專(zhuān)利名稱(chēng)：：擬人參皂苷元在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及擬人參皂苷元的新用途，更具體地說(shuō)涉及該化合物在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：血小板的基本生理功能是黏附、聚集、釋放和分泌顆粒內(nèi)容物(如ADP、5-羥色胺)，靜息狀態(tài)的血小板轉(zhuǎn)變?yōu)樯砉δ軤顟B(tài)即為血小板的活化。血小板活化后能提供磷脂表面，促進(jìn)血液凝固的進(jìn)行，形成由纖維蛋白包繞血小板組成的血栓。因此血小板作為血液的一種有形成分，在生理的A血和病理的血栓形成過(guò)程中，扮演了非常重要的角色。臨床研究表明，臨床上常見(jiàn)的心腦血管疾病如高血壓、心絞痛、心肌梗塞、腦梗塞及腦出血等疾病，均與血小板功能變化和血液流變學(xué)異常有關(guān)?？寡“逅幬锬軌蚩寡“逭掣叫院途奂?，防止血栓形成，有助于防止動(dòng)脈粥樣硬化和心肌梗塞。常用的抗血小板藥物有①阿司匹林抑制TXA2的生成，較少影響PGl2的產(chǎn)生而起作用。但長(zhǎng)期應(yīng)用，阿司匹林有可能引起胃炎或胃出血，所以應(yīng)用時(shí)應(yīng)定期檢査大便潛血。②潘生丁環(huán)核苷磷酸二酯酶抑制藥，抑制腺苷進(jìn)入血小板，使血小板內(nèi)環(huán)磷酸腺苷增高，抑制血小板的聚集。潘生丁小劑量無(wú)效，大劑量時(shí)10%病人可能引起頭痛、頭暈、低血壓，甚至虛脫等副作用，故應(yīng)與阿司匹林合用減少劑量，防止副作用發(fā)生。③噻氯匹定和氯吡格雷選擇性地抑制二磷酸腺苷(ADP)與它的血小板受體的結(jié)合及繼發(fā)的ADP介導(dǎo)的糖蛋白GPIIb/IIIa復(fù)合物的活化，因此可抑制血小板聚集。但應(yīng)用此類(lèi)藥物同時(shí)可出現(xiàn)消化系統(tǒng)癥狀如惡心、嘔吐、腹瀉等以及血液系統(tǒng)癥狀如出血、血小板減少等。PGE^BPGI2:兩藥具有強(qiáng)烈抑制血小板凝集和擴(kuò)張血管作用，但由于二者生物活性較多，故其不良反應(yīng)亦較多.主要有發(fā)燒、頭暈、惡心、頭痛、嘔吐和注射時(shí)肢體有疼痛、腫脹、發(fā)紅、瘙癢等。擬人參皂苷元(Ocotillol)是由擬人參皂苷F(從西洋參中分離提取的四環(huán)三萜類(lèi)人參二醇型皂苷)轉(zhuǎn)化得到的苷元。已經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道了擬人參皂苷元具有解毒、促智、治療老年性癡呆的作用，在中國(guó)專(zhuān)利CN200410023510.7中公開(kāi)了擬人參皂苷元的制備方法。綜上所述，目前常用的抗血小板藥都有較重的不良反應(yīng)，因此開(kāi)發(fā)研制新型有效、不良反應(yīng)小的治療或預(yù)防血小板聚集的藥物已經(jīng)刻不容緩。本發(fā)明人通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)擬人參皂苷元具有抗血小板聚集的作用。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>擬人參皂苷元結(jié)構(gòu)式
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了擬人參皂苷元(Ocotillol)或其鹽在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用。其中所說(shuō)的鹽是指其藥學(xué)上可以接受的鹽。本發(fā)明所述的擬人參皂苷元在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用，其使用劑量范圍為7mg400mg/天，優(yōu)選7mg110mg/天。本發(fā)明所述的擬人參皂苷元可以按如下所述的方法制備，具體方法如下式(I)11=糖基首先從西洋參、西洋參莖葉、越南人參、越南人參莖葉等人參屬植物中獲得的富含擬人參皂苷元為母核的結(jié)構(gòu)通式如式(I)所示的人參皂苷，如含有擬人參皂苷Fu、擬人參皂苷-RT4、珠子參苷(majonoside)-R,、珠子參苷(majonoside)-R2或它們的混和物。加入由堿金屬氫氧化物與低級(jí)醇類(lèi)組成的溶液中，堿濃度一般為0.2%60%，優(yōu)選濃度為520%，在高壓或常壓下加熱進(jìn)行堿降解，徹底水解掉人參皂苷式(1)6位上的糖鏈，從而獲得富含擬人參皂苷元的降解產(chǎn)物，反應(yīng)液傾入冷水，攪拌，析出固體，用水洗至中性，過(guò)濾。得到擬人參皂苷元粗品，經(jīng)硅膠柱色譜分離。洗脫劑由底劑和極性調(diào)節(jié)劑組成。底劑可以是石油醚、氯仿、正己垸、環(huán)己烷、正戊烷中的一種或幾中，極性調(diào)節(jié)劑可以是乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、丙酮、乙醚、含有l(wèi)-4個(gè)碳原子的一元醇中的一種或幾種。由擬人參皂苷元粗品經(jīng)重結(jié)晶得精制擬人參皂苷元。重結(jié)晶溶劑可以是乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙酮以及它們組成的混合劑。經(jīng)硅膠柱層析或重結(jié)晶，從而獲得擬人參皂苷元單體。本發(fā)明中使用的擬人參皂苷元可以單獨(dú)使用或以藥物組合物形式使用。本發(fā)明還提供了含有擬人參皂苷元或其鹽、用于治療和預(yù)防血小板聚集作用的藥物組合物。