專利名稱：一種用于治療乳腺癌的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及在一種抗腫瘤藥,特別是用于治療乳腺癌的藥物組合物。
背景技術(shù)：
雌激素是一種由內(nèi)分泌系統(tǒng)產(chǎn)生的類固醇類激素，它在生殖系統(tǒng)、骨組織、心血管、免 疫系統(tǒng)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)中都發(fā)揮著重要的作用[J Cell Sci, 2003; 116 (4): 585-586]。雌激素信 號(hào)傳遞系統(tǒng)在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和凋亡過(guò)程中都起到很大的作用。雌激素依賴型腫瘤，如 乳腺癌、卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌等的發(fā)生和發(fā)展都與雌激素有著密切的關(guān)系[J Steroid Biochem. Mol. Biol" 2002， 81 (1): 1-24, J Mammary Gland Biol. Neoplasia, 1998, 3(1): 49-61, Curr. Drug Targets Immune Endocr. Metabol. Disord; 2001， 1 (1): 1-12， Cancer Res" 1998, 58(23): 5367-5373， J Psychiatry Neurosci， 2002;27(1):卜27]，因此對(duì)雌激素受體的研究具有指導(dǎo)抗雌激素和雌激素 受體拮抗劑等藥物的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用和指導(dǎo)對(duì)雌激素依賴型腫瘤等疾病的治療的重要意義[Nat. Rev. Drug Discov" 2004， 3 (11): 950-964]。
目前已知的雌激素受體分為a 、 e兩種亞型。雌激素受體a在1958年被Toft和Gorski 等人[Proc. Natl. Acad. Sci. C/&4， 1966， 55 (6): 1574-1581]率先從老鼠子宮細(xì)胞中分離得到， 1986年Green [Nature,1986, 320 (6058): 134-139]和Greene [Science, 1986, 231 (4742): 1150-1154]等人克隆得到第一個(gè)分子量為66kDa的人雌激素受體ERa ; 1996年，Kuiper等 [Proc. Natl. Acad. Sci. [/&4, 1996， 93 (12): 5925-5930]從大鼠前列腺中克隆得到另一種雌激素 受體ER P 。此后，Mosselman等人[FEBS Lett. 1996, 392 (1): 49-53]從人睪丸組織中克隆得到 不完整的人ER e ; Ogawa[Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998, 243 (1): 122-126]和Moore等 人[Biochem. Biophys. Res. Commun.， 1998， 247 (1): 75-78]相繼克隆得到完整的人ERP 。雌激 素受體ERa與ERP亞型具有類似的序列組成[FEBS Lett. 2003， 546: 17-24， Biochem. Soc. Trans. 2003， 31: 56-59];它們都由三個(gè)獨(dú)立但又相互作用的功能區(qū)組成位于N端的A/B區(qū)， 中間的C區(qū)，以及C端的D/E/F區(qū)。N端的A/B區(qū)是一個(gè)不依賴于配體的轉(zhuǎn)錄活化區(qū)(AF-1)， 負(fù)責(zé)與共活化因子的結(jié)合以及轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)的靶基因(圖1)。 C區(qū)是DNA結(jié)合區(qū)，含有兩個(gè)鋅 指結(jié)構(gòu)，對(duì)于分子的二聚化以及和特定DNA序列的結(jié)合至關(guān)重要。C端的D/E/F區(qū)是一個(gè)配 體結(jié)合區(qū)，由它介導(dǎo)配體的結(jié)合，受體的二聚化，核定位，以及配體依賴的轉(zhuǎn)錄活化功能 (AF-2)。
根據(jù)傳統(tǒng)理論，雌激素通過(guò)與細(xì)胞漿或核內(nèi)的雌激素受體(ER)結(jié)合并通過(guò)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn) 錄而發(fā)揮生物功能。近十年來(lái)對(duì)雌激素信號(hào)通路又有了許多新的認(rèn)識(shí)雌激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑 包括細(xì)胞核途徑(經(jīng)典途徑)和細(xì)胞膜途徑(非經(jīng)典途徑)。因此雌激素的生物效應(yīng)，并不完
