的單位劑型。所述包裝可包括例如金屬或塑 料箔，例如泡罩包裝。所述包裝或分散設(shè)備可以附帶施用說明書。
對(duì)于包括靶向CD80的治療劑與一種或多種另外的治療劑一起施用的 組合療法，可以在任何適于進(jìn)行所期望療法的時(shí)間框中進(jìn)行施用。例如，單獨(dú)的靶向CD80的治療劑和任何另外的劑可以被大致同時(shí)(即作為一個(gè) 單獨(dú)的制劑或在幾分鐘或幾小時(shí)內(nèi))或以任何順序連續(xù)地施用。對(duì)于連續(xù) 的施用，單個(gè)劑以約10、 8、 6、 4或2個(gè)月的干預(yù)時(shí)間段，或以4、 3、 2 或1個(gè)星期的干預(yù)時(shí)間段，或以約5、 4、 3、 2或1天的干預(yù)時(shí)間段被施
用O
當(dāng)與一種或多種另外的治療劑聯(lián)合使用時(shí)，所述靶向CD80的治療劑 和一種或多種另外的劑可同時(shí)地或以任何順序連續(xù)地被施用或與細(xì)胞接 觸。被公開的組合療法可引起協(xié)同的治療效應(yīng)，即比它們單個(gè)效應(yīng)的總和 還大的效應(yīng)。可測(cè)量的治療效應(yīng)在本文上面被描述。例如，協(xié)同的治療效 應(yīng)可以是由單個(gè)劑引起的治療效應(yīng)或由給定組合中單個(gè)劑引起的治療效 應(yīng)的總和的至少約兩倍，或至少約五倍，或至少約十倍，或至少約二十倍， 或至少約五十倍，或至少約一百倍。協(xié)同的治療效應(yīng)據(jù)觀測(cè)還可以是與由 單個(gè)劑引起的治療效應(yīng)或由給定組合中單個(gè)劑引起的治療效應(yīng)的總和相 比增加至少10%的治療效應(yīng)，或至少20% ，或至少30% ,或至少40% ，或 至少50% ,或至少60% ，或至少70% ,或至少80% ，或至少90% ,或至少 100% ,或更多。
關(guān)于制劑、劑量、施用方案和可測(cè)量的治療結(jié)果的另外的指導(dǎo)，參見 Berkow等5 The Merck Manual of Medical Information (《默克醫(yī)學(xué)信息手 冊(cè)》),2000， Merck & Co" Inc., Whitehouse Station, New Jersey (新澤西州)； Ebadi, CRC Desk Reference of Clinical Pharmacology (《CRC臨床藥理學(xué)案 頭參考》)，1998， CRC Press, Boca Raton， Florida; Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (《雷明頓藥劑學(xué)的科學(xué)與實(shí)踐》),2000, Lippincott， Williams & Wilkins, Philadelphia (費(fèi)城),Pennsylvania (賓夕法 尼亞州)；Katzung, Basic & Clinical Pharmacology (《基礎(chǔ)與臨床藥理學(xué)》), 2001， Lange Medical Books / McGraw-Hill Medical Pub. Div" New York (紐 約)；Hardman等，Goodman & Gilman's the Pharmacological Basis of Therapeutics (《Goodman和Gilman氏治療的藥理學(xué)基礎(chǔ)》)，2001, The McGraw-Hill Companies, Columbus(哥倫布)，Ohio(俄亥俄州)；Speight & Holford, Avery's Drug Treatment: A Guide to the Properties, Choices,Therapeutic Use and Economic Value of Drugs in Disease Management (《艾弗 里氏藥物治療藥物在疾病處理中的特性、選擇、治療用途和經(jīng)濟(jì)價(jià)值的 指南》)，1997, Lippincott， Williams, & Wilkins, Philadelphia (費(fèi)城)， Pennsylvania (賓夕法尼亞州》
II.C.組合療法
本文所述靶向CD80的治療劑可與其他治療劑或其他療法(例如，外 科摘除、放射等)聯(lián)合使用從而引起增強(qiáng)的治療效應(yīng)和/或減少一些治療劑 的肝細(xì)胞毒性。當(dāng)與一種或多種另外的治療劑聯(lián)合使用時(shí)，所述靶向CD80 的治療劑和一種或多種另外的劑可同時(shí)地或以任何順序連續(xù)地被施用或 與細(xì)胞接觸。被公開的組合療法可引起協(xié)同的治療效應(yīng)，即比它們單個(gè)效 應(yīng)的總和還大的效應(yīng)。可測(cè)量的治療效應(yīng)在本文上面被描述。例如，協(xié)同 的治療效應(yīng)可以是由單個(gè)劑引起的治療效應(yīng)或由給定組合中單個(gè)劑引起 的治療效應(yīng)的總和的至少約兩倍，或至少約五倍，或至少約十倍，或至少 約二十倍，或至少約五十倍，或至少約一百倍的效應(yīng)。協(xié)同的治療效應(yīng)據(jù) 觀測(cè)還可以是與由單個(gè)劑引起的治療效應(yīng)或由給定組合中單個(gè)劑引起的 治療效應(yīng)的總和相比增加至少10%的治療效應(yīng)，或至少20% ,或至少30% , 或至少40% ,或至少50% ,或至少60% ,或至少70% ,或至少80% ,或至 少卯％ ，或至少100% ，或更多。
對(duì)于惡性腫瘤的治療，對(duì)組合療法有用的代表性的劑包括細(xì)胞毒素、 放射性同位素、化療劑、免疫調(diào)控或免疫調(diào)節(jié)劑、抗血管生成劑、抗增殖 劑、促凋亡劑、細(xì)胞抑制和細(xì)胞溶解酶(例如RNA酶X酶抑制劑(例如 蛋白酶體抑制劑)和腫瘤疫苗。另外的劑包括治療性核酸，例如編碼免疫 調(diào)控劑、抗血管生成劑、抗增殖劑或促凋亡劑的基因。這些藥物描述詞不 是互斥的，而且因此可以使用上述術(shù)語中的一個(gè)或多個(gè)來描述治療劑。本 發(fā)明的靶向CD80的治療劑還可與使調(diào)節(jié)T細(xì)胞耗竭或阻斷、抑制或向下 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)T細(xì)胞功能的劑聯(lián)合使用。
術(shù)語細(xì)胞毒素一般指的是抑制或預(yù)防細(xì)胞功能和/或?qū)е录?xì)胞破壞的 劑。代表性的細(xì)胞毒素包括抗生素、微管蛋白聚合抑制劑、結(jié)合并破環(huán)DNA 的烷化劑以及破環(huán)蛋白合成或必要的細(xì)胞蛋白功能的劑例如蛋白激酶、磷
30酸酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶、酶和細(xì)胞周期蛋白。代表性的細(xì)胞毒素包括但不限于 多柔比星、柔紅霉素、伊達(dá)比星、阿柔比星、佐柔比星、米托蒽醌、表柔 比星、卡柔比星、諾加霉素、美諾立爾、吡柔比星(pitarubicin )、戊柔比 星、阿糖胞苷、吉西他濱、曲氟尿苷、安西他濱、依諾他濱、阿扎胞苷、 去氧氟尿苷、噴司他汀、溴尿苷、卡培他濱、克拉屈濱、地西他濱、氟尿 苷、氟達(dá)拉濱、谷氏菌素、嘌呤霉素、替加氟、噻唑呋林、阿霉素、順鉑、 碳鉑、環(huán)磷酰胺、達(dá)卡巴嗪、長春堿、長春新堿、米托蒽醌、博來霉素、 雙氯乙基甲胺、浚尼松、丙卡巴肼、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、依托泊苷、紫 杉醇、紫杉醇類似物、鉑類例如順鉑和碳鉑、絲裂霉素、塞替派、紫杉烷、 長春新堿、柔紅霉素、表柔比星、放線菌素、安曲霉素(authramycin )、 氮絲氨酸、博來霉素、他莫西芬、伊達(dá)比星、多拉司他汀/auristatin、哈米 特林(hemiasterlin )、埃斯培拉霉素和類美登醇(maytansinoid )b
適合于放射療法的放射性同位素包括但不限于a發(fā)射體、P發(fā)射體和 俄歇電子。這些放射性同位素通常被偶合至靶抗體而被遞送到疾病細(xì)胞。 例如，放射性標(biāo)記的抗體可包括放射性同位素例如18氟、64銅、65銅、67 鎵、68鎵、77溴、8。m溴、95釕、97釕、103釕、105釕、""尋、107汞、203汞、
123確、124確、125確、126娥、131碘、133碘、'"銦、113銦、"m錸、105錸、101 錸、版錸、188錸、1211"碲、"锝、'2加碲、1251、 '65銩、'67銩、刷銩、卯
釔、a發(fā)射體例如213鉍、213鉛和225錒，以及從那里衍生的氮化物或氧化
物形式。
免疫調(diào)控或免疫調(diào)節(jié)劑是引起免疫應(yīng)答的組合物，所述免疫應(yīng)答包括 體液免疫應(yīng)答(例如，抗原特異性抗體的產(chǎn)生)和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(例 如，淋巴細(xì)胞增殖)b代表性的免疫調(diào)控劑包括細(xì)胞因子、黃嘌呤、白細(xì)