藥物組合物包括作為活性成分的擬人參皂苷元及藥用載體。該藥物組合物可以通過(guò)口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉或靜脈途徑給藥，以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、糖漿、口嚼劑、貼劑或口服液的形式存在。本發(fā)明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。本發(fā)明以阿司匹林和氯吡格雷作為陽(yáng)性藥，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，擬人參皂苷元能明顯的抑制血小板聚集，可以顯著的改善血液流變學(xué)指標(biāo)，低、中、高切變率的全血粘度、血漿粘度及紅細(xì)胞聚集指數(shù)均顯著降低，與陽(yáng)性藥持平。具體實(shí)施方式-以下實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。實(shí)施例1:擬人參皂苷元的制備將10升甘油加入小型具油浴加熱和攪拌的反應(yīng)罐中，再分別加入lkg的氫氧化鈉和lkg西洋參莖葉皂苷，攪拌，常壓下持續(xù)加熱升溫，升溫至21(TC下保溫反應(yīng)40分鐘，反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液傾入60倍冷水中并攪拌，析出沉淀。靜置，過(guò)濾，水洗至中性，即得擬人參皂苷元粗品。再將此粗品經(jīng)硅膠柱層析，以正己烷/乙酸乙酯(2:1)洗脫，回收溶劑，以甲醇一乙酸乙酯混合溶劑重結(jié)晶得到40g擬人參皂苷元，收率4%，經(jīng)HPLC檢測(cè)含量97%。實(shí)施例2:擬人參皂苷元片劑的制備稱(chēng)取由實(shí)施例1得到的擬人參皂苷元10.OOg，將其與60g淀粉混勻，加入15%淀粉漿適量，混合制成軟材，14目篩制粒，7(TC干燥，14目篩整粒后，加入0.5g硬脂酸鎂和lg羧甲基淀粉鈉，混勻，壓制200片，100mg/片。實(shí)施例3:擬人參皂苷元膠囊的制備稱(chēng)取由實(shí)施例1得到的擬人參皂苷元50g，葡甲胺45g，與95g微晶纖維素用5鬼PVP-乙醇溶液制粒，干燥后，裝入膠囊，規(guī)格為50mg/粒(以擬人參皂苷元計(jì))。實(shí)施例4:注射用擬人參皂苷元凍干粉針的制備稱(chēng)取由實(shí)施例.l得到的擬人參皂苷元1.00g，加入20ml乙醇使苷元完全融解，再加入40ml甘油混合均勻。將0.20g鹽酸丁卡因、0.02g的EDTA-2Na加入到40ml注射用水中，使輔料完全溶解。并將上述水溶液加入到藥物溶液中，混合均勻。以0.01mol/L的氫氧化鈉和稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值為5.5±1.0。加入O.1%的針用活性炭85度保溫15分鐘，G3垂熔玻璃漏斗過(guò)濾，0.22ym的微孔濾膜過(guò)濾。濾液分裝于7ml西林瓶中，每支裝量2ml。分裝好的注射劑半壓塞，于凍干機(jī)凍干。凍干后壓塞，壓鋁蓋制成凍干粉針劑，20mg/支。試驗(yàn)例l:擬人參皂苷元對(duì)大鼠血小板聚集功能的影響1材料擬人參皂苷元(Ocotillol):按照實(shí)施例l方法得到的產(chǎn)品。阿司匹林批號(hào)0607233，青島黃海制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)。硫酸氯吡格雷片藥品注冊(cè)證號(hào)H20030579;分裝批號(hào)0703078;產(chǎn)品批號(hào)1991;SanofiWinthropIndustrie生產(chǎn)。羧甲基纖維素鈉批號(hào)20010829，上海化學(xué)試劑公司。二磷酸腺苷(ADP):批號(hào)061101，上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司。枸櫞酸鈉批號(hào)061211，北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司。TDL-40B型離心機(jī)上海安亭儀器廠(chǎng)生產(chǎn)。LBY-NJ血液凝聚儀北京普利生精密儀器研究中心。DL-4000B離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)。DS-671電子天平上海壽岡電子有限公司制造。動(dòng)物清潔級(jí)Sprague-Dawley大鼠，雄性，體重200g-250g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。2方法與結(jié)果動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組(等容量溶劑)、阿司匹林組(ASA，50mg/kg)、氯吡格雷組(7mg/kg)、擬人參皂苷元0.625mg/kg組、擬人參皂苷元1.25mg/kg組、擬人參皂苷元2.5mg/kg組、擬人參皂苷元5mg/kg組和擬人參皂苷元10mg/kg組，每組8只，灌胃給藥，1次/d，連續(xù)5d。于末次給藥后lh，以3%戊巴比妥鈉分別麻醉大鼠(30mg/kg)，經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，以3.8%枸櫞酸鈉溶液抗凝(血抗凝劑=9:1)，1000r/min離心6min，分離富血小板血漿(PRP)，剩余部分再以3000r/min離心15min，分離貧血小板血漿(PPP)，按比濁法以ADP(252pmol/L)為誘導(dǎo)劑，用LBY-NJ血液凝聚儀測(cè)定5min內(nèi)血小板聚集率，并按以下公式計(jì)算血小板聚集抑制率，數(shù)據(jù)用；is表示，以組間？檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見(jiàn)表l。血小板聚集抑制率=空白對(duì)照血=反=^;°==，、板聚鮮％><腦空白對(duì)照管血小板聚集率％根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，擬人參皂苷元各劑量組可明顯抑制體內(nèi)血小板聚集，藥效與陽(yáng)性藥阿司匹林和氯吡格雷持平。表l擬人參皂苷元對(duì)血小板聚集率的影響(S力，《=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與空白對(duì)照組比較**P<0.01，***P<D.001試驗(yàn)例2:擬人參皂苷元對(duì)大鼠血液流變學(xué)的影響1材料擬人參皂苷元(OCOtillol):按照實(shí)施例1方法得到的產(chǎn)品。阿司匹林批號(hào)0607233，青島黃海制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)。羧甲基纖維素鈉批號(hào)20010829，上?；瘜W(xué)試劑公司。肝素鈉注射液批號(hào)20030311，天津市生物化學(xué)制藥廠(chǎng)。TDL-40B型離心機(jī)上海安亭儀器廠(chǎng)生產(chǎn)。DS-671電子天平上海壽岡電子有限公司制造。動(dòng)物清潔級(jí)Sprague-Dawley大鼠，雄性，體重200g-250g，山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SYXK(魯)20030020。2方法與結(jié)果動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組(等容量溶劑)、阿司匹林組(ASA，50mg/kg)、擬人參皂苷元0.625mg/kg組、人參皂苷元1.25mg/kg組、擬人參皂苷元2.5mg/kg組，擬人參皂苷元5mg/kg組和擬人參皂苷元10mg/kg組，每組8只，灌胃給藥，l次/d，連續(xù)5d。于末次給藥后2h，收集血液，取約5ml血，肝素抗凝，進(jìn)行血液流變學(xué)檢查，分別測(cè)定低、中、高切變率下的全血粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與空白對(duì)照組相比，擬人參皂苷元各組均可明顯改善血液流變學(xué)指標(biāo)，低、中、高切變率的全血粘度、血漿粘度及紅細(xì)胞聚集指數(shù)均顯著降低，結(jié)果與陽(yáng)性藥阿司匹林持平。表2擬人參皂苷元對(duì)血液流變學(xué)指標(biāo)的影響(is，《=8)組別劑量(mg/kg)全血低切粘度(3/S)全血中切粘度(30/S)全血高切粘度(200/S)血漿粘度(mPa.s)紅細(xì)胞聚集指數(shù)空白對(duì)照組15.92±1.398.29±0.856.58±0.652.18±0,0511.01±1.05阿司匹林組5013.81±1.23*6.97±0.69*5.56士0.52"1.38±0.07***9.56±0.33*擬人參皂苷元組0.62513.73±1.477.30±0.745.18±0.501.72±0.02***7.62±0.33**1.2513.54±0.976.88±0.52*4.83±0.2**1.72±0.06***6.18±0.21**2.512.37±0.41**6.70±0.27**4.82±0.22**1.44±0.17***6.50±0.22**12.57±1.2*6.66±0.61*4.74±0.41*1.3±0.02***6.76±0.40**1014.09士1.26*7.19±0.74*5.74±0.56*1.35±0.06***10.43±0,99與空白對(duì)照組比較*P<0.05，"P〈0.01,***尸<0.00權(quán)利要求1.擬人參皂苷元或其鹽在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于擬人參皂苷元的使用劑量為7mg400mg/天。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于擬人參皂苷元的使用劑量為7mg110mg/天。4、含有擬人參皂苷元或其鹽、用于治療和預(yù)防血小板聚集作用的藥物組合物。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于可以通過(guò)口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉或靜脈途徑給藥。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、糖漿、口嚼劑、貼劑或口服液形式存在。全文摘要本發(fā)明涉及擬人參皂苷元在制備抗血小板聚集藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了用于治療和預(yù)防血小板聚集，含有擬人參皂苷元或其鹽的藥物組合物。文檔編號(hào)A61K9/70GK101371847SQ200810136198公開(kāi)日2009年2月25日申請(qǐng)日期2008年7月10日優(yōu)先權(quán)日2007年7月13日發(fā)明者昕于,傅風(fēng)華申請(qǐng)人:山東綠葉制藥有限公司