全依賴于配體-受體的細(xì)胞核激活途徑，還可通過(guò)其他信號(hào)通路發(fā)揮作用。非經(jīng)典雌激素信號(hào) 通路在不同細(xì)胞產(chǎn)生的效應(yīng)各異，例如17e雌二醇(E2P)可通過(guò)膜信號(hào)通路及P38激酶和 PI3K激酶調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞調(diào)亡，從而對(duì)心血管系統(tǒng)具有保護(hù)作用[Curr. Treat. Options Cardiovasc. Med. 2001, 3 (1): 67-79];此外，細(xì)胞內(nèi)幾個(gè)重要的信號(hào)傳導(dǎo)通路如G-蛋白信號(hào)通路、磷脂酶 C，腺苷酸環(huán)化酶及MAPK等信號(hào)傳導(dǎo)通路都和非經(jīng)典的雌激素膜信號(hào)通路有相互作用[Trends in Endocrinol. Metabol., 2002, 13， 349-354]。人們廣泛認(rèn)為血清中的高水平雌激素通過(guò)經(jīng)典及 非經(jīng)典雌激素信號(hào)傳導(dǎo)途徑刺激腺管上皮細(xì)胞的持續(xù)增生，從而參與雌激素依賴型腫瘤，如 乳腺腫瘤、子宮內(nèi)膜癌及卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展。然而非經(jīng)典雌激素膜信號(hào)通路的作用目前尚 不清楚。
Flouriot等[EMBO, 2001， 19: 4688-4700]的研究發(fā)現(xiàn)除了全長(zhǎng)的ER- a 66外還有一個(gè) 缺失了第一個(gè)外顯子所編碼的173個(gè)氨基酸的ER-ci同源異構(gòu)體。這個(gè)新發(fā)現(xiàn)的分子量為 46kDa的ER-a同源異構(gòu)體被稱為ER-a 46 ，而較早發(fā)現(xiàn)的分子量為66kDa的 ER-a [Nature, 1986, 320 (6058): 134-139; Science,1986， 231 (4742): 1150-1154]就被稱為 ER-a 66。該異構(gòu)體缺失了 AF1功能區(qū)，但保持了其他功能區(qū)的完整性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn) ER- a 46能競(jìng)爭(zhēng)性抑制ER- a 66的AF1的功能，而對(duì)AF2的作用沒(méi)有影響。
2005年另一個(gè)分子量為36kDa的全新的ER-a的同源異構(gòu)體被發(fā)現(xiàn)并克隆了，并將其命 名為ER- a 36 [Biochem. Biophy. Res. Co匪u. 2005, 336: 1023 - 1027; Proc. Natl. Acad. Sci. [75^ 2006， 103 (24): 9063-9068]。該異構(gòu)體從存在于ER-a 66基因的第一個(gè)內(nèi)含子中的啟動(dòng)子開(kāi) 始轉(zhuǎn)錄，經(jīng)一小段外顯子后，利用ER-a 66的外顯子2-6進(jìn)行編碼。因此，ER-a 36缺失兩 個(gè)轉(zhuǎn)錄功能區(qū)AF1和AF2，但保留了 DNA結(jié)合功能區(qū)和二聚化功能區(qū)。重要的是ER-a 36激 素配體結(jié)合區(qū)(ligand binding domain)缺失了 8-12螺旋區(qū)(helix)，從而完全改變了其與激 素配體結(jié)合的專一性和親和力(圖l)。因此，ER-a36具有和ER-a66及ER-e完全不同的 激素配體結(jié)合能力，為篩選針對(duì)ER- a 36的特異性配體提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
因ER- a 36缺失AF1和AF2功能區(qū)，ER- a 36本身缺失任何轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能，但可以有效 地抑制ER-a66介導(dǎo)的經(jīng)典的雌激素核信號(hào)通路。ER-a 36主要分布在細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中， 少量分布于細(xì)胞核中。ER-a 36從而可通過(guò)非經(jīng)典的雌激素膜信號(hào)傳導(dǎo)通路并經(jīng)過(guò)MAPK/ERK 信號(hào)傳遞途徑刺激細(xì)胞分裂[Proc. Natl. Acad. Sci. (7&4,2006,103 (24): 9063-9068] 。 ER- a 36 在不同的雌激素依賴型腫瘤，如乳腺癌、卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌中皆有高表達(dá)。因此ER-a 36 介導(dǎo)的信號(hào)途徑可能參與了多種雌激素依賴型腫瘤的形成和發(fā)展。
乳腺癌患者的ER-a表達(dá)水平是預(yù)測(cè)內(nèi)分泌治療是否有效及判斷預(yù)后的最重要指標(biāo)之一。 臨床上通過(guò)檢查腫瘤中雌激素受體ER-a 66的表達(dá)將其分為雌激素受體陽(yáng)性和雌激素受體陰 性乳腺癌。對(duì)于雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌患者，目前常用的治療和化學(xué)預(yù)防藥物為他莫昔芬 (Tamoxifen),他莫昔芬競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合ER-a ，阻斷雌激素與ER-a的結(jié)合。臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，