胞介素、干擾素和生長因子(例如，TNF、 CSF、 GM-CSF和G-CSF )以 及激素例如雌激素(己烯雌酚、雌二醇)、雄激素(睪酮、HALOTESTIN (氟甲睪酮)X孕激素(MEGACE (醋酸甲地孕酮)、PROVERA (醋 酸甲羥孕酮))和皮質(zhì)甾類(潑尼松、地塞米松、氫化可的松)o
本發(fā)明中有用的免疫調(diào)控劑還包括抗激素，其阻斷激素對(duì)腫瘤的作 用；以及免疫抑制劑，其抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生、向下調(diào)節(jié)自體抗原表達(dá)或者掩蔽MHC抗原。代表性的抗激素包括抗雌激素，其包括例如他莫西芬、 雷洛昔芬、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔 芬(keoxifene X LY 117018、奧那司酮(onapnstone )和托瑞米芬；以及抗 雄激素，例如氟他米特、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以 及抗腎上腺劑。代表性的免疫抑制劑包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶、硫 唑嘌呤、環(huán)磷酰胺、溴隱定、達(dá)那唑、達(dá)普松、戊二醛、MHC抗原和MHC 片段的抗獨(dú)特型抗體、環(huán)孢菌素A、類固醇例如糖皮質(zhì)類固醇、細(xì)胞因子 或細(xì)胞因子受體拮抗劑(例如抗干擾素抗體、抗IL10抗體、抗TNFcc抗體、 抗IL2抗體X鏈激酶、TGFP、雷帕霉素、T細(xì)胞受體、T細(xì)胞受體片段 和T細(xì)胞受體抗體。
本發(fā)明中有用的另外的藥物包括抑制血管形成的抗血管生成劑，例 如，法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、COX-2抑制劑、VEGF抑制劑、bFGF抑制劑、 類固醇硫酸酯酶抑制劑(例如，2-甲氧雌二醇雙氨基磺酸酯 (2-MeOE2bisMATE ) X白細(xì)胞介素-24、血小板反應(yīng)蛋白、金屬底板反應(yīng) 蛋白(metallospondin protein 、 I類干擾素、白細(xì)胞介素12、魚精蛋白、 血管他汀、層粘連蛋白、內(nèi)皮他汀和促乳素片段。
抗增殖劑和促凋亡劑包括PPARy活化劑(例如環(huán)戊烯酮前列腺素 (cyPG)X類視黃醇、三萜系化合物(例如，環(huán)木菠蘿烷、羽扇烷、烏斯 烷、齊墩果烷、木栓烷、達(dá)瑪垸、葫蘆素和檸檬苦素類化合物三萜系化合 物X EGF受體抑制劑(例如HER4 X雷帕霉素、CALCITRIOL ( 1,25-二羥膽鈣化固醇(維生素D )、芳香酶抑制劑(FEMARA ( letrozone )、 端粒酶抑制劑、鐵螯合劑(例如3-氨基吡啶-2-甲醛硫代半卡巴腙 (Triapine )、凋亡蛋白(病毒蛋白3 - VP3 ，來自雞貧血病毒》Bcl-2和 Bcl-X(L)抑制劑、TNF-a、 FAS配體、TNF相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體 (TRAIL/Apo2L ) 、 TNF-a/FAS配體/TNF相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體 (TRAIL/Apo2L )信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活化劑以及PI3K-Akt存活途徑信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制 劑(例如，UCN-01和格爾德霉素)b
可與CD80拮抗劑聯(lián)合使用的另外的劑包括阻斷B淋巴細(xì)胞刺激劑 (BLyS )與它的一個(gè)或多個(gè)受體、B細(xì)胞活化因子受體(BAFF-R )、跨膜激活劑及鈣調(diào)親環(huán)素配體相互作用分子(TACI )或B細(xì)胞成熟抗體 (BCMA)相互作用的劑。例如，有用的劑包括特異性結(jié)合BLyS配體的 抗體或特異性結(jié)合它的一個(gè)或多個(gè)受體的抗體，其包括本文所描述的任何 抗體類型。還可以使用BLyS與它的一個(gè)或多個(gè)受體相互作用的小分子抑 制劑。
本發(fā)明的靶向CD80的治療劑還可與其他抗癌治療抗體和抗體/藥物軛 合物聯(lián)合使用?？梢砸晕礃?biāo)記的/未軛合的形式或作為抗體/藥物軛合物被 使用的代表性抗體包括抗CD19抗體、抗CD20抗體(例如，RITUXAN⑧、 ZEVALIN⑧、BEXXAR )、抗CD22抗體、抗CD33抗體(例如 MYLOTARG 抗CD33抗體/藥物軛合物、抗Lewis Y抗體(例如， Hu3S193、Mthu3S193、AGmthu3S193 )^抗HER國2抗辨例如>HERCEPTIN
(曲妥珠單抗)、MDX-210、 OMNITARG (帕妥珠單抗、rhuMAb 2C4 )\ 抗CD52抗體(例如CAMPATH X抗EGFR抗體(例如，ERBITUX⑧(西 妥昔單抗、ABX-EGF(帕尼單抗)、抗VEGF抗體(例如AVASTIN (貝 伐單抗)X抗DNA/組蛋白復(fù)合體抗體(例如ch-TNT-l/b X抗CEA抗體
(例如CEA-Cide、 YMB-1003 〉 hLM609、抗CD47抗體(例如6H9 X抗 VEGFR2 (或含激酶插入結(jié)構(gòu)域的受體，KDR )抗體(例如IMC-1C11 、 抗Ep-CAM抗體(例如ING-1 X抗FAP抗體(例如西羅珠單抗\抗DR4 抗體(例如TRAIL-R X抗孕酮受體抗體(例如2C5 X抗CA19.9抗體(例 如GIVAREX )和抗纖維蛋白抗體(例如MH-1 >>
本發(fā)明的靶向CD80的治療劑還可與全身性抗癌藥物例如埃博霉素 (印ithilone )( BMS-247550、 Epo-卯6》紫杉烷的重制制劑(reformulation ) (Abraxane、 Xyotax X微管蛋白抑制劑(MST-997、 TTI-237 )等聯(lián)合使 用。
在其他聯(lián)合療法中，靶向CD80的治療劑可與一種或多種化療劑的組 合一同施用，所述化療劑例如，烷化劑例如塞替派和環(huán)磷酰胺 (cyclosphosphamide);烷基磺酸酯例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮 丙啶(aziidine )例如benzodopa、卡波醌、meturedopa和uredopa ;乙烯亞 胺和甲基三聚氰胺(methylamelamine ),其包括六甲蜜胺、三乙烯三聚氰胺、三乙烯磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三亞乙基硫代磷酰胺和三羥 甲蜜胺(trimethylolomelamine);氮芥例如苯丁酸氮芥(chiorambucil X萘氮 芥、cholophosphamide 、雌氮芥、異環(huán)磷酰胺、雙氯乙基甲胺
(mechiorethamine )、 鹽酸雙氯乙基甲胺氧化物(mechiorethamine oxide hydrochloride),美法侖、新氮芥、膽甾醇對(duì)苯乙酸氮芥、潑尼莫司汀、氯 乙環(huán)磷酰胺(trofosfamide X尿嘧啶氮芥；亞硝基脲(nitrosureas)例如卡莫 司汀、氯脲菌素(chiorozotocin)、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司 ??；抗生素例如阿克拉希霉素(aclacinomysins)、放線菌素、安曲霉素 (authramycin)、氮絲氨酸、博來霉素、放線菌素C、刺孢霉素(calicheamicin)、 卡柔比星(carabicin)、洋紅霉素、嗜癌霉素、色霉素、放線菌素D、柔紅霉 素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索 比星、伊達(dá)比星、麻西羅霉素、絲裂霉素、霉酚酸、諾加霉素、橄欖霉素、 培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、 鏈黑菌素、鏈佐星、殺結(jié)核菌素、烏苯美司、凈司他汀、佐柔比星；抗代 謝劑例如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物例如二甲葉酸、氨 甲蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物例如氟達(dá)拉濱、6-巰基嘌呤、硫 咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物例如安西他濱、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡 莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷、5-EU ; 雄激素例如卡魯睪酮、丙酸屈他雄酮、環(huán)硫雄醇、環(huán)戊縮環(huán)硫雄烷、睪內(nèi) 酯；抗腎上腺劑例如氨魯米特(aminoglutethimide \米托坦、曲洛司坦； 葉酸補(bǔ)充劑例如亞葉酸(frolinic acid );醋葡醛內(nèi)酯；糖苷醛磷酰胺
