專利名稱：：一類新型胰高血糖素樣肽-1(glp-1)類似物的用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一類新型胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)類似物，其用于制備藥品的用途，具體的說是制備治療糖尿病藥物的用途。
背景技術：
：糖尿病尤其是2型糖尿病是繼腫瘤、心血管疾病之后第三大嚴重威脅人類健康的慢性非傳染性疾病。目前，全球約有2億糖尿病患者，預計到2025年將增加至3億。2007年，中國有4000萬糖尿病患者，僅次于有4090萬糖尿病人的印度居全球第二位，預計到2025年，我國糖尿病患者人數(shù)將突破6000萬，其中2型糖尿病約占糖尿病患者總?cè)藬?shù)的90%以上。現(xiàn)有的一些口服降糖藥物是目前治療糖尿病的主要方法。主要有1.促胰島素分泌的磺酰脲類降糖藥(如格列美M/glimepiride)，其通過抑制P-細胞的鉀通道，刺激胰島素分泌。2.提高胰島素敏感性的藥物如PPARy激動劑或PPARVa雙重激動劑噻唑垸二酮類藥物(如羅格列酮/rosiglitazone)，其可以通過促進外周組織攝取葡萄糖，對于提高胰島素敏感性、調(diào)節(jié)脂肪代謝和保護胰島P-細胞有積極意義。3.通過減少肝臟葡萄糖輸出控制血糖的雙胍類藥物等。但由于糖尿病病因的復雜性，雖然這些口服降糖藥物的療效確切，可也存在很多不足。1.磺酰脲類降糖藥物治療2型糖尿病的藥理機制為非葡萄糖依賴，容易造成低血糖；而且由于磺酰脲類藥物是通過阻斷胰島(3-細胞上的鉀通道，促進胰島素分泌，這易引起j]夷島P-細胞的進一步損傷。2.噻唑垸二酮類藥物可能引起體重增加和周圍性水腫并誘發(fā)心力衰竭。3.雙胍類降糖藥如二甲雙胍有吋會出現(xiàn)劑量相關的胃腸道副作用，且肝、腎功能障礙者還有發(fā)生乳酸酸中毒的危險。此外，以上口服糖尿病藥物在治療2型糖尿病癥中其最大的不足是無法逆轉(zhuǎn)糖尿病的病因，即"治標不知本"，對于胰島(3-細胞的生長、分化、增殖無明顯作用。4.目前，治療2型糖尿病最有效的方法是注射胰島素。但是使用胰島素會出現(xiàn)低血糖的危險。'受到劑量大小、注射部位、注射途徑、個體差異或注射后未進食等因素的影響，如果使用胰島素稍有不慎，就會出現(xiàn)嚴重的低血糖副作用。因此尋找能夠安全的降血糖同時可以逆轉(zhuǎn)糖尿病病因的藥物是目前糖尿病藥物研究的當務之急。胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)是一種葡萄糖依賴性腸降血糖多肽激素，GLP-1刺激胰島素分泌而不出現(xiàn)低血糖，這種葡萄糖依賴性的促胰島素分泌特性，避免了糖尿病治療中常存在的產(chǎn)生低血糖癥的危險，這些生理功能使開發(fā)GLP-l作為一種2型糖尿病治療藥物具有廣闊的前景。胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)主要由末端空腸、回腸和結(jié)腸的L細胞所分泌的葡萄糖依賴性腸降血糖多肽激素，在體內(nèi)有多種存在形式，GLP-1(736)-NH2是人體內(nèi)GLP-1主要的天然形式，約占80%;GLP-1(7~36)-NH2，氨基酸序列是HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH2。GLP-l通過作用于胰島yg-細胞膜上的受體GLP-l受體(GLP-lR)，促進胰島素的分泌。GLP-1R在胰腺^細胞膜上高度表達，是由463個氨基酸組成,屬于七次跨膜的G-蛋白偶聯(lián)受體家族，與GLP-l高度特異性結(jié)合。GLP-1與其受體結(jié)合后可以增加胰島細胞腺苷酸環(huán)化酶的活性，刺激細胞內(nèi)的第二信使cAMP的增加，導致細胞膜K+通道關閉，細胞去極化，誘發(fā)電壓依賴性的Ca"通道開放，細胞外C^+內(nèi)流，細胞漿Ca^濃度升高觸發(fā)胰島素的釋放,此外cAMP水平升高，又激活cAMP依賴的蛋白激酶A和磷酸化酶,進而剌激y-細胞胰島素基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，刺激^細胞的增值和分化。胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)具有多種生物學效應。如下1、具有血糖依賴性的腸促胰島素分泌作用；2、阻止胰腺A細胞退化，刺灣站-細胞的增值和分化；3、誘導前胰島素基因的轉(zhuǎn)錄，促進前胰島素的生物合成；4、增加胰島素的敏感性；5、增加生長抑素分泌Z抑制胰高血糖素的產(chǎn)生(此作用也是血糖依賴性)；6、抑制胃酸分泌，延遲胃排空；7、通過作用于丘腦下部的中樞抑制食欲，降低食物攝取量等作用。GLP-1的N末端6個氨基酸為GLP-1與其受體結(jié)合部位，在體內(nèi)，血漿中的二肽基肽酶IV(dipeptidyIpeptidaseIV，DPPIV)特異性識別并且切割GLP-1的N末端ffis7-Ala8二月t其體內(nèi)半衰期不足5分鐘。