專利名稱：豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物藥物的制備技術(shù)，特別涉及一種豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型 的制備方法。
背景技術(shù)：
目前，豬干擾素都是以注射的途徑給藥，通常有較好的治療效果，但多
者每天需要注射1一2次，連用2 — 5天，給養(yǎng)殖業(yè)主的使用帶來(lái)很多不便，因 此將其制成長(zhǎng)效劑型便成為人們追求的目標(biāo)。已有的豬干擾素標(biāo)在需要長(zhǎng)期 頻繁注射、使用不便、生物利用度低以及藥物使用量大等缺陷。
因此，提供一種豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，有效預(yù)防和治療各 種豬病毒性疾病，是該技術(shù)領(lǐng)域科研人員急需開發(fā)的新課題之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服已有技術(shù)的不足之處，提供一種制備簡(jiǎn)單、應(yīng)用 方便、效果顯著的豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法。
一種豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在于包括如下步驟
(1) 將一定量的豬干擾素溶解在含有穩(wěn)定劑的PBS緩沖溶液，制成水相 溶液(Wl)，豬干擾素的含量為0.5 — 50毫克/毫升；
(2) 將丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(0)，丙交 脂/乙交脂共聚物的含量為0.1—0.5克/毫升；將上述含豬干擾素的水相溶 液(Wl)加入到油相溶液(0)中，油相溶液(0)與水相溶液(Wl)的比例 為20:1至2:1，使這兩種溶液在溫度5 — 30'C下攪拌混合均勻，制成初乳W1 /0，在4 —l(TC下保存；
(3) 將聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量濃 度為0.5-50%;將上述初乳W1 / O加入到水相溶液(W2)攪拌均勻，初乳W1/0 與水相溶液(W2)的比例為l : 50至1 : 200，制成復(fù)乳W1 /0/W2，在4一10。C 下保存；
(4) 將復(fù)乳Wl/0/W2轉(zhuǎn)移到NaCl水溶液中，攪拌均勻，使有機(jī)溶劑揮 發(fā)，然后離心收集微球；
(5) 所述步驟(20中的攪拌溫度為5 — 30'C，攪拌速度為500 — 8000 轉(zhuǎn)/分，攪拌時(shí)間為0.02—0.2小時(shí)；
(6) 所述步驟(3)中的攪拌溫度為5 — 3(TC，攪拌速度為100 — 3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時(shí)間為0.2—0.5小時(shí)；
(7) 所述步驟(4)中的攪拌溫度為5 —3CTC，攪拌速度為500 — 3000 轉(zhuǎn)/分，攪拌時(shí)間為0.2—0.5小時(shí)；
(8) 為了保持溶液的穩(wěn)定，加入一定量的穩(wěn)定劑，穩(wěn)定劑直接加入到所 述制備步驟(1)溶液中。
所述穩(wěn)定劑選自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一種或一種以上。 所述穩(wěn)定劑的加入量為最終溶液的O. 1% — 10%。
所述豬干擾素為重組豬基因工程干擾素IFN-a、 IFN-p和豬天然白細(xì)胞干 擾素。
本發(fā)明方法的有益效果是該注射用豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型能夠減少豬 干擾素用藥次數(shù)，是一種理想的豬干擾素長(zhǎng)效劑型。具有制備工藝簡(jiǎn)單，容 易實(shí)現(xiàn)，應(yīng)用方便，所需成本低等特點(diǎn)。該方法采用毒性小，注射安全的分 散劑及油相等材料，使豬干擾素均勻的分散溶解到油相中，最終成為一種豬 干擾素的長(zhǎng)效劑型。采用該方法制成的豬干擾素的長(zhǎng)效劑型體外實(shí)驗(yàn)表明， 用豬擾素為包裹對(duì)象，所制得的豬干擾素微球形態(tài)圓整，粒度分布均勻，粒 徑分布在40微米以下，載藥量可達(dá)6.0%以上，包封率在30.0%以上，體外緩 釋可以達(dá)4周釋藥，符合長(zhǎng)效制劑特征。 一次注射后能夠在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)發(fā)揮抗 病毒藥效。將豬干擾素做成微球制劑，可以延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，大大提高藥 物療效和經(jīng)濟(jì)效益。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
詳述如下 實(shí)施例l
一種豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在于具體實(shí)施步驟如下
(1) 將40. O毫克豬基因工程干擾素IFN-(3溶解在1. 0毫升含有2%的聚乙二 醇4000的PBS緩沖溶液，制成水相溶液(Wl);