(aldophospharnide glycoside );氨基果糖酸(aminolevulinic acid );安吖啶； 百垂布西(bestrabucil);比生群；依達(dá)曲沙(edatraxate ); defofamine ;地 美可辛；地吖醌；依氟鳥氨酸(dforn他ine );依利醋銨；依托格魯；硝酸 鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達(dá)明(Ionidamine);米托胍腙；米托蒽醌；莫 哌達(dá)醇；二胺硝吖啶；噴司他?。坏鞍钡?；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基 酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；西佐喃；鍺螺胺；細(xì)交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌； 2,2',2'-三氯三乙胺；尿烷；長春地辛；達(dá)卡巴嗪；甘露莫司??；二溴甘露 醇；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷；gacytosine ;阿拉伯糖苷("Am-C");環(huán)磷酰胺； 塞替派；紫杉烷例如紫杉醇(TAXOL ，普林斯頓的Bristol-Myers Squibb腫瘤學(xué)，新澤西州)和多西紫杉醇(doxetaxel ) ( TAXOTERE ， Rhone-Poulenc Rorer of Antony ,法國)；瘤可寧(chiorambucil );吉西他濱； 6-硫鳥嘌昤；巰基嘌呤；甲氨蝶呤；鉑類似物例如順鉑和碳鉑；長春堿； 鉑；依托泊苷(VP-16 );異環(huán)磷酰胺；絲裂霉素C ;米托蒽醌；長春新堿； 長春瑞濱；諾維本；諾消靈；替尼泊苷；柔紅霉素；氨基蝶呤(aininopterin ); 希羅達(dá)；伊班膦酸鹽；CPT-11 ;拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS 2000 ; 二氟甲基鳥 氨酸(DMFO );視黃酸；埃斯培拉霉素(esperamicins );卡培他濱和治療 劑的組合例如ABVD(亞德利亞霉素、博來霉素、長春新堿、達(dá)卡巴嗪)b
為了治療霍奇金氏病，本發(fā)明的靶向CD80的治療劑可與抗體聯(lián)合使 用，所述抗體與在Hodgkin Reed Sternberg ( HRS )細(xì)胞或環(huán)繞HRS細(xì)胞 的滲入細(xì)胞上表達(dá)的抗原結(jié)合。這種對(duì)HRS細(xì)胞的靶向有用的抗原包括 CD30、 CD40、 RANK、 TRAIL、 Notch、 LMP、 IL-13、 CD20、 CD52和 CCR4。用來治療霍奇金氏病的組合療法的其他有用的劑包括蛋白酶體抑 制劑(例如硼替佐米(PS-341 ; Millennium Pharmaceuticals (千禧制藥)) 和MG-132 (東京都醫(yī)學(xué)研究所))、組蛋白脫乙酰酶抑制劑(histone deacytylase inhibitors )(例如縮酚酸肽(FK228 ; Gloucester Pharmaceuticals ) 和辛二酰苯胺氧脰酸(suberoylanilide hydroxamic acid )( SAHA ; Aton Pharnia ))和可用來誘導(dǎo)HRS細(xì)胞凋亡的小分子和肽，包括三萜系化合物 例如CDD ( RTA401 ， Reata Discovery )和17-烯丙基氨基-17-脫甲氧基-格 爾德霉素(gledanamycin X參見例如Kamal等，Trends. Mol. Med" 2004， 10, 283-290 )、 N-乙?；?亮氨酸基-leucynil德leucynal、 N-乙?；?亮氨酸基 leucynil-甲二磺醛、芐氧羰基-亮氨酸基-leucynil-norvalinal、芐氧羰基-亮氨 酸基-leucynil-leucynal、卩-內(nèi)酯、bactacystine、硼酸肽、泛素連接酶抑制劑、 環(huán)孢菌素A和脫氧精胍菌素。
本發(fā)明的靶向CD80的治療劑還可與增強(qiáng)抗腫瘤免疫力的劑例如腫瘤 疫苗聯(lián)合使用。很多這種疫苗是本領(lǐng)域已知的，包括摻入腫瘤特異性的細(xì) 胞毒素表位以及輔助表位的疫苗。另外的劑可防止CD8+細(xì)胞溶解T淋巴 細(xì)胞無反應(yīng)性的誘導(dǎo)。
更進(jìn)一步地，本發(fā)明的靶向CD80的治療劑可以與以下聯(lián)合使用提高免疫活性的劑，例如抗CTLA4抗體、其他阻斷CTLA4的劑、抗PD1 抗體和釋放T細(xì)胞激活和增殖的抑制對(duì)照的另外的劑。
在本申請(qǐng)通篇中，各種出版物、專利和發(fā)行的專利申請(qǐng)通過可識(shí)別的 引用被提及。本申請(qǐng)中引用的這些出版物、專利和發(fā)行的專利說明書的公 開內(nèi)容由此通過引用并入本公開內(nèi)容以更全面地描述本發(fā)明所涉及領(lǐng)域 的技術(shù)狀態(tài)。
下面的實(shí)施例被包括以展示本發(fā)明的實(shí)施方式。下面的實(shí)施例的某些 方面就本發(fā)明共同發(fā)明人發(fā)現(xiàn)或熟思而得并在本發(fā)明實(shí)踐中有效的技術(shù) 和程序進(jìn)行描述?？紤]到本公開內(nèi)容和本領(lǐng)域一般技術(shù)水平，技術(shù)人員將 理解，下面的實(shí)施例只預(yù)期是示范性的，而且許多變化、修飾和改變可以 在不背離本發(fā)明的范圍下被使用。
實(shí)施例
實(shí)施例1.用于治療復(fù)發(fā)的或頑固的霍奇金氏淋巴瘤的加利昔單抗
挑選患有組織學(xué)上確診的典型霍奇金氏淋巴瘤的成人患者(至少18 歲)使用抗CD80抗體加利昔單抗進(jìn)行治療。加利昔單抗是使用 PRIMATIZED⑧抗體技術(shù)開發(fā)的IgGl X ,抗CD80單克隆抗體，其降低免 疫原性?？勺儏^(qū)源自食蟹獼猴，而恒定區(qū)源自人。為了靜脈內(nèi)注射，加利 昔單抗作為10mmol/L檸檬酸鈉中的無菌產(chǎn)品被配制，其含有150mmol/L 氯化鈉和0.02%聚山梨醇酯80 , pH6.5。
患者具有可測(cè)量的疾病(例如，至少一處損傷^ 10 mm )和足夠的血 液、腎臟和肝臟功能。使用加利昔單抗治療患者一個(gè)月的時(shí)間。在加利昔 單抗的靜脈內(nèi)輸注之前，患者被事前用藥，其通過使用輸注泵和0.22微米 低蛋白結(jié)合濾器的靜脈內(nèi)輸注(IV )或通過嘴施用50mg苯海拉明，以及 口服施用650 mg醋氨酚?；颊呙啃瞧诮邮芤淮?00 mg/i^加利昔單抗，持 續(xù)4周。加利昔單抗在門診情況下于一個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)被施用。加利昔單 抗輸注完成后對(duì)患者進(jìn)行監(jiān)測(cè)至少一小時(shí)?？贵w劑量在150mL-250 mL的 生理鹽水中被稀釋。如果發(fā)生任何Sl級(jí)的輸注反應(yīng)(例如，發(fā)熱、寒戰(zhàn)、呼吸困難)，制止加利昔單抗的輸注。在癥狀解除之后，可以之前速率的 一半重新開始輸注。如果患者再次經(jīng)歷輸注相關(guān)的不良事件，則停止加利 昔單抗的輸注并不在當(dāng)天再次開始。
在施用上述的誘導(dǎo)療法之后，患者按月接受長期的加利昔單抗療法直 到疾病演進(jìn)。使用輸注泵和0.22微米低蛋白結(jié)合濾器，患者每四個(gè)星期在 60分鐘內(nèi)接受500mg/r^劑量的加利昔單抗。如果患者經(jīng)歷輸注相關(guān)的毒 性，則延長輸注時(shí)間。對(duì)加利昔單抗有響應(yīng)的患者被允許繼續(xù)治療。在第 八個(gè)星期然后在每3次加利昔單抗治療(即每12個(gè)星期)后，檢查他們 的進(jìn)展直至疾病演進(jìn)。從研究中早期撤出的或在48個(gè)月的研究期間的最 后還活著的所有患者以6個(gè)月的間隔觀查響應(yīng)的繼續(xù)、其他淋巴瘤療法的 起始、存活狀態(tài)或死因。加利昔單抗的治療導(dǎo)致提升腫瘤免疫力的腫瘤微 環(huán)境中的變化，其包括適應(yīng)性免疫應(yīng)答的增強(qiáng)，例如，通過對(duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞 抑制的抑制，腫瘤微環(huán)境中的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞和/或炎性細(xì)胞的減少，支持腫 瘤演進(jìn)的細(xì)胞因子和其他因子的向下調(diào)節(jié)，腫瘤細(xì)胞生長和/或遷移的減 少，腫瘤血管化的減少等。