His7-Alas殘基喪失，不僅導致GLP-1完全喪失生物活性，其降解產(chǎn)物GLP-1(936)-NH2還對GLP-1受體具有抑制作用。是通過改變GLP-1的N端DPPIV酶解部位氨基酸Alas，可以以抑制其被DPPIV的水解作用。此外，天然GLP-1類似物Exendin-4是從美國西南部一種大毒蜥的唾液中分離的含39個氨基酸殘基的多肽，它與哺乳動物的GLP-1大約有53免的同源性。研究發(fā)現(xiàn)Exendin-4與GLP-1有fk似的生理功能，而且能抵抗DPPIY的降解，其體內(nèi)有效作用時間約56h，目前己經(jīng)美國在上市，而且研究表明Exendin-4與GLP-1受體的親和力比胰高血糖素樣肽-1與GLP-1受體的親和力更高，活性更好。Exendin4與胰高血糖素樣肽-1除了在DPPlV酶解位點Ala8處不同外，其二級結(jié)構與胰高血糖素樣肽-1也有不同之處。GLP-1從Thr13到Glu21，和從Gln23到Gly35為兩條穩(wěn)定的a螺旋二級結(jié)構，而Exendin-4相應的序列的序列為一條穩(wěn)定的a螺旋二級結(jié)構。這是因為GLP-1中Gly22為柔性結(jié)構，而Exendin4相應的氨基酸為Glu，具有促螺旋作用。所以Exendin-4比GLP-1更加穩(wěn)定，這可能主要也是由于其二級結(jié)構的差別造成。多肽可以通過基因工程的方法或者化學合成的方法得到，1963年Merrifield創(chuàng)立并開發(fā)了固相合成多肽的方法。固相多肽合成一般有兩種策略即Boc/Bzl正交保護固相合成策略和Fmoc/tBu正交保護固相合成策略，其中Fmoc/tBu正交保護固相合成策略則反應條件溫和的多。當近年來微波技術運用于多肽的固相合成中后，使多肽的合成技術產(chǎn)生了一個飛躍。微波促進化學反應是由于其使極性分子在微波場中快速旋轉(zhuǎn)，使得一些反應速率較常規(guī)加熱方法快10到1000倍，而且產(chǎn)率大大提高。如何高效的合成長肽(大于30肽)在世界上仍然是一個挑戰(zhàn)，而使用微波促進固相合成多肽，可以克服困難肽序，合成傳統(tǒng)固相方法無法得到的多肽.而且合成時間大大縮短，且顯著提高多肽粗品純度及收率，使得產(chǎn)品的純化大大方便，只要經(jīng)過一次制備型HPLC就能得到純度較高的產(chǎn)品。因此，我們在GLP-.類似物的合成中采用此種方法快速高效的合成得到GLP-l系列類似物。
發(fā)明內(nèi)容胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)是葡萄糖依賴性的促胰島素分泌腸降血糖多肽激素，其治療糖尿病的優(yōu)點突出，但是其生物半衰期短。本發(fā)明的目的是提供一類新型胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)類似物的用途，具體的說是制備治療糖尿病藥物的用途，其對DPPIV的穩(wěn)定性更高，降血糖活性更好。針對GLP-1易被DPPIV及體內(nèi)其它活性酶(如中性肽鏈內(nèi)切酶neutralendopeptidase24.11水解)的缺點，首先將其易被水解部位的氨基酸用其它氨基酸替換，以期望達到延長半哀期的效果；再在此基礎上將GLP-l的柔性部位殘基Gly22替換為具有促螺旋作用的氨基酸Glu，使GLP-1的柔性連接區(qū)的(x螺旋程度增加，以進一步增加其降糖活性。合成了一類GLP-1衍生物。其特征在于其結(jié)構具有以下形式ffis-Xaa-Glu-Gl)'-Thr-Phe-Thr-Ser匿Asp-VaI-Ser層Ser-Tyr-Leu-Glu-Gl)a-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ-IDNO:1)Xaa:Giy，Phe'Asp，Met，Ile，Thr,Ser，Val，Leu,Lys,Glu。本發(fā)明的優(yōu)點在于1.提出的一種GLP-1類似物，其穩(wěn)定性提高，作用時間延長。具有抗DPPIV等酶解作用，生物半衰期較GLP-1原型長。2.將GLP-1的柔性部位殘基Gly22替換為具有促螺旋作用Glu，使GLP-1的柔性連接區(qū)的ot螺旋程度增加，將GLP-1的肽鏈主要中間部分的結(jié)構固定為一條穩(wěn)定的a螺旋結(jié)構，其二級結(jié)構被改造為活性優(yōu)勢結(jié)構，提高了其與GLP-1受體的親和能力，在GLP-1原型的基礎上進一步提高了GLP-1的降糖活性。上文對本發(fā)明做了一般性描述，下面附圖用于說明本發(fā)明的具體實施方案。