(2) 將900.0毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于2毫升二氯甲烷制成油相 溶液(0);
(3) 將上述含豬干擾素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，使 這兩種溶液在溫度15"C下、攪拌速度為8000轉(zhuǎn)/分、攪拌時(shí)間為0.05小時(shí)， 攪拌混合，制成初乳W1/0，在4一10'C下保存；
(4) 將上述初乳W1 /0在2000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢枨闆r下加入到400毫升3%的聚乙 烯醇中，攪拌溫度為5 — 3(TC，攪拌時(shí)間為0.2小時(shí)，制成復(fù)乳Wl/0/W2， 在4一1(TC下保存；
(5) 將復(fù)乳W1/0/W2加入至U3倍復(fù)乳體積的3Q認(rèn)aCl水溶液中，通過800轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?，使有機(jī)溶劑揮發(fā)，然后1800轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，收集微球，存放 于冰箱中冷藏。
所制得的豬干擾素微球形態(tài)圓整，粒度分布均勻，平均粒徑在22.4微米， 載藥量可達(dá)8.2%，包封率在31.5%，體外釋放實(shí)驗(yàn)表明，緩釋可以達(dá)3周， 符合長(zhǎng)效制劑特征。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明這種新型干擾素除具有干擾素的抗豬病毒 作用外，其在體內(nèi)的半衰期是普通豬干擾素的5.2倍，從而延長(zhǎng)了其在體內(nèi)的 作用時(shí)間。
實(shí)施例2
一種豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在于具體實(shí)施步驟如下:
(1) 將50毫克豬基因工程干擾素IFN-a溶解在l毫升含有2y。的海藻糖的 PBS緩沖溶液，制成水相溶液(Wl);
(2) 將1000毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于4毫升二氯甲烷制成油相 溶液(0);
(3) 將上述含豬干擾素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，使 這兩種溶液在溫度15'C下、攪拌速度為8000轉(zhuǎn)/分、攪拌時(shí)間為0.05小時(shí)， 攪拌混合，制成初乳W1/0,在4一10'C下保存；
(4) 將上述初乳W1 / 0在1500轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢枨闆r下加入到300毫升2%的聚乙 烯醇中，攪拌溫度為5-30。C，攪拌時(shí)間為0.2小時(shí)，制成復(fù)乳Wl/0/W2， 在4一10'C下保存；
(5) 將復(fù)乳W1 / 0 / W2加入到3倍復(fù)乳體積的2y。NaCl水溶液中，通過1500 轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢枋褂袡C(jī)溶劑揮發(fā)，然后2000轉(zhuǎn)/分，離心15分鐘，收集微球，存放 于冰箱中冷藏。
所制得的豬干擾素微球形態(tài)圓整，粒度分布均勻，平均粒徑在19.5微米， 載藥量可達(dá)8.5%，包封率在36.2%，體外釋放實(shí)驗(yàn)表明，緩釋可以達(dá)4周， 符合長(zhǎng)效制劑特征。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明這種新型干擾素除具有干擾素的抗豬病毒 作用外，其在體內(nèi)的半衰期是普通豬干擾素的2.5倍，從而延長(zhǎng)了其在體內(nèi)的
作用時(shí)間。 實(shí)施例3
一種豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在于具體實(shí)施步驟如下
(1) 將150. 0毫克豬天然白細(xì)胞干擾素溶解在2. 5毫升含有2%的牛血清白
蛋白的PBS緩沖溶液，制成水相溶液(Wl);
(2) 將1000毫克丙交脂/乙交脂共聚物溶解于3.5毫升二氯甲垸制成油 相溶液(0);
(3) 將上述含豬干擾素的水相溶液(Wl)加入到油相溶液(0)中，這兩種溶液在溫度15'C下、攪拌速度為8000轉(zhuǎn)/分、攪拌時(shí)間為0.05小時(shí)， 攪拌混合，制成初乳W1/0，在4一10'C下保存；
(4) 將上述初乳W1 / 0在2000轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢枨闆r下加入到400毫升3%的聚乙 烯醇中，攪拌溫度為5 — 30。C，攪拌時(shí)間為0.2小時(shí)，制成復(fù)乳Wl/0/W2， 在4一1(TC下保存；
(5) 將復(fù)乳W1/0/W2加入到2倍復(fù)乳體積的淺NaCl水溶液中，通過1000 轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢枋褂袡C(jī)溶劑揮發(fā)，然后1300轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，收集微球，存放于 冰箱中冷藏。