疾病的評(píng)估通過全面的掃描(計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)、磁共振成像和X射 線)和在基線的物理檢查(研究錄入)在加利昔單抗治療完成后1個(gè)月(第 50天X之后第l和2年中每3個(gè)月和第3和4年中每6個(gè)月進(jìn)行。使用 由非霍奇金氏淋巴瘤國際工作組響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)所定義的臨床試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果 測(cè)量(完全響應(yīng)、未確認(rèn)的完全響應(yīng)、部分響應(yīng)、穩(wěn)定型疾病和進(jìn)展型疾 病)來分析治療的應(yīng)答。相關(guān)的終點(diǎn)包括總響應(yīng)率、完全緩解率、未確認(rèn) 的完全緩解率、部分緩解率、響應(yīng)持續(xù)時(shí)間和演進(jìn)時(shí)間。另外的效力相關(guān) 指標(biāo)包括腫瘤微環(huán)境的變化，如實(shí)施例3中所評(píng)價(jià)。
實(shí)施例2.加利昔單抗的藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析
在第八個(gè)星期和之后每12個(gè)星期(只要患者還留在硏究中)輸注加 利昔單抗之前，血清和/或活體解剖樣品的獲得是在輸注前以及輸注完成的 IO分鐘內(nèi)(第I、 8、 15和22天)c藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析包括血漿、腫瘤 塊、腫瘤結(jié)節(jié)和/或腫瘤引流淋巴結(jié)中加利昔單抗的濃度；觀測(cè)到的最大濃度(Cmax );達(dá)到觀測(cè)到的最大濃度的時(shí)間；半衰期；以及濃度時(shí)間曲線 下面積(AUC)b使用無房室線性回歸法分析數(shù)據(jù)以使用在研究第1天之 后采集的所有樣品的數(shù)據(jù)來確定抗體半衰期，其中所述樣品含有超過測(cè)定 定量下限的加利昔單抗?jié)舛?250ng/mL >使用線性的/對(duì)數(shù)的梯形方法計(jì) 算并將時(shí)間外推至無窮而確定AUC。
實(shí)施例3.加利昔單抗對(duì)腫瘤微環(huán)境中免疫功能的作用
在接受加利昔單抗療法的患者中，在如下時(shí)間點(diǎn)獲得血清和/或活體解 剖樣品第1天治療之前，在第4個(gè)星期(誘導(dǎo)完成)，在第8個(gè)星期， 和之后患者留在研究的持續(xù)時(shí)間中的每12個(gè)星期?；铙w解剖樣品可以從 腫瘤塊、腫瘤結(jié)節(jié)和/或腫瘤引流淋巴結(jié)中獲得。根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法測(cè) 定樣品中的免疫細(xì)胞功能。使用特異性結(jié)合感興趣的細(xì)胞因子的抗體來確 定細(xì)胞因子水平。使用流式細(xì)胞分析以及本領(lǐng)域已知的和本文所描述的適 合的分子標(biāo)志物來對(duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞、Th2細(xì)胞和巨噬細(xì)胞進(jìn)行定量。對(duì)于腫 瘤微環(huán)境的分析，首先使用特異性結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原的抗體使惡性細(xì)胞從 樣品中耗竭。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地為被治療的惡性腫瘤鑒定適合的腫 瘤相關(guān)抗原。通過鑒定CD4+、 CD25hi細(xì)胞群體來評(píng)估調(diào)節(jié)T細(xì)胞含量， 可選地聯(lián)合以下中的一種或多種細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4
(CTLA4 X糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體家族相關(guān)的基歐GITR》 CC趨化因子受體4 ( CCR4 X叉頭盒p3 ( F0XP3 X CC趨化因子受體6
(CCR6 X CD30、 CD62Lhi、 CD45RB1。、 CD45ROhi和/或CD45RA-。 Th2 細(xì)胞可以是鑒定的TCR+ ( T細(xì)胞受體)CD4+、 CD25-細(xì)胞。使用生物標(biāo)志 物對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行定量，其中所述生物標(biāo)志物包括TLR5、 FCGR1A、 SEPTIO、 LGMN和/或C3AR1。還可以使用生物標(biāo)志物來定量巨噬細(xì)胞以 計(jì)算淋巴細(xì)胞相關(guān)的巨噬細(xì)職LAM )#量，例如，如Farinha等,S/ooJ，2005, 〗06(16).'2169-274所述。通過在活體染料例如二醋酸羧基熒光素(CFSE ) 的存在下培養(yǎng)細(xì)胞來測(cè)定調(diào)節(jié)T細(xì)胞的增殖。
實(shí)施例4.加利昔單抗對(duì)T細(xì)胞激活的作用
加利昔單抗對(duì)正常的人外周血T淋巴細(xì)胞的激活的作用通過將CD4+CD25-T細(xì)胞與獲自獨(dú)立供體的SB淋巴瘤細(xì)胞或成熟樹突細(xì)胞一起 培養(yǎng)而被確定。在兩種情況下，通過由SB淋巴瘤細(xì)胞或成熟樹突細(xì)胞表 達(dá)的同種異體的主要組織相容性復(fù)合體(MHC )蛋白提供對(duì)T細(xì)胞激活的 刺激。MHC錯(cuò)配的范圍沒有被進(jìn)一步表征。
使用標(biāo)準(zhǔn)的菲科-帕克程序(Ficoll-paque procedure )通過密度離心來 分離外周血單核細(xì)胞(PBMC )b使用CD4+ T細(xì)胞分離試劑盒(Meltenyi Biotec of Aubern ,加利福尼亞州)通過對(duì)缺乏CD4表達(dá)的所有細(xì)胞進(jìn)行間 接的磁性標(biāo)記和磁性細(xì)胞分離，從PBMC群體中陰性選擇CD4+CD25- T 淋巴細(xì)胞。表達(dá)CD8、 CD14、 CD16、 CD19、 CD36、 CD56、 CD123、 TCR y/S和CD235a (血型糖蛋白A )的細(xì)胞的耗竭產(chǎn)生CD4+T淋巴細(xì)胞群體， 所述CD4+ T淋巴細(xì)胞對(duì)于CD4的表達(dá)超過95%陽性。使用CD25微珠II (Meltenyi Biotec of Aubern ，加利福尼亞州)通過陰性選擇使此種CD"T 細(xì)胞群體中表達(dá)CD25的細(xì)胞被進(jìn)一步耗竭。所有細(xì)胞分離物經(jīng)由流式細(xì) 胞術(shù)表征以保證所富集的細(xì)胞群體的一致性。接著使用可透過細(xì)胞的熒光 染料羧基熒光素琥珀酰亞胺酯(CFSE )標(biāo)記CD4+CD25- T細(xì)胞。通過在 2 pg/ml脂多糖的存在下培養(yǎng)PBMC過夜而產(chǎn)生成熟的樹突細(xì)胞。接著將 所述細(xì)胞沖洗五次并進(jìn)行外部Y照射(2000拉德)以使細(xì)胞不增殖。CFSE 標(biāo)記的CD4+CD25- T細(xì)胞與SB淋巴瘤細(xì)胞或成熟的樹突細(xì)胞一同培養(yǎng)五 天。在培養(yǎng)物中包含不同濃度的加利昔單抗。此外，為了進(jìn)行比較，還研 究了阻斷抗體對(duì)CD86和CTLA4-Ig的作用。通過對(duì)CFSE熒光染料的強(qiáng) 度進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)定量來測(cè)量CD4+CD25- T細(xì)胞增殖，其中所述CFSE熒 光染料在細(xì)胞分裂時(shí)分布在子細(xì)胞之間，導(dǎo)致細(xì)胞熒光強(qiáng)度隨著細(xì)胞分裂 周期的增加而逐漸減弱。
由SB淋巴瘤細(xì)胞或同種異體的樹突細(xì)胞誘導(dǎo)的CD4+CD25- T細(xì)胞的 增殖在細(xì)胞培養(yǎng)物中包含了加利昔單抗之后被顯著地抑制(圖1A-1B )b加 利昔單抗對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制總是比抗CD86或CTLA4-Ig抗體介導(dǎo)的抑 制小。這與作為支持T細(xì)胞激活的共刺激分子的CD80和CD86的相關(guān)貢 獻(xiàn)一致。這些結(jié)果證明，在強(qiáng)的T細(xì)胞激活信號(hào)(即同種異體刺激)的情 況下，加利昔單抗部分地抑制新生的CD4+CD25- T淋巴細(xì)胞的激活，就如T細(xì)胞增殖的抑制所表現(xiàn)的。就T淋巴細(xì)胞有助于建立腫瘤微環(huán)境中存 在的獨(dú)特細(xì)胞組成而言，這些結(jié)果表明，加利昔單抗能夠調(diào)控T細(xì)胞功能 并因此改變T淋巴細(xì)胞對(duì)界定腫瘤微環(huán)境的貢獻(xiàn)。
實(shí)施例5.加利昔單抗對(duì)經(jīng)由激活的T細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生的作用