其中圖1顯示的是GLP-1(7~36)-NH2與DPPIV溫孵0h和4h的HPLC分析譜圖2顯示的是改造后的Gly8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2與DPPIV溫孵Oh和4h的HPLC分析譜圖,具體實施例方式,在本說明書全文中采用以下縮寫Et3N:三乙胺；NMM:N-甲基嗎啉；D正A:N，N'-二異丙基乙胺；DMF:二甲基甲酰胺；DMSO:二甲亞砜；DCM:二氯甲垸；FmOC:N-9芴甲氧羰基；DIC:N，N，-二異丙基碳二亞胺；CDI:N，N，-羰基二咪唑；DMAP:4-二甲氨基吡疲；HOSU:N-羥基琥珀酰亞胺；EDC.HC1:l-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；HATU:2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯；HBTU:苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸酯；HCTU:6-氯苯并三氮唑-U,3，3-四甲基脲六氟磷酸酯；HOAT:l-羥基-7-偶氮苯并三氮唑；HOBT:l-羥基-苯并三氮唑；PyBOP:六氟磷酸苯并三唑-l-基-氧基三吡咯垸基磷；HPLC:高效液相色譜；ESI-MS:電噴霧質(zhì)譜；Gly:甘氨酸；Ser:絲氨酸；Ala:丙氨酸；Thr:蘇氨酸；Val:纈氨酸；lie:異亮氨酸；Leu:亮氨酸.Tyr:酪氨酸；Phe:苯丙氨酸His:組氨酸；Pro:脯氨酸；Asp:天門冬氨酸；Met:蛋氨酸；Gill:谷氨酸；Trp:色氨酸；LyS:賴氨酸；Arg:精氨酸。Asn:天冬酰胺；Gin:谷氨酰胺。本發(fā)明是通過下列實施例來進行說明的，但這些實施例不做任何限制本發(fā)明的解釋。-實施例1Qy8-GIu22-GLP-(7~36)-NH2(SEQ.IDNO:2)的微波促進固相合成(1)樹脂的溶脹稱取Fmoc-rinkamide-MBHAResin50mg(取代量0.4mmol/g)，經(jīng)7mLDCM溶脹30min，抽濾去DCM，再用10mLNMP溶脹30min，最后分別用NMP，DCM，NMP7mL沖洗干凈。(2)微波促進Fmoc保護基的脫除將溶脹好的樹脂放入反應器中，加入7mL含0.1MHOBT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液，在微波反應器中反應1min，微波功率為15W，反應溫度控制在50°C以內(nèi)，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻，反應結(jié)束后濾去溶液；再加入7mL含O.lMHOBT的25免哌啶/NMP(V/V)溶液在微波反應器中再反應4min，微波功率為25W，反應溫度控制在50'C，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻。反應結(jié)束后濾去溶液，用NMP洗滌干凈。得到脫去初始連接的Fmoc保護基的樹脂。(3)微波促進Fmoc-Arg(Pbf)-rinkamide-MBHAResin的合成將Fmoc-Arg(Pbf)-OH(0.04mmol)，HBTU(0.04mmol)，HOBT(0.04腿ol)禾口DIPEA(0.08mmol)溶于10mLNMP中，再將此溶液加入上面的樹脂中，在微波反應器中反應7min，微波功率為25W，反應溫度控制在50匸，使用空氣壓縮機壓縮空氣冷卻。反應結(jié)束后濾除反應液，用DCM和NMP各7mL洗滌樹脂3次。(4)偶合效率的檢測用茚三酮法或者溴酚蘭法定性檢測樹脂的偶合效率，顯色反應為陰性即可進入下一個偶合循環(huán)。茚三酮法取少量樹脂顆粒用乙醇洗滌，放入透明小瓶中加入5%茚三酮乙醇、KCN口比啶溶液(2ml0.001MKCN稀釋于98ml吡啶中)、80%苯酚乙醇溶液各2滴，于100'C加熱5分鐘，如果樹脂顯藍色即為陽性。溴酚蘭法取少量樹脂顆粒用二甲酰乙酰胺洗滌，放入透明小瓶中加入3滴1%的溴酚藍二甲基乙酰胺溶液，常溫下振搖3分鐘，如果樹脂顯藍色即為陽性。(5)肽鏈的延長按照Gly8-Glu22-GLP-(736)-NH2的序列，重復上述脫保護和偶合的步驟依次連接上相應的氨基酸，偶合微波促進反應時間520min不等。得到連有G.y8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2的樹脂。(6)樹脂上多肽的裂解將上述得到的連有Gly8-Gu22-GLP-(7~36)-NH2的樹脂放入反應瓶中，各加入裂解劑RegeantK(TFA/苯甲硫醚/水/苯酚/EDT，82.5:5:5:5:2.5,V/V)10mL，先在0。C下振搖30min，再在常溫下反應3h。反應結(jié)束后抽濾，加少量TFA和DCM洗滌三次，合并濾液。將濾液加入大量的冰乙醚中析出白色絮狀沉淀，冷凍離心得到目標多肽的粗品。最終得到Gly8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2粗品64.4mg，收率為95.9%。(7)Gly8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2粗品的純化將上面得到的Gly8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2粗品，溶于少量的水中，用島津制備型反相HPLC純化粗品。純化中采用C18反相制備柱(340mmx28mm，5(im);流動相A:0.1%TFA/水(V/V)，流動相B:0.1呢TFA/乙腈(V/V);流動相梯度流動相B20X65X，40min;流速為6mL/min;檢測波長為214nm。