專利名稱：一種葉酸偶聯(lián)殼聚糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用作腫瘤細胞靶向藥物載體的制備方法，具 體地說是一種葉酸偶聯(lián)殼聚糖的制備方法。
背景技術(shù)：
目前，腫瘤疾病的發(fā)病率越來越高，葉酸受體是腫瘤選擇性 藥物輸送的特異性靶點，其在卵巢癌、結(jié)腸直腸癌、肺癌、腎細 胞癌等多種腫瘤細胞膜表面的活性和數(shù)量明顯高于一般正常細 胞。由于受體與其配體的結(jié)合具有特異性、選擇性強等特點，利 用配體作為腫瘤藥物的載體，通過受體的介導(dǎo)作用，可增加藥物 在病灶局部的濃度，達到靶向治療的目的。因此，作為葉酸受體 的配體，葉酸在腫瘤預(yù)防與治療中越來越受到重視?，F(xiàn)在將葉酸 分子偶聯(lián)到藥物載體上的方法多是將葉酸制備成葉酸活性脂，或 者使用大量有機溶劑如二甲基亞砜作為液相溶劑來進行反應(yīng)，具 有一定的毒副作用。目前也有將殼聚糖進行親水改性，在水溶液 中與葉酸偶聯(lián)，制得的物質(zhì)作為腫瘤靶向載體的報道，但是其制 備方法成本較高、步驟復(fù)雜，不易于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中有機溶劑毒害性大、制備方 法復(fù)雜的不足，提供一種葉酸偶聯(lián)殼聚糖的制備方法。
實現(xiàn)上述發(fā)明目的采用以下技術(shù)方案 一種葉酸偶聯(lián)殼聚糖 的制備方法，包括葉酸和水溶性低分子殼聚糖，它按照以下步驟 制備而成
a、 稱取原料水溶性低分子殼聚糖，加入蒸餾水，攪拌至充分
溶解，用0.22jiim濾紙過濾后得到殼聚糖溶液，備用；
b、 向殼聚糖溶液中加入NaOH，調(diào)節(jié)溶液的PH值為8;
c、 在避光條件下，向殼聚糖溶液中加入葉酸，其中殼聚糖與 葉酸的質(zhì)量比為7 9: 1，攪拌，溫度升至60-80。C，其反應(yīng)時間 為50-70分鐘；
d、將反應(yīng)后的產(chǎn)物冷卻至室溫，用凝膠柱進行分離，在紫外
分光光度計上，于363nrn波長處監(jiān)測洗脫過程，用容器收集洗脫 過程中流出的第一個波峰的溶液，將其冷凍干燥22 28小時后， 得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖固體。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用水溶性殼聚糖為載體，在水溶 液中直接與葉酸偶聯(lián)，所用試劑價格低廉，無毒無害。制備方法 簡單，方便快捷，便于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明中水溶性低分子殼聚糖和制備所得的葉酸偶聯(lián) 殼聚糖的紅外圖譜。
其中a為原料水溶性低分子殼聚糖，b為葉酸偶聯(lián)殼聚糖。
具體實施例方式
下面結(jié)合附圖和實施例詳述本發(fā)明。
從圖1對比可看出，1639cm—1對應(yīng)于反應(yīng)生成的酰胺鍵的吸 收峰，由于引入了葉酸分子中的苯環(huán)使1450cm—1處得到了增強， 3420cm—1附近保留了殼聚糖原有伸縮振動譜帶，2970cm—1附近的 吸收峰對應(yīng)于CH3中的C-H伸縮振動峰，1098cm"處的吸收峰是 醚鍵，比殼聚糖中對應(yīng)的振動吸收有所增強。
殼聚糖是一種帶正電的天然多糖，本身具有無毒、無刺激性、 無致突變的性質(zhì)，是一種具有良好生物相容性和生物降解性的高 分子材料。
實施例1
a、 將0.3g的水溶性低分子殼聚糖放在容器中，緩慢地向水溶 性低分子殼聚糖中加入100ml蒸餾水，攪拌，其充分溶解后停止 加蒸餾水，將溶液用0.22pm的濾紙過濾，得到殼聚糖溶液，備用。
b、 向殼聚糖溶液中加入NaOH，調(diào)節(jié)直至溶液的PH值為8。