如實(shí)施例4中所述分離并培養(yǎng)CD4+CD25- T細(xì)胞。使用多重的細(xì)胞 計(jì)數(shù)的珠陣列測(cè)定(BD Biosciences of San Jose ,加利福尼亞州)測(cè)量T細(xì) 胞激活時(shí)產(chǎn)生的干擾素-Y和白細(xì)胞介素2的水平。簡短地，在第3天從按 照實(shí)施例4中所述被建立的培養(yǎng)物中收集培養(yǎng)物上清液，并在多個(gè)稀釋度 下測(cè)定。通過從同時(shí)產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線外推而確定濃度(按照制造商的說明 書)b由CD4+CD25-T淋巴細(xì)胞與成熟的、同種異體的樹突細(xì)胞一起培養(yǎng) 而誘導(dǎo)的干擾素-Y和白細(xì)胞介素-2 二者的產(chǎn)生被加利昔單抗顯著地抑制 (圖2A-2B )o加利昔單抗和抗CD86各自抑制干擾素，的產(chǎn)生大約50% (圖2A >>加利昔單抗和抗CD86的組合導(dǎo)致干擾素-Y產(chǎn)生的幾乎完全的 抑制(圖2A )o CTLA4-Ig也展示了干擾素-Y產(chǎn)生的基本完全的抑制，這 與加利昔單抗和抗CD86的疊加效應(yīng)一致，假設(shè)CTLA4-Ig結(jié)合并阻斷 CD80和CD86 二者(圖2A》白細(xì)胞介素-2的產(chǎn)生展示了加利昔單抗、 抗CD86、 CTLA4-Ig和加利昔單抗加上抗CD86的相似的差異化抑制(圖 2B》這些結(jié)果證明，在強(qiáng)的T細(xì)胞激活信號(hào)(即同種異體刺激)的情況 下，加利昔單抗部分地抑制新生的CD4+CD25- T淋巴細(xì)胞的激活，就如 對(duì)干擾素-Y和白細(xì)胞介素-2產(chǎn)生的抑制所表現(xiàn)的。就T淋巴細(xì)胞有助于建 立腫瘤微環(huán)境中存在的獨(dú)特細(xì)胞因子組合而言，這些結(jié)果表明，加利昔單 抗能夠調(diào)控T細(xì)胞功能并因此改變T淋巴細(xì)胞對(duì)界定腫瘤微環(huán)境的貢獻(xiàn)。
實(shí)施例6.加利昔單抗對(duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的發(fā)育的作用
在離體的共培養(yǎng)系統(tǒng)中研究加利昔單抗對(duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的產(chǎn)生的作用， 在所述培養(yǎng)系統(tǒng)中CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞與同種異體的SB淋巴瘤細(xì)胞一 起培養(yǎng)3天。簡短地，如實(shí)施例4中所述分離PBMC并通過實(shí)施例4中所 述的陰性選擇進(jìn)一步純化CD4+細(xì)胞。使用CD25微珠II ( Meltenyi Biotec ofAubern ,加利福尼亞州)通過陽性選擇使CD4+CD25+細(xì)胞進(jìn)一步富集。
40通過流式細(xì)胞術(shù)將調(diào)節(jié)T細(xì)胞作為CD4+CD45RA+CD127-細(xì)胞的百分比 來測(cè)量，其中所述CD4+CD45RA+CD127-細(xì)胞表達(dá)高水平的CD25 ,即 CD25hi。據(jù)證實(shí)，此細(xì)胞群體代表FOXP3陽性細(xì)胞，其定義調(diào)節(jié)T細(xì)胞 亞群。
CD4+CD25+ T細(xì)胞與SB淋巴瘤細(xì)胞以1:10的SB:T比的培養(yǎng)導(dǎo)致調(diào) 節(jié)T細(xì)胞被最大誘導(dǎo)至代表測(cè)定中CD4+CD45RA+CD127- T細(xì)胞的大約 37%和62%的水平(即CD25hi )，其中所述測(cè)定使用來自兩種不同供體的 PBMC (圖3A和3B )b使用1:120和1:160的SB:T比分別導(dǎo)致大約16% 和48%的調(diào)節(jié)T細(xì)胞的誘導(dǎo)(圖3A和3B )o在兩種情況下，單獨(dú)培養(yǎng)的 T細(xì)胞導(dǎo)致了少于5%的調(diào)節(jié)T細(xì)胞(圖3A和3B》相對(duì)于同種型匹配的 人IgGl對(duì)照抗體， 一個(gè)供體(202 )展現(xiàn)了加利昔單抗對(duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞誘導(dǎo) 的顯著抑制(圖3A》在這種情況下，加利昔單抗比抗CD86更有效力， 其展現(xiàn)對(duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞誘導(dǎo)的抑制水平與用CTLA4-Ig或用加利昔單抗加上 抗CD86觀察到的抑制水平更相似。另一個(gè)供體展現(xiàn)了 CTLA4-Ig而非加 利昔單抗對(duì)調(diào)節(jié)T細(xì)胞誘導(dǎo)的抑制(圖3B )o這些結(jié)果表明，加利昔單抗 能夠抑制調(diào)節(jié)T細(xì)胞的誘導(dǎo)。
實(shí)施例7.加利昔單抗對(duì)腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞因子產(chǎn)生的作用
為了進(jìn)一步研究加利昔單抗在腫瘤微環(huán)境情況下的潛在作用，建立了 共培養(yǎng)測(cè)定以對(duì)在不同程度上有助于建立復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境的多種細(xì)胞 類型的貢獻(xiàn)建模。
使用標(biāo)準(zhǔn)的菲科-帕克程序通過密度離心來分離PBMC。通過對(duì)所有非 CD4+或CD14+細(xì)胞進(jìn)行間接的磁性標(biāo)記和磁性細(xì)胞分離，從PBMC群體 中陰性選擇由CD4+ T淋巴細(xì)胞或CD14+單核細(xì)胞組成的特定的細(xì)胞亞 群。使用CD4+ T細(xì)胞分離試劑盒(Meltenyi Biotec , Aubern ,加州)，通 過使表達(dá)CD8、 CD14、 CD16、 CD19、 CD36、 CD56、 CD123、 TCR y/S 和CD235a (血型糖蛋白A )的細(xì)胞耗竭來分離CD4+ T淋巴細(xì)胞至超過 95%的CD4均一性。使用單核細(xì)胞分離試劑盒(Meltenyi Biotec of Aubern , 加利福尼亞州)，通過使表達(dá)CD3、 CD7、 CD16、 CD19、 CD56、 CD123和CD235a(血型糖蛋白A )的細(xì)胞耗竭來分離CD14+單核細(xì)胞至超過卯％ 的CD14均一性。所有細(xì)胞分離物經(jīng)由流式細(xì)胞術(shù)表征以保證所富集的細(xì) 胞群體的一致性。在96孔平底微量滴定板中，以每孔200,000個(gè)細(xì)胞，使 用純化的CD4+ T淋巴細(xì)胞和CD14+單核細(xì)胞，在含有10% FBS的 RPMI-1640培養(yǎng)基(Invitrogen of Carlsbad ，加利福尼亞州)中培養(yǎng)細(xì)胞。 以每孔20,000個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)Raji淋巴瘤細(xì)胞系。維持培養(yǎng)物4天，此時(shí)收集 培養(yǎng)物上清液。使用多重的細(xì)胞計(jì)數(shù)的珠陣列(BD Biosciences of San Jose ， 加利福尼亞州)測(cè)量存在于培養(yǎng)物上清液中的白細(xì)胞介素-12 (p70 )、 TNF-a、白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-1(3和白細(xì)胞介素-8 的濃度。純化的人血清骨髓瘤IgGl k( Southern Biotech of Birmingham ，阿 拉巴馬州)被用作加利昔單抗的同種型對(duì)照。從人工產(chǎn)生的CHO細(xì)胞系 中純化的CTLA4-Ig被用作對(duì)照以將完全的阻斷(即CD80和CD86 )與加 利昔單抗介導(dǎo)的CD80特異性阻斷進(jìn)行比較。脂多糖(Sigma of St. Louis , 密蘇里州)被用作外周血單核細(xì)胞激活的陽性對(duì)照。