收集的溶液凍干得純品，最終得到純品29.7mg。ESI-MSm/z:found[M+3H廣1119.5，[M+4Hf十840.0，[M+5H])+680.0;calu[M+3H]J+1119.6，[M+4H]4+839.9,[M+5H]5+679.8。理論相對分子質(zhì)量為3283.6，實際相對分子量為3355.7。實施例211根據(jù)實施例l所述的方法，根據(jù)相應的序列合成得到實施例228的多肽，通過電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)確證各自的分子量。實施例2ffis-Phe-Glu-G]v-Thr-Phe-Thr-SCT匿Asp-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu陽Glu-GlTi-Ala-Aa-Lvs-Gu-Phe-I1e-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:3);理論相對分子質(zhì)量為3445.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1149.4，[M+4H]4+862.4,[M+4H+K]5+697.6:calu[M+3H產(chǎn)1149.6，[M+4H]4+862.5,[M+4H+K產(chǎn)697.8。實施例3His-Asp-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu-GIn-Ala-Ala-Lvs-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:4);理論相X寸分子質(zhì)量為3413.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1138.5,[M+4H]4+854.3，[M+5H]5+691.3;calu[M+3H]3+1138.9,[M+4H]4+854.4,[M+4H+K]5+691.4。實施例4ffis-M改-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-AIa-Lvs-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:5);理論相對分子質(zhì)量為3429.9。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1144.2，[M+4H]4+858.4，[M+3H+Na]4+864.0,[M+5H產(chǎn)687.0;calu「M+3H]3+1144.3，[M+4H]4+858.5，[M+3H+Na]4+864.0,[M+5H]5+687.0。實施例5ffis-IJ^-Glu-GIy-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:6);理論相對分子質(zhì)嚴為34]i.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1138.2,[M+4H]4+854.0，[M+5H]5+683.4;calu[M+3H]3+1138.3,[M+4H]4+854.0，[M+5H]5+683.4。實施例6His-Thr-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Scr-Asp-Val-Ser-Ser-IVr-Leu-GIu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lvs-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:7);理論相對分子質(zhì)量為3399.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1134.2,[M+4H]4+850.9，[M+5H]5+681.0;calu[M+3H]3+1134.3，[M+4H]4+850.9,[M+5H]5+681.0。實施例7His-Ser-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lvs-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:8);理論相對分子質(zhì)量為3385.7。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1129.7,[M+4H]4+847.6，[M+5H]5+678.5;calu[M+3H]3+1129.6,[M+4H]4+847.4，[M+5H]5+678.3。實施例8His-:^]-Glu-Gy-Tlir-Phe-Thr-Ser-As-Va！-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-GIu-Gln-A!a-Ala-Lys-GIu-Phe-Iie-Ala-Trp-Leu-VaI-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:9);論相對分亍質(zhì)量為3397.8。