在規(guī)定的用藥劑量范圍內(nèi)，使用他莫昔芬對(duì)乳腺癌的緩解、復(fù)發(fā)的預(yù)防、減少同一患者對(duì)側(cè) 乳腺癌的發(fā)病率、延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間都有顯著的效果。
雖然他莫昔芬作為乳腺癌內(nèi)分泌治療的標(biāo)準(zhǔn)療法已有超過(guò)20年的歷史，但在長(zhǎng)期的臨床 使用中也突顯出一些缺點(diǎn)。其一盡管他莫昔芬對(duì)ER-ci陽(yáng)性患者有一定的療效，但在ER-a陰性的患者中，他莫昔芬卻未見(jiàn)明顯的效果。其二他莫昔芬作為手術(shù)后輔助用藥，服用 后會(huì)產(chǎn)生潮熱、陰道分泌異常、月經(jīng)紊亂等副作用，長(zhǎng)期使用會(huì)誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌及卵巢囊腫 一些不良病變的發(fā)生；服用5年或更長(zhǎng)時(shí)間后，其副作用將遠(yuǎn)大于其在療效方面的優(yōu)勢(shì)。其 三盡管他莫昔芬開(kāi)始都顯示出一定療效，但大約95%的乳腺癌患者最終都會(huì)對(duì)他莫昔芬失 去反應(yīng)而產(chǎn)生耐藥性，而且耐藥性會(huì)隨著用藥周期的增加而增加。耐藥性問(wèn)題也已成為影響 TAM在乳腺癌內(nèi)分泌治療中長(zhǎng)期使用的最大因素。
針對(duì)他莫昔芬較大的毒副作用，我們研究發(fā)現(xiàn)如果降低他莫昔芬用量，并與一些具有相 同療效并針對(duì)不同靶點(diǎn)的藥物進(jìn)行聯(lián)合用藥，將很有可能解決這些問(wèn)題。
IC-162、 IC-163 (其結(jié)構(gòu)式見(jiàn)II、 III)是以新發(fā)現(xiàn)的ER-ci36受體為作用靶點(diǎn)的全新 抗雌激素依賴性腫瘤新藥，IC-162是從中草藥淫羊藿中提取出來(lái)的有效成分，IC-163是 IC-162的水合產(chǎn)物。研究證明，ER-a36的表達(dá)水平與TAM先天耐藥性有重要的相關(guān)性，因 此對(duì)ER- a 36高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞、對(duì)他莫昔芬治療無(wú)效的ER- a 66陰性腫瘤，及對(duì)他莫昔 芬產(chǎn)生耐藥性的腫瘤有可能有作用。
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目前針對(duì)IC162、 IC163的作用機(jī)理及應(yīng)用領(lǐng)域等我們己經(jīng)申請(qǐng)了相關(guān)專利。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是研制一種含有他莫昔芬(I)和IC-162(II)或IC-163(111)的活性成分的 藥物組合物，利用其協(xié)同機(jī)制，提供具有抑制乳腺癌腫瘤效果好，并能相應(yīng)減低他莫昔芬的 副作用的藥物組合物。
一種用于治療乳腺癌的藥物組合物，其活性成份中含他莫昔芬(I)和IC-162(II)或 IC-163 (III)。
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其中IC-162(11)或IC-163(III)在活性成份中的重量百分含量是5鬼到95%之間。 優(yōu)選35%到65%之間。
所述藥物包括片劑，口嚼劑，膠囊劑，懸浮液劑，溶液劑。
本發(fā)明通過(guò)IC-162、 IC-163與他莫昔芬聯(lián)合用藥，達(dá)到既可降低他莫昔芬用量，減少其 誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌等副作用的發(fā)生，又可利用IC-162、 IC-163與他莫昔芬不同的作用 機(jī)理，減少他莫昔芬耐藥性的產(chǎn)生。


圖l他莫昔芬、IC-162單獨(dú)用藥及聯(lián)合用藥對(duì)MCF7細(xì)胞株中乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)情況影響， 圖2他莫昔芬、IC-163單獨(dú)用藥及聯(lián)合用藥對(duì)MCF7細(xì)胞株中乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)情況影響。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
他莫昔芬從SIGMA—ALDRICH公司購(gòu)買(mǎi)。IC-162和IC-163從上海友思生物技術(shù)有限公司 購(gòu)買(mǎi)。
實(shí)施例2藥物組合物的體外生物試驗(yàn) 試驗(yàn)1:
他莫昔芬和IC-162共同作用可誘導(dǎo)ER表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞株MCF7細(xì)胞死亡。 實(shí)驗(yàn)方法
MCF7細(xì)胞株(購(gòu)自ATCC細(xì)胞庫(kù))是一株高表達(dá)ER a 66和ER a 36的乳腺癌細(xì)胞株，用含 10X無(wú)雌激素胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基avitrogen),在37°C, 5% C02的溫箱中培養(yǎng)2天 后。按1乂104的密度接種于60mm直徑的培養(yǎng)皿中，加入濃度為0W， 1)41, 2MM Tamoxifen
(TAM)和不同濃度的IC-162 —起或不同濃度的IC-162單獨(dú)作用(用DMS0溶解稀釋)，培養(yǎng) 8天后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)存活的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞按照藥物類型和濃度進(jìn)行分組，5個(gè)培養(yǎng)皿 為一組。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
如圖l所示同時(shí)表達(dá)ER-a36和ER-a66雌激素受體的乳腺癌MCF-7細(xì)胞，在l剛低 濃度組里，IC-162處理組的活細(xì)胞數(shù)己明顯下降，而TAM組略有下降。在l剛TAM和IC-162 共同作用時(shí)，活細(xì)胞則有很明顯的下降。因此，TAM和IC-162在低濃度情況下，明顯地可以 協(xié)同作用，誘導(dǎo)MCF7細(xì)胞死亡。
試驗(yàn)2:
他莫昔芬和IC-163共同作用可誘導(dǎo)ER表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞株MCF7細(xì)胞死亡。 實(shí)驗(yàn)方法
MCF7細(xì)胞株(購(gòu)自ATCC細(xì)胞庫(kù))是一株高表達(dá)ER a 66和ER a 36的乳腺癌細(xì)胞株，用含 10%無(wú)雌激素胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基(Ivitrogen)，在37'C， 5% c02的溫箱中培養(yǎng)2 天后。按lXl(T的密度接種于60mm直徑的培養(yǎng)皿中，加入濃度為OmM， 1mM, 2幽Tamoxifen (TAM)和不同濃度的IC-163 —起或不同濃度的IC-163單獨(dú)作用(用DMS0溶解稀釋)，培養(yǎng) 8天后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)存活的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞按照藥物類型和濃度進(jìn)行分組，5個(gè)培養(yǎng)皿 為一組。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
如圖2所示同時(shí)表達(dá)ER- a 36和ER- a 66雌激素受體的乳腺癌MCF-7細(xì)胞，在1_2剛 低濃度組里，IC-163處理組的活細(xì)胞數(shù)略有增加，而TAM組則略有下降。在l-2剛TAM和 1-2MMIC-163共同作用時(shí)，活細(xì)胞則有很明顯的下降。因此，TAM和IC-163在低濃度情況下， 明顯地可以協(xié)同作用，誘導(dǎo)乳腺癌MCF7細(xì)胞死亡。
權(quán)利要求
1.一種用于治療乳腺癌的藥物組合物，其活性成中含有他莫昔芬(I)和IC-162(II)或IC-163(III)。他莫昔芬IC-162 IC-163
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中IC-162(II)或IC-163(III)在活性成分中 的重量百分含量是5%到95%之間。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其中IC-162(n)或IC-163(in)在活性成分中 的百分含量是35%到65%之間。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，所述藥物劑型包括片劑，口嚼劑，膠囊劑，懸浮液 劑，溶液劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及“一種用于治療乳腺癌的藥物組合物”，屬于化學(xué)藥物領(lǐng)域。本發(fā)明研制了一種含有他莫昔芬(I)和IC-162(II)或IC-163(III)的活性成分的藥物組合物，利用其協(xié)同機(jī)制，提供具有抑制乳腺癌腫瘤效果好，并能相應(yīng)減低他莫昔芬的副作用的藥物組合物。
文檔編號(hào)A61K31/138GK101357128SQ200810117739
公開(kāi)日2009年2月4日 申請(qǐng)日期2008年8月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月5日
發(fā)明者坤 孟, 靖 李 申請(qǐng)人:北京珅奧基醫(yī)藥科技有限公司