如圖4A-4D中所示，分離培養(yǎng)的CD14+單核細(xì)胞展現(xiàn)了白細(xì)胞介素-8 和白細(xì)胞介素-6的自發(fā)的或組成的產(chǎn)生。與CD4+ T細(xì)胞或Raji細(xì)胞共培 養(yǎng)導(dǎo)致白細(xì)胞介素-8和白細(xì)胞介素-6產(chǎn)生的減少(圖4A-4D )o加利昔單 抗以及CTLA4-Ig抑制了經(jīng)由CD14+單核細(xì)胞單獨(dú)或者與CD4+ T細(xì)職1:1 比例)或Raji細(xì)胞(10:1比例)一起培養(yǎng)的CD14+單核細(xì)胞的白細(xì)胞介素 -8和白細(xì)胞介素-6的產(chǎn)生(圖4A-4D )b CD4+T纟田胞、CD14+單核細(xì)胞和 Raji淋巴瘤細(xì)胞(10:10:1比例)的三方共培養(yǎng)(three-way co-culture )清 楚地證明了取決于所有三種細(xì)胞類型的存在的不同的生物活性，這由所有 三種細(xì)胞類型共培養(yǎng)與任何單個(gè)細(xì)胞類型或兩種細(xì)胞類型的組合組成的 培養(yǎng)相比時(shí)的白細(xì)胞介素-8和白細(xì)胞介素-6的產(chǎn)生的顯著、協(xié)同的增強(qiáng)所 證明。在三方共培養(yǎng)中，加利昔單抗顯著地抑制白細(xì)胞介素-8和白細(xì)胞介 素_6 二者增多的產(chǎn)生(圖4A-4D )b來自一個(gè)供體(供體A )的結(jié)果顯示， 加利昔單抗在抑制三方共培養(yǎng)中的白細(xì)胞介素-8和白細(xì)胞介素-6方面與 CTLA4-Ig同樣有效(圖4A-4B )b來自第二個(gè)供體(供體B )的結(jié)果顯示， CTLA4-Ig展現(xiàn)更強(qiáng)的效力。在供體B中，加利昔單抗抑制了白細(xì)胞介素 -8和白細(xì)胞介素-6 二者的產(chǎn)生至少50%。在供體B中，加利昔單抗與Raji 細(xì)胞組合在一起的CD14+單核細(xì)胞的細(xì)胞因子產(chǎn)生的方面展現(xiàn)了相似的 效力(圖4C-4D >因此，就供體B來說，CTLA4-Ig的增強(qiáng)的效力只有在 三方共培養(yǎng)條件下是明顯的，其中在所述條件下白細(xì)胞介素-8和白細(xì)胞介 素-6的產(chǎn)生被顯著地增加。從共培養(yǎng)測(cè)定系統(tǒng)中所分析的一個(gè)另外的供體(供體C)獲得的細(xì)胞 上觀察到了變化(圖4E-4F )b在這種情況下，加利昔單抗或CTLA4-Ig對(duì) 白細(xì)胞介素-8和白細(xì)胞介素-6的產(chǎn)生都沒有任何作用。然而，CD14+單核 細(xì)胞產(chǎn)生的自發(fā)的白細(xì)胞介素-8和白細(xì)胞介素-6的水平至少比使用來源于 供體A或供體B的細(xì)胞進(jìn)行的測(cè)定中觀察到的水平高一個(gè)級(jí)數(shù)(圖 4A-4D )，如表1中所概述。此外，使用來自供體C的細(xì)胞的三方共培養(yǎng)沒 有導(dǎo)致在來自供體A和B的細(xì)胞上觀察到的白細(xì)胞介素-8的產(chǎn)生的協(xié)同增 加，雖然觀察到了白細(xì)胞介素-6的產(chǎn)生的協(xié)同增加。這些結(jié)果證明，加利 昔單抗能顯著地影響在腫瘤微環(huán)境中表達(dá)的直接和間接地支持腫瘤演進(jìn) 的那類細(xì)胞因子。表l.經(jīng)由CD14+單核細(xì)胞的自發(fā)的細(xì)胞因子產(chǎn)生供體白細(xì)胞介素-8 (pg/ml)白細(xì)胞介素-6 (pg/ml)A8244 +/- 3548144+/- 3B1362 +/-3431+/-0C82094 +/- 109831633+/- 530
權(quán)利要求
1.一種治療患有惡性腫瘤的受治療者的方法，所述惡性腫瘤包括惡性和非惡性細(xì)胞的腫瘤微環(huán)境，其中調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能促成或加重所述惡性腫瘤，所述方法包括對(duì)所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
2 .如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述疾病是血液的惡性腫瘤或非血液的惡性腫瘤。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述惡性腫瘤是血液的惡性腫瘤。
4 .如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
5 .如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細(xì)胞淋巴瘤。
6 .如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述B細(xì)胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
7 .如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述惡性腫瘤是非血液的惡性腫瘤。
8 .如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、結(jié)腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內(nèi)分泌腺、甲狀腺、腎上腺、垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經(jīng)、眼、腦膜的癌癥。
9 .如權(quán)利要求1所述的方法,其中所述靶向CD80的治療劑是抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段。
10 .如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
11 .如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體結(jié)合的CD80表位結(jié)合。
12 .如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體競爭結(jié)合CD80。
13 .如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)的可變區(qū)。
14 .如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)。
15 .如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR )。
16 .如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
17 .如權(quán)利要求1所述的方法，其中調(diào)節(jié)T細(xì)胞、Th2輔助細(xì)胞或調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2細(xì)胞二者的激活被抑制。
18 .如權(quán)利要求1所述的方法，其中調(diào)節(jié)T細(xì)胞、Th2輔助細(xì)胞或調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2細(xì)胞二者的增殖被抑制。
19 .如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑阻斷CD80/CD28信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)而不阻斷CD80/CTLA4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
20 .如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述腫瘤微環(huán)境中的一種或多種炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生被減少。
21 .如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述一種或多種炎性細(xì)胞因子選自由白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-12、轉(zhuǎn)化生長因子P和干擾素，組成的組。
22 .如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述腫瘤微環(huán)境中的非惡性的表達(dá)CD80的細(xì)胞被減少。
23 .如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述表達(dá)CD80的細(xì)胞是抗原呈遞細(xì)胞、源自骨髓的單核細(xì)胞或表達(dá)Tie-2的單核細(xì)胞。
24 .如權(quán)利要求2所述的方法，其中經(jīng)由所述腫瘤微環(huán)境的非惡性細(xì)胞的一種或多種惡性細(xì)胞存活信號(hào)的產(chǎn)生被減少。
25 .如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述一種或多種存活信號(hào)選自由CD40/CD40L信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、白細(xì)胞介素-1或白細(xì)胞介素-6組成的組。
26 .如權(quán)利要求2所述的方法，其中對(duì)所述惡性腫瘤的免疫力在所述受治療者中被提高。
27 .如權(quán)利要求2所述的方法，其還包括向所述受治療者施用抗癌劑，其中所述靶向CD80的治療劑和所述抗癌劑同時(shí)地或以任何順序連續(xù)地施用。
28 .如權(quán)利要求27所述的方法，其中第二治療劑選自由細(xì)胞毒素、放射性同位素、化療劑、免疫調(diào)控或免疫調(diào)節(jié)劑、抗血管生成劑、抗增殖劑、促凋亡劑、細(xì)胞抑制和細(xì)胞溶解酶(例如RNA酶^酶抑制劑(例如蛋白酶體抑制劑)和腫瘤疫苗組成的組。
29 . —種提高受治療者癌癥免疫力的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