ESi-MSm/z:found[M+3H]3+1133.5，[M+4H]4+850.5,[M+5H]5+680.5;calu[M+3H]3+1133.6，[M+4H]4+850.4,[M+5H]5+680.6。實施例9His-Lsu-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-GIu-Phe-IIe-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-GIy-Arg-NH2(SEQ.IDNO:10);理論相對分子質(zhì)量為3411.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1138.3,[M+4H]4+853.9,[M+5H]5+683.5;calu[M+3H]3+1138.3，1M+4H]4+853.9，[M+5H]5+683.4。實施例10His-Lvs-Glu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gn-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:11);理論相對分子質(zhì)量為3426.8。ESI-MSm/z:found[M+3H]3+1143.2，[M+4H]4+857.7，[M+5H]5+686.3;calu[M+3H]3+1143.3，[M+4HJ4+857.7,[M+5H]5+686.4。實施例11His-Glu-GIu-Glv-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tvr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lvs-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO:12);理論相對分子質(zhì)量為3427.8。ESI-MSm/z:foundi:M+3H產(chǎn)l143.6,〖M+4Hj4+857.9，[M+5Hj5+686.6:oiiu[M+3H產(chǎn)1〗43.6，[M+4HJ4+857.9，[M+5H]5+686.6。實施例12GLP-1及其類似物對DPPIV的穩(wěn)定性實驗經(jīng)過純化后的GLP-1或其類似物5nmol和5mU的DPPIV在200濃度為50mM的Tris-HCL緩沖溶液中，37。C溫孵4h，pH7.4。最后加入10nL209fc的乙腈/水溶液終止反應。分別取0h，4h點的溫孵溶液，離心，取上清液，進HPLC分析；柱尾收集降解產(chǎn)物GLP-1(9~36)-NH2。分析采用C18反相柱(150rnrnx4.6ir皿，5jam);流動相A:0.1%TFA/水(V/V)，流動相B:0.1免TFA/乙腈(V/V);流動相梯度流動相B10免459fc，22min;流速為1m!7min;柱溫為40°C;檢測波長為214mn。如圖l，圖2所示，結(jié)果顯示未經(jīng)改造的天然GLP-1在與DPPIV溫孵4h后，基本上皆被水解為無活性的GLP-1(936)-NH2，完整的肽鏈小于10%。而改造后的GLP-1類似物與DPPIV溫孵4h后基本上都仍保持原型，未見有降解，完整的肽鏈大于90%。結(jié)果表明通過對GLP-1易被DPPIV水解的部位改造，可以使GLP-1類似物抵抗DPPIV的酶解作用，從而能保持肽鏈的完整性。實施例13GLP-1及其類似物體內(nèi)降糖活性實驗取10周齡雄性昆明小鼠(體重18-22g)，隨機分組，每組6只。只給飲水.禁食過夜。一組按照小鼠體重每千克腹腔注射18mmol的葡萄糖溶液(濃度20%)和生理鹽水其他組按照小鼠體重每千克腹腔注射18mmol的葡萄糖溶液和25nmol的GLP-1類似物溶液(10脾ol/L)。在0，15，30，45，60用血糖儀測定血糖值。如表i所示，在將其易被水解部位的氨基酸Ala8用其它氨基酸替換的基礎上，將其柔性部位殘基Gly22替換為具有促螺旋作用Glu，使GLP-1的柔性連接區(qū)的a螺旋程度增加，在GLP-1原型的基礎上進一步提高了GLP-1的降糖活性，其中Gly8-Glu22-GLP-(7~36)-NH2(SEQ.IDNO:12)是所有的GLP-1類似物中活性最好的一個。表lGLP-1及其類似物降血糖的效應<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><110>中國藥科大學'<120>—類新型胰高血糖素樣肽-l(GLP-l)類似物的用途<160>12<170>Patentlnversion3.5<210>1<211>30<212>PRT<213>人工序列<220><221>合成構建體<222>(2)..