專利名稱：：一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及一種藥物制劑及制備方法，特別是涉及用于預(yù)防、治療感冒及流行性感冒領(lǐng)域。發(fā)明背景感冒、流行性感冒屬常見多發(fā)病，皆由病毒所致。利用藥物制劑有效抑制流感病毒是當(dāng)前醫(yī)藥領(lǐng)域研究課題。研究證實EGCG和ECG對進入細胞內(nèi)流感病毒有顯著抑制作用，量效關(guān)系明顯，毒性低，安全范圍寬。相關(guān)文獻，專利申請01106982.1"—種抗白血病藥物"公開了表沒食子兒茶素沒食子酸酯為主要原料的抗白血病藥物。用于治療急性早幼粒白血病，慢性粒細胞白血病，維甲酸耐藥早幼粒細胞白血病，是一種白血病基因調(diào)控劑，具有顯著抑制急性早幼粒白血病細胞HL-60的生長，并可誘導(dǎo)其凋亡的作用?？梢?，EGCG作為現(xiàn)有已知藥物已被公開，研究表明，其制劑對白血病細胞有較強的抑制作用。眾所周知，EGCG是一個單體，具有極強的供氫能力，但不可忽視，其鄰苯三酚結(jié)構(gòu)在溶液中更不穩(wěn)定，易氧化聚合?！夺t(yī)藥導(dǎo)報》第13巻，"綠茶組分和療效研究進展"公開了EGCG具有抗流感病毒的活性，然而，細胞外凝聚流感病毒，防止細胞吸收，能作為預(yù)防或消毒劑。因此，此文獻資料表明，EGCG和ECG的藥理作用可用于預(yù)防感冒、流行性感冒。相關(guān)文獻，《中國飼料》第16期，"茶多酚的生物學(xué)活性及應(yīng)用前景"公開了流感病毒一般是分散聚集，比病毒更小的表沒食子兒茶素沒食子酸酯與免疫反應(yīng)抗體一樣粘附在突起的表面上和病毒相粘連，而且表沒食子兒茶素沒食子酸酯還能粘附于動物的細胞壁上，完成抑制感染的編碼。上海諾德生特實業(yè)有限公司"兒茶素純品"，配料專題第3期，公開了EGCG有較強的收斂作用，對病原菌、病毒有明顯的抑制和殺滅作用，對消炎止瀉有明顯效果。它能夠覆蓋在突起的粘膜細胞上，防止流感病毒和粘膜結(jié)合，同時殺死病毒。然而，EGCG和ECG的鄰苯三酚結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致它們在溶液中極易氧化、聚合，此為制劑的難題。因此，研究利用EGCG和ECG化學(xué)特性，固態(tài)密封，避光保存等，大幅延長保質(zhì)期，提供一種較為穩(wěn)定的制劑，實際應(yīng)用于抗感冒、流感。同時，考慮EGCG和ECG的氧化速度受到溶液劑ra影響明顯的特性，ra升高，氧化速度加快，研究利用溶劑的酸度以延長EGCG和ECG制劑的有效期。發(fā)明概述本發(fā)明的一方面提供了一種以表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯(EGCG)和表兒茶素-3-0-沒食子酸酯(ECG)的單體或復(fù)方為有效成分，直接給藥于流感病毒復(fù)制區(qū)，或通過鼻黏膜吸收，吸收速度快，有效抑制流感病毒。本發(fā)明的另一方面提供一種鼻黏膜吸收劑制備方法，較為穩(wěn)定的表沒食子兒茶素_3-0_沒食子酸酯(EGCG)和表兒茶素-3-0-沒食子酸酯(ECG)的單體或復(fù)方固態(tài)制劑，緩沖液的酸度有效地延長了制劑的有效使用期。表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯(EGCG)或表兒茶素-3-0-沒食子酸酯(ECG)呈固態(tài)制劑；而且，醋酸一醋酸鈉緩沖液；而且，固態(tài)制劑EGCG或ECG溶入緩沖液；而且，鼻黏膜吸收劑濃度為67mg/ml。因此，充分利用EGCG和ECG在固態(tài)條件下較穩(wěn)的特性，可大幅延長鼻黏膜吸收劑保質(zhì)期。充分考慮EGCG和ECG的氧化速度受到溶液劑PH影響明顯的特性，利用緩沖對控制溶劑的酸度以延長鼻黏膜吸收劑的有效使用期。發(fā)明詳述一、EGCG和ECG的主要理化性質(zhì)易發(fā)生氧化聚合反應(yīng)，固態(tài)較溶液穩(wěn)定.水溶性好，易受光、熱、氧、酸堿的影響。制劑取EGCG按比例加入PEG混勻.制粒，顆粒低溫真空干燥，壓片.薄膜包衣，鋁箔真空包裝，每片含EGCG70mg,另取醋酸鈉18g加冰乙酸9.8ml以蒸溜水溶解稀釋至lOOOml.即得PH4.5的噴霧溶劑.分裝成10ml/每瓶，使用時將藥片置入噴瓶內(nèi)溶解噴霧。二、表沒食子兒茶素_3-0-沒食子酸酯(EGCG)和表兒茶素-3-0-沒食子酸酯(ECG)體外抗流感病毒的實驗研究。1、實驗材料1.1細胞狗腎傳代細胞(MDCK)由武漢市疾病控制中心提供，開始實驗時為第18代(實驗結(jié)束細胞不超過35代)。細胞培養(yǎng)基是DMEM(GIBCOBRI公司產(chǎn)品)，細胞用含10%胎牛血清(三利生物制品廠產(chǎn)品)的DMEM培養(yǎng)基作為生長液，用含2ug/ml胰蛋白酶的DMEM培養(yǎng)基作為維持液；常規(guī)加入青霉素，鏈霧素o1.2病毒株流感病毒H2N3型由北京中國疾病控制中心提供。