所制得的豬干擾素微球形態(tài)圓整，粒度分布均勻，平均粒徑在19.4微米， 載藥量可達(dá)8.2%，包封率在32.3%，體外釋放實(shí)驗(yàn)表明，緩釋可以達(dá)3周， 符合長(zhǎng)效制劑特征。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明這種新型干擾素除具有干擾素的抗豬病毒 作用外，其在體內(nèi)的半衰期是普通豬干擾素的4.0倍，從而延長(zhǎng)了其在體內(nèi)的 作用時(shí)間。
上述參照實(shí)施例對(duì)該豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法進(jìn)行的詳細(xì)描 述，是說(shuō)明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施例， 因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1、一種豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將一定量的豬干擾素溶解在含有穩(wěn)定劑的PBS緩沖溶液，制成水相溶液(W1)，豬干擾素的含量為0.5—50毫克/毫升；(2)將丙交脂/乙交脂共聚物用二氯甲烷溶解制成油相溶液(0)，丙交脂/乙交脂共聚物的含量為0.1—0.5克/毫升；將上述含豬干擾素的水相溶液(W1)加入到油相溶液(0)中，油相溶液(0)與水相溶液(W1)的比例為20∶1至2∶1，使這兩種溶液在溫度5—30℃下攪拌混合均勻，制成初乳W1/0，在4—10℃下保存；(3)將聚乙烯醇充分溶解于水制成水相溶液(W2)，聚乙烯醇的重量濃度為0.5-50％；將上述初乳W1/0加入到水相溶液(W2)攪拌均勻，初乳W1/0與水相溶液(W2)的比例為1∶50至1∶200，制成復(fù)乳W1/0/W2，在4—10℃下保存；(4)將復(fù)乳W1/0/W2轉(zhuǎn)移到1-5％的NaCl水溶液中，攪拌均勻，使有機(jī)溶劑揮發(fā)，然后離心收集微球；(5)所述步驟(2)中的攪拌溫度為5—30℃，攪拌速度為500—8000轉(zhuǎn)/分，攪拌時(shí)間為0.02—0.2小時(shí)；(6)所述步驟(3)中的攪拌溫度為5—30℃，攪拌速度為100—3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時(shí)間為0.2—0.5小時(shí)；(7)所述步驟(4)中的攪拌溫度為5—30℃，攪拌速度為500—3000轉(zhuǎn)/分，攪拌時(shí)間為0.2—0.5小時(shí)；(8)為了保持溶液的穩(wěn)定，加入一定量的穩(wěn)定劑，穩(wěn)定劑直接加入到所述制備步驟(1)溶液中。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在 于所述丙交脂/乙交脂共聚物分子量為2000-5000Da。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在 于所述穩(wěn)定劑選自海藻糖、牛血清白蛋白和聚乙二醇的一種或一種以上。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在 于所述穩(wěn)定劑的加入量為最終溶液的O. 1% — 10%。
5、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在 于所述豬干擾素為重組豬基因工程干擾素IFN-a、 IFN-(3和豬天然白細(xì)胞干擾 素。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種可每周肌肉注射一次的豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型的制備方法，其特征在于采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備，丙交脂/乙交脂共聚物為微球載體，用豬干擾素為包裹對(duì)象，制成的豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型體外釋藥性能符合長(zhǎng)效制劑特征。本發(fā)明有益效果是該注射用豬干擾素長(zhǎng)效注射劑型克服了已有的豬干擾素注射針劑需要長(zhǎng)期頻繁注射、使用不便以及生物利用度低和藥物使用量大的缺陷；一次注射后能夠在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)發(fā)揮抗病毒藥效，是理想的豬干擾素的長(zhǎng)效劑型。本發(fā)明制備簡(jiǎn)單，應(yīng)用簡(jiǎn)便，且易吸收，更好的發(fā)揮治療豬病毒性疾病的效果。
文檔編號(hào)A61P31/12GK101411869SQ200810053409
公開日2009年4月22日 申請(qǐng)日期2008年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月3日
發(fā)明者王連民, 田杏芳 申請(qǐng)人:天津生機(jī)集團(tuán)股份有限公司