(2)<223>第2位的Xaa是GIy,Phe，Asp，Met,Ile，Thr，Ser，Val，Leu，Lys,或Glu<4()0>1HisXaaGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuG〗uGlu151015GinAlaAlaLysGluPhe工leAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>2<2]1>30<212>PRT<213>人工序列<400>2HisGlyGluGlyThrPheTl]rSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinA]aAlaLysGluPheIleAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>3<211>30<212>PRT<213>人工序列<4()()>3HisPheGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPheIleAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>4<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>4HisAspGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>5<21]>30<212>PRT<213>人工序列<400>5HisMeGiuGlyThrPheThrSe'AspVa'iSerSerT)'tLeuGluGil151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuVa]LysGlyArg202530<21()>6<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>6HisHeGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAa亇rpLeuValLysGlyArg202530<210>7<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>7HisThrGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluG]u151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>S<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>8HisSerGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>9200810124640.8說明書第11/11頁<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>9HisValGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<21()>〗()<2i》30<212>PRT<213>人工序列<400>10HisLeuGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<210>11<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>11ffisLysGluGlyThrPheThrSerAspValSerSerTyrLeuGluGlu]51015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg202530<2i0>12<211>30<212>PRT<213>人工序列<400>12ffisGiuGluG;yThrPheThrSerAspVaiSerSerTyrLeuGluGlu151015GinAlaAlaLysGluPhelieAlaTrpLeuValLysGlyArg2025301權利要求1.一種含有式I(SEQ.IDNO1)結(jié)構的胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物在制備用于治療糖尿病藥品中的用途His-Xaa-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2(SEQ.IDNO1)XaaGly，Phe，Asp，Met，Ile，Thr，Ser，Val，Leu，Lys，Glu。2.根據(jù)權利要求l的用途，其中式I化合物可以具有如下序列<sequence>seeoriginaldocumentpage2</sequence>全文摘要本發(fā)明涉及一類新型GLP-1類似物在用于制備藥品中的用途，具體的說是制備治療糖尿病藥物的用途。其對二肽基肽酶IV(DPPIV)穩(wěn)定性比GLP-1原型更好，降血糖活性更強。文檔編號A61K38/26GK101342365SQ200810124640公開日2009年1月14日申請日期2008年8月28日優(yōu)先權日2008年8月28日發(fā)明者倪帥鍵,周映紅,周金培,張惠斌,遲玉石,海錢,黃文龍申請人:中國藥科大學