30 .—種抑制受治療者腫瘤微環(huán)境中調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助細(xì)胞激活的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
31 .如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述腫瘤微環(huán)境包括血液的或非血液的惡性腫瘤的惡性細(xì)胞。
32 .如權(quán)利要求31所述的方法，其中所述惡性細(xì)胞是血液的惡性腫瘤的細(xì)胞。
33 .如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
34 .如權(quán)利要求33所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細(xì)胞淋巴瘤。
35 .如權(quán)利要求34所述的方法，其中所述B細(xì)胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
36 .如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述惡性細(xì)胞是非血液的惡性腫瘤的細(xì)胞。
37 .如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、結(jié)腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內(nèi)分泌腺、甲狀腺、腎上腺、垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經(jīng)、眼、腦膜的癌癥。
38 .如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑是抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段。
39 .如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
40 .如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體結(jié)合的CD80表位結(jié)合。
41 .如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與ATCC保藏編號(hào)HB-12I19所產(chǎn)生的抗體競爭結(jié)合CD80。
42 .如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)的可變區(qū)。
43 .如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)。
44 .如權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR )。
45 .如權(quán)利要求44所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
46 .如權(quán)利要求30所述的方法，借此所述腫瘤微環(huán)境中的一種或多種炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生被減少。
47 .如權(quán)利要求46所述的方法，其中所述一種或多種炎性細(xì)胞因子選自由白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-12、轉(zhuǎn)化生長因子(3和干擾素-Y組成的組。
48 .如權(quán)利要求30所述的方法，借此調(diào)節(jié)T細(xì)胞和Th2輔助細(xì)胞的增殖被減少。
49 . 一種抑制受治療者腫瘤微環(huán)境中一種或多種炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
50 .如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述一種或多種炎性細(xì)胞因子選自由白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-12、轉(zhuǎn)化生長因子P和干擾素-Y組成的組。
51 .如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述腫瘤微環(huán)境包括血液的或非血液的惡性腫瘤的惡性細(xì)胞。
52 .如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述惡性細(xì)胞是血液的惡性腫瘤的細(xì)胞。
53 .如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
54 .如權(quán)利要求53所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細(xì)胞淋巴瘤。
55 .如權(quán)利要求54所述的方法，其中所述B細(xì)胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
56 .如權(quán)利要求52所述的方法，其中所述惡性細(xì)胞是非血液的惡性,腫瘤的細(xì)胞。
57 .如權(quán)利要求56所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、結(jié)腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內(nèi)分泌腺、甲狀腺、腎上腺、;垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經(jīng)、眼、腦膜的癌癥。
58 .如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑是抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段。
59 .如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
60 .如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體結(jié)合的CD80表位結(jié)合。
61 .如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體競爭結(jié)合CD80。
62 .如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于;ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)的可變區(qū)。
63 .如權(quán)利要求62所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)。
64 .如權(quán)利要求58所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR )。
65 .如權(quán)利要求64所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
66 .如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述腫瘤微環(huán)境中的非惡性的表達(dá)CD80的細(xì)胞被減少。
67 .如權(quán)利要求49所述的方法，其中所述表達(dá)CD80的細(xì)胞是抗原呈遞細(xì)胞、源自骨髓的單核細(xì)胞或表達(dá)Tie-2的單核細(xì)胞。
68 . —種使受治療者腫瘤微環(huán)境中非惡性的表達(dá)CD80的細(xì)胞耗竭的方法，其包括向所述受治療者施用治療有效量的靶向CD80的治療劑。
69 .如權(quán)利要求68所述的方法，其中所述表達(dá)CD80的細(xì)胞是抗原呈遞細(xì)胞、源自骨髓的單核細(xì)胞或表達(dá)Tie-2的單核細(xì)胞。
70 .如權(quán)利要求68所述的方法，其中所述腫瘤微環(huán)境包括血液的或非血液的惡性腫瘤的惡性細(xì)胞。
71 .如權(quán)利要求70所述的方法，其中所述惡性細(xì)胞是血液的惡性腫瘤的細(xì)胞。
72 .如權(quán)利要求71所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
73 .如權(quán)利要求72所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細(xì)胞淋巴瘤。
74 .如權(quán)利要求73所述的方法，其中所述B細(xì)胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
75 .如權(quán)利要求68所述的方法，其中所述惡性細(xì)胞是非血液的惡性腫瘤的細(xì)胞。