c、 在避光的條件下，向PH值為8的殼聚糖溶液中加入0.05g 葉酸，攪拌，溫度升至70。C后，反應(yīng)時間為60分鐘。
d、 將反應(yīng)后的產(chǎn)物冷卻至室溫，用SephadexG-lO葡聚糖凝 膠柱進行分離，用紫外分光光度計進行檢測，在其363nm波長處
監(jiān)測洗脫過程，用容器收集洗脫過程中流出的第一個波峰的溶液，
將收集的該溶液冷凍干燥24小時后，得到淡黃色的葉酸偶聯(lián)殼聚 糖固體。
實施例2
a、 將0.9g的水溶性低分子殼聚糖放在容器中，緩慢地向水溶 性低分子殼聚糖中加入300ml蒸餾水，攪拌，其充分溶解后停止 加蒸餾水，將溶液用0.22,的濾紙過濾，得到殼聚糖溶液，備用。
b、 向殼聚糖溶液中加入NaOH，調(diào)節(jié)溶液，直至溶液的PH 值為8。
c、 在避光的條件下，向PH值為8的殼聚糖溶液中加入O.lg 葉酸，攪拌，溫度升至7(TC后，反應(yīng)時間為70分鐘。
d、 將反應(yīng)后的產(chǎn)物冷卻至室溫，用SephadexG-10葡聚糖凝 膠柱進行分離，用紫外分光光度計進行檢測，在其363nm波長處 監(jiān)測洗脫過程，用容器收集洗脫過程中流出的第一個波峰的溶液， 將收集的該溶液冷凍干燥28小時后，得到淡黃色的葉酸偶聯(lián)殼聚 糖固體。
經(jīng)過上述方法制備后，所得到的葉酸偶聯(lián)殼聚糖的結(jié)構(gòu)式為-
其中R為:<formula>formula see original document page 5</formula>或<formula>formula see original document page 6</formula>
通過上述方法制得的葉酸偶聯(lián)殼聚糖本身具有腫瘤靶向作 用，可用作治療腫瘤疾病的耙向藥物的載體。
權(quán)利要求
1、一種葉酸偶聯(lián)殼聚糖的制備方法，包括葉酸和水溶性低分子殼聚糖，其特征在于，它按照以下步驟制備而成a、稱取原料水溶性低分子殼聚糖，加入蒸餾水，攪拌至充分溶解，用0.22μm濾紙過濾后得到殼聚糖溶液，備用；b、向殼聚糖溶液中加入NaOH，調(diào)節(jié)溶液的PH值為8；c、在避光條件下，向殼聚糖溶液中加入葉酸，其中殼聚糖與葉酸的質(zhì)量比為7～91，攪拌，溫度升至60-80℃，其反應(yīng)時間為50-70分鐘；d、將反應(yīng)后的產(chǎn)物冷卻至室溫，用凝膠柱進行分離，在紫外分光光度計上，于363nm波長處監(jiān)測洗脫過程，用容器收集洗脫過程中流出的第一個波峰的溶液，將其冷凍干燥22～28小時后，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖固體。
全文摘要
本發(fā)明涉及葉酸偶聯(lián)殼聚糖的制備方法。它包括葉酸和水溶性低分子殼聚糖，按照以下步驟制備而成a.稱取原料水溶性低分子殼聚糖，加入蒸餾水，攪拌至充分溶解，用濾紙過濾后備用；b.向殼聚糖溶液中加入NaOH，調(diào)節(jié)pH值為8；c.在避光條件下，向殼聚糖溶液中加入葉酸，其質(zhì)量比為7～9∶1，攪拌，溫度升至60-80℃，其反應(yīng)時間為50-70分鐘；d.將反應(yīng)后的產(chǎn)物冷卻至室溫，用凝膠柱進行分離，在紫外分光光度計上，于363nm波長處監(jiān)測洗脫過程，收集第一個波峰的溶液，將其冷凍干燥22～28小時后，得到葉酸偶聯(lián)殼聚糖固體。本發(fā)明采用水溶性殼聚糖為載體，在水溶液中直接與葉酸偶聯(lián)，所用試劑價格低廉，制備方法簡單，便于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61K31/519GK101361982SQ20081016692
公開日2009年2月11日 申請日期2008年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月27日
發(fā)明者呂朝霞, 尚曉嫻, 蛟 杜 申請人:河北理工大學(xué)