將病毒按常規(guī)方法接種于9-lld齡雞胚尿囊腔，35。C孵育72h，收集尿囊液，以3000r/tnin離心15min，取上清液進行血凝實驗，將血凝滴度大于l:320且細菌培養(yǎng)陰性的病毒液分裝，置-80。C保存?zhèn)溆谩?、3藥物EGCG和ECG用PBS溶解，配成終濃度為30mg/ml的溶液，經(jīng)0.22ul濾膜過濾除菌，密封，避光4'C冷藏保存。2、實驗方法及過程(略)3、實驗結(jié)果3.1EGCG對MDCK細胞的毒性作用EGCG對MDCK細胞的毒性作用主要表現(xiàn)在細胞折光性增強，細胞變圓，粘連，破碎，脫落。且藥物對細胞的毒性作用在一定范圍內(nèi)隨著藥物濃度的增加，細胞存活率降低。用SPASS11.5軟件處理實驗數(shù)據(jù)，結(jié)果EGCG對MDCK細胞的T仏。是88.04ul/ml,實驗選擇的最大藥物濃度是32ug/ml。見表1:表lEGCG的藥毒結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>3.2EGCG對H2N3繁殖的抑制作用實驗結(jié)果表明，EGCG有明顯抑制H2N3生物合成的作用，表現(xiàn)在隨著藥物濃度的增加，細胞腫脹變圓，脫離并裂解等典型CPE逐漸減弱，病毒抑制率(細胞存活率)明顯升高。在藥物濃度為232ug/ml的范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，H2N3的抑制率增加，并表現(xiàn)出量效關(guān)系。MTT法檢測的EGCG對H2N3的EDs。為1.47ug/ml，TI為60,1;血凝實驗法檢測EGCG對H2N3的ED50為1.28ul/ml，TI為68.6。見表2:表2EGCG對H2N3生物合成的抑制作用Tab2InhibitoryeffectsofEGCGonbiosynthesisofH2N3<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*:++++75%以上細胞病變(cytopathicupto75%);+++751^50%細胞病變(cyt叩athicin75%~50%);++50%~25%細胞病變(cytopathicin50%~25%);+25%—下細胞病變(cytopathicbelow25%);—無細胞病變(noncytopathic)△:log[TCIW0.01ml]本實驗研究結(jié)果表明，藥物EGCG具有很強的體外抗流感病毒的作用，TI>60，而且隨著藥物濃度的增加，其抗病毒效率增加。實驗證實藥物抗H2N3的作用是在病毒進入細胞后的某個環(huán)節(jié)產(chǎn)生。該藥毒性小，安全范圍較寬，屬目前少見的高效低毒抗感冒、流感病毒的化合物。一、抗感冒病毒實用范例120例臨床觀察。制劑EGCG、ECG噴霧鼻劑，暫定為天奇露。藥物濃度1.01排除標(biāo)準(zhǔn)感冒多日，并發(fā)有肺炎、肺結(jié)核及其他肺、支氣管疾患者。療效判斷給藥后1小時觀察實驗結(jié)果見表3首批80例臨床療效統(tǒng)計(治療藥EGCG噴鼻劑)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>小結(jié)臨床實驗表明，EGCG和ECG混合物噴霧劑能快速消除感冒、流感的卡他癥狀，用藥后均未出現(xiàn)發(fā)燒癥狀。其作用速度快、療效是目前極少見的高效低毒抗感冒、流感病毒制劑。權(quán)利要求1、一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法，其特征在于表沒食子兒茶素-3-0-沒食子酸酯(EGCG)或表兒茶素-3-0-沒食子酸酯(ECG)呈固態(tài)制劑，醋酸-醋酸鈉緩沖液為溶劑，固態(tài)制劑EGCG或ECG溶入緩沖液，鼻黏膜吸收劑濃度為6～7mg/ml。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗流感病毒鼻黏膜吸收劑及其制備方法，以表沒食子兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG)或表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(ECG)固態(tài)制劑為功效成分，以醋酸-醋酸鈉緩沖液為溶劑，將EGCG或ECG固態(tài)制劑溶入醋酸-醋酸鈉緩沖液，鼻黏膜吸收劑濃度為6～7mg/ml。以EGCG和ECG為抗流感病毒功效成分制成的固、液分裝，使用時混溶，有效解決了EGCG和ECG在溶液中不穩(wěn)定，保質(zhì)期短的問題，延長EGCG和ECG制劑的使用期，本發(fā)明鼻黏膜吸收劑直接作用于流感病毒，吸收速度快，有效抑制流感病毒。文檔編號A61K9/12GK101214226SQ200810046650公開日2008年7月9日申請日期2008年1月9日優(yōu)先權(quán)日2008年1月9日發(fā)明者左小章,祝汪洋,譚文界,譚靜玲申請人:譚文界