76 .如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、結(jié)腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽嚢、膽管、小腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內(nèi)分泌腺、甲狀腺、腎上腺、垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經(jīng)、眼、腦膜的癌癥。
77 .如權(quán)利要求68所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑是抗CD80抗體或其CD80結(jié)合片段。
78 .如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結(jié) 合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
79 .如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保 藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體結(jié)合的CD80表位結(jié)合。
80 .如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與 ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體競爭結(jié)合CD80。
81 .如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于 ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)的可變區(qū)。
82 .如權(quán)利要求81所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC 保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)。
83 .如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC 保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR )。
84 .如權(quán)利要求83所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
85 .如權(quán)利要求68所述的方法，其中經(jīng)由所述腫瘤微環(huán)境的非惡性 細(xì)胞的一種或多種惡性細(xì)胞存活信號(hào)的產(chǎn)生被減少。
86 .如權(quán)利要求85所述的方法，其中所述一種或多種存活信號(hào)選自 由CD40/CD40L信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、白細(xì)胞介素-1或白細(xì)胞介素-6組成的組。
87 . —種治療患有惡性腫瘤的受治療者的方法，所述惡性腫瘤包括惡 性和非惡性細(xì)胞的腫瘤微環(huán)境，其中非惡性的表達(dá)CD80的細(xì)胞促成或加 重所述惡性腫瘤，所述方法包括對(duì)所述受治療者施用治療有效量的靶向 CD80的治療劑。
88 .如權(quán)利要求87所述的方法，其中所述惡性腫瘤是血液的惡性腫 瘤或非血液的惡性腫瘤。
89 .如權(quán)利要求88所述的方法，其中所述惡性腫瘤是血液的惡性腫瘤。
90 .如權(quán)利要求89所述的方法，其中所述血液的惡性腫瘤是淋巴瘤。
91 .如權(quán)利要求90所述的方法，其中所述淋巴瘤是B細(xì)胞淋巴瘤。
92 .如權(quán)利要求91所述的方法，其中所述B細(xì)胞淋巴瘤是霍奇金氏病。
93 .如權(quán)利要求88所述的方法，其中所述惡性腫瘤是非血液的惡性 腫瘤。
94 .如權(quán)利要求93所述的方法，其中所述非血液的惡性腫瘤是乳腺、 結(jié)腸、直腸、肺、口咽、下咽、食道、胃、胰腺、肝臟、膽囊、膽管、小 腸、包括腎、膀胱和泌尿道上皮的泌尿道、女性生殖道、子宮頸、子宮、 卵巢、男性生殖道、前列腺、精囊、睪丸、內(nèi)分泌腺、甲狀腺、腎上腺、 垂體腺、皮膚、骨、軟組織、血管、腦、神經(jīng)、眼、腦膜的癌癥。
95 .如權(quán)利要求87所述的方法，其中所述表達(dá)CD80的細(xì)胞是巨噬細(xì) 胞、樹突細(xì)胞或源自骨髓的抑制性細(xì)胞。
96 .如權(quán)利要求87所述的方法，其中所述靶向CD80的治療劑是抗 CD80抗體或其CD80結(jié)合片段。
97 .如權(quán)利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其CD80結(jié) 合片段是嵌合的、人源化的或人抗體。
98 .如權(quán)利要求％所述的方法，其中所述抗CD80抗體與ATCC保 藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體結(jié)合的CD80表位結(jié)合。
99 .如權(quán)利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體或其片段與 ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體競爭結(jié)合CD80。
100 .如權(quán)利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括來源于 ATCC保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)的可變區(qū)。
101 .如權(quán)利要求100所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC 保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的可變區(qū)。
102 .如權(quán)利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體包括ATCC 保藏編號(hào)HB-12119所產(chǎn)生的抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR )。
103 .如權(quán)利要求96所述的方法，其中所述抗CD80抗體是加利昔單抗。
104 .如權(quán)利要求87所述的方法，其中所述腫瘤微環(huán)境中的一種或多 種炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生被減少。
105 .如權(quán)利要求104所述的方法，其中所述一種或多種炎性細(xì)胞因 子選自由白細(xì)胞介素-2、白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-10、白細(xì)胞介素-12、 轉(zhuǎn)化生長因子p和干枕素-y組成的組。
106 .如權(quán)利要求87所述的方法，其中所述腫瘤微環(huán)境中的表達(dá)CD80 的細(xì)胞被減少。
107 .如權(quán)利要求87所述的方法，其中經(jīng)由所述腫瘤微環(huán)境的非惡性 細(xì)胞的一種或多種惡性細(xì)胞存活信號(hào)的產(chǎn)生被減少。
108 .如權(quán)利要求107所述的方法，其中所述一種或多種存活信號(hào)選 自由CD40/CD40L信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、白細(xì)胞介素-1或白細(xì)胞介素-6組成的組。
109 .如權(quán)利要求87所述的方法，其中對(duì)所述惡性腫瘤的免疫力在所 述受治療者中被提高。
110 .如權(quán)利要求87所述的方法，其還包括向所述受治療者施用抗癌 劑，其中所述靶向CD80的治療劑和所述抗癌劑同時(shí)地或以任何順序連續(xù) 地施用。
111 .如權(quán)利要求110所述的方法，其中第二治療劑選自由細(xì)胞毒素、 放射性同位素、化療劑、免疫調(diào)控或免疫調(diào)節(jié)劑、抗血管生成劑、抗增殖 劑、促凋亡劑、細(xì)胞抑制和細(xì)胞溶解酶(例如RNA酶、酶抑制劑(例如 蛋白酶體抑制劑)和腫瘤疫苗組成的組。
全文摘要
提供了包括靶向CD80的治療劑的組合物和使用這些組合物的方法，以治療疾病或病癥，在所述疾病或病癥中表達(dá)CD80的細(xì)胞或調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能促成或加重相關(guān)的病理學(xué)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101679522SQ200880017793
公開日2010年3月24日 申請(qǐng)日期2008年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月28日
發(fā)明者A·莫里納, K·哈利哈蘭, S·坦格里, S·赫, T·云 申請(qǐng)人:拜奧根Idec公司